抗生素課件講義整理-002

第八章抗生素類藥物的分析（Antibiotics）1最新課件第八章抗生素類藥物的分析1最新課件第一節(jié)：概述1、定義：抗生素是某些微生物的代謝產(chǎn)物或合成的類似物，在小劑量的情況下能抑制微生物的生長(zhǎng)和存活，而對(duì)宿主不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性。2、特點(diǎn)：由生物體產(chǎn)生或人工合成化學(xué)純度低結(jié)構(gòu)、組成復(fù)雜對(duì)他種生物體有抑制作用3、名稱演變：抗生素——抗菌素——抗生素

60-70年80年后2最新課件第一節(jié)：概述1、定義：抗生素是某些微生物的代謝產(chǎn)物或合成2、一、抗生素類藥物一般檢查項(xiàng)目：

①鑒別試驗(yàn):用化學(xué)法、物理化學(xué)法以及生物學(xué)法來確認(rèn)是哪種抗生素②毒性試驗(yàn):控制藥品中的毒性物質(zhì)③無菌試驗(yàn):檢查藥品中有無雜菌污染④熱源試驗(yàn):控制藥品中的致熱物質(zhì)3最新課件一、抗生素類藥物一般檢查項(xiàng)目：3最新課件

⑤水分測(cè)定:控制水分含量⑥溶液澄明度檢查:檢查不溶性物質(zhì)⑦

溶液pH試驗(yàn):測(cè)定pH⑧降壓試驗(yàn):檢查有降壓作用的雜質(zhì)⑨

效價(jià)測(cè)定:有效成分測(cè)定4最新課件⑤水分測(cè)定:控制水分含量4最新課件抗生素藥品分析常用的方法：物理方法:旋光法、紫外、紅外、色譜等化學(xué)方法（專屬性不強(qiáng)）：功能團(tuán)反應(yīng)，鑒別和含量的測(cè)定。容量分析法：酸堿滴定（青霉素含量測(cè)定）和碘量法。生物學(xué)方法：酶反應(yīng)、微生物法測(cè)定效價(jià)5最新課件抗生素藥品分析常用的方法：物理方法:旋光法、紫外、紅外、色譜第二節(jié)抗生素類藥物的鑒別鑒別方法：理化方法生物學(xué)法：微生物法

官能團(tuán)顯色：β–內(nèi)酰胺環(huán)光譜法：UV、IR色譜法:TLC、HPLC6最新課件第二節(jié)抗生素類藥物的鑒別鑒別方法：理化方法官能團(tuán)顯色：根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：β–內(nèi)酰胺類抗生素：青霉素、頭孢菌素氨基糖苷類：鏈霉素、慶大霉素四環(huán)素類：四環(huán)素、金霉素大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素、麥迪霉素多稀大環(huán)類：兩性霉素Ｂ多肽類：多粘菌素苯烴胺類：氯霉素蒽環(huán)類：阿霉素其他：

抗生素類藥物的分類

7最新課件根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：抗生素類藥物的分類7最新課件第二節(jié)β-內(nèi)酰胺抗生素

(β-LactamAntibiotics)

8最新課件第二節(jié)β-內(nèi)酰胺抗生素

(β-LactamAntibi一、β-內(nèi)酰胺抗生素的結(jié)構(gòu)特征★指分子中含有由四個(gè)原子組成β-內(nèi)酰胺環(huán)★是該類抗生素發(fā)揮生物活性的必需基團(tuán)★和細(xì)菌作用時(shí)，內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)與細(xì)菌發(fā)生?；饔靡种萍?xì)菌的生長(zhǎng)?！镆颚?內(nèi)酰胺由四個(gè)原子組成，分子張力較大，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定易發(fā)生開環(huán)導(dǎo)致失活。9最新課件一、β-內(nèi)酰胺抗生素的結(jié)構(gòu)特征★指分子中含有由四個(gè)原子組成β二、分類：經(jīng)典結(jié)構(gòu)藥物青霉素類(Penicillins)頭孢菌素(Cephalosporins)10最新課件二、分類：經(jīng)典結(jié)構(gòu)藥物青霉素類(Penicillins)頭孢碳青霉烯(Carbapenem)青霉烯(Penem)單環(huán)的β-內(nèi)酰胺(Monobactam)氧青霉烷(Oxypenam)亞胺培南（泰能）克拉維酸氨曲南分類：非典型結(jié)構(gòu)藥物11最新課件碳青霉烯(Carbapenem)青霉烯(Penem)單環(huán)的β性質(zhì)1：酸性分子中游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機(jī)堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機(jī)溶劑。12最新課件性質(zhì)1：酸性分子中游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某性質(zhì)2：旋光性青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個(gè)手性碳原子，故都具有旋光性。根據(jù)此性質(zhì)，可用于定性和定量分析。﹡﹡﹡﹡﹡13最新課件性質(zhì)2：旋光性青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子，頭孢菌素族

