醫(yī)學(xué)藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則培訓(xùn)課件

1、藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則參考2014年5月13日起草且已頒布的藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則。給出與藥品注冊(cè)工作指南（2005年3月頒布的指導(dǎo)原則）的區(qū)別之處。2參考2014年5月13日起草且已頒布的藥物非臨床藥代動(dòng)力學(xué)主要內(nèi)容（一）概述（二）試驗(yàn)設(shè)計(jì)總體要求生物樣品的分析方法研究項(xiàng)目3主要內(nèi)容（一）概述3概述定義：通過體外和動(dòng)物體內(nèi)的研究方法，揭示藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，獲得藥物的基本藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，闡明藥物的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）的過程和特征。研究意義：評(píng)價(jià)藥物制劑特性和質(zhì)量的重要依據(jù)。闡明藥物作用機(jī)制，是藥效和毒理研究動(dòng)

2、物選擇的依據(jù)之一。藥物或活性代謝產(chǎn)物濃度數(shù)據(jù)及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)是產(chǎn)生、決定或闡明藥效或毒性大小的基礎(chǔ)，可提供藥物對(duì)靶器官效應(yīng)（藥效或毒性）。為設(shè)計(jì)和優(yōu)化臨床試驗(yàn)給藥方案提供參考信息。 4概述定義：通過體外和動(dòng)物體內(nèi)的研究方法，揭示藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)（一）總體要求1 受試物：采用工藝相對(duì)穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映臨床試驗(yàn)擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。名稱、來源、批號(hào)、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告。2 試驗(yàn)動(dòng)物：成年和健康。常用動(dòng)物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。動(dòng)物選擇原則：（1）首選動(dòng)物：在考慮與人體藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)相關(guān)性的前提下，盡可能選擇

3、與毒理學(xué)和藥效學(xué)研究相同的動(dòng)物。（體外模型比較動(dòng)物與人代謝的種屬差異性）（2）盡量在動(dòng)物清醒狀態(tài)下進(jìn)行試驗(yàn)，最好從同一動(dòng)物多次采樣獲取藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。（3）創(chuàng)新性藥物應(yīng)選用兩種或兩種以上的動(dòng)物（嚙齒類+非嚙齒類）。其他藥物，可選用一種動(dòng)物，建議首選非嚙齒類動(dòng)物。（4）經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動(dòng)物。3 劑量選擇：動(dòng)物體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)設(shè)置至少三個(gè)劑量組，低劑量與動(dòng)物最低有效劑量基本一致，中、高劑量按一定比例增加。（書：高劑量最好接近最大耐受劑量，中小劑量根據(jù)動(dòng)物有效劑量的上下限范圍選?。? 給藥途徑：盡可能與臨床用藥一致，也要兼顧藥效學(xué)研究和毒理研究的給藥途徑。5（一）總體要求1 受試物：采

4、用工藝相對(duì)穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能（二）生物樣品的分析方法色譜法、放射性同位素標(biāo)記法、微生物 學(xué)方法、免疫學(xué)方法。方法學(xué)驗(yàn)證是生物樣品分析的基礎(chǔ)。包括準(zhǔn)確度、精密度、特異性、靈敏度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等研究；制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行測(cè)定，確保生物樣品分析的可靠性。6（二）生物樣品的分析方法色譜法、放射性同位素標(biāo)記法、微生物 指導(dǎo)原則對(duì)“生物樣品的分析”修改部分基本概念1.靈敏度：主要通過測(cè)定定量下限樣品的準(zhǔn)確度和精密度來表征。（書：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線表征，主要包括定量下限和濃度-響應(yīng)函數(shù)）2.介質(zhì)改成為基質(zhì)：基質(zhì)組分、生物基質(zhì)、基質(zhì)效應(yīng)。分析方法驗(yàn)證1.特異性：對(duì)于色譜法至少要考察6個(gè)不同個(gè)體空白

5、生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品（注明樣品來源基質(zhì)、用藥后的時(shí)間）色譜圖。2.精密度：為獲得批間精密度，應(yīng)至少3個(gè)分析批合格。（書：連續(xù)3個(gè)分析批）3.稀釋可靠性：樣品稀釋不應(yīng)影響準(zhǔn)確度和精密度。準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)在15%之內(nèi)。稀釋的可靠性應(yīng)該覆蓋試驗(yàn)樣品所用的稀釋倍數(shù)。4.殘留：方法開發(fā)期間應(yīng)使殘留最小化。方法驗(yàn)證期間應(yīng)通過檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量上限濃度后測(cè)定空白樣品來確定其殘留，通常殘留應(yīng)不大于定量下限的20%。生物樣品分析期間也應(yīng)進(jìn)行殘留檢測(cè)，如在測(cè)定高濃度樣品后和分析下一個(gè)樣品之前測(cè)定空白樣品。5.組織分布樣品： 組織分布樣品由于每種組織樣本數(shù)目少，

