獸藥殘留的檢測(cè)方法定稿文件

1、. z.說明書摘要本創(chuàng)造提供一種獸藥的檢測(cè)方法，所述方法包括如下步驟：1樣品的處理：將待測(cè)樣品進(jìn)展前處理，參加提取劑后經(jīng)過多個(gè)步驟處理得到上清液過濾得到的濾液用于UPLC-MS/MS測(cè)定；2獸藥殘留的測(cè)定，將得到的樣品在一定的測(cè)定條件下進(jìn)展超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的測(cè)定。本創(chuàng)造的檢測(cè)方法具有靈敏度高，專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，能夠滿足獸藥殘留的測(cè)定。. z.權(quán)利要求書一種獸藥殘留的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：1樣品的處理：將待測(cè)樣品進(jìn)展前處理，參加提取劑后進(jìn)展勻漿，之后進(jìn)展超聲提取，之后進(jìn)展第一次離心別離得到上清液，用氮?dú)鈱⑸锨逡捍蹈珊蟮玫降氖Ｓ辔镉贸跏剂鲃?dòng)相溶解，混勻，之后進(jìn)展第二次離

2、心別離得到上清液，取上清液進(jìn)展微孔濾膜過濾得到的濾液用于UPLC-MS/MS測(cè)定；2獸藥殘留的測(cè)定將步驟1得到的樣品進(jìn)展超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的測(cè)定，測(cè)定條件如下：色譜條件：色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)；源溫為105-115；脫溶劑溫度為340-360；脫溶劑氣流速度為600Lh-1-700Lh-1；錐孔反吹氣流速度為如權(quán)利要求1所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中所述獸藥為四環(huán)素類藥物、受體沖動(dòng)劑類藥物、喹諾酮類藥物、磺胺類藥物。如權(quán)利要求1或2所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中所述

3、獸藥為四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素、特步他林、西馬特羅、沙丁胺醇、菲諾特羅、萊克多巴胺、氯丙那林、克倫特羅、妥布特羅、噴布洛爾、苯乙醇胺A、培氟沙星，環(huán)丙沙星，恩諾沙星，氧氟沙星，伊諾沙星、吡哌酸、萘啶酸、西諾沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯達(dá)嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲異噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一種、幾種或全部。如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，步驟2

4、所述梯度洗脫程序?yàn)椋?-10.0 min：甲醇的體積比為3.0-90.0%；：甲醇的體積比為90.0-3.0；min：甲醇的體積比為3.0。如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟1所述氮?dú)獯蹈缮锨逡旱臏囟葹?5-35如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟1所述第一次離心和第二次離心的轉(zhuǎn)速為9000 rmin-1-11000 rmin-1，離心的時(shí)間為8 min -12min，優(yōu)選所述第一次離心和第二次離心的轉(zhuǎn)速為10000 rmin-1，離心的時(shí)間為10 min。如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟1所述提取劑為10%三氯乙酸水溶液與乙腈

5、的混合溶液；優(yōu)選兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=1525：7585；更優(yōu)選兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=20：80。如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟1所述在第一次離心別離后得到上清液的同時(shí)得到沉淀，對(duì)沉淀進(jìn)展再次提取，得到上清液與第一次離心別離得到的上清液進(jìn)展合并，將合并后的上清液進(jìn)展下一步驟的氮?dú)獯蹈?。如?quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟2的甲酸水溶液的質(zhì)量濃度為0.04-0.07，優(yōu)選質(zhì)量濃度為0.05。如權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其中步驟2所述色譜條件：色譜柱為Waters Acquity UPLC

6、 BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫；流速為0.25 mLmin-1；柱溫為30質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)；毛細(xì)管電壓為3.5 KV；錐孔電壓為3.0 V；RF透鏡電壓為0.5 V；源溫為110；脫溶劑溫度為350；脫溶劑氣流速度為650Lh-1；錐孔反吹氣流速度為50Lh. z.說明書一種獸藥殘留的檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域本創(chuàng)造涉及以一種檢測(cè)方法，特別是涉及一種獸藥殘留的檢測(cè)方法。背景技術(shù)獸藥在防治動(dòng)物疾病、提高生產(chǎn)效率、改善畜產(chǎn)品質(zhì)量等方面起著十分重要的作用。然而，由于養(yǎng)殖人員對(duì)科學(xué)知識(shí)的缺乏以及一味地追求經(jīng)濟(jì)利益，致使濫用獸藥現(xiàn)象在當(dāng)前畜牧業(yè)中普遍存在。隨著人

7、們對(duì)動(dòng)物源食品由需求型向質(zhì)量型的轉(zhuǎn)變，動(dòng)物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn)。獸藥殘留是指用藥后蓄積或存留于畜禽機(jī)體或產(chǎn)品(如雞蛋、奶品、肉品等)中原型藥物或其代產(chǎn)物，包括與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)殘留。目前，在動(dòng)物源食品中較容易引起獸藥殘留量超標(biāo)的獸藥主要有抗生素類、磺胺類和激素類等藥物。濫用獸藥極易造成動(dòng)物源食品中有害物質(zhì)的殘留，這對(duì)人體安康造成直接危害。例如長期食用獸藥殘留超標(biāo)的食品后，當(dāng)體蓄積的藥物濃度到達(dá)一定量時(shí)人體會(huì)產(chǎn)生多種急慢性中毒現(xiàn)象。目前，國外已有多起有關(guān)人食用鹽酸克侖特羅超標(biāo)的豬肺臟而發(fā)生急性中毒事件的報(bào)道。四環(huán)素類藥物能夠與骨骼中的鈣結(jié)合，抑制骨骼和牙齒的發(fā)育?；前奉?/p>