性質(zhì)3：紫外吸收特性2、頭孢菌素類

母核有共軛體系

1、青霉素類母核無明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基

14最新課件性質(zhì)3：紫外吸收特性2、頭孢菌素類母核有共軛體性質(zhì)4：不穩(wěn)定性

干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液在pH6-6.8時(shí)較穩(wěn)定。β-內(nèi)酰胺環(huán)是該類抗生素結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的部分。四元環(huán)張力大

酰胺鍵易水解不穩(wěn)定性因素（某些金屬離子）（溫度）某些氧化劑、羥胺15最新課件性質(zhì)4：不穩(wěn)定性

干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例16最新課件例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉（一）色譜法1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法和斑點(diǎn)顏色比較供試品對(duì)照品相同條件fR?????Rt比較供試品對(duì)照品相同條件?????二、鑒別試驗(yàn)17最新課件（一）色譜法1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法和斑點(diǎn)顏色

頭孢氨芐

λmax=262nm青霉素V鈉

A280nm/A264nm

=1.30～1.50A,Emin,max,,%cm11λ光譜圖λ2．紫外分光光度法(UV)（二）光譜法1、IR法18最新課件頭孢氨芐λmax=262nm19最新課件19最新課件2、IR法3180cm-1酰胺N-H1780cm-1β–內(nèi)酰胺C=O3470cm-1酚羥基O-H1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1酚羥基C-O以阿莫西林為例20最新課件2、IR法3180cm-11780cm-13470cm-11β-內(nèi)酰胺環(huán)酰胺115251680-=cm、VOC117501800-=cm~VOCNHV=13300-cmCOOHV-114101600-cm、羧基21最新課件β-內(nèi)酰胺環(huán)酰胺115251680-=cm、VOC11750（三）茚三酮反應(yīng)某些具有α-氨基的本類藥物，如氨芐西林，遇茚三酮即顯藍(lán)紫色。

△22最新課件（三）茚三酮反應(yīng)某些具有α-氨基的本類藥物，如氨芐西林，遇茚α-氨基、伯胺某些羥基胺類酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍(lán)紫色23最新課件α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍(lán)紫色23最新課件（四）各種鹽的反應(yīng)

青霉素族、頭孢菌素族藥品中，許多制成鉀鹽或鈉鹽供臨床使用，因而可利用其火焰反應(yīng)進(jìn)行鑒別。1.火焰反應(yīng)24最新課件（四）各種鹽的反應(yīng)青霉素族、頭孢菌素族藥品中，許多制三、特殊雜質(zhì)的檢查

本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用HPLC法控制其限量，也有采用測(cè)定雜質(zhì)的吸收度來控制雜質(zhì)量的。25最新課件三、特殊雜質(zhì)的檢查本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚

（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體

例：頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查（反相HPLC法）取本品，流動(dòng)相，成0.4mg/ml，得供試液供試液，流動(dòng)相，成4ug/ml，得對(duì)照液①②對(duì)照品，流動(dòng)相，成4ug/ml，得雜質(zhì)對(duì)照液

雜質(zhì)①②，外標(biāo)法。其他雜質(zhì)，主成分自身對(duì)照法。頭孢氨芐以青霉素鉀為原料，經(jīng)氧化、擴(kuò)環(huán)、裂解得7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（7-ADCA）①，再與側(cè)鏈a-苯甘氨酸②縮合而成。這兩種原料有可能成為主要雜質(zhì)。26最新課件（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體26最新課件

（三）雜質(zhì)吸收度的檢查例：青霉素鈉（鉀）

取本品，加水，成1.80mg/ml。A280nm[控制雜質(zhì)]不得大于0.10，A264nm

[控制青霉素鈉（鉀）的含量]應(yīng)為0.80-0.88。27最新課件（三）雜質(zhì)吸收度的檢查27最新課件（四）有機(jī)溶劑氨芐西林鈉：CH2Cl2GC頭孢哌酮：丙酮GC頭孢他啶：吡啶HPLC