6、所以其分析方法只需驗(yàn)證選擇性、日內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度等。通常選擇一兩種代表性組織進(jìn)行分析方法驗(yàn)證。7指導(dǎo)原則對(duì)“生物樣品的分析”修改部分基本概念7生物樣品分析方法的應(yīng)用每個(gè)分析批應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，隨行測(cè)定高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中。當(dāng)一個(gè)分析批中未知樣品數(shù)目較多時(shí)，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%（書：低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%），最多允許1/3質(zhì)控樣品的結(jié)果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn)。同一天內(nèi)進(jìn)行不同組織樣品測(cè)試時(shí)，用代表性組織作為基質(zhì)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，但質(zhì)控樣品應(yīng)采用目標(biāo)空白

7、組織制備。根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算質(zhì)控樣品的濃度，若相對(duì)偏差在15%之內(nèi)，則可共用一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，否則采用與待測(cè)組織樣品相同的空白組織建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。指導(dǎo)原則對(duì)“生物樣品的分析”修改部分8生物樣品分析方法的應(yīng)用指導(dǎo)原則對(duì)“生物樣品的分析”修改部分8（三）研究項(xiàng)目血藥濃度-時(shí)間曲線吸收分布排泄與血漿蛋白的結(jié)合生物轉(zhuǎn)化藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體研究物質(zhì)平衡創(chuàng)新型藥物9（三）研究項(xiàng)目血藥濃度-時(shí)間曲線創(chuàng)新型藥物9（三）研究項(xiàng)目血藥濃度-時(shí)間曲線1.1 受試動(dòng)物數(shù)：以藥-時(shí)曲線的每個(gè)采樣點(diǎn)不少于5個(gè)數(shù)據(jù)計(jì)算所需動(dòng)物數(shù)。受試動(dòng)物采用雌雄各半。（書：最好從同一受試動(dòng)物個(gè)體取樣，如由多只動(dòng)物的數(shù)據(jù)共同構(gòu)成一條血藥濃度-時(shí)間

8、曲線，需增加動(dòng)物數(shù)，以反映個(gè)體差異對(duì)結(jié)果的影響）1.2 采樣點(diǎn)*：（1）給藥前需采血作為空白樣品。（2）采樣時(shí)間點(diǎn)的設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧藥物的吸收相、平衡相（峰濃度Cmax附近）和消除相。一般在吸收相至少需要23個(gè)采樣點(diǎn)，對(duì)于吸收快的血管外給藥藥物，避免第一個(gè)點(diǎn)是Cmax；在Cmax附近需要3個(gè)時(shí)間點(diǎn)；消除相需要46個(gè)采樣點(diǎn)。（3）整個(gè)采樣時(shí)間應(yīng)持續(xù)到35個(gè)半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/101/20。（4）注意采血途徑和整個(gè)試驗(yàn)周期的采血總量不影響動(dòng)物的正常生理功能和血液動(dòng)力學(xué)，一般不超過動(dòng)物總血量的1520%。例如，每只大鼠24h內(nèi)采血總量不宜超過2 mL。在采血方式上，同時(shí)也要兼顧動(dòng)物福利

9、。10（三）研究項(xiàng)目血藥濃度-時(shí)間曲線10（三）研究項(xiàng)目1.3 口服給藥：給藥前應(yīng)禁食12小時(shí)以上，以排除食物對(duì)藥物吸收的影響。1.4 多次（重復(fù)）給藥對(duì)于臨床需長(zhǎng)期給藥或有蓄積傾向的藥物，應(yīng)考慮進(jìn)行多次（重復(fù)）給藥的藥代動(dòng)力學(xué)研究。多次給藥試驗(yàn)時(shí), 一般可選用一個(gè)劑量(有效劑量)。1.5 血藥濃度測(cè)定1.6 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)靜脈注射給藥：消除半衰期（t1/2）、表觀分布容積（Vd）、藥-時(shí)曲線下面積（AUC）、清除率（CL）等參數(shù)值。血管外給藥：上述參數(shù)、峰濃度（Cmax）和達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等，以反映藥物吸收、消除的規(guī)律。統(tǒng)計(jì)矩參數(shù)，如: 平均滯留時(shí)間（MRT）、AUC(0-t)和AUC(

