臨床微生物檢 驗(yàn)弧菌屬

1、弧 菌 屬 Vibrio 分類弧菌科弧菌屬異單胞菌屬腸弧菌屬發(fā)光桿菌屬等共8個(gè)屬O1群霍亂弧菌非O1/O139群霍亂弧菌副溶血弧菌等36個(gè)種 注：鄰單胞菌屬現(xiàn)屬腸桿菌科、氣單胞菌屬屬于氣單胞菌科擬態(tài)弧菌O139群霍亂弧菌Vibrionaceae弧菌科共同生物學(xué)特性 革蘭陰性弧菌或短桿菌 兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高 極端單鞭毛 動(dòng)力陽性 發(fā)酵葡萄糖 氧化酶陽性 革蘭陰性、弧形（短桿）菌、動(dòng)力（） 兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高 除麥?zhǔn)匣【猓趸福?） 發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，罕見產(chǎn)氣；硝酸鹽還原（+） 鈉離子能刺激其生長，部分菌株嗜鹽 對O/129敏感（近年出現(xiàn)抗性株）弧菌屬（Vibrio）的共同生物學(xué)特性弧菌

2、屬（Vibrio）的共同生物學(xué)特性副溶血弧菌O/129敏感弧菌屬（Vibrio）的共同生物學(xué)特性嗜水氣單胞菌O/129耐藥弧菌屬的致病性（含鹽和海水環(huán)境中自身微生物群的一部分）腸道內(nèi)感染腸道外感染 霍亂、胃腸炎 傷口感染、敗血癥等致病性弧菌所引起的疾病霍亂弧菌是烈性腸道傳染病霍亂的病原菌，為我國法定傳染?。最悾追Q2號病。（1號病為鼠疫）?；?亂 弧 菌Vibrio cholerae O1 and O139霍亂的流行史1817-1923 共6次 印度恒河三角洲 古典生物型1961 第7次 印度尼西亞 Eltor生物型1992.10 孟加拉灣的印度、孟加拉 O139霍亂的流行史O139群霍亂

3、弧菌在亞洲的流行(1992.10-1994.11)臨床意義-感染途徑糞口途徑臨床意義-致病因素侵襲力 進(jìn)入小腸，鞭毛、菌毛，O139有莢膜粘附于小腸粘膜上皮細(xì)胞刷狀緣的微絨毛上大量繁殖穿過小腸粘膜表面粘液層臨床意義-致病因素霍亂腸毒素霍亂弧菌腸毒素（CE, cholera enterotoxin）A1:毒素亞單位 A2:連接亞單位 B：結(jié)合亞單位臨床意義-臨床表現(xiàn)霍亂弧菌的致?。▏?yán)重時(shí)液體丟失量達(dá)5001000ml/h） 劇烈上吐下瀉“米泔水”樣糞便 嚴(yán)重脫水、酸中毒 低血容量性休克 肌肉痙攣、尿閉、死亡。臨床意義-引起的疾病分類（血清群） H 抗原：共同抗原 特異性低血清分群O 抗原（A、B

4、、C) 分群和分型的基礎(chǔ)有155個(gè)血清群（O1、O139、非O1群霍亂弧菌）分類 (血清型) O抗原有A,B,C三種抗原因子，不同組合不同型別分類（生物型） O1群每個(gè)血清型根據(jù)表型不同分成噬菌體分型生物分型第IV組噬菌體 古典生物型 第V組噬菌體 El-Tor生物型 O1群霍亂弧菌 古典生物型El-Tor生物型生物學(xué)特性(生物型的區(qū)分：根據(jù)生物特性分型)生物學(xué)特性-純培養(yǎng)革蘭染色 霍亂弧菌的革蘭染色結(jié)果1.形態(tài)染色結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：革蘭陰性，彎曲弧形或逗點(diǎn)狀?！懊足锼奔S便標(biāo)本中可首尾相接魚群樣平行排列 魚群樣排列霍亂弧菌形態(tài)（電鏡）生物學(xué)特性-純培養(yǎng)掃描電鏡霍亂弧菌的掃描電鏡圖（金屬鍍膜）形態(tài)特點(diǎn)

