生化檢驗(yàn)項(xiàng)目校準(zhǔn)課件

生化檢驗(yàn)項(xiàng)目校準(zhǔn)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目校準(zhǔn)校準(zhǔn)：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器(或測量系統(tǒng))所指示的量值，或?qū)嵨锪烤?或參考物質(zhì))所代表的值，與對應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。校準(zhǔn)：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器(或測量系統(tǒng))所指儀器的性能驗(yàn)證：零點(diǎn)漂移波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性雜散光吸光度正確度吸光度重復(fù)性吸光度線性誤差交叉污染率溫度正確度比色杯間差距檢測項(xiàng)目校準(zhǔn)儀器的性能驗(yàn)證：

參考方法決定性方法

廠家方法

常規(guī)分析

一級標(biāo)準(zhǔn)品二級標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)品校準(zhǔn)目的是準(zhǔn)確度的傳遞溯源校準(zhǔn)參考方法決定性方法廠家方法常規(guī)分析一項(xiàng)目校準(zhǔn)主要涉及內(nèi)容校準(zhǔn)方法的選擇校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)頻率的選擇校準(zhǔn)后的驗(yàn)證問題討論項(xiàng)目校準(zhǔn)主要涉及內(nèi)容校準(zhǔn)方法的選擇

校準(zhǔn)方法的選擇

校準(zhǔn)方法的選擇K因子法（+-）：理論k值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)來計(jì)算。通常試劑生產(chǎn)廠家給出的k值都屬于。實(shí)測K值：是根據(jù)儀器實(shí)測的摩爾消光系數(shù)來設(shè)置K值校準(zhǔn)k值：是根據(jù)儀器當(dāng)前的實(shí)際狀態(tài)，試劑的穩(wěn)定性等通過校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后得到的K值。K因數(shù)法適用的分析方法有一點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)速率法，多點(diǎn)速率法。K因子法（+-）：波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性logit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功定值質(zhì)控品是否可以替代校準(zhǔn)品？試劑改變了種類或更換了批號試劑參數(shù)為：Primarywavelength：340nm；零度水平是否均可以用水來代替？（LPa）校準(zhǔn)目的是準(zhǔn)確度的傳遞校準(zhǔn)后用校準(zhǔn)品當(dāng)樣本進(jìn)行測試，看其值與定值之間的差異R1reagentvolume：185ul；校準(zhǔn)范圍也定義為分析方法的工作范圍。線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直線），一般只需一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直線），一般只需一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直非線性法：又稱非直線性校準(zhǔn)法非線性法包括logit-log法、指數(shù)函數(shù)法、樣條函數(shù)法等方法Logit-log3p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。P表示參數(shù)之意，由3個(gè)參數(shù)（S1Abs、k、a）參與計(jì)算。S1Abs表示試劑空白，K表示校準(zhǔn)所得斜率，a表示近似常數(shù)。非線性法：又稱非直線性校準(zhǔn)法非線性法包括logit-loglogit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。logit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸

樣條函數(shù)法（spline）：是將每一標(biāo)準(zhǔn)液測定的吸光度連接起來（點(diǎn)對點(diǎn)），形成一個(gè)完整曲線，即為曲線擬合。該曲線擬合優(yōu)于折線法校準(zhǔn)。樣條函數(shù)法（spline）：是將每一標(biāo)準(zhǔn)液測定的吸光度連接logit-logXp與樣條函數(shù)法拋物線型(左下圖)，則多考慮用logic方法擬合。曲線類型不確定時(shí)，或校準(zhǔn)曲線類型如圖12-37所示的S型非線性校準(zhǔn)類型，則多考慮Splain方法擬合。logit-logXp與樣條函數(shù)法拋物線型(左下圖)，則多考校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)品：含有已知量的欲測物，用以校準(zhǔn)該測定方法的數(shù)值，它與該方法、試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)性誤差。最好為人血清基質(zhì)，減少基質(zhì)效應(yīng)儀器、試劑、校準(zhǔn)品的配套性如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)要有明確的不確定度校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)品：含有已知量的欲測物，用以校準(zhǔn)該測定冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從-70℃或-20℃冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，使之完全融化，溫和混勻。凍干產(chǎn)品的復(fù)溶步驟：從冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，輕拍小瓶，以確保所有物質(zhì)已沉淀在該小瓶底部，小心拔開膠塞，采用已校準(zhǔn)的移液管沿瓶壁緩慢精確加入規(guī)定體積的去離子水，壓膠塞到原位后置室溫下使之完全溶解，溫和混勻。應(yīng)按廠家提供說明書操作。冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從-70℃或-20℃冰箱中取出樣本，置室校準(zhǔn)品濃度水平及個(gè)數(shù)選擇校準(zhǔn)至少包含你需要報(bào)告結(jié)果的內(nèi)容/范圍。校準(zhǔn)范圍也定義為分析方法的工作范圍。個(gè)數(shù)要與儀器要求相匹配校準(zhǔn)品濃度水平及個(gè)數(shù)選擇案例分析一、現(xiàn)象：某品牌HCY試劑（儀器：雅培C8000），校準(zhǔn)無法通過，出現(xiàn)“校準(zhǔn)失敗”的報(bào)警。試劑參數(shù)為：Primarywavelength：340nm；

Secondarywavelength：700nm；

Mainreadtime：31-33；

Blankreadtime：26-28；

Samplevolume：10ul；

R1reagentvolume：185ul；

R2reagentvolume：50ul；Calibrationmethod：Spline；

校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)設(shè)置：3；

濃度分別設(shè)置為：0、10、33umol/L。

案例分析一、現(xiàn)象：二、了解情況：

查看校準(zhǔn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)其每個(gè)濃度的吸光度實(shí)際在該儀器上已做出測定，分別為：0：-0.002710：-0.034433：-0.0738，但參與最終結(jié)果計(jì)算的CalFactor（校準(zhǔn)因數(shù)）卻顯示為0，說明該儀器并未通過所測定的吸光度進(jìn)行曲線擬合，故出現(xiàn)“校準(zhǔn)失敗”報(bào)警。二、了解情況：三、處理：分別對10umol/L、33umol/L的校準(zhǔn)品進(jìn)行對倍稀釋，得到5umol/L、16.5umol/L濃度的校準(zhǔn)；把參數(shù)中校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)修改為：5；濃度設(shè)置修改為0、5、10、16.5、33umol/L。仍采用Spline定標(biāo)模式重新進(jìn)行校準(zhǔn)，后校準(zhǔn)順利通過，結(jié)果如下：

0umol/L5umol/L10umol/L16.5umol/L33umol/LCalFactor

-87.2-213.5-279.6-365.3吸光度-0.0032-0.0195-0.0366-0.0558-0.0744三、處理：

0umol/L5umol/L10umol/5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功四、分析：全自動(dòng)生化分析儀的校準(zhǔn)模式設(shè)置中均有線性或非線性的選擇。當(dāng)我們對其進(jìn)行設(shè)置時(shí)，會(huì)根據(jù)試劑盒的反應(yīng)原理選擇合適的校準(zhǔn)模式。通常情況下，常規(guī)的生化項(xiàng)目我們會(huì)選擇線性模式校準(zhǔn)，而免疫比濁項(xiàng)目我們會(huì)選擇非線性模式校準(zhǔn)。若選擇線性校準(zhǔn)，往往我們只需帶一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行兩點(diǎn)校準(zhǔn)即可。若選擇非線性校準(zhǔn)時(shí)，我們會(huì)帶多個(gè)濃度校準(zhǔn)品進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)。5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功四、分析：5.不同的儀器，在做非線性校準(zhǔn)時(shí)所要求的校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)是不同的。例如：日立、奧林巴斯等儀器，要求至少帶三個(gè)濃度的校準(zhǔn)品即可進(jìn)行非線性擬合；貝克曼、東芝等儀器，則要求至少帶四個(gè)濃度的校準(zhǔn)品才進(jìn)行非線性擬合。五、總結(jié)：