10、0-)等，以描述藥物藥代動(dòng)力學(xué)特征。11（三）研究項(xiàng)目1.3 口服給藥：給藥前應(yīng)禁食12小時(shí)以上，以（三）研究項(xiàng)目1.7 應(yīng)提供的數(shù)據(jù)1.7.1 單次給藥各個(gè)受試動(dòng)物的藥-時(shí)數(shù)據(jù)及曲線和各組平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及曲線。各個(gè)受試動(dòng)物的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及各組平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。對(duì)受試物單次給藥非臨床藥代動(dòng)力學(xué)的規(guī)律和特點(diǎn)進(jìn)行討論和評(píng)價(jià)。1.7.2 多次（重復(fù)）給藥各個(gè)受試動(dòng)物首次給藥后的藥-時(shí)數(shù)據(jù)及曲線和主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及各組平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和曲線。各個(gè)受試動(dòng)物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及各組平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。各個(gè)受試動(dòng)物血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后末次給藥的藥-時(shí)數(shù)據(jù)和曲線和主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，及各組平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和曲線。

11、比較首次與末次給藥的藥-時(shí)曲線和有關(guān)參數(shù)。對(duì)受試物多次給藥非臨床藥代動(dòng)力學(xué)的規(guī)律和特點(diǎn)進(jìn)行討論和評(píng)價(jià)。12（三）研究項(xiàng)目1.7 應(yīng)提供的數(shù)據(jù)12（三）研究項(xiàng)目2. 吸收經(jīng)口給藥的新藥，進(jìn)行整體動(dòng)物試驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能同時(shí)進(jìn)行血管內(nèi)給藥的試驗(yàn)，提供絕對(duì)生物利用度。如有必要，可進(jìn)行體外細(xì)胞試驗(yàn)、在體或離體腸道吸收試驗(yàn)等以闡述藥物的吸收特性。對(duì)于其他血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應(yīng)根據(jù)立題目的，提供絕對(duì)生物利用度或相對(duì)生物利用度。建議采用非嚙齒類動(dòng)物自身交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，用同一受試動(dòng)物比較生物利用度。生物利用度：指藥物制劑被機(jī)體吸收的速率和吸收程度的一種度量。絕對(duì)生物利用度：用非血管途徑給藥的藥時(shí)曲線

12、下面積與該藥參比制劑靜注給藥的AUC的比值，以百分率表示。相對(duì)生物利用度：用相同途徑給藥的試驗(yàn)制劑與參比制劑的藥時(shí)曲線下面積的比值。13（三）研究項(xiàng)目2. 吸收13（三）研究項(xiàng)目3. 分布大鼠或小鼠，必要時(shí)可選擇非嚙齒類動(dòng)物（書：選用大鼠或小鼠做組織分布試驗(yàn)較為方便）選擇一個(gè)劑量（有效劑量）給藥后，至少測(cè)定藥物及主要代謝產(chǎn)物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度。必要時(shí)建立和說明血藥濃度與靶組織藥物濃度的關(guān)系。參考藥-時(shí)曲線的變化趨勢(shì)，選擇至少3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。若某組織的藥物或代謝產(chǎn)物濃度較高，應(yīng)增加觀測(cè)點(diǎn)，進(jìn)一步研究該組織中藥物消

13、除的情況。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，一般應(yīng)有6個(gè)動(dòng)物（雌雄各半）的數(shù)據(jù)?？煽紤]進(jìn)行多次給藥后特定組織的藥物濃度研究：進(jìn)行組織分布試驗(yàn)，必須注意取樣的代表性和一致性。14（三）研究項(xiàng)目3. 分布14（三）研究項(xiàng)目4. 排泄同時(shí)提供嚙齒類和非嚙齒類動(dòng)物的排泄數(shù)據(jù)，嚙齒類每個(gè)性別3只動(dòng)物，非嚙齒類每個(gè)性別23只動(dòng)物。（書：大鼠或小鼠）4.1 尿和糞的藥物排泄：將動(dòng)物放入代謝籠內(nèi)，選定一個(gè)有效劑量給藥后，按一定的時(shí)間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，直至收集到的樣品中藥物和主要代謝產(chǎn)物低于定量下限或小于給藥量的1%。糞樣品收集后按一定比例制成勻漿，記錄總重量或體積，取部分尿或糞樣品進(jìn)行藥物和主要代謝產(chǎn)物濃度測(cè)定或代謝產(chǎn)

