生物課件第四章目的基因的獲取

1、生物課件第四章目的基因的獲取第四章 目的基因的獲取目的基因：準(zhǔn)備要分離、改造、擴(kuò)增或表達(dá)的基因。第一節(jié) 基因組DNA片斷化一、限制性?xún)?nèi)切酶法用限制性?xún)?nèi)切酶把基因組DNA切成不同大小的片斷。酶切由于帶有粘性末端，產(chǎn)物可以直接與載體連接。1. 優(yōu)點(diǎn)2. 缺點(diǎn)目的基因內(nèi)部也可能有該內(nèi)切酶的切點(diǎn)。目的基因也被切成碎片！BamH IBamH IBamH Igene二、隨機(jī)片斷化1. 限制性?xún)?nèi)切酶局部消化法控制內(nèi)切酶的用量和消化時(shí)間，使基因組中的酶切位點(diǎn)只有一部分被隨機(jī)切開(kāi)。 內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的堿基數(shù)影響所切出的產(chǎn)物的長(zhǎng)度和隨機(jī)程度。（1）限制性?xún)?nèi)切酶的選用原則1）4bp的內(nèi)切酶平均每46（4096）bp一

2、個(gè)切點(diǎn)。2）6bp的內(nèi)切酶平均每44（256）bp一個(gè)切點(diǎn)。隨機(jī)程度高。如Hae、AluI、Sau3A。 內(nèi)切酶粘性末端能與常用克隆位點(diǎn)相連。（Sau3ABamH I）2. 機(jī)械切割法（1）超聲波超聲波強(qiáng)烈作用于DNA，可使其斷裂成約300bp的隨機(jī)片斷。（2）高速攪拌1500轉(zhuǎn)/分下攪拌30min，可產(chǎn)生約8kb的隨機(jī)片斷。1976年H.G. Khorana提出了用化學(xué)方法合成基因的設(shè)想，并于1979年在science上發(fā)表了率先成功地合成大腸桿菌酪氨酸t(yī)RNA基因的論文。第二節(jié) 化學(xué)合成目的基因一、目前常用的方法磷酸二酯法、磷酸三酯法、亞磷酸三酯法、固相合成法自動(dòng)化合成法。 保護(hù)dNTP的

3、5端P 或3端-OH 用酸或堿的脫保護(hù)（1）原理1. 磷酸二酯法 帶保護(hù)的單核苷酸連接保證合成反應(yīng)的定向進(jìn)行。帶5保護(hù)的單核苷酸與帶3保護(hù)的另一個(gè)單核苷酸以磷酸二酯鍵連接起來(lái)。（2）合成過(guò)程下一個(gè)5端保護(hù)的單核苷酸又可以同3端保護(hù)的二核苷酸聚合。原理與磷酸二酯法一樣。只是參加反應(yīng)的單核苷酸都是在3端磷酸和5-OH上都先連接了一個(gè)保護(hù)基團(tuán)。2. 磷酸三酯法 將第一個(gè)核苷酸的3-OH端固定在固相支持物上。 固相磷酸三酯合成法是目前通用的合成方法。15合成的二核苷酸連接處有三個(gè)酯鍵！固相磷酸三酯合成過(guò)程固相支持物結(jié)果是全保護(hù)的DNA：5 DMT, 3固相支持物, 核苷酸之間對(duì)氯苯。最后脫保護(hù)固相 支

4、持物固相 支持物C化學(xué)合成的DNA片斷一般在200bp以?xún)?nèi)。 二、 化學(xué)合成DNA片斷的組裝用T4多核苷酸激酶使各個(gè)片段的5端帶上磷酸。1. 互補(bǔ)連接法預(yù)先設(shè)計(jì)合成的片斷之間都有互補(bǔ)區(qū)域，不同片斷之間的互補(bǔ)區(qū)域能形成有斷點(diǎn)的完整雙鏈。（2）5端磷酸化（1）互補(bǔ)配對(duì)（合成的DNA單鏈的5端是-OH）T4 DNA連接酶T4多核苷酸激酶使5-OH磷酸化完整的DNA雙鏈（3）連接酶連成完整雙鏈2. 互補(bǔ)延伸連接法預(yù)先設(shè)計(jì)的片斷之間有局部互補(bǔ)區(qū)，可以相互作為另一個(gè)片斷延長(zhǎng)的引物，用DNA聚合酶延伸成完整的雙鏈。3 5 5 3 5 3 T4DNA連接酶Klenow片段引物1. 直接合成基因三、 寡聚核苷酸

5、化學(xué)合成的優(yōu)點(diǎn)2. 合成引物（20mer左右）（1）mRNA的含量很低，很難作cDNA 3. 合成探針序列4. 定點(diǎn)突變合成合成帶有定點(diǎn)突變的基因片斷。（2）有些基因比較短，化學(xué)合成費(fèi)用較低DNA合成儀5. 合成人工接頭或銜接物含有各種酶切位點(diǎn)人工接頭（Adaptor）或銜接物（Linker）序列。EcoRIEcoRILinkerAdaptor 將某種生物細(xì)胞的整個(gè)基因組DNA切割成大小合適的片斷，并將所有這些片斷都與適當(dāng)?shù)妮d體連接，引入相應(yīng)的宿主細(xì)胞中保存和擴(kuò)增。 理論上講，這些重組載體上帶有了該生物體的全部基因，稱(chēng)為基因文庫(kù)。一、基因文庫(kù)的構(gòu)建1. 基因文庫(kù)（gene library）第三

6、節(jié) 目的基因的保存和擴(kuò)增（2）目前常用的載體 2. 構(gòu)建基因文庫(kù)的載體選用載體能夠容載的DNA片斷大小直接影響到構(gòu)建完整的基因文庫(kù)所需要的重組子的數(shù)目。載體容量越大，所要求的DNA片斷數(shù)目越少，所需的重組子越少。（1）對(duì)載體的要求載體系列： 容量為 24 kp cosmid載體： 容量為 50 kb YAC： 容量為 1 Mb BAC: 容量為 300 kb斷點(diǎn)完全隨機(jī)，片斷長(zhǎng)度合適于載體連接。不能用一般的限制性?xún)?nèi)切酶消化法。（1）染色體DNA大片段的制備3. 基因文庫(kù)構(gòu)建的一般步驟超聲波（300bp）或機(jī)械攪拌（8kb）。 物理切割法：內(nèi)切酶Sau3A進(jìn)行局部消化?？傻玫?0-30kb的隨機(jī)

7、片斷。 酶切法：（2）載體與基因組DNA大片段的連接 粘性末端直接連接載體與外源DNA大片段的兩個(gè)末端都有相同的粘性末端。如：Sau3A與BamHI的酶切末端。直接連接、人工接頭或同聚物加尾。人工接頭法（adapter）人工合成的限制性?xún)?nèi)切酶粘性末端片斷。各種酶的接頭可以向公司定做或購(gòu)買(mǎi)。接上人工接頭粘性末端CCCCCC末端轉(zhuǎn)移酶粘性末端 同聚物加尾4. 基因組文庫(kù)的大小一個(gè)文庫(kù)要包含99%的基因組DNA時(shí)所需要的克隆數(shù)目。N=ln (1-p)ln (1-f)p: 文庫(kù)包含了整個(gè)基因組DNA的概率（99%）f: 插入載體的DNA片斷的平均長(zhǎng)度占整個(gè)基因 組DNA的百分?jǐn)?shù)N：所需的重組載體數(shù)（克