5、：彎曲弧形或逗點(diǎn)狀生物學(xué)特性 (電鏡)霍亂患者小腸粘膜上皮局部平切電鏡圖霍亂弧菌掃描電鏡圖（金屬鍍膜）生物學(xué)特性 (米泔水樣便)霍亂弧菌的運(yùn)動(dòng)模式圖特點(diǎn)：動(dòng)力（+）呈“流星樣”樣運(yùn)動(dòng)。生物學(xué)特性 (電鏡)霍亂弧菌的鞭毛（單鞭毛）生物學(xué)特性 (特殊染色10,000)霍亂弧菌的鞭毛染色生物學(xué)特性-培養(yǎng)特性 需氧或兼性厭氧，有氧環(huán)境下長的更好 營養(yǎng)要求不高 最適生長溫度35 最適pH8.29.0 Max:10.2 (耐堿怕酸)Eltor生物型在血平板上可形成-溶血（有變異）培養(yǎng)條件初次分離用pH8.5堿性蛋白胨水增菌，經(jīng)46小時(shí)液體表面大量繁殖，形成菌膜培養(yǎng)條件生物學(xué)特性-培養(yǎng)特性生物學(xué)特性 (培養(yǎng)

6、特性選擇鑒別性平板)TCBS（硫代硫酸鹽-枸櫞酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂平板）霍亂弧菌在TCBS瓊脂平板上形成發(fā)酵蔗糖的較大的黃色菌落生物學(xué)特性 (培養(yǎng)特性選擇鑒別性平板)含亞碲酸鉀的培養(yǎng)基：4號瓊脂 慶大霉素瓊脂霍亂弧菌在含亞碲酸鉀的瓊脂平板上將碲離子還原成金屬碲，形成有灰褐色中心的菌落生物學(xué)特性-重要的生化反應(yīng)霍亂弧菌副溶血弧菌擬態(tài)弧菌麥?zhǔn)匣【趸?硝酸鹽還原 除霍亂和擬態(tài)弧菌外，其余弧菌需在含鹽培養(yǎng)基上生長，在不含鹽的培養(yǎng)基上不生長。霍亂弧菌擬態(tài)弧菌副溶血弧菌耐鹽試驗(yàn)(%NaCl)0% 6% 7% 10% 生物學(xué)特性-重要的生化反應(yīng) 吲哚、枸櫞酸鹽利用、明膠試驗(yàn)均（+） 賴氨酸和鳥氨酸脫羧酶

7、（+） 精氨酸雙水解（） 動(dòng)力（+） 發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇，乳糖（-）生物學(xué)特性-重要的生化反應(yīng)生物學(xué)特性-抵抗力 河水中：20天 蔬菜水果上：1周 冰內(nèi)：4天 對熱、干燥、日光和常用消毒劑敏感， 10012min 即可殺死 耐堿怕酸： 胃酸中存活4分鐘 pH 10.2仍能生長 對慶大霉素耐藥：用于制作選擇性培養(yǎng)基 多粘菌素B(50u/ml)：Eltro biotype耐藥， Classic biotype敏感，可作為分型依據(jù)微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本的采集患者的米泔水樣便、嘔吐物、尸檢腸內(nèi)容物或攜帶有病原菌的海產(chǎn)品和污染的水源等微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法（1）直接鏡檢：取標(biāo)本涂片2張，乙醇或甲

8、醇固定，革蘭染色，油鏡觀察。（2）動(dòng)力和制動(dòng)試驗(yàn)：水樣便，懸滴（壓滴）、高倍鏡、暗視野觀察動(dòng)力：穿梭似流星狀。同法制備另一標(biāo)本，加入1滴不含防腐劑的霍亂多價(jià)診斷血清（效價(jià)1:64）；可見運(yùn)動(dòng)活潑的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)停止并發(fā)生凝集，為制動(dòng)試驗(yàn)陽性；推斷存在霍亂弧菌。（3）玻片凝集：O1群和O139群抗原的單克隆抗體（4）分離培養(yǎng)：常用堿性蛋白胨水、選擇性平板（TCBS、4號等），菌落特征和蔗糖發(fā)酵菌落，如有可疑菌落，進(jìn)一步鑒定。微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法l）初步鑒定：與01群和O139群抗血清(多價(jià)和單價(jià)）凝集試驗(yàn)，菌落和菌體形態(tài)、氧化酶試驗(yàn)等作出初步報(bào)告。2）最后鑒定：根據(jù)純培養(yǎng)后全面生化反應(yīng)、血清學(xué)分群及