8、藥物能夠破壞人體造血機(jī)能等。另一方面，動(dòng)物機(jī)體長期反復(fù)接觸*種抗菌藥物后，其體敏感菌株受到選擇性的抑制，從而使耐藥菌株大量繁殖，耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生使得一些常用藥物的療效下降甚至失去療效。此外，濫用獸藥對(duì)畜牧業(yè)的開展和生態(tài)環(huán)境也造成極大危害。動(dòng)物用藥后，一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物隨糞便、尿被排泄到環(huán)境中后仍能穩(wěn)定存在，從而造成環(huán)境中的藥物殘留。長期濫用藥物嚴(yán)重制約著畜牧業(yè)的安康持續(xù)開展。如長期使用抗生素易造成畜禽機(jī)體免疫力下降，影響疫苗的接種效果，還可引起畜禽源性感染和二重感染。對(duì)動(dòng)物性食品中的獸藥殘留進(jìn)展監(jiān)控的一個(gè)重要手段就是建立快速準(zhǔn)確的殘留分析方法。目前，報(bào)道的文獻(xiàn)及國家標(biāo)準(zhǔn)多是單一獸藥或單一種類獸

9、藥的檢測(cè)方法，但在實(shí)際工作中，由于動(dòng)物性食品平安的保證需要多個(gè)指標(biāo)進(jìn)展綜合指證，因此，單個(gè)樣本常需要屢次檢測(cè)工作，極大的浪費(fèi)了人力、物力及財(cái)力。多殘留的檢測(cè)能夠更好的節(jié)省時(shí)間、提高工作效率，并能更加有效地監(jiān)測(cè)動(dòng)物產(chǎn)品的平安性。另一方面，國外報(bào)道的動(dòng)物源性食品中藥物殘留檢測(cè)的檢測(cè)方法主要有液相色譜法HPLC、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)、酶聯(lián)免疫法及生物傳感器技術(shù)。酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(ELISA)是一種將酶化學(xué)反響的敏感性和抗原抗體免疫反響的特異性相結(jié)合的方法，其敏感性和特異性較好。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時(shí)間短，適

10、合于做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點(diǎn)，使其可實(shí)現(xiàn)快速現(xiàn)場監(jiān)測(cè)，是現(xiàn)階段食品平安檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用較多的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。但它也存在著很多缺陷：對(duì)試劑的選擇性高，很難同時(shí)分析多種成分；對(duì)構(gòu)造類似的化合物有一定程度的穿插反響；分析分子量很小的化合物或很不穩(wěn)定的化合物有一定的困難。生物傳感器是由一種生物敏感膜和電化學(xué)轉(zhuǎn)換器兩局部配合，對(duì)特定種類的化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和可逆響應(yīng)的分析裝置。在獸藥殘留分析上得到了較廣泛的應(yīng)用。雖然生物傳感器具有微型化、響應(yīng)速度快、樣品用量少的特點(diǎn)，但還存在著結(jié)果的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和使用壽命方面的問題?，F(xiàn)有技術(shù)的方法常有靈敏度不高、前處理繁瑣、檢測(cè)藥物單一或重現(xiàn)性不好等問題，很難

11、滿足對(duì)藥物殘留的同時(shí)確證檢測(cè)。液質(zhì)聯(lián)用HPLC-MS的檢測(cè)方法以液相色譜作為別離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜局部被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用表達(dá)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，將色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高別離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與構(gòu)造信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來，在藥物分析領(lǐng)域具有了廣泛的應(yīng)用。液質(zhì)聯(lián)用HPLC-MS分析樣品中定性和定量方面的優(yōu)勢(shì)是單獨(dú)液相分析不能媲美的。創(chuàng)造容本創(chuàng)造解決的技術(shù)問題是：提供一種新的獸藥殘留的檢測(cè)方法，其是通過液質(zhì)聯(lián)用的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)多種類多樣品的檢測(cè)。具體來說，本創(chuàng)造是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種獸

12、藥殘留的檢測(cè)方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：1樣品的處理：將待測(cè)樣品進(jìn)展前處理，參加提取劑后進(jìn)展勻漿，之后進(jìn)展超聲提取，之后進(jìn)展第一次離心別離得到上清液，用氮?dú)鈱⑸锨逡捍蹈珊蟮玫降氖Ｓ辔镉贸跏剂鲃?dòng)相溶解，混勻，之后進(jìn)展第二次離心別離得到上清液，取上清液進(jìn)展微孔濾膜過濾得到的濾液用于UPLC-MS/MS測(cè)定；2獸藥殘留的測(cè)定將步驟1得到的樣品進(jìn)展超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的測(cè)定，測(cè)定條件如下：色譜條件：色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)；源溫為105-115；脫溶劑溫度為340-

13、360；脫溶劑氣流速度為600Lh-1-700Lh-1；錐孔反吹氣流速度為45 L其中，所述獸藥為四環(huán)素類藥物、受體沖動(dòng)劑類藥物、喹諾酮類藥物、磺胺類藥物。其中，所述獸藥為四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素、特步他林、西馬特羅、沙丁胺醇、菲諾特羅、萊克多巴胺、氯丙那林、克倫特羅、妥布特羅、噴布洛爾、苯乙醇胺A、培氟沙星，環(huán)丙沙星，恩諾沙星，氧氟沙星，伊諾沙星、吡哌酸、萘啶酸、西諾沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯

14、達(dá)嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲異噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一種、幾種或全部。其中，步驟2所述梯度洗脫程序?yàn)椋?-10.0 min：甲醇的體積比為3.0-90.0%；：甲醇的體積比為90.0A-3.0；min：甲醇的體積比為3.0。其中，步驟1所述氮?dú)獯蹈缮锨逡旱臏囟葹?5-35其中，步驟1所述第一次離心和第二次離心的轉(zhuǎn)速為9000 rmin-1-11000 rmin-1，離心的時(shí)間為8 min -12min，優(yōu)選所述第一次離心和第二次離心的轉(zhuǎn)速為10000 rmin-1，離心的時(shí)間為10 min。其中，步驟1所述提取劑為10%三氯乙酸水溶液與乙腈的混合溶液；

15、優(yōu)選兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=1525：7585；更優(yōu)選兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=20：80。其中，步驟1所述在第一次離心別離后得到上清液的同時(shí)得到沉淀，對(duì)沉淀進(jìn)展再次提取，得到上清液與第一次離心別離得到的上清液進(jìn)展合并，將合并后的上清液進(jìn)展下一步驟的氮?dú)獯蹈伞Ｆ渲?，步驟2的甲酸水溶液的體積濃度為0.04-0.07，優(yōu)選體積濃度為0.05。其中，步驟2所述色譜條件：色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫；流速為0.25 mLmin-1；柱溫為30質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)；毛細(xì)管

16、電壓為3.5 KV；錐孔電壓為3.0 V；RF透鏡電壓為0.5 V；源溫為110；脫溶劑溫度為350；脫溶劑氣流速度為650Lh-1；錐孔反吹氣流速度為50Lh本創(chuàng)造的有益技術(shù)效果如下：本創(chuàng)造的檢測(cè)方法具有靈敏度高，專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。本創(chuàng)造采用的超高液相色譜進(jìn)展測(cè)定，超高效液相色譜Ultra Performance Liquid Chromatography簡稱UPLC是別離科學(xué)中的一個(gè)全新類別，UPLC借助于HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超高液相色譜在測(cè)定上相對(duì)于普通液相色譜存在很多優(yōu)點(diǎn)。與傳統(tǒng)的HPLC相

17、比，UPLC的速度、靈敏度及別離度分別是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它縮短了分析時(shí)間，同時(shí)減少了溶劑用量降低了分析本錢。UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)，結(jié)合了液相色譜的高別離能力和質(zhì)譜提供構(gòu)造信息的功能，具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，尤其是串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù) (MS/MS或MSn) 的應(yīng)用，可以獲得豐富、有效的化合物構(gòu)造信息，建立快速、高效的分析研究體系。本創(chuàng)造的目的是抑制現(xiàn)有技術(shù)的缺乏，針對(duì)4種四環(huán)素類藥物、18種磺胺類藥物、14種喹諾酮類藥物及10種受體沖動(dòng)劑藥物建立了一種快速簡便、專屬性強(qiáng)、靈敏度高的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)方法，以保障對(duì)動(dòng)物源性食品中該類藥物殘留的檢

18、測(cè)。此外，本創(chuàng)造為了提高分析的靈敏度和專一性，進(jìn)展多時(shí)間段的多反響檢測(cè)掃描MRMmulti-period MRM，mpMRM，即按照待測(cè)藥物的保存時(shí)間，分為多個(gè)時(shí)間段分別進(jìn)展MRM掃描，并同時(shí)進(jìn)展定性和定量的雙離子通道分析，進(jìn)而進(jìn)一步提高該方法的準(zhǔn)確性和專屬性。本創(chuàng)造建立了穩(wěn)定高效的測(cè)定方法，當(dāng)待測(cè)樣品通過本創(chuàng)造測(cè)定方法進(jìn)展測(cè)定時(shí)，通過與所述的定性離子色譜圖及保存時(shí)間進(jìn)展殘留藥物的定性分析，并進(jìn)一步通過定量離子色譜圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線最終確定殘留藥物的含量。附圖說明圖1：4種四環(huán)素類藥物混合對(duì)照物的定量離子通道色譜圖；圖2：10種-受體沖動(dòng)劑類藥物和3種氘代標(biāo)混合對(duì)照物的定量離子通道色譜圖；圖3：14

19、種喹諾酮類藥物混合對(duì)照物的定量離子通道色譜圖；圖4 18種磺胺類藥物混合對(duì)照物的定量離子通道色譜圖；上述各圖是UPLC-MS/MS測(cè)定結(jié)果的原始圖譜，由于軟件系統(tǒng)是英文的，故輸出的原始圖是英文的，其中1207代表樣品的名稱，圖中的英文翻譯如下：Channels ：質(zhì)譜檢測(cè)離子的通道Tetracycline：四環(huán)素、O*ytetracycline：土霉素、Chlorotetracycline：金霉素、Do*ycycline：強(qiáng)力霉素；Terbutaline；特步他林、Cimaterol：西馬特羅、Salbutamol：沙丁胺醇、Salbutamol-D6：氘代沙丁胺醇、Fenoterol：菲諾特

20、羅、Ractopamine：萊克多巴胺、Ractopamine-D6：氘代萊克多巴胺、Clorprenaline：氯丙那林、Clenbuterol：克倫特羅、Clenbuterol-D9：氘代克倫特羅、Tulobuterol：妥布特羅、Penbutolol：噴布洛爾、Phenyl EA A：苯乙醇胺A；Peflo*acin：培氟沙星，Ciproflo*acin：環(huán)丙沙星，Enroflo*acin：恩諾沙星，Oflo*acin：氧氟沙星，Eno*acin：伊諾沙星、Pipemidic Acid吡哌酸、Nalidi*ic Acid：萘啶酸、Cino*acin：西諾沙星、Norflo*acin：諾氟