28最新課件（四）有機(jī)溶劑氨芐西林鈉：CH2Cl2GC28最新課件四、含量測(cè)定青霉族和頭孢菌素族的含量測(cè)定大多采用理化測(cè)定方法中的HPLC法內(nèi)標(biāo)法＋校正因子外標(biāo)法特點(diǎn)

快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好一法多用（鑒別、檢查、含測(cè)）29最新課件四、含量測(cè)定青霉族和頭孢菌素族的含量測(cè)定大多采用理化測(cè)定方法哌拉西寧原料藥含量測(cè)定色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇–0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液–10％氫氧化四乙基銨溶液–水（400︰50︰3︰547）用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。30最新課件哌拉西寧原料藥含量測(cè)定30最新課件二氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素31最新課件二氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素3鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元鏈霉雙糖胺鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺鏈霉胍32最新課件鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺慶大霉素

糖

苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖

絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺33最新課件慶大霉素糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H

慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH334最新課件慶大霉素C復(fù)合物34最新課件一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心（一）堿性水溶性（二）溶解性（三）

UV（四）苷的水解與穩(wěn)定性鏈霉素pH5～7.5慶大霉素pH2～12

穩(wěn)定鏈霉素在230nm處有吸收，慶大霉素、奈替米星無35最新課件一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)36最新課件坂口反應(yīng)N-甲基葡萄麥芽酚反應(yīng)36最新課件二、鑒別

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)硫酸慶大霉素鑒別(1)取本品約5mg，加水1ml溶解后，加0.1％茚三酮的水飽和正丁醇溶液1ml與吡啶

0.5ml，在水浴中加熱5分鐘，即顯紫藍(lán)色。

37最新課件二、鑒別茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)硫酸慶（二）Molisch反應(yīng)

具五碳或六碳糖的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸（或硫酸）作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛。這些產(chǎn)物遇α-萘酚或蒽酮呈色。紅紫色38最新課件（二）Molisch反應(yīng)具五碳或六碳糖的氨基糖蒽酮呈色原理：藍(lán)紫色阿米卡星鑒別(1)取本品約10mg，加水1ml溶解后，加0.1％蒽酮的硫酸溶液4ml，即顯藍(lán)紫色。

39最新課件蒽酮呈色原理：藍(lán)紫色阿米卡星鑒別39最新課件N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）H+40最新課件N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基

麥芽酚反應(yīng)（四）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排擴(kuò)環(huán)41最新課件麥芽酚反應(yīng)（四）鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排擴(kuò)環(huán)紫紅麥芽酚42最新課件紫紅麥芽酚42最新課件鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（五）α-萘酚43最新課件鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（五）α-（六）反應(yīng)H+光譜法（八）慶大霉素?zé)oUV吸收色譜法（七）44最新課件（六）反應(yīng)H+光譜法（八）慶大霉素?zé)oUV吸收色譜法（七）44三、檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）方法TLC中的對(duì)照品法（BP）1.來源反應(yīng)中間體45最新課件三、檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）對(duì)微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同工藝差別C組分比例不一致規(guī)定控制各組分的相對(duì)百分含量HPLCChPUSPBPJP慶大霉素C組分的測(cè)定（二）46最新課件對(duì)微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同C組λmax=330nm1.衍生化原理

1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物47最新課件λmax=330nm1.衍生化原理1-烷基硫代-2-烷RP－HPLC方法2.規(guī)定C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%計(jì)算3.峰面積歸一化法48最新課件RP－HPLC方法2.規(guī)定C149最新課件49最新課件四、

含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法

本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。50最新課件四、含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法50最新離子交換色譜法離子對(duì)色譜法RP-HPLC法HPLC法51最新課件離子交換色譜法HPLC法51最新課件第四節(jié)四環(huán)素類抗生素(TetracyclineAntibiotics)52最新課件第四節(jié)四環(huán)素類抗生素(TetracyclineAnti苯并蒽環(huán)結(jié)構(gòu),C-4為α結(jié)構(gòu),是由放線菌產(chǎn)生的,天然有