8、隆數(shù)）例如：人的基因組是 3109 bp，插入DNA片斷的平均長(zhǎng)度如果是1.7104 bpN=ln (1-p)ln (1-f)=ln (1-99%)ln (1-f)=4.61GfN=4.61GfG：Genome大??；f：fragment大小N=4.61Gf=4.6131091.7104= 8.11051. cDNA以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄出的DNA稱(chēng)cDNA。2. cDNA library二、 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建mRNAcDNA3 3 5 5 反轉(zhuǎn)錄酶引物利用某種生物的總mRNA合成cDNA，再將這些cDNA與載體連接，轉(zhuǎn)入細(xì)菌細(xì)胞中進(jìn)行保存和擴(kuò)增，稱(chēng)cDNA文庫(kù)。（1）不含內(nèi)含子序列。 （2）

9、可以在細(xì)菌中直接表達(dá)。 （3）包含了所有編碼蛋白質(zhì)的基因。 （4）比DNA文庫(kù)小的多，容易構(gòu)建。4. 構(gòu)建cDNA文庫(kù)的一般步驟（1）總RNA（total RNA）提取3. cDNA文庫(kù)的特點(diǎn)提取總RNA有商業(yè)化的試劑盒（kit）。分離mRNA用商業(yè)化的Oligo dT纖維柱。 利用mRNA都含有一段polyA尾巴，將mRNA從總RNA（rRNA、tRNA等）中分離純化。 mRNA只占總RNA的1%-2%。（2）mRNA的分離純化 原理 mRNA的分離純化Column（柱）反轉(zhuǎn)錄酶（3）cDNA的合成 cDNA第一鏈合成逆轉(zhuǎn)錄酶能以RNA為模板合成DNA。 用Oligo dT（或隨機(jī)引物）作引

10、物，合成cDNA的第一鏈。 mRNAcDNA3 5 5 AAAAAAATTTTTTTOligo dT引物用堿處理或用RNaseH降解mRNA-DNA雜交分子中的mRNA。mRNAcDNA3 3 5 5 反轉(zhuǎn)錄酶引物mRNAcDNA第一鏈3 3 5 5 引物cDNA第一鏈3 5 引物 降解mRNA模板或RNaseH堿剩下的cDNA單鏈的3末端一般形成一個(gè)彎回來(lái)的雙鏈發(fā)卡結(jié)構(gòu)（機(jī)理不明），可成為合成第二條cDNA鏈的引物。用DNA聚合酶合成第二鏈DNA.。cDNA第一鏈5 cDNA第二鏈合成DNA聚合酶cDNA第一鏈cDNA第二鏈5 3 cDNA第二鏈合成去掉發(fā)卡結(jié)構(gòu)核酸酶S1用核酸酶S1可以切掉

11、發(fā)卡結(jié)構(gòu)（但這會(huì)導(dǎo)致cDNA中有用的序列被切掉?。?。cDNA第一鏈cDNA第二鏈5 3 cDNA第一鏈cDNA第二鏈5 3 5 3 這種酶能識(shí)別mRNA-cDNA雜交分子中的mRNA，并將其降解成許多小片斷。妙用RNaseH小片斷正好成為DNA聚合酶的引物，用來(lái)合成岡崎片斷。DNA Pol I除去引物并修補(bǔ)后再使用DNA連接酶連成一整條DNA鏈。mRNAcDNA3 5 反轉(zhuǎn)錄酶引物mRNAcDNA第一鏈3 5 引物mRNAcDNA第一鏈3 5 mRNAmRNADNA 聚合酶DNA 聚合酶cDNA第二鏈cDNA第一鏈3 5 RNaseHDNA ligase去引物在雙鏈cDNA末端接上人工接頭，即

12、可與載體連接，轉(zhuǎn)入受體菌。 或借助末端轉(zhuǎn)移酶給載體和雙鏈cDNA的3端分別加上幾個(gè)C或G，成為粘性末端。5.cDNA與載體連接：接上人工接頭粘性末端CCCCCC末端轉(zhuǎn)移酶6. cDNA文庫(kù)的大小一個(gè)cDNA文庫(kù)要包含99%的mRNA時(shí)所需要的克隆數(shù)目。N=ln (1-p)ln (1- )p: 文庫(kù)包含了完整mRNA的概率（99%）: 某一種低豐度（不足14份拷貝）mRNA占細(xì)胞整個(gè)mRNA的比例N：所需的重組載體數(shù)（克隆數(shù)）1n1n三、文庫(kù)的查詢(xún)（screening）用目的基因探針與文庫(kù)中的重組載體進(jìn)行Southern blot雜交。文庫(kù)載體探針電泳后雜交放射自顯影測(cè)序分析第四節(jié) 目的基因的分

13、離和擴(kuò)增一、目的基因的分離1. 探針柱分離特異mRNA根據(jù)已知的基因序列合成探針，結(jié)合到纖維素柱上，用來(lái)分離純化該基因的mRNA。富集特定基因的mRNA或cDNA模板。纖 維 柱探針DNA探針DNA探針DNA探針DNATotal mRNA纖 維 柱探針DNA探針DNA探針DNA探針DNA過(guò)柱與探針堿基互補(bǔ)的mRNA結(jié)合到柱上，其它mRNA流走。特異mRNA洗脫RT-PCR2. mRNA消解雜交原理：羥基磷灰石柱結(jié)合單鏈DNA-RNA或DNA-DNA雙鏈，不結(jié)合單鏈DNA。（Hydroxylapatite column）從表達(dá)A蛋白和不表達(dá)A蛋白的組織細(xì)胞中分別提取和分離總mRNA。 將表達(dá)A蛋

14、白的mRNA合成cDNA第一鏈。再同不表達(dá)A蛋白的總mRNA雜交成cDNA-mRNA雙鏈。 不能雜交的cDNA就包括特異表達(dá)的A基因的cDNA單鏈。 用羥磷灰石柱收集單鏈cDNA，合成為雙鏈DNA進(jìn)行擴(kuò)增、克隆、測(cè)序。AAA組織B組織總mRNA（A）總mRNA（B）含蛋白A的mRNA不含蛋白A的mRNA總cDNA第一鏈A雜交內(nèi)含蛋白A 的cDNA羥磷灰石柱過(guò)柱吸收RNA-DNA單鏈濾過(guò)羥磷灰石柱BAPCR16cDNA文庫(kù)3. mRNA差異顯示PCR（DD RT-PCR）mRNA differential display RT-PCR（1）3端的錨定引物Oligo(dT)引物的3端加兩個(gè)核苷酸（

15、倒數(shù)第二個(gè)不再是T）。 AAAAAAAAAAAAAAAAmRNA3 5 NMTTTTTTTTM：A、G or C N: A、G、T or C5 3 （2）12種錨定引物AGTTTTTTTT5 3 CGTTTTTTTT5 3 GGTTTTTTTT5 3 TGTTTTTTTT5 3 AATTTTTTTT5 3 CATTTTTTTT5 3 GATTTTTTTT5 3 TATTTTTTTT5 3 ACTTTTTTTT5 3 CCTTTTTTTT5 3 GCTTTTTTTT5 3 TCTTTTTTTT5 3 （3）5端的隨即引物10 mer AAAAAAAAAAAAAAAAmRNA3 5 NMTTTTT