21、沙星、Danoflo*acin：達(dá)氟沙星、Lomeflo*acin：洛美沙星、Diflo*acin：二氟沙星、Saraflo*acin：沙氟沙星、Sparflo*acin：司帕沙星;Sulfado*ine：磺胺鄰二甲氧嘧啶、Sulfadiazine：磺胺嘧啶、Sulfathiazole：磺胺噻唑、Sulfapyridine：磺胺吡啶、Sulfamerazine：磺胺甲基嘧啶、Sulfamo*ol：磺胺二甲基噁唑、Sulfameter：磺胺對(duì)甲氧嘧啶、Sulfamethazine：磺胺二甲嘧啶、Sulfamethizole：磺胺甲噻二唑、Sulfametho*ypyridazine：磺胺甲氧噠嗪

22、、Sulfametho*azole：磺胺甲噁唑、Sulfachloropyridazine：磺胺氯達(dá)嗪、Sulfamonometho*ine：磺胺間甲氧嘧啶、Sulfacetamide：磺胺醋酰、Sulfiso*azole：磺胺二甲異噁唑、Sulfaphenazole：磺胺苯吡唑、Sulfadimetho*ine：磺胺二甲氧嘧啶、Sulfaquino*aline：磺胺喹噁啉。具體實(shí)施方式本創(chuàng)造提供了一種獸藥殘留的檢測(cè)方法，所述方法包括如下步驟：1樣品的處理：將待測(cè)樣品進(jìn)展粉碎，參加提取劑后進(jìn)展勻漿，之后進(jìn)展超聲提取，之后進(jìn)展第一次離心別離得到上清液，用氮?dú)鈱⑸锨逡捍蹈珊蟮玫降氖Ｓ辔镉贸跏剂鲃?dòng)相

23、溶解，混勻，之后進(jìn)展第二次離心別離得到上清液，取上清液進(jìn)展微孔濾膜過濾得到的濾液用于UPLC-MS/MS測(cè)定；所述待測(cè)樣品是各類動(dòng)物源的肉、蛋、奶。當(dāng)所述的樣品為肉時(shí)，前處理的步驟是通過料理機(jī)進(jìn)展粉碎；當(dāng)待測(cè)樣品是蛋時(shí)，去殼打碎；當(dāng)待測(cè)樣品是奶時(shí)，只需要簡單過濾除雜就可以。所述的兩次離心別離目的是使樣品中蛋白質(zhì)盡量全部除去，防止堵塞液相色譜柱，同時(shí)減少殘留物質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾。所述的提取劑為10%三氯乙酸水溶液與乙腈的混合溶液，兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=1525：7585，優(yōu)選兩者的體積比例為10%三氯乙酸水溶液：乙腈=20：80。所述的提取劑的選擇是考慮到蛋白沉淀、藥物溶解

24、性及酸堿性進(jìn)展選擇的結(jié)果，選擇單獨(dú)的有機(jī)溶劑不利于小分子藥物的溶解。選擇酸性溶液過多會(huì)使樣品中的殘留藥物破環(huán)，而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。優(yōu)選地，所述在第一次離心別離后得到上清液的同時(shí)得到沉淀，對(duì)沉淀進(jìn)展再次提取，得到上清液與第一次離心別離得到的上清液進(jìn)展合并，將合并后的上清液進(jìn)展下一步驟的氮?dú)獯蹈?。?yōu)選地，所述的再次提取是將沉淀參加提取劑后進(jìn)展勻漿，之后進(jìn)展超聲提取，之后進(jìn)展離心別離得到上清液，將得到的該上清液與第一次離心別離得到的上清液進(jìn)展合并，將合并后的上清液進(jìn)展下一步驟的氮?dú)獯蹈?。所述微孔濾膜的孔徑大小為0.45 m。優(yōu)選地，氮?dú)獯蹈缮锨逡旱臏囟葹?5-35優(yōu)選地，所述第一次離心和第二次離

25、心的轉(zhuǎn)速為9000 rmin-1-11000 rmin-1，離心的時(shí)間為8 min -12min；優(yōu)選第一次離心和第二次離心的轉(zhuǎn)速為10000 rmin-1，離心的時(shí)間為10min。通過所述的提取過程盡量地將藥物提取，并保證動(dòng)物源性雜質(zhì)的去除最大化，在兩者同時(shí)兼顧的前提下，在本創(chuàng)造檢測(cè)方法中提取的次數(shù)以2次為優(yōu)選。2獸藥殘留的測(cè)定將步驟1得到的樣品進(jìn)展超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的測(cè)定；測(cè)定條件如下：色譜條件：色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和0.05甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫；流速為0.25 mLmin-1；柱溫為30；進(jìn)樣量為10L質(zhì)譜條件：電

26、噴霧離子源(ESI+)；毛細(xì)管電壓為3.5 KV；錐孔電壓為3.0 V；RF透鏡電壓為0.5 V；源溫為110；脫溶劑溫度為350；脫溶劑氣流速度為650Lh-1；錐孔反吹氣流速度為50Lh優(yōu)選地，所述梯度洗脫程序?yàn)椋?-10.0 min：甲醇的體積比為3.0-90.0%；：甲醇的體積比為90.0-3.0；10.1-13.0 min：甲醇的體積比為3.0。所述梯度洗脫的流動(dòng)相配比和洗脫程序可以保證各個(gè)藥物的良好別離和定量。優(yōu)選地，所述獸藥為四環(huán)素類藥物、受體沖動(dòng)劑類藥物、喹諾酮類藥物、磺胺類藥物。優(yōu)選地，所述獸藥為四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素、特步他林、西馬特羅、沙丁胺醇、菲諾特羅、萊克多

27、巴胺、氯丙那林、克倫特羅、妥布特羅、噴布洛爾、苯乙醇胺A、培氟沙星，環(huán)丙沙星，恩諾沙星，氧氟沙星，伊諾沙星、吡哌酸、萘啶酸、西諾沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯達(dá)嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲異噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一種或幾種或全部。所述的四種獸藥殘用途較為廣泛，在動(dòng)物組織中殘留較多，同時(shí)檢測(cè)上述四類獸藥對(duì)于食品的檢測(cè)具有重要意義。上述46種藥物涉及的圍很廣，構(gòu)造類型豐富

