ELISA的原理技術(shù)及其在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用課件

ELISA的原理技術(shù)及其在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院崔元璐研究員1.

ELISA的原理2.

ELISA的類型3.試劑準備：免疫吸附劑結(jié)合物酶底物的準備4.對照設(shè)定5.標本的采取和保存6.結(jié)果判斷第一部分：ELISA的原理與技術(shù)ELISA是一種免疫測定（immunoassay，IA）?；A(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物、能夠被激發(fā)出熒光或化學發(fā)光，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進行定性或定量分析。1.

ELISA的原理酶免疫測定類型

這種固相酶免疫測定方法在1971年最初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定（EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay），簡稱ELISA。酶免疫技術(shù)酶免疫組化酶免疫測定均相酶免疫測定非均相酶免疫測定固相酶免疫測定液相酶免疫測定1.1抗原抗體反應(yīng)

1.1.1可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab

抗體的親和力（affinity），可以用平衡常數(shù)K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab],Ag·Ab的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。1.1.3最適比例

1.1.4敏感性化學比色法的敏感度為mg/ml水平酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5-10μg/ml免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿標記的免疫檢測敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平例如，乙肝表面抗原(HBsAg)，其敏感度可達0.1ng/ml。2ELISA的類型ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物。可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。2.2.1雙抗體夾心法測抗原此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、炎性因子等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。2.2.2雙抗原夾心法測抗體用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。炎性因子類蛋白的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗體的制備，根據(jù)抗體結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法。2.2.3間接法測抗體

傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。2.2.5競爭法測抗原（cAMP、cGMP、PGE2等）小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少，最后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

2.2.6捕獲包被法測抗體IgM的檢測常用于傳染病的診斷。用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。此法常用于病毒性感染的早期診斷。2.2.7ABS-ELISA法

①：固相支持物；②：樣品；③：特異性IgG；④：生物素化抗小鼠IgG（Biotin）；⑤：辣根過氧化物酶HRP-酶標鏈親和素（Avidin）；⑥：DAB顯色液；⑦：顯色；2.2.8Cell-basedELISA的優(yōu)勢用雙熒光顯色系統(tǒng)同時檢測HRP與ALP標記的抗體，從而同時檢測兩種目的抗原簡便、高通量，可部分替代WesternBlot實驗成本廉價、方法易于建立對于磷酸化蛋白研究，可同時檢測總蛋白及磷酸化蛋白水平，實驗結(jié)果更可靠2.2.9CREB/pCREBTranscriptionFactorAssay

基于ELISA技術(shù)的高通量方法ELISA的試劑準備A

固相載體聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。聚氯乙烯。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板（酶標板）應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。建議選擇NUNC、Greiner品牌，高結(jié)合型號3.1.2包被的方式將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。

蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。3.1.5包被的條件 pH9.6碳酸鹽緩沖液 pH7.2的磷酸鹽緩沖液 pH7-8的Tris-HCL緩沖液。加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置過夜，37℃中保溫2小時。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/ml-20ug/ml。3.1.6封閉封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價廉，可以高濃度使用（5%）。所有的ELISA固相均需封閉3.4洗滌液在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸鹽緩沖液。