16、TTT5 3 擴(kuò)增cDNA第一鏈。RTNMTTTTTTTT5 cDNA3 NNNNNNNNNN5 3 NNNNNNNNNN5 3 cDNA第二鏈，并PCR（4）隨機(jī)引物與錨定引物成對(duì)擴(kuò)增12種錨定引物，若與20種隨機(jī)引物，可組成240組引物。引物組合：240組在能分出20000多條帶！實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如果每條帶相當(dāng)于一種mRNA，20000 mRNA基本上反映了一種特定細(xì)胞中全部的mRNA。在測(cè)序膠上，每組擴(kuò)出50-100條長(zhǎng)度為100-500bp的帶。（5）隨機(jī)-錨定引物PCR的產(chǎn)物電泳比較不同組織的240組引物組合PCR產(chǎn)物在測(cè)序膠中電泳。選擇有差異的帶，進(jìn)一步PCR作探針。篩選文庫(kù)，找到差別基

17、因的全長(zhǎng)序列。二、PCR擴(kuò)增獲得目的基因1. 直接從基因組中擴(kuò)增（1）提取基因組DNA作模板（2）根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物（3）PCR擴(kuò)增真核生物基因組含有內(nèi)含子！適合擴(kuò)增原核生物基因。原核基因組部分原核細(xì)胞提取基因組DNAPCR擴(kuò)增（1）提取基因組 total RNA（2）反轉(zhuǎn)錄合成總cDNA作模板（4）PCR擴(kuò)增（3）根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物2. 從mRNA中擴(kuò)增: RT-PCR原核生物不易得到mRNA，也不含有polyA尾。適合擴(kuò)增真核生物基因。目的基因 的引物1反轉(zhuǎn)錄成目的基因cDNA第一鏈目的基因 的引物2目的 基因cDNA第二鏈PCRmRNA克隆外源基因我勸一個(gè)草率結(jié)婚的朋友離婚。

18、她平靜的告訴我，如果說(shuō)當(dāng)初魯莽結(jié)婚是個(gè)錯(cuò)誤。那么，現(xiàn)在草率離婚是一錯(cuò)再錯(cuò)。這位朋友后來(lái)還是離婚了，大家一致認(rèn)為她的行為很理性。同樣的故事正在互聯(lián)網(wǎng)搜索巨頭谷歌身上發(fā)生，但是谷歌選擇了草率“離婚”。飲鴆止渴由于急于抑制蘋(píng)果iphone手機(jī)翻天覆地的產(chǎn)業(yè)沖擊，谷歌采取急功近利的粗糙型開(kāi)放策略。飲鴆止渴的策略一時(shí)取得了成果。市場(chǎng)研究公司尼爾森最近公布的數(shù)據(jù)顯示，在通過(guò)Verizon Wireless、AT&T和Sprint Nextel三大運(yùn)營(yíng)商經(jīng)銷(xiāo)后，谷歌Android手機(jī)在美國(guó)市場(chǎng)上的銷(xiāo)售量已經(jīng)超過(guò)iPhone。另一家市場(chǎng)研究公司iSuppli甚至認(rèn)為，全球范圍內(nèi)使用Android操作系統(tǒng)的手機(jī)

19、數(shù)量將在 2012年超過(guò)蘋(píng)果iPhone。 表面繁華的背后，是Android生態(tài)系統(tǒng)的一團(tuán)糟，谷歌正在為自己的粗放型開(kāi)放策略買(mǎi)單。用戶(hù)對(duì)谷歌手機(jī)的態(tài)度從開(kāi)始的好奇、后來(lái)的猶豫，變成強(qiáng)烈的批評(píng)?！按蠖郃ndroid手機(jī)程序都是垃圾，亂七八糟的”，一位手機(jī)發(fā)燒友迅速投奔了iphone的陣營(yíng)：“同樣的植物人大戰(zhàn)僵尸游戲，在谷歌手機(jī)和iphone手機(jī)上的體驗(yàn)簡(jiǎn)直沒(méi)法比”混亂，還是混亂。一切一切的亂象，折射出谷歌已經(jīng)失去對(duì)Android生態(tài)系統(tǒng)的控制。這一切的根源，我的判斷是開(kāi)放策略初期過(guò)于寬松，導(dǎo)致失去控制權(quán)?；靵y的生態(tài)系統(tǒng)表現(xiàn)在用戶(hù)手機(jī)上，就是應(yīng)用程序的混亂和粗燥。一錯(cuò)再錯(cuò)為此，谷歌開(kāi)始采取對(duì)策。最

20、近，有國(guó)內(nèi)廠(chǎng)商稱(chēng)新的Android3.0開(kāi)始關(guān)閉應(yīng)用程序的API(應(yīng)用程序編程接口)，統(tǒng)一Android界面。這意味著，谷歌將放棄其初始開(kāi)放策略，開(kāi)始封閉管理。粗看之下，谷歌認(rèn)識(shí)到自己的錯(cuò)誤。既然是過(guò)度開(kāi)放導(dǎo)致的錯(cuò)誤，那么收緊開(kāi)放尺度是很自然的邏輯，無(wú)懈可擊。但我認(rèn)為，谷歌倉(cāng)促收緊開(kāi)放策略仍然是個(gè)錯(cuò)誤。打個(gè)比喻。如果過(guò)度開(kāi)放的政策是草率結(jié)婚，那么草率的封閉就是草率離婚。這么判斷的原因很簡(jiǎn)單，谷歌把Android開(kāi)放出去的那一天，Android已經(jīng)不屬于谷歌。谷歌沒(méi)有認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)，還以為Android只是自己的。合作伙伴對(duì)谷歌封閉政策的反應(yīng)加強(qiáng)了我的判斷結(jié)論。經(jīng)濟(jì)觀(guān)察報(bào)報(bào)道，國(guó)內(nèi)第一家生產(chǎn)基于A

21、ndroid平臺(tái)手機(jī)的設(shè)計(jì)公司創(chuàng)楊通信，近日已經(jīng)被迫出售。創(chuàng)楊通信負(fù)責(zé)人給出的出售理由是，“因?yàn)椴辉敢飧十?dāng)炮灰而選擇放棄?！卑凑漳壳癆ndroid3.0將統(tǒng)一界面的想法，未來(lái)的手機(jī)市場(chǎng)將出現(xiàn)毫無(wú)差異化的產(chǎn)品。這對(duì)于企業(yè)來(lái)說(shuō)，幾乎意味著不可避免的價(jià)格戰(zhàn)。利潤(rùn)空間的微薄，導(dǎo)致合作伙伴生存環(huán)境惡劣。于是大量退出幾乎是一種必然。除了為合作伙伴找到新的利益空間，谷歌還將面臨開(kāi)放陣營(yíng)精神層面的聲討，這對(duì)谷歌的挑戰(zhàn)會(huì)更大。如果說(shuō)谷歌為了自己競(jìng)爭(zhēng)的私利利用了開(kāi)放，贏得了名聲。那么，谷歌不能一腳把開(kāi)放踢開(kāi)，他現(xiàn)在還需要為這種名聲買(mǎi)單。如果只顧自己收網(wǎng)，谷歌會(huì)被面臨鋪天蓋地的道德譴責(zé)。谷歌，希望你準(zhǔn)備好了，三思而