28、，這說明本創(chuàng)造的方法可以用于多種藥物的檢測(cè)。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，本創(chuàng)造獸藥殘留的檢測(cè)方法包括如下步驟：1樣品前處理動(dòng)物性肌肉組織首先用料理機(jī)充分粉碎，冷凍保存；準(zhǔn)確稱取解凍后的動(dòng)物源性食品5.0 g，置于50 mL的離心管中，參加10%三氯乙酸：乙腈提取液V：V=20：8010.0 mL，充分勻漿后，超聲提取10 min，10 000 rmin-1 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移到另一50 mL離心管中，殘?jiān)儆锰崛∫?0.0 mL重復(fù)提取一次，合并提取液，將提取液于30下氮?dú)獯蹈伞ＪＳ辔镉贸跏剂鲃?dòng)相2.0 mL溶解，渦旋混勻，以10 000 rmin-1的速率高速離心10 min。取適量上

29、清液，0.45 m 微孔濾膜過濾，供UPLC-MS/MS2樣品的檢測(cè)：色譜條件與質(zhì)譜條件色譜柱為Waters Acquity UPLC BEH C18柱 (100 mm2.1 mm，1.7m)；流動(dòng)相:A相為甲醇，B相為0.05甲酸水溶液，梯度洗脫：0-10.0 min：3.0A-90.0%A；：90.0A-3.0A；10.1-13.0 min：3.0A；流速為0.25 mLmin-1；柱溫為30；進(jìn)樣量為10L電噴霧離子源(ESI+)；毛細(xì)管電壓為3.5 KV；錐孔電壓為3.0 V；RF透鏡電壓為0.5 V；源溫為110 ；脫溶劑溫度為350 ；脫溶劑氣流速為650Lh-1；錐孔反吹氣流速為

30、50 Lh實(shí)施例實(shí)施例11 儀器與試藥1.1 儀器Waters Ultra Performance LC液相色譜儀(Waters公司)，Quattro Premier *E 質(zhì)譜儀(Waters公司)，MassLyn* v 4.1數(shù)據(jù)處理軟件 (Waters公司)；Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱(100 mm2.1 mm，1.7m)；TranssonicTP 690超聲波清洗器Elma 公司;3K15離心機(jī)Sigma 公司；MilliporeEli* Milli-Q純水儀。1.2 材料色譜純甲醇Fisher Scientific公司產(chǎn)品；色譜純乙腈FisherSc

31、ientific公司產(chǎn)品；超純水；其他試劑均為分析純。所用46種藥物均是商購獲得，各個(gè)藥物的純度均高于98.0%。將安康牛肉經(jīng)過測(cè)定不含所述的46種藥物中的任一種定量參加所述的四環(huán)素、土霉素、金霉素、強(qiáng)力霉素、特步他林、西馬特羅、沙丁胺醇、菲諾特羅、萊克多巴胺、氯丙那林、克倫特羅、妥布特羅、噴布洛爾、苯乙醇胺A、培氟沙星，環(huán)丙沙星，恩諾沙星，氧氟沙星，伊諾沙星、吡哌酸、萘啶酸、西諾沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧噠嗪、磺胺甲噁唑、磺

32、胺氯達(dá)嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲異噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉以下簡稱46種獸藥，將參加獸藥后牛肉參加首先用料理機(jī)充分粉碎，冷凍保存；準(zhǔn)確稱取解凍后的牛肉5.0 g，置于50 mL的離心管中，參加10%三氯乙酸：乙腈提取液V：V=20：8010.0 mL，充分勻漿后，超聲提取10 min，10 000 rmin-1離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移到另一50 mL離心管中，殘?jiān)儆锰崛∫?0.0 mL重復(fù)提取一次，合并提取液，將提取液于30下氮?dú)獯蹈?。剩余物用初始流?dòng)相2.0 mL溶解，渦旋混勻，以10 000 rmin-1的速率高速離心10 min。取適量上清液，0.4

33、5 m 微孔濾膜過濾，供UPLC-MS/MS2方法與結(jié)果2.1 方法色譜條件色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱；流動(dòng)相為甲醇和0.05甲酸水溶液，洗脫方式為梯度洗脫，A相為甲醇，B相為0.05甲酸水溶液，0-10.0 min：3.0A-90.0%A；：90.0A-3.0A；10.1-13.0 min：3.0A；流速為0.25 mLmin-1；柱溫為30；進(jìn)樣量為10L質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)；毛細(xì)管電壓為3.5 KV；錐孔電壓為3.0 V；RF透鏡電壓為0.5 V；源溫為110；脫溶劑溫度為350；脫溶劑氣流速度為650Lh-1；錐孔反吹氣流速度為50L

34、h-12.2質(zhì)譜條件優(yōu)化將所述的46種藥物分別進(jìn)展MS掃描，確定各個(gè)藥物的定性離子和定量離子，并優(yōu)化各個(gè)藥物離子對(duì)的碰撞電壓。為了提高分析的靈敏度和專一性，選用多反響監(jiān)測(cè)模式(Multi-ReactionMonitoring，MRM) 進(jìn)展檢測(cè)，并同時(shí)進(jìn)展定性和定量的雙離子通道分析，進(jìn)而進(jìn)一步提高該方法的定性準(zhǔn)確性和專屬性。46種藥物保存時(shí)間、定性離子對(duì)和定量離子對(duì)列于表1。為了增強(qiáng)方法的靈敏度，本研究進(jìn)展多時(shí)間段的多反響檢測(cè)掃描，即按照待測(cè)藥物的保存時(shí)間，分為多個(gè)時(shí)間段分別進(jìn)展MRM掃描，以增加每個(gè)藥物的掃描時(shí)間，進(jìn)而提高靈敏度。具體來說，根據(jù)各個(gè)藥物的保存時(shí)間確定監(jiān)測(cè)時(shí)間，得到測(cè)定結(jié)果見表