ELISA的試劑準備B

3.2結(jié)合物即酶標記的抗體（或抗原）是ELISA中關(guān)鍵的試劑1酶的催化活性2抗體（或抗原）的免疫活性3含有或少含有游離的抗體（或抗原）4結(jié)合物尚要有良好的穩(wěn)定性。3.2.1結(jié)合物用的抗原和抗體（一般性了解）制備結(jié)合物時所用純度較高的IgG，以免在與酶聯(lián)結(jié)時其他雜蛋白的干擾。最好用層析純化的抗體，這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進行反應(yīng)，實驗結(jié)果本底淺淡。在ELISA中用酶標抗原的模式不多，總的要求是抗原必須是高純度的。3.2.2酶（一般性了解）純度高，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，專一性強，性質(zhì)穩(wěn)定，來源豐富，價格不貴，受檢標本中不存在相同的酶。酶結(jié)合物保留活性部分和催化能力，底物易于制備和保存，價格低廉，有色產(chǎn)物易于測定等。在ELISA中，HRP，AP，葡萄糖氧化酶，β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。HRP是一種糖蛋白，含糖量約為18%，分子量為44000，是一種復合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成，是一種卟啉蛋白質(zhì)。3.2.3結(jié)合物的制備（一般性了解）酶標記抗體的制備方法主要有兩種，即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。（1）戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團試劑，可使酶與蛋白質(zhì)的氨基通過它而聯(lián)結(jié)。有效（結(jié)合率達60%-70%）和重復性好。交聯(lián)反應(yīng)是隨機的，結(jié)合物的大小也不均一，酶與酶，抗體與抗體之間也有可能交聯(lián)，影響效果。（2）過碘酸氧化法：適用含糖量較高的酶。過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑，可與蛋白質(zhì)上的氨基形成chiff氏堿而結(jié)合。簡便有效.3.2.4結(jié)合物（酶標記物）的保存酶和抗體均為生物活性物質(zhì)，易失活。高濃度較為穩(wěn)定，凍干后可在普通冰箱中保存一年左右。結(jié)合物溶液中加入等體積的甘油，加入蛋白保護劑。另外再加入抗生素（例如慶大霉素）和防腐劑（HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉）。切忌反復凍融！3.2.5結(jié)合物（酶標記物）的稀釋液用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工作液。為避免結(jié)合物在反應(yīng)中直接吸附在固相載體上：0.1%牛血清白蛋白，0.05%吐溫20。試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達6個月。試劑準備C酶的底物3.3酶的底物（一般性了解）3.3.1HRP的底物OPD氧化后的產(chǎn)物呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色方便，是HRP結(jié)合物最常用的底物。DH2+H2O2

D+2H2O上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。DH2一般為無色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)物。DH2如：鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS。ETMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍色。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液。酶反應(yīng)終止后，TMB產(chǎn)物由藍色呈黃色，可在比色計中定量，最適吸收波長為450nm。ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些試劑盒所采用。HRP對氫受體的專一性很高，僅作用于H2O2

、小分子醇的過氧化物和尿素過氧化物(ureaperoxide)。AP一般采用對硝基苯磷酸酯作為底物。產(chǎn)物為黃色的對硝基酚，在405nm波長處有吸收峰。用NaOH終止酶反應(yīng)后，黃色可穩(wěn)定一時間。AP也有發(fā)熒光底物（磷酸4-甲基傘酮），可用于ELISA作熒光測定，敏感度較高于用顯色底物的比色法。3.5酶反應(yīng)終止液

常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的最終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。4對照設(shè)定

陽性對照品(positivecontrol)和陰性對照品(negativecontrol)是檢驗試驗有效性的控制品，同時也作為判斷結(jié)果的對照。 陽性對照品的基本組成應(yīng)盡量與檢測標本的組成相一致，多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)。 加入的量應(yīng)與試劑的敏感度相稱； 在測定中得到的吸光值與受檢標本吸光值比較，可以估計標本物質(zhì)的量。參考標準品定量測定（如TNF-alpha，IL-6，cAMP等）應(yīng)含有制作標準曲線用的參考標準品，應(yīng)包括覆蓋可檢測范圍的4-5個濃度，一般均配入含蛋白保護劑及防腐劑的緩沖液中. 陰性對照品須先行檢測確定不含待測物質(zhì)。例如HBsAg檢測的陰性對照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是陰性。5標本的采取和保存