我們在進(jìn)行新項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)前，除了選擇正確的校準(zhǔn)模式外，還要根據(jù)該儀器的性能特點(diǎn)，選擇符合要求的校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)，以保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。5.不同的儀器，在做非線性校準(zhǔn)時(shí)所要求的校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)是不同的。校準(zhǔn)頻率的選擇1.1實(shí)驗(yàn)室用房選址：BSL-2級實(shí)驗(yàn)室在選址和建筑物間距方面并沒有特殊要求，也不要求有單獨(dú)的建筑物，不過BSL-2級實(shí)驗(yàn)在布局上還是強(qiáng)調(diào)要與辦公用房和其它公共用房隔離，盡量自成一區(qū)或設(shè)在建筑物的一端，遠(yuǎn)離公共活動(dòng)場所，屏蔽電磁，震動(dòng)。一般選擇2-3樓層為宜，通風(fēng)，寬敞明亮，靠近整棟建筑污物電梯，附近有廁所。理想狀況下進(jìn)行每批次檢測前都應(yīng)進(jìn)行試劑改變了種類或更換了批號儀器進(jìn)行了大的維護(hù)維修或更換了重要的配件，如光源燈、濾光片等室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)了趨勢性變化或飄移（系統(tǒng)性誤差）；或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定接受限，采取了一般性糾正措施后，不能識別和糾正問題時(shí)廠家試劑有明確校準(zhǔn)時(shí)限規(guī)定的校準(zhǔn)頻率的選擇1.1實(shí)驗(yàn)室用房選址：理想狀況下進(jìn)行每批次檢校準(zhǔn)后的驗(yàn)證校準(zhǔn)后用校準(zhǔn)品當(dāng)樣本進(jìn)行測試，看其值與定值之間的差異測定室內(nèi)質(zhì)控，看結(jié)果是否在控。參加室間質(zhì)評或返測已知濃度的室間質(zhì)評樣本。校準(zhǔn)后的驗(yàn)證記錄每次校準(zhǔn)結(jié)果，與之前的校正結(jié)果進(jìn)行比較。記錄每次校準(zhǔn)結(jié)果，與之前的校正結(jié)果進(jìn)行比較。問題討論定值質(zhì)控品是否可以替代校準(zhǔn)品？空白校準(zhǔn)的選擇？K值究竟該選擇理論、實(shí)測、校準(zhǔn)K值？零度水平是否均可以用水來代替？（LPa）校準(zhǔn)品的保存與使用？室內(nèi)質(zhì)控失控是否都應(yīng)進(jìn)行校準(zhǔn)糾正？不同批號的校準(zhǔn)品使用和對k值的影響？校準(zhǔn)品是否可以通用于各儀器和方法，測量次數(shù)？問題討論定值質(zhì)控品是否可以替代校準(zhǔn)品？謝謝！謝謝！身體健康，學(xué)習(xí)進(jìn)步！身體健康，生化檢驗(yàn)項(xiàng)目校準(zhǔn)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目校準(zhǔn)校準(zhǔn)：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器(或測量系統(tǒng))所指示的量值，或?qū)嵨锪烤?或參考物質(zhì))所代表的值，與對應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。校準(zhǔn)：在規(guī)定條件下，為確定測量儀器(或測量系統(tǒng))所指儀器的性能驗(yàn)證：零點(diǎn)漂移波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性雜散光吸光度正確度吸光度重復(fù)性吸光度線性誤差交叉污染率溫度正確度比色杯間差距檢測項(xiàng)目校準(zhǔn)儀器的性能驗(yàn)證：

