蟾蜍離體坐骨神經–腓腸肌標本制備培訓課件

1、蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，而且其離體組織的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，來源也較豐富，因此在生理學實驗，常用蛙或蟾蜍的坐骨神經-腓腸肌標本來觀察神經肌肉的興奮性、刺激與反應的規(guī)律及肌肉收縮的特點等。制備具有正常興奮收縮功能的蛙類坐骨神經腓腸肌標本是生理學實驗的基本操作技術之一。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20221蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，而且【目的要求】1. 學習蛙類動物單毀髓和雙毀髓的方法。2. 掌握坐骨神經腓腸肌標本的制備方法。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20222【目的要求】1. 學習蛙類動物單毀髓

2、和雙毀髓的方法。蟾蜍離體【基本原理】兩棲類動物生存環(huán)境較簡單，離體組織或器官所要求的條件也較簡單。坐骨神經和腓腸肌屬于可興奮組織，把它們置于人工配制的任氏液中，其興奮性在幾個小時內保持不變。若給坐骨神經一個適宜的刺激，可在神經和肌肉上產生一個可傳導的動作電位，肉眼可以看到一次肌肉的收縮和舒張，表明神經和肌肉興奮了一次。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20223【基本原理】兩棲類動物生存環(huán)境較簡單，離體組織或器官所要求的 【動物和器材】蟾蜍或蛙；任氏液；常規(guī)手術器械；毀髓針、鋅銅弓、解剖盤、玻璃分針、培養(yǎng)皿、燒杯、滴管、蛙板、蛙釘等。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20224 【

3、動物和器材】蟾蜍或蛙；蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備1【步驟】雙毀髓剝制后肢標本分離兩后肢分離坐骨神經分離股骨游離腓腸肌檢驗標本蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20225【步驟】雙毀髓分離股骨蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/1、雙毀髓左手握蟾蜍，背部向上。用食指按壓其頭部前端，拇指壓住軀干的背部，使頭向前俯；右手持毀髓針，由兩眼之間中線向后方劃觸，觸及兩耳后腺之間的凹陷處即是枕骨大孔的位置。將毀髓針由凹陷處垂直刺入枕骨大孔（進針深度約2mm，有脫空感即到達椎管），然后針尖向前刺入顱腔，在顱腔內攪動，以毀腦組織。再將毀髓針退至枕骨大孔，針尖轉向后方，與脊柱平行刺入椎管，以搗毀脊髓。脊

4、髓徹底搗毀時，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后癱軟，此時的動物為雙毀髓動物（pithed toad） 。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202261、雙毀髓左手握蟾蜍，背部向上。用食指按壓其頭部前端，拇指壓蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20227蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/3/202272、剝制后肢標本剪除軀干上部及內臟：左手持手術鑷提起兩前肢之間背部的皮膚，右手持手術剪橫向剪斷皮膚，然后往后肢方向撕剝皮膚。用金冠剪在顱骨后方剪斷脊柱。左手握住蟾蜍下肢，大拇指抵住脊柱尾骨，右手用粗剪刀沿脊柱兩側（避開坐骨神經）剪開腹壁。此時軀干上部及內臟即全部下垂。剪除全部軀干上部及內臟

5、組織，棄于燒杯內。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202282、剝制后肢標本剪除軀干上部及內臟：左手持手術鑷提起兩前肢之蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/20229蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/3/20229剝皮：避開神經，左手持鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊緣，向下牽拉剝離皮膚。拉至大腿時，如阻力較大，可先剝下一側，再剝另一側。將全部皮膚剝除后，將標本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。然后洗凈雙手和用過的全部手術器械，再進行下列步驟。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202210剝皮：避開神經，左手持鑷子夾住脊柱，右手捏住皮膚邊緣，向下牽3、分離兩后肢將去皮的后肢腹面向上置于

6、解剖盤上，右手持金冠剪縱向剪開脊柱，再剪開恥骨聯合，使兩后肢完全分離。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/2022113、分離兩后肢將去皮的后肢腹面向上置于解剖盤上，右手持金冠剪4、分離坐骨神經將一側后肢的脊柱端腹面向上，用大頭針將標本背位固定于蛙板上。用玻璃分針沿脊神經向后分離坐骨神經。股部沿腓腸肌正前方的股二頭肌和半膜肌之間的裂縫，縱向分離暴露坐骨神經的大腿部分，直至分離至腘窩脛神經分叉處。剪斷蓋在坐骨神經上方的梨狀肌，完全暴露坐骨神經，剪去支配腓腸肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神經發(fā)出部位的一小塊脊柱骨。將已游離的坐骨神經搭在腓腸肌上。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/

7、9/2022124、分離坐骨神經將一側后肢的脊柱端腹面向上，用大頭針將標本背蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202213蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/3/2022135、分離股骨沿膝關節(jié)剪除并刮凈股骨周圍的肌肉，保留股骨的后2/3，剪斷股骨。注意：勿剪斷坐骨神經。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/2022145、分離股骨沿膝關節(jié)剪除并刮凈股骨周圍的肌肉，保留股骨的后26、游離腓腸肌在腓腸肌跟腱下穿線并結扎，提起結扎線，剪斷肌腱與脛腓骨的聯系，游離腓腸肌，剪去膝關節(jié)下部的后肢，保留腓腸肌與股骨的聯系，制備出完整的坐骨神經-腓腸肌標本。標本應包括：坐骨神經、腓腸肌、股骨頭和一段

8、脊柱骨四部分。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/2022156、游離腓腸肌在腓腸肌跟腱下穿線并結扎，提起結扎線，剪斷肌腱7、檢驗標本將制備好的標本浸泡到任氏液中5-10min，待其功能穩(wěn)定后，用任氏液沾濕的鋅銅弓的兩極接觸神經，如腓腸肌迅速發(fā)生收縮，則標本機能正常。依次用溫熱的玻璃棒和食鹽的接觸和洗脫檢驗肌肉收縮的變化。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/2022167、檢驗標本將制備好的標本浸泡到任氏液中5-10min，待其【注意事項】1）雙毀髓時應注意捻動探針并使蟾蜍頭部前俯，防止耳后腺分泌物射入實驗者眼內，如被射入，應立即用生理鹽水沖洗眼睛。2）標本制備過程中應經常滴加任氏液，防止標本干燥，以保持正常生理活性。3）避免污染、過度牽拉或用器械夾傷坐骨神經和腓腸肌。蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202217【注意事項】1）雙毀髓時應注意捻動探針并使蟾蜍頭部前俯，防止思考與討論（1）用鋅銅弓刺激坐骨神經如何引起腓腸肌收縮？（2）如何保持離體標本的機能正常？（3）剝去皮膚的后肢標本能用自來水沖洗嗎？蟾蜍離體坐骨神經腓腸肌標本制備10/9/202218思考與討論（1）