9、分型、生物型。 微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法初篩試驗(yàn)： (1)霍亂紅試驗(yàn) (2)O/129敏感試驗(yàn) 微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法 霍亂紅試驗(yàn)（+） O/129敏感試驗(yàn)初篩試驗(yàn)： (3)黏絲試驗(yàn) (4)耐鹽試驗(yàn) 微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法生物分型試驗(yàn)： a.羊紅細(xì)胞溶血試驗(yàn) b.雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) c. VP試驗(yàn) d.多粘菌素B敏感試驗(yàn) e. 第IV和V組霍亂弧菌噬菌體裂解試驗(yàn)。微生物學(xué)檢驗(yàn)-檢驗(yàn)方法微生物學(xué)檢驗(yàn)（檢驗(yàn)方法）鑒別試驗(yàn)： 霍亂弧菌與擬態(tài)弧菌鑒別：蔗糖發(fā)酵 （） （） 霍亂弧菌和氣單胞菌鑒別： （） （） 黏絲試驗(yàn) 敏感 耐藥 O/129敏感試驗(yàn)副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticu

10、s)臨床意義 （1）溶血毒性； （2）細(xì)胞毒性 （3）心臟毒性； （4）腸毒性 致病因子： 菌毛 TDH（thermostable direct hemolysin) TRH（thermostable direct hemolysin related hemolysin) 嗜鹽性，存在于海水和海產(chǎn)品中，主要引起食物中毒、急性腹瀉、也可引起傷口感染、菌血癥。 生物學(xué)特性-形態(tài)特征 革蘭氏陰性 直或微彎桿菌 極端單鞭毛， 無莢膜副溶血弧菌革蘭染色生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征 需氧或兼性厭氧 營養(yǎng)要求不高，嗜鹽（無鹽不生長,最適鹽濃度 3.5%） 最適pH7.78.0，最適溫度3037 TCBS上形成綠色菌

11、落副溶血弧菌在TCBS上菌落生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征副溶血弧菌在TCBS上菌落生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征從腹瀉病人中分離到的副溶血弧菌95%以上 在我萋培養(yǎng)基上可產(chǎn)生-溶血現(xiàn)象，稱為神奈川現(xiàn)象（Kanagawa phenomenon, KP）在嗜鹽性選擇平板上形成較大圓形、隆起、半透明或不透明、無黏性的菌落。在SS， Mac平板上形成扁平，無色半透明，蠟滴狀的菌落，不易刮下，有辛辣味。生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征副溶血弧菌神奈川現(xiàn)象生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征副溶血弧菌在羊血平板菌落（不溶血）生物學(xué)特性-培養(yǎng)特征副溶血弧菌在Mac上（不分解乳糖：淡黃色菌落）生物學(xué)特性-生化特征 氧化酶 + 蔗糖發(fā)酵 - （乳糖-） 葡

12、萄糖發(fā)酵 + (麥芽糖+、甘露醇+） NaCl生長試驗(yàn) 0%NaCl - 3%NaCl + 7%NaCl + 10%NaCl - 脲酶 + / -(臨床分離菌株常陽性）微生物學(xué)檢驗(yàn)程序標(biāo)本3.5%NaCl堿性蛋白胨水培養(yǎng)基TCBS分離培養(yǎng)可疑菌落（綠色）純培養(yǎng)菌種鑒定毒素測定生物學(xué)特性（鑒定特征） 革蘭陰性弧菌或桿菌，動(dòng)力（） 氧化酶（），臨床分離株脲酶（） TCBS上綠色菌落、氯化鈉生長試驗(yàn) 神奈川現(xiàn)象(+) TDH和TRH的檢測：毒素和基因檢測 各種生化試驗(yàn) 思考題1. 描述弧菌屬的共性。2. 描述霍亂弧菌的血清分群、血清分型和生物分型依據(jù)3. 霍亂弧菌的致病因子及特點(diǎn)4. 霍亂弧菌的培養(yǎng)

13、特點(diǎn)及生化特征5. 如何從糞便標(biāo)本中快速檢出霍亂弧菌6. 霍亂弧菌的鑒別鑒定試驗(yàn)主要包括哪些？7. 副溶血弧菌的致病及生物學(xué)特性（形態(tài)結(jié)構(gòu)、培養(yǎng)、生化、抵抗力）KEY POINTSThe genus Vibrio is calssified in the family Vibrionaceae, and it is the type genus for the family. Vibrio cholera is the pathogen of cholera and it is the most important species in the genus Vibrio. It is now divided into three major subgroups: V. cholera O1, V. cholera O139,and V. cholera non-O1. Vibrio parahaemolyticus causes gastroenteritis in human following ingest