參考方法決定性方法

廠家方法

常規(guī)分析

一級標(biāo)準(zhǔn)品二級標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)品校準(zhǔn)目的是準(zhǔn)確度的傳遞溯源校準(zhǔn)參考方法決定性方法廠家方法常規(guī)分析一項(xiàng)目校準(zhǔn)主要涉及內(nèi)容校準(zhǔn)方法的選擇校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)頻率的選擇校準(zhǔn)后的驗(yàn)證問題討論項(xiàng)目校準(zhǔn)主要涉及內(nèi)容校準(zhǔn)方法的選擇

校準(zhǔn)方法的選擇

校準(zhǔn)方法的選擇K因子法（+-）：理論k值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)來計(jì)算。通常試劑生產(chǎn)廠家給出的k值都屬于。實(shí)測K值：是根據(jù)儀器實(shí)測的摩爾消光系數(shù)來設(shè)置K值校準(zhǔn)k值：是根據(jù)儀器當(dāng)前的實(shí)際狀態(tài)，試劑的穩(wěn)定性等通過校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后得到的K值。K因數(shù)法適用的分析方法有一點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)終點(diǎn)法，兩點(diǎn)速率法，多點(diǎn)速率法。K因子法（+-）：波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性logit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功定值質(zhì)控品是否可以替代校準(zhǔn)品？試劑改變了種類或更換了批號試劑參數(shù)為：Primarywavelength：340nm；零度水平是否均可以用水來代替？（LPa）校準(zhǔn)目的是準(zhǔn)確度的傳遞校準(zhǔn)后用校準(zhǔn)品當(dāng)樣本進(jìn)行測試，看其值與定值之間的差異R1reagentvolume：185ul；校準(zhǔn)范圍也定義為分析方法的工作范圍。線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直線），一般只需一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直線），一般只需一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)。波長準(zhǔn)確度及重復(fù)性線性校準(zhǔn)（Linear）：其反應(yīng)為線性（直非線性法：又稱非直線性校準(zhǔn)法非線性法包括logit-log法、指數(shù)函數(shù)法、樣條函數(shù)法等方法Logit-log3p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。P表示參數(shù)之意，由3個(gè)參數(shù)（S1Abs、k、a）參與計(jì)算。S1Abs表示試劑空白，K表示校準(zhǔn)所得斜率，a表示近似常數(shù)。非線性法：又稱非直線性校準(zhǔn)法非線性法包括logit-loglogit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸光度表現(xiàn)為收束的工作曲線。logit-log4p對數(shù)函數(shù)法中的一種，適用于濃度升高而吸

樣條函數(shù)法（spline）：是將每一標(biāo)準(zhǔn)液測定的吸光度連接起來（點(diǎn)對點(diǎn)），形成一個(gè)完整曲線，即為曲線擬合。該曲線擬合優(yōu)于折線法校準(zhǔn)。樣條函數(shù)法（spline）：是將每一標(biāo)準(zhǔn)液測定的吸光度連接logit-logXp與樣條函數(shù)法拋物線型(左下圖)，則多考慮用logic方法擬合。曲線類型不確定時(shí)，或校準(zhǔn)曲線類型如圖12-37所示的S型非線性校準(zhǔn)類型，則多考慮Splain方法擬合。logit-logXp與樣條函數(shù)法拋物線型(左下圖)，則多考校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)品：含有已知量的欲測物，用以校準(zhǔn)該測定方法的數(shù)值，它與該方法、試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)性誤差。最好為人血清基質(zhì)，減少基質(zhì)效應(yīng)儀器、試劑、校準(zhǔn)品的配套性如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)要有明確的不確定度校準(zhǔn)品的選擇及準(zhǔn)備校準(zhǔn)品：含有已知量的欲測物，用以校準(zhǔn)該測定冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從-70℃或-20℃冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，使之完全融化，溫和混勻。凍干產(chǎn)品的復(fù)溶步驟：從冰箱中取出樣本，置室溫（18-25）℃下平衡，并放置在水平桌面上，輕拍小瓶，以確保所有物質(zhì)已沉淀在該小瓶底部，小心拔開膠塞，采用已校準(zhǔn)的移液管沿瓶壁緩慢精確加入規(guī)定體積的去離子水，壓膠塞到原位后置室溫下使之完全溶解，溫和混勻。應(yīng)按廠家提供說明書操作。冰凍產(chǎn)品的處理步驟：從-70℃或-20℃冰箱中取出樣本，置室校準(zhǔn)品濃度水平及個(gè)數(shù)選擇校準(zhǔn)至少包含你需要報(bào)告結(jié)果的內(nèi)容/范圍。校準(zhǔn)范圍也定義為分析方法的工作范圍。個(gè)數(shù)要與儀器要求相匹配校準(zhǔn)品濃度水平及個(gè)數(shù)選擇案例分析一、現(xiàn)象：某品牌HCY試劑（儀器：雅培C8000），校準(zhǔn)無法通過，出現(xiàn)“校準(zhǔn)失敗”的報(bào)警。試劑參數(shù)為：Primarywavelength：340nm；

