病毒接種、收獲尿囊液操作步驟_第1頁(yè)
病毒接種、收獲尿囊液操作步驟_第2頁(yè)
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1、-病毒接種1.選胚：首先，在照蛋間挑選出血管模糊，沒(méi)有生命跡象的雞胚。2.標(biāo)記注射點(diǎn)：接著用記號(hào)筆在氣室上方約 1mm 處畫(huà)線，在線的下方挑選注射點(diǎn)，在挑選注射點(diǎn)時(shí)應(yīng)注意避開(kāi)主血管，避開(kāi)雞頭。3.打孔：孔不宜過(guò)大，否則會(huì)導(dǎo)致封蠟不完全，甚至將蠟油流進(jìn)雞胚內(nèi)部。4.注射病毒：用注射槍向每個(gè)雞蛋孔內(nèi)注射 0.2ml 病毒稀釋液，注射時(shí)針頭朝向注射點(diǎn)方向，每次注射停留 46s。5.封蠟：注射完畢，用鑷子夾取酒精棉沾上蠟油，進(jìn)行雞胚封蠟。將封蠟完成的雞胚放入孵化箱中培養(yǎng)。孵化箱溫度設(shè)置3335，濕度 4852 6672小時(shí)。收獲尿囊液1.雞胚消毒:將培養(yǎng)好的雞胚放入 4冷庫(kù)進(jìn)行冷胚 6h 以上；首先，

2、用 0.1%的新潔而滅溶液將雞胚進(jìn)行消毒，每次消毒 12 分鐘。接著，在雞胚的氣室.z.-用碘酊消毒。2.烙蛋：將經(jīng)過(guò)消毒處理的雞胚在烙蛋器上進(jìn)行烙蛋。3.收獲：先用小鑷子將殼膜撕破扒出氣室，再用大鑷子壓住雞頭，同時(shí)用 5ml移液槍吸取尿囊液。收獲的尿囊液應(yīng)是澄清、微黃狀。4.保存：將收獲的尿囊液放至 6冷庫(kù)保存。 藍(lán)血凝滴度試驗(yàn)1.稀釋病毒液 ：取一塊潔凈的“ 96”孔血凝板，橫向擺放。用微量移液器（20200ul）加入磷酸鹽緩沖液 100ul 至第一孔，橫向從第二孔開(kāi)始，每孔均用微量移液器（550ul）加入磷酸鹽緩沖液25ul 直至第十二孔。2.倍比稀釋：在“U”型 96 孔血凝板的左側(cè)標(biāo)記樣品名稱，用微量移液器（5 25ul 取出 25ul 放到第二孔中，從第二孔開(kāi)始倍比稀釋，每孔吹打混勻，稀釋到最后一孔棄掉 25ul，此時(shí)的稀釋倍數(shù)為 1:10240。3.陰性對(duì)照 96 25ul 的磷酸鹽緩沖液替代供試品，作為陰性對(duì)照。4.加雞血：將 每孔均用微量移液器（5-50l）加入 25l 的 1%雞紅細(xì)胞懸液，振蕩均勻.z.-后置室溫 40 分鐘后觀察結(jié)果。觀察陰性對(duì)照，若紅細(xì)胞于孔底形成一個(gè)小團(tuán)，邊緣光滑并有立體感，將板傾斜片刻，可見(jiàn)紅細(xì)胞滑動(dòng)呈淚滴狀為“”，則陰性對(duì)照成立。（+以數(shù)字2點(diǎn)，此稀釋度的倒數(shù)

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