一、天然四環(huán)素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)ABCD4R1R2R3R4四環(huán)素HOHCH3H53年得到土霉素OHOHCH3H50年得到金霉素HOHCH3Cl48年得到53最新課件苯并蒽環(huán)結(jié)構(gòu),C-4為α結(jié)構(gòu),是由放線菌產(chǎn)生的,天然有二、作用：廣譜抗生素，G+、G-、部分立克次體、病毒、原蟲等近年來四環(huán)素類抗生素新藥開發(fā)不理想三、作用機(jī)制:干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的生物合成與細(xì)菌中的Mn+形成金屬離子絡(luò)合物54最新課件二、作用：廣譜抗生素，G+、G-、部分立克近年來四環(huán)素類抗生四、理化性質(zhì)：黃色結(jié)晶性粉末1、酸堿兩性：Ar10-OH、=C3-OH為酸性

C4–N=為堿性。可溶酸堿臨床用其堿，成HCl鹽55最新課件四、理化性質(zhì)：黃色結(jié)晶性粉末1、酸堿兩性：Ar10-OH、=2、穩(wěn)定性：PH=2脫水產(chǎn)物（C6-OH；C5α-H）1)在酸性條件下發(fā)生消除反應(yīng),失活56最新課件2、穩(wěn)定性：PH=2脫水產(chǎn)物（C6-OH；C5α-H）1)在PH=2-6差向異枸化（C4-N；由α→β）難易：土（氫鍵）＞四＞金（位阻）2)pH2-6,C-4二甲胺基易發(fā)生差向異構(gòu)化,失活57最新課件PH=2-6差向異枸化（C4-N；由α→βPH＞7成內(nèi)酯（C環(huán)，C6-OH；C11=O）3)OH-下C環(huán)開裂,失活58最新課件PH＞7成內(nèi)酯（C環(huán)，C6-OH；C11=O）3)OH-五、臨床用缺點(diǎn)：耐藥性嚴(yán)重吸收不好，血藥濃度低影響骨骼生長(zhǎng)孕婦及兒童為何不可用四環(huán)素：牙齒變黃、骨骼生長(zhǎng)抑制4)和金屬離子的反應(yīng)含OH、C=O、=C-OH等基團(tuán)，可與Mn+生成不溶性螯合物,如成Ca、Mg、Fe鹽等,生成不同色59最新課件五、臨床用缺點(diǎn)：耐藥性嚴(yán)重孕婦及兒童為何不可用四環(huán)素：牙齒變2.降解反應(yīng)（1）酸性下降解λmax=445nmλmax=435nm橙黃色60最新課件2.降解反應(yīng)（1）酸性下降解λmax=445nmλmax脫水四環(huán)素61最新課件脫水四環(huán)素61最新課件～～TCETCATCEATC＜＜62最新課件～～TCETCATCEATC＜＜62最新課件63最新課件63最新課件二、

鑒別試驗(yàn)H2SO4反應(yīng)（一）64最新課件二、鑒別試驗(yàn)H2SO4反應(yīng)（一）64最新課件（三）1mol/L鹽酸-甲醇（1→100）0.01mg/mlUV法（二）（三）熒光法UV綠色熒光H+UV65最新課件（三）1mol/L鹽酸-甲醇（1→100）UV法（二）（三）TLC法（四）HPLC法（五）EDTA克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象（六）IR法硅藻土做載體66最新課件TLC法（四）HPLC法（五）EDTA克服痕量金屬三、檢查有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法自身稀釋對(duì)照法鹽酸四環(huán)素67最新課件三、檢查有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法自身稀釋對(duì)照法鹽吸收度（二）68最新課件吸收度（二）68最新課件雜質(zhì)吸收度69最新課件雜質(zhì)吸收度69最新課件四、含量測(cè)定HPLC法（外標(biāo)法）70最新課件四、含量測(cè)定HPLC法（外標(biāo)法）70最新課件第五節(jié)抗生素類藥物中高分子雜質(zhì)的檢查1.高分子雜質(zhì)分子量大于藥物本身的雜質(zhì)總稱。71最新課件第五節(jié)抗生素類藥物中高分子1.高分子雜質(zhì)71最新蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、多糖的結(jié)合物。主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。

藥物的自身聚合物，來自于生產(chǎn)、貯存過程。可引發(fā)過敏。

外源性雜質(zhì)內(nèi)源性雜質(zhì)72最新課件蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、73最新課件73最新課件74最新課件74最新課件75最新課件75最新課件

3.高分子雜質(zhì)的質(zhì)控方法

（1）凝膠色譜法測(cè)定高分子雜質(zhì)：使高分子雜質(zhì)與藥物分離。

（2）高分子雜質(zhì)的控制方法---自身對(duì)照外標(biāo)法原理：測(cè)定在Kav=0處藥物締合物的峰響應(yīng)指標(biāo)

樣品中高分子雜質(zhì)的響應(yīng)指標(biāo)

按外標(biāo)法計(jì)算，得樣品中高分子雜質(zhì)相當(dāng)于藥物本身的相對(duì)含量。

76最新課件3.高分子雜質(zhì)的質(zhì)控方法

（1）凝膠色譜法測(cè)定高分子雜質(zhì)：（3）高分子雜質(zhì)的分析方法

簡(jiǎn)單測(cè)定系統(tǒng)：葡聚糖凝膠G-10（40～

120μm）柱.