35、2。表1 46種藥物的保存時(shí)間、定性離子對(duì)和定量離子對(duì)藥物保存時(shí)間定量離子對(duì)定性離子對(duì)四環(huán)素類四環(huán)素(Tetracycline)4.89445.1410.1445.1428.1土霉素(O*ytetracycline)5.02461.2426.0461.2443.1金霉素(Chlorotetracycline)6.21479.2443.9479.2462.3強(qiáng)力霉素 (Do*ycycline)7.22445.1428.1445.1410.1受體沖動(dòng)劑類藥物特步他林(Terbutaline)2.95226.0124.9226.0151.9西馬特羅( Cimaterol)3.13220.0159.9

36、220.0202.0沙丁胺醇(Salbutamol)3.20240.1147.9240.1222.0菲諾特羅(Fenoterol)3.83304.0134.9304.0104.9萊克多巴胺(Ractopamine)4.99302.1164.0302.1106.9氯丙那林(Clorprenaline)5.35214.0153.9214.0196.0克倫特羅(Clenbuterol)5.46277.0202.9277.0259.0妥布特羅(Tulobuterol)6.02228.0153.9228.0171.9噴布洛爾( Penbutolol)9.15292.1201.0292.1236.1苯乙醇

37、胺APhenylethanolamine A7.27345.2327.2345.2150.0喹諾酮類藥物培氟沙星(Peflo*acin)4.67334.2316.2334.2290.2環(huán)丙沙星(Ciproflo*acin)4.96332.1314.1332.1288.1恩諾沙星( Enroflo*acin)4.99360.2316.2360.2245.1氧氟沙星Oflo*acin4.66362.1318.1362.1261.1伊諾沙星Eno*acin4.71321.0232.1321.0303.2吡哌酸Pipemidic Acid4.23304.0217.1304.0189.0萘啶酸Nalid

38、i*ic Acid7.52233.0215.0233.0187.0西諾沙星Cino*acin6.17263.1245.1263.1217.1諾氟沙星Norflo*acin4.85320.0302.2320.0276.2達(dá)氟沙星Danoflo*acin5.03358.2340.1358.2238.1洛美沙星Lomeflo*acin5.15352.1265.1352.1308.1二氟沙星Diflo*acin5.23400.2382.1400.2356.1沙氟沙星Saraflo*acin5.42386.2299.1386.2342.2司帕沙星Sparflo*acin5.87393.1349.2393

39、.1292.2磺胺類藥物磺胺鄰二甲氧嘧啶Sulfado*ine5.30311.1156.0311.1108.1磺胺嘧啶Sulfadiazine3.33251.1156.0251.1108.1磺胺噻唑Sulfathiazole3.63256.0155.9256.092.0磺胺吡啶Sulfapyridine3.76250.0155.9250.0184.0磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine3.95265.0155.9265.0171.9磺胺二甲基噁唑Sulfamo*ol4.36268.0155.9268.0113.0磺胺對(duì)甲氧嘧啶Sulfameter4.41281.0156.0281.0215.

40、1磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine4.48279.0186.0279.0124.0磺胺甲噻二唑Sulfamethizole4.52271.0155.9271.092.0磺胺甲氧噠嗪Sulfametho*ypyridazine4.71281.0155.9281.0108.0磺胺甲噁唑Sulfametho*azole5.12254.0155.9254.092.0磺胺氯達(dá)嗪Sulfachloropyridazine4.99285.0155.9285.0108.0磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonometho*ine5.22281.1155.9281.1108.0磺胺醋酰Sulfacetamide

41、2.96215.1156.0215.1108.1磺胺二甲異噁唑Sulfiso*azole5.39268.1156.0268.1113.1磺胺苯吡唑Sulfaphenazole5.97315.1160.1315.1156.0磺胺二甲氧嘧啶Sulfadimetho*ine6.32311.0155.9311.0108.0磺胺喹噁啉Sulfaquino*aline6.54301.0.1155.9301.092.0表2 46個(gè)藥物的mpMRM參數(shù)藥物時(shí)間minmpMRM監(jiān)測(cè)離子碰撞電壓V四環(huán)素類藥物四環(huán)素Tetracycline4.3-5.2 445.1410.019445.1428.111土霉素O*y

42、tetracycline4.8-5.3 461.2426.020461.2443.113金霉素Chlorotetracycline5.7-6.9 479.2443.922479.2462.317強(qiáng)力霉素Do*ycycline7.0-10.0 445.1428.121445.1410.120受體沖動(dòng)劑類藥物特步他林(Terbutaline)3.0-3.5 226.0124.922226.0151.916西馬特羅(Cimaterol)2.8-3.1 220.0159.916220.0202.010氯丙那林(Clorprenaline)5.1-5.7 214.0153.916214.0196.011

43、克倫特羅(Clenbuterol)5.3-5.9 277.0202.916277.0259.010噴布洛爾(Penbutolol)7.0-10.0 292.1201.020292.1236.115萊克多巴胺(Ractopamine)4.8-5.3 302.1106.928302.1164.016菲諾特羅(Fenoterol)3.7-4.0 304.0104.916304.0134.912妥布特羅(Tulobuterol)5.7-6.9 228.0153.916228.0171.912沙丁胺醇(Salbutamol) 240.1222.018240.1147.910苯乙醇胺APhenyletha

