微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用基礎(chǔ)知識(shí)-高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

1.2.1微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用重要知識(shí)點(diǎn)培養(yǎng)基的功能：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物培養(yǎng)基的分類：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的種類特點(diǎn)主要用途按照物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、保藏菌種等固體培養(yǎng)基微生物的分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)、保藏等按照化學(xué)成分天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確微生物的分類、鑒定等按照功能用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離特定的微生物，如在加入青霉素的培養(yǎng)基中分離酵母菌、霉菌等；在加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基中分離金黃色葡萄球菌鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如伊紅美藍(lán)（伊紅—亞甲藍(lán)）培養(yǎng)基上可以鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌微生物的主要成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌CO2NH、NO等光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物大腸桿菌糖類等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物需要重點(diǎn)掌握的一些微生物培養(yǎng)時(shí)需要加入特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：微生物名稱特殊物質(zhì)或需求乳酸桿菌添加維生素毛霉PH值調(diào)整為酸性細(xì)菌PH值調(diào)整為中性或弱堿性厭氧微生物提供無氧環(huán)境異養(yǎng)型生物有機(jī)碳源，如尿素、蛋白質(zhì)等培養(yǎng)基配制的基本原則：(1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據(jù)培養(yǎng)目的進(jìn)行配制。(2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不能滿足微生物營(yíng)養(yǎng)的需要，過高對(duì)微生物的生長(zhǎng)有抑制作用。(3)pH要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的pH范圍不同，為維持pH的相對(duì)穩(wěn)定，可在培養(yǎng)基中加入緩沖溶劑。培養(yǎng)基的配置過程往往需要調(diào)節(jié)PH值，一般在培養(yǎng)基中加入緩沖劑進(jìn)行調(diào)節(jié)，常見的有“K2HPO4和KH2PO4”固體培養(yǎng)基——因?yàn)楹协傊?，瓊脂只作為凝固劑，不?huì)給培養(yǎng)基提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，瓊脂在98℃以上融化，在44℃以下凝固，溫度過高，會(huì)燙傷操作者，溫度過低，培養(yǎng)基凝固，無法操作，所以在50℃時(shí)進(jìn)行倒平板無菌技術(shù)的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染，主要包括消毒和滅菌兩種殺菌技術(shù)。消毒的定義：使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物滅菌的定義：使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。注意:殺菌≠滅菌，殺菌包括消毒和滅菌兩種方法，選擇題需要注意審題芽孢：細(xì)菌的休眠體，孢子：真菌的繁殖體13、消毒和滅菌的比較：內(nèi)容種類主要方法應(yīng)用范圍消毒煮沸消毒法100

℃煮沸5～6

min一般物品巴氏消毒法62～65

℃消毒30

min或80～90

℃處理30

s～1

min牛奶、啤酒、果酒等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液體化學(xué)藥物消毒法用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等用于皮膚、傷口、動(dòng)植物組織表面、空氣、手術(shù)器械等紫外線消毒法紫外燈照射30

min接種室、接種箱、超凈工作臺(tái)滅菌濕熱滅菌法用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在100

kPa、121

℃的條件下維持15～30

min培養(yǎng)基及過重器材、物品干熱滅菌法用干熱滅菌箱在160～170

℃的熱空氣中維持2～3

h玻璃器皿、金屬用具等灼燒滅菌直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒涂布器、接種環(huán)、接種針或其他金屬用具，接種過程中試管口或瓶口等容易被污染的部位14、消毒和滅菌的歸納圖解：15、制備培養(yǎng)基的流程：配制培養(yǎng)基→定容→分裝→滅菌→冷卻→倒平板16、平板劃線操作重要知識(shí)點(diǎn)：①灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能深入菌液，以免溫度太高殺死菌種。②第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，目的是使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的菌落。③劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。④第一次接種前和每次劃線前都要灼燒接種環(huán)，劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)。（劃線5次，灼燒6次）接種環(huán)灼傷的原因：灼燒時(shí)間灼燒目的第一次劃線前殺死接種環(huán)上原有的微生物，防止外來微生物干擾每次劃線前殺死上次劃線