體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。以血清標本為例：血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份同血清。血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標本應(yīng)避免溶血：紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，可能會增加非特異性顯色。加樣:在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡?；静僮髯⒁馐马棻乜乖贵w完成反應(yīng)的保溫過程稱為溫育(incubation)。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育？溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。保溫方式：ELISA儀器附有特制的電熱塊，水浴。若用保溫箱：ELISA板需要貼防蒸發(fā)貼膜。反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng)，操作時的室溫應(yīng)嚴格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求控制溫育。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準確。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板同時測定。洗滌洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA洗滌：達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外，手工操作有流水沖洗式和浸泡式兩種：（1）流水沖洗式流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液為蒸餾水，自來水。洗滌效果更為徹底，且也簡便、快速。已有實驗表明，流水沖洗式同樣適用于微量滴定板的洗滌。讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。

（2）浸泡式微量滴定板多采用。洗滌液為非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。顯色顯色是酶催化無色的底物生成有色產(chǎn)物的溫育反應(yīng)。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2小時后即可完全消退至無色。比色拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀中。以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行計算。結(jié)果以光密度（oplicaldensity，OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（absorbence，A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長寫于A字母的右下角，如OPD的吸收波長為492nm，表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。酶標比色儀酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指測讀ELISA光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到0.001，準確性為±1%，重復性達0.5%。操作時室溫宜在15-30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀。各種酶標儀性能有所不同，使用中應(yīng)詳細閱讀說明書。6結(jié)果判斷

6.1定性測定定性測定的結(jié)果判斷作出“有”或“無”的回答，分別用“陽性”、“陰性”表示。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應(yīng)性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同。6.2定量測定ELSIA操作步驟復雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。CatchPointcAMPAssayKit

檢測小鼠腦海馬組織勻漿液中cAMP含量變化的實例

PY膠囊組分C給藥24h后小鼠腦海馬組織中cAMP含量的變化6.3ELISA的操作要點嚴謹?shù)脑O(shè)計，優(yōu)質(zhì)的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證ELISA必要條件。嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果。1.微量（痕量）小分子藥物測定1.1毒品及藥物濫用控制近年來，藥物濫用問題在世界范圍內(nèi)日趨嚴重。隨著毒品及藥物濫用現(xiàn)象的蔓延，對成癮患者監(jiān)控方法的研究已經(jīng)成為我國乃至全球的重要課題之一。嗎啡是典型的半抗原，因此可以制備抗嗎啡抗體用于ELISA檢測，能快速準確地檢出血液樣本中微量（痕量）的嗎啡，可以有效鑒別、監(jiān)控成癮者。由于各國法律的差異，許多國家吸毒被界定為有罪，因此對于嗎啡檢測方法的可靠性提出了很高的要求。嗎啡的ELISA檢測方法在許多國家已經(jīng)得到了法醫(yī)界的認可，成為普遍使用的方法。第二部分ELISA在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用1.2生物樣本中微量抗生素的檢測1.2.1四環(huán)素類藥物檢測