22、行。木桶效應(yīng)就是指一個(gè)水桶無(wú)論有多高，它盛水的高度取決于其中最低的那塊木板。這在選購(gòu)手機(jī)的時(shí)候也同樣適用。尤其是很多用戶(hù)在購(gòu)買(mǎi)手機(jī)的時(shí)候， 都會(huì)專(zhuān)注于某一個(gè)參數(shù)，比如要求處理器主頻要高達(dá)1GHz，但一部手機(jī)的整機(jī)表現(xiàn)是由多個(gè)因素組成，所以在購(gòu)買(mǎi)手機(jī)的時(shí)候一定要從整體的角度上來(lái)看一部手 機(jī)的性除了處理器主頻以外，其實(shí)還有很多影響整機(jī)表現(xiàn)的元素，比如運(yùn)行內(nèi)存(RAM)、機(jī)身內(nèi)存(ROM)、操作系統(tǒng)、廠(chǎng)商對(duì)系統(tǒng)的優(yōu)化都會(huì)有所影 響。不過(guò)在很多用戶(hù)眼中，這幾項(xiàng)卻遠(yuǎn)沒(méi)有處理器主頻重要。而如果忽略這幾項(xiàng)的話(huà)，可能買(mǎi)到一個(gè)主頻很高，但整機(jī)性能卻仍然不令人滿(mǎn)意的機(jī)型。用戶(hù)在選機(jī)過(guò)程中切勿只關(guān)注一個(gè)硬件參數(shù)，這

23、樣很可能并不能買(mǎi)到一款理想的機(jī)型，就算買(mǎi)的手機(jī)主頻再高，運(yùn)行內(nèi)存低的話(huà)仍然無(wú)法同時(shí)運(yùn)行數(shù)個(gè)程 序、機(jī)身內(nèi)存小的話(huà)則無(wú)法把太多的軟件安裝到機(jī)器上，這對(duì)整機(jī)耗電和運(yùn)行速度方面都有所影響、而廠(chǎng)商優(yōu)化更是決定著一部手機(jī)的穩(wěn)定性和部分運(yùn)行速度。綜上 所述，大家在選購(gòu)手機(jī)的時(shí)候一定要綜合考慮一款手機(jī)的硬件規(guī)格。除此之外，也不要把硬件看的太過(guò)重要，就比如蘋(píng)果iPhone 3GS在硬件配置上并不出眾，但卻在操控手感以及軟件資源上目前難有機(jī)型企及。更高分辨率能獲得更為逼真細(xì)膩的顯示效果，所以對(duì)于屏幕的分辨率絕大多數(shù)人都會(huì)偏向于分辨率更高的機(jī)型。但對(duì)于筆者 所說(shuō)的高分辨率未必是好事會(huì)有所懷疑。其實(shí)這里說(shuō)的高分辨率

24、“不好”更多是指采用非主流的高分辨率機(jī)型。在此前，就有幾款“悲情”機(jī)型在分辨率上吃了不小 的虧。大名鼎鼎的HTC Diamond就是一款頗具代表意義的機(jī)型，Diamond上市的手機(jī)市場(chǎng)還處于QVGA時(shí)代、只有少數(shù)旗艦機(jī)皇采用WVGA這樣級(jí)別的屏幕，由于HTC Diamond卻采用了VGA這一過(guò)渡型的分辨率，而也正是因?yàn)檫@一點(diǎn)，Diamond很多軟件都未有支持或無(wú)法完美運(yùn)行，可謂是一個(gè)不小的遺憾。除此之 外，曾經(jīng)非常經(jīng)典的 附贈(zèng)人生心語(yǔ)人生太短，聰明太晚人生太短，聰明太晚(1)我們都老得太快卻聰明得太遲把錢(qián)省下來(lái)，等待退休后再去享受結(jié)果退休后，因?yàn)槟昙o(jì)大，身體差，行動(dòng)不方便，哪里也去不成。錢(qián)存下

25、來(lái)等養(yǎng)老，結(jié)果孩子長(zhǎng)大了，要出國(guó)留學(xué)，要?jiǎng)?chuàng)業(yè)做生意，要花錢(qián)娶老婆，自己的退休金都被拗走了。人生太短，聰明太晚(2)當(dāng)自己有足夠的能力善待自己時(shí)，就立刻去做，老年人有時(shí)候是無(wú)法做中年人或是青少年人可以做的事，年紀(jì)和健康就是一大因素。小孩子從小就告訴他，養(yǎng)你到高中，大學(xué)以后就要自立更生，要留學(xué)，創(chuàng)業(yè)，娶老婆，自己想辦法，自己要留多一點(diǎn)錢(qián)，不要為了小孩子而活我們都老得太快卻聰明得太遲，我的學(xué)長(zhǎng)去年喪妻。這突如其來(lái)的事故，實(shí)在叫人難以接受，但是死亡的到來(lái)不總是如此。學(xué)長(zhǎng)說(shuō)他太太最希望他能送鮮花給他，但是他覺(jué)得太浪費(fèi)，總推說(shuō)等到下次再買(mǎi)，結(jié)果卻是在她死后，用鮮花布置她的靈堂。這不是太蠢愚了嗎？！等到.、

26、等到.，似乎我們所有的生命，都用在等待。人生太短，聰明太晚(3)等到我大學(xué)畢業(yè)以后，我就會(huì)如何如何我們對(duì)自己說(shuō)等到我買(mǎi)房子以后！等我最小的孩子結(jié)婚之后！等我把這筆生意談成之后！等到我死了以后人人都很愿意犧牲當(dāng)下，去換取未知的等待；犧牲今生今世的辛苦錢(qián)，去購(gòu)買(mǎi)后世的安逸在臺(tái)灣只要往有山的道路上走一走，就隨處都可看到農(nóng)舍變精舍，山坡地變靈塔，無(wú)非也是為了等到死后，能圖個(gè)保障，不必再受苦。許多人認(rèn)為必須等到某時(shí)或某事完成之后再采取行動(dòng)。明天我就開(kāi)始運(yùn)動(dòng)，明天我就會(huì)對(duì)他好一點(diǎn)，下星期我們就找時(shí)間出去走走；退休后，我們就要好好享受一下。人生太短，聰明太晚(4)然而，生活總是一直變動(dòng)，環(huán)境總是不可預(yù)知，現(xiàn)

27、實(shí)生活中，各種突發(fā)狀況總是層出不窮。身為一個(gè)醫(yī)生，我所見(jiàn)過(guò)的死人，比一般人要來(lái)得多。這些人早上醒來(lái)時(shí)，原本預(yù)期過(guò)的是另一個(gè)平凡無(wú)奇的日子，沒(méi)想到一個(gè)意料之外的事；交通意外、腦溢血、心臟病發(fā)作等等。剎那間生命的巨輪傾覆離軌，突然闖進(jìn)一片黑暗之中。那么我們要如何面對(duì)生命呢？我們毋需等到生活完美無(wú)瑕，也毋需等到一切都平穩(wěn)，想做什么，現(xiàn)在就可以開(kāi)始做起。一個(gè)人永遠(yuǎn)也無(wú)法預(yù)料未來(lái)，所以不要延緩想過(guò)的生活，不要吝于表達(dá)心中的話(huà)，因?yàn)樯辉谝凰查g。人生太短，聰明太晚(5)記??！給活人送一朵鮮花，強(qiáng)過(guò)給死人送貴重的花圈，每個(gè)人的生命都有盡頭，許多人經(jīng)常在生命即將結(jié)束時(shí)，才發(fā)現(xiàn)自己還有很多事沒(méi)有做，有許多話(huà)來(lái)

