高效液相色譜法測(cè)定鴨掌散不同煎液中甘草酸的含量及體外抗菌作用

1、高效液相色譜法測(cè)定鴨掌散差異煎液中甘草酸的含量及體外抗菌作用葉世蕓馮華武孔云靳鳳云賀祝英田維毅梁光義【摘要】目的觀察用合煎傳統(tǒng)湯劑、分煎配方顆粒湯劑要領(lǐng)制備的鴨掌散湯劑中甘草酸含量的變革，并比力其體外抗菌作用。要領(lǐng)創(chuàng)立高效液相色譜要領(lǐng)，接納Dianisl18柱(2504.6，5)，甲醇-0.2l/L醋酸胺溶液-冰醋酸67331為活動(dòng)相，流速1l/in，檢測(cè)波長(zhǎng)250n。闡發(fā)鴨掌散合煎液和分煎液樣品中甘草酸的含量變革。接納稀釋法體外測(cè)試?guó)喺粕⒉町惣逡簩?duì)常見(jiàn)菌種的最低抑菌濃度(I)和最低殺菌濃度(B)。效果鴨掌散分煎液中甘草酸的均勻含量大于合煎液中甘草酸的均勻含量。鴨掌散分煎液對(duì)福氏痢疾桿菌有抑菌

2、作用，而合煎液沒(méi)有；合煎液對(duì)白色葡萄球菌、黃曲霉菌的抑菌作用大于分煎液。結(jié)論與傳統(tǒng)湯劑比力，鴨掌散配方顆粒湯劑中甘草酸的含量較高，抑菌譜較廣?！娟P(guān)鍵詞】鴨掌散甘草酸合煎分煎高效液相色譜體外抗菌“鴨掌散出自張時(shí)徹?攝生眾妙方?，處方由麻黃、甘草、白果構(gòu)成，具有斂肺定喘、化痰等成果。本實(shí)行以中藥經(jīng)方“鴨掌散中的有用身分甘草酸作為指標(biāo)，比力該方合煎法與分煎法制得的湯劑中甘草酸含量差異以及體外抗菌活性的差異，探究中藥復(fù)方湯劑差異制法對(duì)其有用身分溶出量的影響，亦對(duì)單味中藥精制顆粒應(yīng)用于臨床提供一些理論根據(jù)。1東西1.1儀器安捷倫1100型高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，1100/IND3D化學(xué)事情站。1.

3、2藥材與試劑麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasiniaStapf(河北)；白果為銀杏科植物銀杏GinkgbilbaL.貴州的枯燥成熟種子；甘草GlyyrrhizauralensisFish(內(nèi)蒙)。以上3味藥材飲片經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院陳德媛傳授斷定，根據(jù)2022版?中國(guó)藥典?劃定要領(lǐng)測(cè)定含量切合要求。甘草酸單銨鹽比擬品(批號(hào):0731-9704，中國(guó)藥品生物成品檢定所)；甲醇色譜純，醋酸胺、冰醋酸闡發(fā)純，水娃哈哈純潔水。2要領(lǐng)與效果2.1甘草酸含量測(cè)定及比力比擬品溶液的制備：細(xì)密稱取甘草酸單銨鹽比擬品10g，置50l量瓶中，用活動(dòng)相溶解并定容，即得甘草酸比擬品溶液每毫升甘草酸單銨鹽比擬品0.23

4、92g，折合甘草酸為0.221g1，備用。合煎液樣品溶液的制備(傳統(tǒng)湯劑，利用傳統(tǒng)煎煮法)：稱取藥材飲片，麻黃15.0g，甘草12.0g，白果10個(gè)，加8倍量的水煎煮，保持微沸30in，倒出煎液；藥渣再加8倍量的水煎煮兩次，20in/次，歸并3次煎液，減壓枯燥成干粉。稱取相稱原藥材處方量的干粉，置50l量瓶中，用開(kāi)水溶解定容至刻度冷至室溫。細(xì)密汲取2l，置25l容量瓶中，加活動(dòng)相約20l，超聲處置懲罰功率250，頻率20kHz20in，取出，放冷，加活動(dòng)相定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液用的微孔濾膜0.45濾過(guò)，即得。分煎液樣品溶液的制備配方顆粒湯劑，煎煮要領(lǐng)由貴州宏宇藥業(yè)提供：別離稱取上述量