HPLC系統(tǒng):葡聚糖凝膠G-10柱.

77最新課件（3）高分子雜質(zhì)的分析方法

簡(jiǎn)單測(cè)定系統(tǒng)：葡聚糖凝膠G-102、鏈霉素毒性雜質(zhì):

鏈霉胍,鏈胍雙氫鏈糖;雙氫鏈霉素;鏈霉素醛基結(jié)合物;

神經(jīng)毒性：二鏈霉胺二鏈霉胺含量測(cè)定原理:二鏈霉胺等不被KBH4還原，能與鹽酸氨基脲反應(yīng)，生成的縮氨脲在233nm有吸收峰78最新課件2、鏈霉素78最新課件3、土霉素脫水土霉素、差向土霉素、α-阿撲土霉素、β-阿撲土霉素等降解產(chǎn)物薄層分離，熒光測(cè)定4、四環(huán)素脫水四環(huán)素、差向四環(huán)素、差向脫水四環(huán)素

HPLC測(cè)定79最新課件3、土霉素79最新課件感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！80感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，80感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們刪除，謝謝配合！81感謝親觀看此幻燈片，此課件部分內(nèi)容來源于網(wǎng)絡(luò)，81第八章抗生素類藥物的分析（Antibiotics）82最新課件第八章抗生素類藥物的分析1最新課件第一節(jié)：概述1、定義：抗生素是某些微生物的代謝產(chǎn)物或合成的類似物，在小劑量的情況下能抑制微生物的生長(zhǎng)和存活，而對(duì)宿主不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性。2、特點(diǎn)：由生物體產(chǎn)生或人工合成化學(xué)純度低結(jié)構(gòu)、組成復(fù)雜對(duì)他種生物體有抑制作用3、名稱演變：抗生素——抗菌素——抗生素

60-70年80年后83最新課件第一節(jié)：概述1、定義：抗生素是某些微生物的代謝產(chǎn)物或合成2、一、抗生素類藥物一般檢查項(xiàng)目：

①鑒別試驗(yàn):用化學(xué)法、物理化學(xué)法以及生物學(xué)法來確認(rèn)是哪種抗生素②毒性試驗(yàn):控制藥品中的毒性物質(zhì)③無菌試驗(yàn):檢查藥品中有無雜菌污染④熱源試驗(yàn):控制藥品中的致熱物質(zhì)84最新課件一、抗生素類藥物一般檢查項(xiàng)目：3最新課件

⑤水分測(cè)定:控制水分含量⑥溶液澄明度檢查:檢查不溶性物質(zhì)⑦

溶液pH試驗(yàn):測(cè)定pH⑧降壓試驗(yàn):檢查有降壓作用的雜質(zhì)⑨

效價(jià)測(cè)定:有效成分測(cè)定85最新課件⑤水分測(cè)定:控制水分含量4最新課件抗生素藥品分析常用的方法：物理方法:旋光法、紫外、紅外、色譜等化學(xué)方法（專屬性不強(qiáng)）：功能團(tuán)反應(yīng)，鑒別和含量的測(cè)定。容量分析法：酸堿滴定（青霉素含量測(cè)定）和碘量法。生物學(xué)方法：酶反應(yīng)、微生物法測(cè)定效價(jià)86最新課件抗生素藥品分析常用的方法：物理方法:旋光法、紫外、紅外、色譜第二節(jié)抗生素類藥物的鑒別鑒別方法：理化方法生物學(xué)法：微生物法

官能團(tuán)顯色：β–內(nèi)酰胺環(huán)光譜法：UV、IR色譜法:TLC、HPLC87最新課件第二節(jié)抗生素類藥物的鑒別鑒別方法：理化方法官能團(tuán)顯色：根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：β–內(nèi)酰胺類抗生素：青霉素、頭孢菌素氨基糖苷類：鏈霉素、慶大霉素四環(huán)素類：四環(huán)素、金霉素大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素、麥迪霉素多稀大環(huán)類：兩性霉素Ｂ多肽類：多粘菌素苯烴胺類：氯霉素蒽環(huán)類：阿霉素其他：