28、不及說(shuō)，這實(shí)在是人生最大的遺憾。別讓自己徒留為時(shí)已晚的空余恨。逝者不可追，來(lái)者猶未卜，最珍貴、最需要實(shí)時(shí)掌握的當(dāng)下，往往在這兩者蹉跎間，轉(zhuǎn)眼錯(cuò)失。人生太短，聰明太晚(6)人生短暫飄忽，包得有一首小詩(shī)這樣寫(xiě)：高天與原地，悠悠人生路；行行向何方，轉(zhuǎn)眼即長(zhǎng)暮。正是道盡了人生如寄，轉(zhuǎn)眼即逝的惶恐。有許多事，在你還不懂得珍惜之前已成舊事；有許多人，在你還來(lái)不及用心之前已成舊人。遺憾的事一再發(fā)生，但過(guò)后再追悔早知道如何如何是沒(méi)有用的，那時(shí)候已經(jīng)過(guò)去，你追念的人也已走過(guò)了你。人生太短，聰明太晚(7)一句瑞典格言說(shuō)：我們老得太快，卻聰明得太遲。 不管你是否察覺(jué)，生命都一直在前進(jìn)。人生并未售來(lái)回票，失去的便永遠(yuǎn)

29、不再得到。將希望寄予等到方便的時(shí)間才享受人生太短，聰明太晚(8)我們不知失去了多少可能的幸福不要再等待有一天你可以松口氣，或是麻煩都過(guò)去了。生命中大部分的美好事物都是短暫易逝的，享受它們、品嘗它們，善待你周?chē)拿恳粋€(gè)人，別把時(shí)間浪費(fèi)在等待所有難題的完滿(mǎn)結(jié)局上。找回迷失的生命死亡也許是免費(fèi)的 但是，卻要付出生命的代價(jià)。勸大家一句話(huà)：把握當(dāng)下，莫等待。成功人生的十堂課人生成功第1課 做一個(gè)終生學(xué)習(xí)的人，離開(kāi)學(xué)校并不意味著學(xué)習(xí)就結(jié)束了。學(xué)習(xí)可以成為一種生活方式，幫助你發(fā)揮最大的潛能。我們從未停止學(xué)習(xí)，總會(huì)有新的，有趣的東西等待我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)。學(xué)習(xí)新的技能可能讓人感到有一點(diǎn)恐懼，但每當(dāng)我們?cè)趥€(gè)人學(xué)習(xí)上停滯

30、不前時(shí)，我們都需要去學(xué)習(xí)新的東西。積極地尋求支援和建議，突破停滯期?！敬髮W(xué)課件】出品版權(quán)歸原作者所有!參加一些培訓(xùn)，進(jìn)修，夜校任何新的興趣都將會(huì)有助于發(fā)展你的優(yōu)勢(shì)。多看，多聽(tīng)，讓你的頭腦保持活躍?；畹嚼?，學(xué)到老。 人生成功第2課 令自己感到沮喪的秘訣就是用空閑時(shí)間去煩惱自己是否快樂(lè)。所以不要費(fèi)事去想它！摩拳擦掌干起來(lái)吧。你將熱血沸騰，你會(huì)頭腦清醒。很快，在你身體中的這種高漲的積極人生觀(guān)將把煩惱從你的頭腦中趕出去。行動(dòng)起來(lái)，忙碌起來(lái)。這是世界上最便宜的一種藥，也是最好的一種。人生成功第3課 在困境中尋找成功的希望逆境是一所最好的學(xué)校。每一次失敗，每一次打擊，每一次損失，都蘊(yùn)育著成功的萌芽，都教會(huì)

31、我在下一次有更出色的表現(xiàn)。我再也不會(huì)逃避現(xiàn)實(shí)，也不會(huì)拒絕從以往的錯(cuò)誤中獲取經(jīng)驗(yàn)，我不再因此而促成自己的失敗。因?yàn)槲抑?，寶玉不?jīng)磨礪就不能發(fā)光，沒(méi)有，我也不能完善自我?，F(xiàn)在我知道，靈魂倍受煎熬的時(shí)刻，也正是生命中最多選擇與機(jī)會(huì)的時(shí)刻。任何事情的成敗取決于我在尋求幫助時(shí)是抬起頭還是低下頭。無(wú)論何時(shí)，當(dāng)我被可怕的失敗擊倒，在最初的陣痛過(guò)去之后，我都要想方設(shè)法將苦難變成好事。偉大的機(jī)遇就在這一刻閃現(xiàn)這苦澀的根必將迎來(lái)滿(mǎn)園芬芳！ 我將一直在困境中尋找成功的希望。 人生成功第4課 沒(méi)有人可以使你感到自卑我選擇自我感覺(jué)良好，這樣我能更加開(kāi)放地學(xué)習(xí)。如果人們給我負(fù)面的回應(yīng)或是批評(píng)我做的事情，我不會(huì)認(rèn)為他們所

32、說(shuō)的就表明我是一個(gè)“差勁的”人。我堅(jiān)信自尊由我掌控，這讓我毫無(wú)戒心地去聽(tīng)取別人的反饋，想看看是否有我可以學(xué)習(xí)的東西。我們每天都有兩種選擇。我們可以感到自己很棒，也可以感到自己很差勁。難道有人會(huì)選擇后者嗎？人生成功第5課緊緊抓住夢(mèng)想我們每個(gè)人都有夢(mèng)想。我們每個(gè)人都希望能發(fā)自?xún)?nèi)心地相信自已有一種特殊的天賦，相信自己能發(fā)揮重要的作用，相信自己能以一種特殊的方式感動(dòng)他人，相信自己能夠把世界變得更加美好。在一生中，我們都曾經(jīng)對(duì)自己渴望并追求的生活品質(zhì)抱有憧憬。然而，對(duì)我們大多數(shù)人來(lái)說(shuō)，這些憧憬在日常生活的成規(guī)和挫敗中已經(jīng)變得如此渺茫，以到于我們甚至不再努力去實(shí)現(xiàn)它們。對(duì)太多人來(lái)說(shuō)，夢(mèng)想已經(jīng)遠(yuǎn)離，隨之遠(yuǎn)離