5、的藥材麻黃、甘草和白果。麻黃加10倍量的水煎煮保持微沸40in，倒出煎液，藥渣再加6倍量的水煎煮40in；甘草加10倍量的水煎煮保持微沸60in，倒出煎液，藥渣再加8倍量的水煎煮60in；白果加10倍量的水煎煮保持微沸60in，倒出煎液，藥渣再加8倍量的水煎煮40in；別離歸并各藥材的兩次煎液，減壓枯燥成干粉。將各藥材干粉混淆勻稱，稱取相稱原藥材處方量的干粉，同合煎液樣品溶液制備法制得分煎液樣品溶液。陰性比擬液的制備：再別離按上法制備不含甘草的合煎液、分煎液的陰性比擬液。2.2體外抗菌實(shí)行平凡肉湯造就基、平凡營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血瓊脂平板、沙氏瓊脂造就基、沙氏液體造就基等。級(jí)生物寧?kù)o柜、生化造就箱。菌株

6、及藥物的處置懲罰：將上述細(xì)菌菌株別離用相應(yīng)造就基通例轉(zhuǎn)種造就24h后，再用液體傳代造就6h，然后作11000稀釋備用。黑曲霉菌和青霉菌用暴皿法網(wǎng)絡(luò)造就，洗脫孢子，調(diào)解濃度為2105個(gè)/l備用。取適量鴨掌散合煎液干粉參加50l容量瓶中，加開(kāi)水至刻度，搖勻，配成濃度相稱于1g藥材/l的合煎液溶液。取適量鴨掌散分煎液干粉參加50l容量瓶中，加開(kāi)水至刻度，搖勻，配成濃度相稱于1g藥材/l的分煎液溶液?？咕鷱?qiáng)度定性實(shí)行：接納通例瓊脂擴(kuò)散管碟法定性測(cè)定該藥的抗菌強(qiáng)度(接種試驗(yàn)菌液0.1l，藥物用上述100%濃度原液，藥物量200l)。效果見(jiàn)表3。抗菌強(qiáng)度定量實(shí)行接納試管法定量測(cè)定抗菌強(qiáng)度：每一菌株取干凈試

7、管10支，于第1管參加上述100%濃度藥液和相應(yīng)造就液1l，第2管至第8管各參加相應(yīng)造就液1l。將第1管中藥液混勻后沿28管做等倍稀釋，至第8管混勻后汲取1l棄去，由此得到12，14，181：256的稀釋度。第9管只加稀釋菌液1.05l作陽(yáng)性比擬，第10管只加相應(yīng)造就液1.05l作陰性比擬。別離汲取稀釋菌液0.05l參加第1管至第8管，混勻。通例造就效果見(jiàn)表3。表3抗菌強(qiáng)度定性、定量實(shí)行效果3討論接納HPL法測(cè)定中藥復(fù)方制劑中的甘草酸，文獻(xiàn)報(bào)道可用多種差異構(gòu)成的活動(dòng)相體系2，3，本實(shí)行選擇藥典要領(lǐng)，甘草酸在13.515.5in之間出峰，并與雜質(zhì)峰能到達(dá)基線分散。鴨掌散有斂肺定喘，化痰等成果，甘草有抗菌活性。因此，對(duì)鴨掌散合煎湯劑與分煎湯劑舉行了甘草酸含量和體外抗菌活性的比擬研究。從以上研究效果可以看出，與鴨掌散合煎液比擬力，分煎液中甘草酸的含量較高。合煎液中的有用身分含量低是否是一個(gè)比力普及的征象，另有待更深化普及的研究才氣確定。根據(jù)以上效果，合煎液對(duì)白色葡萄球菌、黃曲霉菌的抑菌作用略大于分煎液。分煎液對(duì)福氏痢疾桿菌有抑菌作用，而合煎液沒(méi)有，是否在混淆煎煮歷程中有某化學(xué)身分起按捺作用，兩種湯劑對(duì)差異細(xì)菌抑菌的差異還必要進(jìn)一步的實(shí)行研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國(guó)度藥典委員會(huì).中國(guó)藥典