四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力土霉素等四環(huán)素類藥物在牧業(yè)生產(chǎn)上有著廣泛的應(yīng)用，除作為治療性藥物使用外，還作為飼料添加劑應(yīng)用于飼料工業(yè)生產(chǎn)上，這一切都不可避免地造成了在畜禽產(chǎn)品中的獸藥殘留問題，將對人們的健康造成嚴重威脅。若長期大劑量使用四環(huán)素類藥物，將引起肝臟損傷以致肝細胞壞死，造成中毒并可能死亡。四環(huán)素類藥物能夠與骨骼中的鈣結(jié)合，抑制骨骼和牙齒的發(fā)育，并且治療劑量的四環(huán)素類藥物可能具有潛在的致畸作用。應(yīng)用ELISA方法，可以方便快速測定牛奶、肉類中殘留的四環(huán)素類抗生素，免除了傳統(tǒng)的HPLC檢測方法中繁瑣的樣品預(yù)處理環(huán)節(jié)，提高了檢測效率。1.2.2氯霉素類藥物檢測氯霉素類抗生素曾在我國畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用，對畜禽的疾病控制和治療起到了重要作用。但氯霉素存在嚴重的副作用，能引起人的再生障礙性貧血、粒狀白細胞缺乏癥等疾病。氯霉素在動物組織中的殘留不僅會對動物和人體產(chǎn)生直接危害，而且低濃度藥物殘留會誘發(fā)致病菌的耐藥性，對人類的健康構(gòu)成巨大的潛在威脅。為此，歐美等發(fā)達國家相繼禁止或嚴格限制使用氯霉素。歐盟規(guī)定氯霉素的最高殘留限量(MRL)為0.01mg/kg，韓國則規(guī)定動物組織中不得檢出氯霉素，我國也規(guī)定氯霉素在所有動物性產(chǎn)品中的MRL為零。酶聯(lián)免疫測定(ELISA)法非常適合對畜產(chǎn)品中氯霉素殘留進行篩選檢測的需要，它能在短短的幾小時內(nèi)檢測幾十個到上百個樣品，且不需要復雜的儀器設(shè)備，具有特異性強、靈敏度高、樣品預(yù)處理簡單等優(yōu)點。2002年農(nóng)業(yè)部殘留監(jiān)控計劃將雞肝中氯霉素的殘留檢測方法定為ELISA法。ELISA法還可作為牛奶中氯霉素殘留的快速篩選方法以及水產(chǎn)品中殘留氯霉素的檢測方法。1.2.3硝基呋喃類藥物檢測硝基呋喃類藥物具有較好的抗菌作用和藥動力學的特性，如呋喃唑酮(又名痢特靈)、呋喃它酮等價格低、效果好，曾廣泛添加于畜禽飼料中，但是，發(fā)達國家經(jīng)過長時間研究發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物及其代謝產(chǎn)物均能夠使實驗動物發(fā)生癌變和基因突變，因此多個國家已禁止使用，近來又規(guī)定動物產(chǎn)品中不得檢出硝基呋喃類藥，這樣一來，我國動物產(chǎn)品的出口又面臨新的技術(shù)壁壘。硝基呋喃類原型藥在生物體內(nèi)代謝迅速，由于畜禽使用了硝基呋喃類藥物后，其在體內(nèi)很快被代謝，無法檢測。但其代謝產(chǎn)物因和蛋白質(zhì)結(jié)合而相當穩(wěn)定，能在組織中存留很長時間，故利用代謝物的檢測可反應(yīng)硝基呋喃類藥物的殘留狀況。過去，常用化學、儀器分析方法檢測呋喃唑酮(AOZ)或呋喃它酮(AMOZ)，研究者采用AOZ或AMOZ特異性抗體，建立了競爭性ELISA檢測方法，該方法精確度、靈敏度均較高，操作簡單，檢測時間短，可作為對動物產(chǎn)品中呋喃唑酮、呋喃它酮殘留量的控制檢測方法。1.2.4磺胺類藥物的檢測

磺胺類藥物(SulfonamidesSAs)通過干擾細菌的酶系統(tǒng)對對氨基苯甲酸的利用，從而抑制細菌生長。該類藥物廣泛用于預(yù)防和治療細菌感染性疾病和原蟲病等，具有廣譜、穩(wěn)定、經(jīng)濟、易用等特點。SAs常配合抗菌增效劑作為飼料添加劑預(yù)防疾病的發(fā)生和促進動物生長，其中常用品種就有十幾種。但其不合理使用易在動物組織中造成殘留。一方面殘留的藥物可能對人的健康造成潛在的危害；另一方面獸藥殘留問題也是目前動物性產(chǎn)品貿(mào)易中的主要障礙。許多國家規(guī)定了磺胺類藥物的最高殘留限量(MRLs)。我國、美國以及歐盟等國家規(guī)定動物性食品中總磺胺以及單個磺胺藥的MRL為0.1mg/kg，加強殘留的檢測及監(jiān)控是控制獸藥殘留發(fā)生的重要措施?；前奉愃幬餁埩舻臋z測常采用色譜分析方法和酶免疫測定