33、的還有塑造我們命運(yùn)的意愿。很多人已經(jīng)推動(dòng)了堅(jiān)定的信念，而正是堅(jiān)定的信念為勝利者創(chuàng)造了優(yōu)勢(shì)。我們所要做的就是重拴夢(mèng)想，并實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想，讓我們每個(gè)人都記住，并去運(yùn)用深藏在自己身上的無(wú)限潛能。人生成功第6課 毅力無(wú)法替代世界上沒(méi)有任何東西可以替代毅力。才干不可以，無(wú)所作為的能人十分普遍；天分不可以，碌碌無(wú)為的天才盡人皆知;教育不可以，受過(guò)良好教育的沒(méi)落者更是隨處可見(jiàn)。只要有毅力和決心，就是無(wú)所不能的。毅力并不總是意味著永遠(yuǎn)堅(jiān)持做同一件事。它意味著無(wú)論你做任何事情，你都要立刻全心投入，竭盡全力；它意味著先做艱苦的工作，再去期待隨之而來(lái)的滿(mǎn)足和回報(bào)。它意味著開(kāi)心地工作，渴望更多的知識(shí)和進(jìn)步。它意味著多打幾個(gè)

34、 ，多夏裝幾里路，多除草，早起床，意味著總是尋求更好的方式去做你在做的事情。毅力就是經(jīng)歷考驗(yàn)和過(guò)失的成功。 人生成功第7課駐足片刻聞花香在現(xiàn)代生活的忙忙碌碌中，人們很少會(huì)停下來(lái)欣賞自然的美。問(wèn)問(wèn)自己，你有多少次傾聽(tīng)過(guò)鳥(niǎo)兒的歌唱。你最近一次抬頭仰望閃耀的星空又是在什么時(shí)候？時(shí)光飛逝，人生苦短。不要忘記駐足聞聞花香。我們?cè)诩庇谥\生的過(guò)程中，往往忽視了我們生活的品質(zhì)。多少次，你聽(tīng)見(jiàn)人們?yōu)檫@為那說(shuō)“我忙死了?！倍嗫上О?！有一天，當(dāng)他們真的找到時(shí)間能夠駐足片刻聞花香時(shí)，可能已經(jīng)太遲了。 人生成功第8課加入到微笑者和贊美者的行列來(lái)當(dāng)你對(duì)別人，別人也會(huì)對(duì)你報(bào)以，你自然會(huì)感覺(jué)很棒。即使他有對(duì)你報(bào)以，你也會(huì)感覺(jué)

35、很棒，因?yàn)槟阏J(rèn)識(shí)到世界上最貧窮的人就是從不微笑的人，當(dāng)你對(duì)那個(gè)人微笑，你立刻變得更加富有。贊美也是這個(gè)道理。當(dāng)你真誠(chéng)地毛病抑或恭維一個(gè)人時(shí)，他將立刻受益，更喜歡自己。當(dāng)你讓別人感覺(jué)更好時(shí)，你自己也會(huì)感覺(jué)更好。人生成功第9課 讓自己快樂(lè)。調(diào)查表明，我們當(dāng)中70%的人在生活中時(shí)間有臨床性的抑郁現(xiàn)象。如今我們有這么多的機(jī)遇，為什么我們還這么不快樂(lè)呢？人們嘗試各種東西：金錢(qián)，權(quán)利，事業(yè)，婚姻，離婚，酒精，搖滾甚至毒品，但我們大多數(shù)人只是想要得到一樣?xùn)|西快樂(lè)。快樂(lè)是人的一種自然的身心狀態(tài)；我們只要去相信快樂(lè)，讓自己感受快樂(lè)。要宣稱(chēng)：我應(yīng)當(dāng)?shù)玫娇鞓?lè)。 說(shuō)出來(lái)，唱出來(lái)，喊出來(lái)。優(yōu)先考慮快樂(lè)，讓快樂(lè)成為你最重

36、要的事情。對(duì)你所擁有的一切抱以感激之情吧。 人生成功第10課 我擁有無(wú)與倫比的想象力現(xiàn)在我將通過(guò)這種神奇的力量得到我想要的。 如果我害怕發(fā)表演講，我就想象自己在公眾場(chǎng)合無(wú)所畏懼，充滿(mǎn)信心；如果我在病魔的煎熬，我就想象我以前健康的樣子；如果我感到貧窮，我就想象我將要富有。 現(xiàn)在我明白了：人類(lèi)惟一的限制就是想象力。我之所以沒(méi)有成功，原因就在于我不知道如何使用我的想象力?，F(xiàn)在，我精通這個(gè)技巧，我將從中受益。最大的回報(bào)將是成功和愈加快樂(lè)。你會(huì)管理時(shí)間嗎?如何讓自己一天的時(shí)間不止24小時(shí)呢?這里有一些總結(jié):你會(huì)管理時(shí)間嗎?（1）1.對(duì)目標(biāo)、任務(wù)、會(huì)議等事件分別按優(yōu)先級(jí)進(jìn)行排序；2.從優(yōu)先級(jí)最高的事物著手

37、；3.和拖延做斗爭(zhēng)，如果事情重要，從現(xiàn)在開(kāi)始做；4.把大的、艱難的任務(wù)細(xì)分為小的、容易的部分；5.為自己創(chuàng)造一小時(shí)的寧?kù)o，哪怕這需要很強(qiáng)的意志力，或者有時(shí)不起作用；你會(huì)管理時(shí)間嗎?（2）6.找到一個(gè)隱蔽的地方，如圖書(shū)館或空閑的辦公室；7.當(dāng)你有重要的事情要處理時(shí)，學(xué)會(huì)對(duì)別人說(shuō)“不”；8.學(xué)會(huì)委派別人做事；9.歸納相似的事情，把它們放在一起處理；10.減少例行事務(wù)：它們不值得花費(fèi)過(guò)多時(shí)間?？s短低價(jià)值的事件。拋開(kāi)沒(méi)有價(jià)值的信件和文書(shū)工作。委派別人完成、減少或推遲優(yōu)先級(jí)很低的任務(wù)；你會(huì)管理時(shí)間嗎?（3）11.避免完美主義。記住80/20定律；12.避免做出過(guò)多許諾。對(duì)你在有限時(shí)間內(nèi)能完成的工作持現(xiàn)實(shí)

38、態(tài)度；13.不要把時(shí)間表排得滿(mǎn)滿(mǎn)的，為自己留下一定機(jī)動(dòng)時(shí)間應(yīng)付突發(fā)事件；14.設(shè)置時(shí)間限制。例如，做某些決定時(shí)，不應(yīng)超過(guò)3分鐘；15.聚精會(huì)神地做手頭的事情；你會(huì)管理時(shí)間嗎?（4）16.處理重要事情時(shí)，使用大塊的時(shí)間；17.迅速處理困難的事情，等待和拖延不會(huì)使它們變?nèi)菀祝?8.文書(shū)工作爭(zhēng)取只處理一次；19.在行動(dòng)以前，徹底地思索整件工作；20.第一次就做好。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（1） 1：找方法，不找借口。2：遇到挫折時(shí)，對(duì)自己說(shuō)“太棒了”。3：不說(shuō)消極的話(huà)，不落入消極的情緒，一旦出現(xiàn)立即正面處理。4：隨時(shí)用零碎時(shí)間做零碎的事。5：寫(xiě)下來(lái)，不要太依靠