14、物譜分析，計(jì)算藥物和主要代謝產(chǎn)物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量。每個(gè)時(shí)間段至少有5只動(dòng)物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。采樣時(shí)間點(diǎn)：采取給藥前尿及糞樣，參考預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，設(shè)計(jì)給藥后收集樣品的時(shí)間點(diǎn)，包括藥從尿或糞中開始排泄、排泄高峰及排泄結(jié)束的全過程）4.2 膽汁排泄：一般在動(dòng)物麻醉下作膽管插管引流，待動(dòng)物清醒且手術(shù)完全恢復(fù)后給藥，并以合適的時(shí)間間隔分段收集膽汁，進(jìn)行藥物和主要代謝產(chǎn)物測(cè)定。（書：大鼠在乙醚麻醉下）4.3 記錄藥物及主要代謝產(chǎn)物自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質(zhì)平衡的數(shù)據(jù)。15（三）研究項(xiàng)目4. 排泄15（三）研究項(xiàng)目5. 與血漿蛋白的結(jié)合建議根據(jù)藥理毒理研究所采用的動(dòng)

15、物種屬，進(jìn)行動(dòng)物與人血漿蛋白結(jié)合率比較試驗(yàn)。采用方法：平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、色譜法等?？蛇x擇使用一種方法進(jìn)行至少3個(gè)濃度（包括有效濃度）的血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少重復(fù)試驗(yàn)次，以了解藥物與血漿蛋白結(jié)合率以及可能存在的濃度依賴性和血漿蛋白結(jié)合率的種屬差異。對(duì)血漿蛋白結(jié)合率高，且安全范圍窄的藥物，（書：對(duì)蛋白結(jié)合率高于90%的藥物）建議開展體外藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結(jié)合率藥物，考察對(duì)所研究藥物蛋白結(jié)合率的影響。16（三）研究項(xiàng)目5. 與血漿蛋白的結(jié)合16（三）研究項(xiàng)目6. 生物轉(zhuǎn)化-創(chuàng)新型藥物臨床前可先采用色譜方法或放射性同位素標(biāo)記方法分析

16、和分離可能存在的代謝產(chǎn)物，并用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法初步推測(cè)其結(jié)構(gòu)。體內(nèi)藥物生物轉(zhuǎn)化可考慮與藥-時(shí)曲線和排泄試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，應(yīng)用這些試驗(yàn)采集的樣品進(jìn)行代謝產(chǎn)物的鑒定及濃度測(cè)定。建議在早期非臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，進(jìn)行藥物體外代謝試驗(yàn)。盡早考察藥效和毒性試驗(yàn)所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人體代謝的差異?？紤]這種代謝的種屬差異是否會(huì)影響到其藥效和毒性，并以此作為藥效和毒性試驗(yàn)動(dòng)物選擇的依據(jù)。17（三）研究項(xiàng)目6. 生物轉(zhuǎn)化-創(chuàng)新型藥物17（三）研究項(xiàng)目7.藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體研究-創(chuàng)新型藥物體外試驗(yàn)體系是評(píng)價(jià)藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體作用機(jī)制，結(jié)合體內(nèi)試驗(yàn)，綜合評(píng)價(jià)藥物的處置過程。非臨床ADME研究應(yīng)主要采用人源化材料（如：人

17、肝微粒體、肝S9、原代肝細(xì)胞及P450重組酶等），鑒定藥物是否是代謝酶的底物或抑制劑。具有重要臨床意義的外排和攝入轉(zhuǎn)運(yùn)體主要包括P-gp、BCRP、OATP1B1、OATP1B3、OAT1、OAT3和OCT2等，建議針對(duì)這些轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)行研究。考慮代謝酶與轉(zhuǎn)運(yùn)體之間的相互影響及潛在的相互作用、人特異性代謝產(chǎn)物的評(píng)估等。18（三）研究項(xiàng)目7.藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體研究-創(chuàng)新型藥物18（三）研究項(xiàng)目8. 物質(zhì)平衡-創(chuàng)新型藥物臨床前和臨床早期，毒性劑量和有效治療劑量范圍確定時(shí)，運(yùn)用放射性標(biāo)記化合物，收集動(dòng)物和人體糞、尿以及膽汁以研究藥物的物質(zhì)平衡。這些研究能夠獲得化合物的排泄途徑和排泄速率等信息，而且有助于代謝產(chǎn)物的性質(zhì)鑒定，并通過有限的數(shù)據(jù)比較它們的體內(nèi)吸收和分布特點(diǎn)。19（三）研究項(xiàng)目8. 物質(zhì)平衡-創(chuàng)新型藥物19研究項(xiàng)目：（1）血藥濃度-時(shí)間曲線：不少于5個(gè)、雌雄各半、同一受試動(dòng)物個(gè)體取樣；采樣點(diǎn)*；給藥劑量。（