Secondarywavelength：700nm；

Mainreadtime：31-33；

Blankreadtime：26-28；

Samplevolume：10ul；

R1reagentvolume：185ul；

R2reagentvolume：50ul；Calibrationmethod：Spline；

校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)設(shè)置：3；

濃度分別設(shè)置為：0、10、33umol/L。

案例分析一、現(xiàn)象：二、了解情況：

查看校準(zhǔn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)其每個(gè)濃度的吸光度實(shí)際在該儀器上已做出測定，分別為：0：-0.002710：-0.034433：-0.0738，但參與最終結(jié)果計(jì)算的CalFactor（校準(zhǔn)因數(shù)）卻顯示為0，說明該儀器并未通過所測定的吸光度進(jìn)行曲線擬合，故出現(xiàn)“校準(zhǔn)失敗”報(bào)警。二、了解情況：三、處理：分別對10umol/L、33umol/L的校準(zhǔn)品進(jìn)行對倍稀釋，得到5umol/L、16.5umol/L濃度的校準(zhǔn)；把參數(shù)中校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)修改為：5；濃度設(shè)置修改為0、5、10、16.5、33umol/L。仍采用Spline定標(biāo)模式重新進(jìn)行校準(zhǔn)，后校準(zhǔn)順利通過，結(jié)果如下：

0umol/L5umol/L10umol/L16.5umol/L33umol/LCalFactor

-87.2-213.5-279.6-365.3吸光度-0.0032-0.0195-0.0366-0.0558-0.0744三、處理：

0umol/L5umol/L10umol/5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功四、分析：全自動(dòng)生化分析儀的校準(zhǔn)模式設(shè)置中均有線性或非線性的選擇。當(dāng)我們對其進(jìn)行設(shè)置時(shí)，會(huì)根據(jù)試劑盒的反應(yīng)原理選擇合適的校準(zhǔn)模式。通常情況下，常規(guī)的生化項(xiàng)目我們會(huì)選擇線性模式校準(zhǔn)，而免疫比濁項(xiàng)目我們會(huì)選擇非線性模式校準(zhǔn)。若選擇線性校準(zhǔn)，往往我們只需帶一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行兩點(diǎn)校準(zhǔn)即可。若選擇非線性校準(zhǔn)時(shí)，我們會(huì)帶多個(gè)濃度校準(zhǔn)品進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)。5、之后校準(zhǔn)顯示通過，質(zhì)控在控，證明校準(zhǔn)成功四、分析：5.不同的儀器，在做非線性校準(zhǔn)時(shí)所要求的校準(zhǔn)品個(gè)數(shù)是不同的。例如：日立、奧林巴斯等儀器，要求至少帶三個(gè)濃度的校準(zhǔn)品即可進(jìn)行非線性擬合；貝克曼、東芝等儀