39、腦袋記憶。6：隨時(shí)記錄靈感。7：守時(shí)8：把重要的觀(guān)念方法寫(xiě)下來(lái)，并隨時(shí)提醒自己。9：走路時(shí)，比平時(shí)快30%，肢體語(yǔ)言要健康，有力，不懶惰，不萎靡。10：每天自我反省一次。11：每天堅(jiān)持一次運(yùn)動(dòng)。12：開(kāi)會(huì)坐在前排。13：微笑。14：說(shuō)話(huà)時(shí)，聲音有力。15：說(shuō)話(huà)之前，先考慮對(duì)方的感受16：每天有意識(shí)或真誠(chéng)地贊美別人3次17:不要用訓(xùn)斥 指責(zé)的口吻跟別人說(shuō)話(huà).18:每天做一件分外事.19:節(jié)儉.20:恪守誠(chéng)信,說(shuō)到做到.成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（2）“好的習(xí)慣讓人立于不敗之地，壞的習(xí)慣則讓人從成功的寶座上跌下來(lái)”。拿破侖希爾認(rèn)為， 如侵權(quán)，請(qǐng)告知，吾即刪！聯(lián)系 ：910670854保羅蓋蒂

40、的這句話(huà)很有道理。有一段時(shí)期，蓋蒂抽煙抽得很兇。一天，他去法國(guó)度假的途中，在一個(gè)小旅館投宿。晚上下起了大雨，地面特別泥濘，開(kāi)了好幾個(gè)鐘頭的車(chē)之后，蓋蒂實(shí)在是累極了。吃過(guò)晚飯，他就回到自己的房間里，睡著了。但是清晨時(shí)分蓋蒂突然醒了過(guò)來(lái)，他很想抽支煙，于是他就打開(kāi)了燈，很自然的伸手去摸他一般都會(huì)放在床頭的煙，但是沒(méi)有。他下了床，到衣服的口袋里去找，也沒(méi)有。于是他又在行李袋里找，結(jié)果他又一次失望了。他知道這個(gè)時(shí)候旅館的酒吧和餐廳早就關(guān)門(mén)了。他想，這個(gè)時(shí)候把不耐煩的門(mén)房叫過(guò)來(lái)，實(shí)在是不可能。現(xiàn)在他唯一能得到香煙的方法就是穿好衣服，到火車(chē)站去，但是那還在6條街之外呢。 成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（

41、3）看來(lái)情形并不樂(lè)觀(guān)，外面還下著雨。他的汽車(chē)也停在離旅館還有一段距離的車(chē)房里。而且，在他住店的時(shí)候，別人也提醒過(guò)他了。車(chē)房的門(mén)是午夜關(guān)，第二天早上6點(diǎn)才開(kāi)門(mén)，現(xiàn)在能叫到出租車(chē)的機(jī)率也相當(dāng)于零。顯然，要是他真的迫切地需要一支煙，那么他只能在雨里走到黑暗中。抽煙的欲望不斷地折磨著他。于是，他下了床，脫下睡衣，穿好衣服，準(zhǔn)備出去。正在他伸手拿雨衣的時(shí)候，他突然笑了起來(lái)，笑自己傻。他突然覺(jué)得，自己的行為多荒唐可笑。蓋蒂站在那里，心里不停地想著，一個(gè)所謂的知識(shí)分子，一個(gè)商人，一個(gè)認(rèn)為自己有足夠的智慧可以對(duì)別人下命令的人，居然在三更半夜要離開(kāi)舒適的旅館，冒著大雨走上好幾條街去買(mǎi)香煙。蓋蒂也是生平第一次注意

42、到，他現(xiàn)在早就養(yǎng)成了一個(gè)壞習(xí)慣，那就是為了一個(gè)不好的習(xí)慣，他可以放棄極大的舒適?？磥?lái)，這個(gè)習(xí)慣對(duì)他并沒(méi)有什么好處，于是，他的頭腦立刻就清醒了過(guò)來(lái)，很快他就做出了決定。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（4）他已經(jīng)決定好了，就走到桌子旁邊把那個(gè)煙盒團(tuán)起來(lái)扔出去，然后重新?lián)Q上睡衣，回到舒服的床上。心里懷著一種解脫，甚至是一種勝利的感覺(jué)，很滿(mǎn)足地關(guān)上燈，合上了眼睛。在窗外的雨聲里，他進(jìn)入了一個(gè)從來(lái)沒(méi)有過(guò)的深沉的睡眠。自從那個(gè)晚上之后，他再也沒(méi)抽過(guò)一根煙，也再?zèng)]有想過(guò)要抽煙。蓋蒂說(shuō)，他并不是想用這件事來(lái)指責(zé)那些有抽煙習(xí)慣的人。但是他經(jīng)?；貞浤翘焱砩系那樾危皇菫榱吮硎?，按照他當(dāng)時(shí)的情況，他差點(diǎn)被一種惡

43、習(xí)俘虜。經(jīng)常做一件事就會(huì)形成習(xí)慣，而習(xí)慣的力量是難以抗拒的。但是人類(lèi)還有一種潛藏的緩沖能力，也不容小覷。既然人有可能養(yǎng)成一種習(xí)慣，那肯定他也有能力改掉這種習(xí)慣。還有些人說(shuō)，奇怪的是，養(yǎng)成好習(xí)慣很難，但是一個(gè)壞習(xí)慣卻在不知不覺(jué)中就已經(jīng)形成了。但是，事實(shí)并非如此，這還要看一個(gè)人的毅力。不管怎么說(shuō)，習(xí)慣終歸是習(xí)慣，并沒(méi)有合理的理論說(shuō)壞習(xí)慣要比好習(xí)慣更容易養(yǎng)成。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（5）動(dòng)作敏捷或遲緩只是個(gè)時(shí)間的問(wèn)題，一個(gè)人要么習(xí)慣了準(zhǔn)時(shí)，要么他就會(huì)習(xí)慣遲到。一個(gè)準(zhǔn)時(shí)的人，總會(huì)體會(huì)到這種習(xí)慣給他帶來(lái)的好處，無(wú)論是約會(huì)，會(huì)議，還是什么別的方面的承諾。如果別人請(qǐng)你吃飯，你遲到了，那就會(huì)給主人和

44、其他的客人造成不便。你可能會(huì)因此而變得很不受歡迎，以后人家都不會(huì)再請(qǐng)你吃飯了。拿破侖 希爾認(rèn)為，對(duì)商人來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)時(shí)是一項(xiàng)特別寶貴的資產(chǎn)。俗話(huà)說(shuō)得好，“時(shí)間就是金錢(qián)”，這句話(huà)永遠(yuǎn)是正確的，現(xiàn)在這個(gè)時(shí)代里，這個(gè)原則比以前更加重要?，F(xiàn)代企業(yè)的步調(diào)是一日千里，分秒必爭(zhēng)。主管和高級(jí)職員的每日安排都是滿(mǎn)滿(mǎn)的，因?yàn)樗麄兛蓻](méi)有多余的時(shí)間可以浪費(fèi)，就像生產(chǎn)線(xiàn)不能耽擱一樣。守信對(duì)生意人來(lái)說(shuō)，是個(gè)難得的品德，最有希望成功的商人和公司，他們一定是準(zhǔn)時(shí)接受定單，準(zhǔn)時(shí)回復(fù)并交貨，提供服務(wù)，準(zhǔn)時(shí)付款，準(zhǔn)時(shí)還債。如果等時(shí)間已過(guò)去了，訂貨還沒(méi)到，那顧客下次可能就不找你了。成功是一種習(xí)慣，習(xí)慣是需要培養(yǎng)的（6）節(jié)儉是另外一種可以養(yǎng)