44、nolamine A345.2150.025345.2327.215喹諾酮類藥物培氟沙星(Peflo*acin)334.2316.220334.2290.215環(huán)丙沙星(Ciproflo*acin)332.1288.123332.1314.118恩諾沙星( Enroflo*acin)360.2316.218360.2245.125氧氟沙星Oflo*acin362.1261.120362.1318.125伊諾沙星Eno*acin321.0232.120321.0303.230吡哌酸Pipemidic Acid304.0217.120304.0189.030萘啶酸Nalidi*ic Acid233

45、.0215.015233.0187.025西諾沙星Cino*acin263.1245.115263.1217.120諾氟沙星Norflo*acin320.0302.220320.0276.215達(dá)氟沙星Danoflo*acin358.2340.120358.2238.121洛美沙星Lomeflo*acin352.1265.123352.1308.115二氟沙星Diflo*acin400.2382.125400.2356.120沙氟沙星Saraflo*acin386.2299.127386.2342.219司帕沙星Sparflo*acin393.1292.225393.1349.220磺胺類藥物

46、磺胺鄰二甲氧嘧啶Sulfado*ine311.1156.020311.1108.122磺胺嘧啶Sulfadiazine251.1156.016251.1108.125磺胺噻唑Sulfathiazole256.0155.915256.092.025磺胺吡啶Sulfapyridine250.0155.916250.0184.016磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine265.0155.916265.0171.915磺胺二甲基噁唑Sulfamo*ol268.0155.916268.0113.017磺胺對(duì)甲氧嘧啶Sulfameter281.0156.015281.0215.117磺胺二甲嘧啶Sulfa

47、methazine279.0186.016279.0124.022磺胺甲噻二唑Sulfamethizole271.0155.916271.092.025磺胺甲氧噠嗪Sulfametho*ypyridazine281.0155.916281.0108.025磺胺甲噁唑Sulfametho*azole254.0155.916254.092.025磺胺氯達(dá)嗪Sulfachloropyridazine285.0155.925285.0108.015磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonometho*ine281.1155.916281.1108.025磺胺醋酰Sulfacetamide215.1156.021

48、215.1108.116磺胺二甲異噁唑Sulfiso*azole268.1156.013268.1113.117磺胺苯吡唑Sulfaphenazole301.0155.916301.092.025磺胺二甲氧嘧啶Sulfadimetho*ine311.0155.917311.0108.025磺胺喹噁啉Sulfaquino*aline315.1160.120315.1156.018mpMRM數(shù)據(jù)采集模式在一個(gè)循環(huán)中檢測(cè)多個(gè)藥物，節(jié)約分析時(shí)間，尤其是mpMRM靈敏度高，能夠檢測(cè)含量較低的待測(cè)組分?，F(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)四環(huán)素類藥物檢測(cè)的定量限為500.0ppb，或200.0 ppb，而在mpMRM掃描中上述

49、4個(gè)藥物的檢測(cè)限均能到達(dá)5.0ppb，說明該數(shù)據(jù)采集模式能夠顯著提高靈敏度。2.3方法驗(yàn)證專屬性實(shí)驗(yàn)將1.2制備的用于檢測(cè)的樣品進(jìn)展測(cè)定得到色譜圖見圖1-4。通過圖可以看出，46種藥物能和其他色譜峰完全別離，空白組織沒有干擾，到達(dá)了多藥物的同時(shí)檢測(cè)。線性關(guān)系和檢測(cè)限準(zhǔn)確量取適量的46個(gè)藥物的標(biāo)準(zhǔn)液，分別添加到5.0 g安康牛肉中，制得含量為0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0，100.0 , 200.0 ngmL-1的系列空白添加試樣，按1.2的前處理方法項(xiàng)下所述方法進(jìn)展處理，然后進(jìn)展UPLC-MS/MS測(cè)定。對(duì)于四環(huán)素類藥物、磺胺類及喹諾酮類藥物，以各藥物定量離子的色

50、譜峰面積為縱坐標(biāo)，樣品濃度(ngmL-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并測(cè)定檢出限S/N3和定量限S/N10，對(duì)于-受體沖動(dòng)劑類藥物，按標(biāo)法以峰面積比計(jì)算，結(jié)果見表3。表 3 46種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線、定量限和檢測(cè)限藥物標(biāo)準(zhǔn)曲線rLOD(ng/mL)LOQ(ng/mL)四環(huán)素TetracyclineY=102.17*+13.010.9992.05.0土霉素O*ytetracyclineY=29.99*+43.690.9902.05.0強(qiáng)力霉素Do*ycyclineY=147.43*+5.220.9902.05.0金霉素ChlorotetracyclineY=25.57*+6.750.9952.05.0

51、特步他林(Terbutaline)0.9960.51.0西馬特羅( cimaterol)0.9930.51.0沙丁胺醇(Salbutamol)Y=1.524*+0.0760.9980.51.0菲諾特羅(Fenoterol)Y=0.005*+0.0020.9920.51.0萊克多巴胺(Ractopamine)Y=1.104*+0.1550.9990.51.0氯丙那林(Clorprenaline)0.9980.51.0克倫特羅(Clenbuterol)0.9980.51.0妥布特羅(Tulobuterol)0.9980.51.0噴布洛爾(Penbutolol)0.9970.51.0苯乙醇胺APhe

52、nylethanolamine AY=25.57*+6.750.9960.51.0培氟沙星(Peflo*acin)Y=486*-74.80.9980.51.0環(huán)丙沙星(Ciproflo*acin)Y=293*+7.550.9990.51.0恩諾沙星( Enroflo*acin)Y=450*+46.70.9990.51.0氧氟沙星Oflo*acinY=416*-8.110.9990.51.0伊諾沙星Eno*acinY=555*-23.20.9980.51.0吡哌酸Pipemidic AcidY=282*-15.80.9990.51.0萘啶酸Nalidi*ic AcidY=891*-87.40.9