45、成的習(xí)慣，對(duì)天生節(jié)儉的人來(lái)說(shuō)，這個(gè)習(xí)慣給他帶來(lái)的成功的機(jī)會(huì)要比別人多。而習(xí)慣了節(jié)儉的人，他只知道在乎時(shí)就要注意節(jié)減開(kāi)支和成本。 受用一生的教誨：職場(chǎng)10只魔戒 N條箴言第只魔戒 第一條箴言：習(xí)慣仿佛像一根纜繩，我們每天給它纏上一股新索，要不了多久，它就會(huì)變得 牢不可破。第二條箴言：人類(lèi)所有優(yōu)點(diǎn)都要變成習(xí)慣才有價(jià)值，即使愛(ài)這樣一個(gè)永恒的主題，你也 必須通過(guò)不斷的修煉，變成你的習(xí)慣，才真正會(huì)化為你的行動(dòng)。第三條箴言：很多好的觀(guān)念、原則，我們知道是一回事，但知道了是否能做到是另 一碼事。這中間必須架起一座橋，這橋便是習(xí)慣。第四條箴言：科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，一個(gè)習(xí)慣的養(yǎng)成需要天的時(shí)間，這天是個(gè)平均數(shù)， 但習(xí)

46、慣一旦養(yǎng)成就將終生受用。第五條箴言：任何一個(gè)習(xí)慣的培養(yǎng)都不會(huì)是輕而易舉的，因此一定要遵循循序漸進(jìn)、由淺入 深、由近及遠(yuǎn)、由漸變到突變的原則。第只魔戒 第一條箴言： 人生來(lái)是簡(jiǎn)單的，和文明打交道之后變得復(fù)雜了，陷入了某種復(fù)雜的旋渦中 無(wú)法自拔，這些羈絆使人忘記人性的最終追求是平靜、簡(jiǎn)單、自由。第二條箴言：不經(jīng)過(guò)復(fù)雜的簡(jiǎn)單是一種蒼白，我曾經(jīng)很人為地把金錢(qián)放在一邊它卻不安分， 但今天當(dāng)我駕馭了金錢(qián)，它就能很安分地呆在一邊。第三條箴言：要鍛煉一個(gè)人的財(cái)商，讓他具有富人心態(tài)，首先他確實(shí)要學(xué)會(huì)放棄，同時(shí)也要 學(xué)會(huì)克服，要學(xué)會(huì)走出很多障礙和陰影。第四條箴言：財(cái)商教育的根本目的是讓人們獲得自由，增加收入、減少

47、財(cái)務(wù)問(wèn)題的初衷是減 少人們?cè)诮疱X(qián)上的虛榮心和攀比風(fēng)。第五條箴言：財(cái)商教育要解決人類(lèi)面對(duì)金錢(qián)的兩大問(wèn)題：恐懼與貪婪。而為了生活穩(wěn)定這個(gè) 假象，人們常常淪為金錢(qián)的奴隸。第六條箴言：對(duì)于金錢(qián)，不是說(shuō)你要成為它的主人，而是要做到與之和諧、平等，因?yàn)樗?映的是你自己，所以對(duì)它要多一分寬容。第只魔戒 第一條箴言：成功的實(shí)質(zhì)就是獲得自由度，就是當(dāng)你想當(dāng)?shù)娜?，做你想做的事，去你想去?地方，說(shuō)你想說(shuō)的話(huà)。 第二條箴言：世上沒(méi)有懶惰的人，只有沒(méi)有目標(biāo)的人。世界上最貧窮的人就是沒(méi)有目標(biāo)的人 ，因?yàn)檫B夢(mèng)想都沒(méi)有，還會(huì)擁有什么？第三條箴言：只有明確而具體的目標(biāo)才可衡量，而只有可衡量的目標(biāo)才可能達(dá)到。第四條箴言：付出

48、就表示富有，索取就是貧窮，快行動(dòng)起來(lái)，用行動(dòng)表現(xiàn)你的富有。第五條箴言：心態(tài)、目標(biāo)、時(shí)間管理三者的集中點(diǎn)就是在行動(dòng)上，三者的表現(xiàn)特征也是行 動(dòng)。它們共同形成知行合一的統(tǒng)一體。 第只魔戒 第一條箴言：人的一生就是不斷地闖入一個(gè)又一個(gè)圈子并不斷爭(zhēng)取承認(rèn)的過(guò)程。第二條箴言：在西方社會(huì)，特別是在北美，只有那些樹(shù)立自我推銷(xiāo)和成功意識(shí)的人，才有可 能贏得機(jī)會(huì)與成功。第三條箴言：國(guó)際化人才不是一個(gè)地理意義上的概念，而是文化、心理層面的概念。是否是 國(guó)際化人才取決于一個(gè)人的涵養(yǎng)、知識(shí)構(gòu)成和思維模式。第四條箴言：創(chuàng)業(yè)的失敗率是非常高的，在美國(guó)，每年有幾十萬(wàn)人開(kāi)公司，每年也有幾十萬(wàn) 家公司倒閉，所以創(chuàng)業(yè)只適合一部分

49、人。第五條箴言：我時(shí)常摸著跳動(dòng)的心口，數(shù)著那一下一下的脈搏，計(jì)算著我的生命長(zhǎng)河究竟能 卷起多少浪花。我要讓短暫的生命，爆發(fā)出火花。第六條箴言：命運(yùn)不是機(jī)遇，而是一種選擇。命運(yùn)從來(lái)都不是一種可以等到的東西，而是一 件需要去完成的事情。第只魔戒 第一條箴言：不管你對(duì)成功如何定義，積極總是有價(jià)值的。積極不一定成功，但消極肯定失敗。第二條箴言：成功學(xué)的最大的特征就是強(qiáng)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)化和量化，把認(rèn)為說(shuō)不清楚、不可琢磨的東 西都變成可琢磨、可操作的東西。第三條箴言：成功絕對(duì)有捷徑，當(dāng)然它的捷徑絕對(duì)不是整個(gè)過(guò)程，這個(gè)捷徑告訴我們的是必 須按照最有效的成功策略去做，否則你就會(huì)越忙越出錯(cuò)。第四條箴言：人的改變會(huì)遵循一定

50、的軌跡，即：結(jié)果決定于行為，行為決定于態(tài)度，態(tài)度決 定于信念，信念決定于自我期望。第五條箴言：人對(duì)環(huán)境有四種反應(yīng)：第一是離開(kāi)環(huán)境；第二是改變環(huán)境；第三是適應(yīng)環(huán)境； 第四是抱怨環(huán)境。前三種反應(yīng)都有可能從中找到新的生機(jī)，只是千萬(wàn)不要選擇第四種反應(yīng)。第六條箴言：成功的秘訣第一個(gè)是堅(jiān)持到底，永不放棄；第二個(gè)就是當(dāng)你想放棄的時(shí)候，再 照著第一個(gè)秘訣去做：堅(jiān)持到底，永不放棄。第只魔戒第一條箴言：人們總是感到自己是對(duì)的，別人和世界都是不對(duì)的；所以人們總想改變世界、 改變別人，很少想到改變自己。其實(shí)，改變世界應(yīng)該先從改變自己開(kāi)始。第二條箴言：不少老板都恨不得把員工改造成跟自己一樣的人，其實(shí)最不像你的人、你最不 喜歡的人，或