53、990.51.0西諾沙星Cino*acinY=410*-19.10.9980.51.0諾氟沙星Norflo*acinY=311*+1810.9960.51.0達(dá)氟沙星Danoflo*acinY=558*-65.70.9970.51.0洛美沙星Lomeflo*acinY=418*-38.30.9990.51.0二氟沙星Diflo*acinY=381*-25.60.9990.51.0沙氟沙星Saraflo*acinY=141*-4.810.9970.51.0司帕沙星Sparflo*acinY=171*-10.00.9980.51.0磺胺鄰二甲氧嘧啶Sulfado*ineY=426*-1.500.9

54、990.51.0磺胺嘧啶SulfadiazineY=149*-4.450.9980.51.0磺胺噻唑SulfathiazoleY=378*-18.90.9980.51.0磺胺吡啶SulfapyridineY=321*-23.50.9980.51.0磺胺甲基嘧啶SulfamerazineY=237*-25.00.9990.51.0磺胺二甲基噁唑Sulfamo*olY=386*-13.00.9990.51.0磺胺對(duì)甲氧嘧啶SulfameterY=229*+8.680.9980.51.0磺胺二甲嘧啶SulfamethazineY=365*+1.050.9980.51.0磺胺甲噻二唑Sulfameth

55、izoleY=391*+1.480.9970.51.0磺胺甲氧噠嗪Sulfametho*ypyridazineY=419*-27.60.9990.51.0磺胺甲噁唑Sulfametho*azoleY=211*+4.540.9960.51.0磺胺氯達(dá)嗪SulfachloropyridazineY=296*-17.10.9990.51.0磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonometho*ineY=275*+7.70.9980.51.0磺胺醋酰SulfacetamideY=139*+9.820.9990.51.0磺胺二甲異噁唑Sulfiso*azoleY=291*+10.20.9980.51.0磺胺苯吡唑

56、SulfaphenazoleY=138*-10.70.9970.51.0磺胺二甲氧嘧啶Sulfadimetho*ineY=359*-64.30.9990.51.0磺胺喹噁啉Sulfaquino*alineY=408*-65.20.9990.51.0通過表3數(shù)據(jù)可以看出4種四環(huán)素類藥物在5.0 ngmL-1-200.0 ngmL-1的濃度圍呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.990，檢測(cè)限為2.0 ngmL-1，定量限為5.0 ngmL-1；喹諾酮及磺胺類藥物在1.0 ngmL-1-100.0 ngmL-1的濃度圍呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.996；檢測(cè)限為0.5 ngmL-1，定

57、量限為1.0ngmL-1。對(duì)于-受體沖動(dòng)劑類藥物，按標(biāo)法以峰面積比計(jì)算，結(jié)果說明10種-受體沖動(dòng)劑類藥物在1.0 ngmL-1-100.0 ngmL-1的濃度圍呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r)均大于0.992；檢測(cè)限為0.5 ngmL-1，定量限為1.0ngmL-1。上述數(shù)據(jù)說明本創(chuàng)造檢測(cè)方法靈敏度高，檢測(cè)限和定量限較低?；厥章屎途?xì)度試驗(yàn)準(zhǔn)確量取適量的46個(gè)藥物的標(biāo)準(zhǔn)液，配制高、中、低濃度的46種標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別添加到5.0 g安康牛肉中，按照1.2的樣品前處理方法項(xiàng)下處理樣品，并測(cè)定藥物濃度，每個(gè)濃度測(cè)定6個(gè)樣本，每個(gè)濃度的測(cè)得量與參加量相比，最終得回收率。日精細(xì)度按高、中、低3個(gè)濃度分別在

58、1天的不同時(shí)間測(cè)6次進(jìn)展計(jì)算，日間精細(xì)度按高、中、低濃度連續(xù)測(cè)定3天進(jìn)展計(jì)算。表4 46種藥物的準(zhǔn)確度及精細(xì)度藥物Drug濃度/ng/mL準(zhǔn)確度/%日精細(xì)度n=6日間精細(xì)度n=3土霉素O*ytetracycline5.090.36.93.88.720.093.36.06.72.3100.099.27.64.85.2金霉素Chlorotetracycline5.083.25.87.19.020.095.64.84.88.0100.096.34.55.35.4四環(huán)素Tetracycline5.085.28.83.87.120.090.07.45.24.8100.094.38.53.85.3強(qiáng)力霉素

59、Chlorotetracycline5.0101.39.47.89.920.090.19.85.37.8100.093.29.66.24.0特步他林(Terbutaline)1.0105.36.54.810.75.0103.36.26.52.350.085.23.64.85.2西馬特羅(Cimaterol)1.0104.27.56.59.15.0102.65.88.88.650.096.34.45.55.4沙丁胺醇(Salbutamol)1.0103.57.88.28.15.0101.95.88.24.350.0105.44.57.55.0菲諾特羅(Fenoterol)1.091.07.36.

60、64.35.090.45.26.55.950.0103.36.36.55.3萊克多巴胺(Ractopamine)1.0104.97.64.59.25.0102.25.06.17.150.0105.67.84.88.6氯丙那林(Clorprenaline)1.096.37.55.38.45.095.25.36.16.050.094.67.05.24.8克倫特羅(Clenbuterol)1.0106.97.58.59.35.0102.35.07.88.650.0104.06.55.86.0妥布特羅(Tulobuterol)1.084.36.46.77.35.093.45.84.85.250.010