抗生素類藥物的分類

88最新課件根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：抗生素類藥物的分類7最新課件第二節(jié)β-內(nèi)酰胺抗生素

(β-LactamAntibiotics)

89最新課件第二節(jié)β-內(nèi)酰胺抗生素

(β-LactamAntibi一、β-內(nèi)酰胺抗生素的結(jié)構(gòu)特征★指分子中含有由四個(gè)原子組成β-內(nèi)酰胺環(huán)★是該類抗生素發(fā)揮生物活性的必需基團(tuán)★和細(xì)菌作用時(shí)，內(nèi)酰胺環(huán)開環(huán)與細(xì)菌發(fā)生?；饔靡种萍?xì)菌的生長(zhǎng)?！镆颚?內(nèi)酰胺由四個(gè)原子組成，分子張力較大，化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定易發(fā)生開環(huán)導(dǎo)致失活。90最新課件一、β-內(nèi)酰胺抗生素的結(jié)構(gòu)特征★指分子中含有由四個(gè)原子組成β二、分類：經(jīng)典結(jié)構(gòu)藥物青霉素類(Penicillins)頭孢菌素(Cephalosporins)91最新課件二、分類：經(jīng)典結(jié)構(gòu)藥物青霉素類(Penicillins)頭孢碳青霉烯(Carbapenem)青霉烯(Penem)單環(huán)的β-內(nèi)酰胺(Monobactam)氧青霉烷(Oxypenam)亞胺培南（泰能）克拉維酸氨曲南分類：非典型結(jié)構(gòu)藥物92最新課件碳青霉烯(Carbapenem)青霉烯(Penem)單環(huán)的β性質(zhì)1：酸性分子中游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某些有機(jī)堿形成鹽。其堿金屬鹽易溶于水，而有機(jī)堿鹽難溶于水，易溶于甲醇等有機(jī)溶劑。93最新課件性質(zhì)1：酸性分子中游離羧基具有相當(dāng)強(qiáng)的酸性，能與無機(jī)堿或某性質(zhì)2：旋光性青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子，頭孢菌素族含有兩個(gè)手性碳原子，故都具有旋光性。根據(jù)此性質(zhì)，可用于定性和定量分析。﹡﹡﹡﹡﹡94最新課件性質(zhì)2：旋光性青霉素族分子中含有三個(gè)手性碳原子，頭孢菌素族

性質(zhì)3：紫外吸收特性2、頭孢菌素類

母核有共軛體系

1、青霉素類母核無明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基

95最新課件性質(zhì)3：紫外吸收特性2、頭孢菌素類母核有共軛體性質(zhì)4：不穩(wěn)定性

干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液在pH6-6.8時(shí)較穩(wěn)定。β-內(nèi)酰胺環(huán)是該類抗生素結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定的部分。四元環(huán)張力大

酰胺鍵易水解不穩(wěn)定性因素（某些金屬離子）（溫度）某些氧化劑、羥胺96最新課件性質(zhì)4：不穩(wěn)定性

干燥條件下青霉素鹽穩(wěn)定。青霉素水溶液例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉酸H2OpH2100℃α–青霉噻唑?；u胺酸NH2OH青霉烯酸pH4青霉胺CO2青霉醛HgCl2例97最新課件例青霉素的降解反應(yīng)青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ青霉素酶青霉（一）色譜法1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法和斑點(diǎn)顏色比較供試品對(duì)照品相同條件fR?????Rt比較供試品對(duì)照品相同條件?????二、鑒別試驗(yàn)98最新課件（一）色譜法1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法和斑點(diǎn)顏色

頭孢氨芐

λmax=262nm青霉素V鈉

A280nm/A264nm

=1.30～1.50A,Emin,max,,%cm11λ光譜圖λ2．紫外分光光度法(UV)（二）光譜法1、IR法99最新課件頭孢氨芐λmax=262nm100最新課件19最新課件2、IR法3180cm-1酰胺N-H1780cm-1β–內(nèi)酰胺C=O3470cm-1酚羥基O-H1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1酚羥基C-O以阿莫西林為例101最新課件2、IR法3180cm-11780cm-13470cm-11β-內(nèi)酰胺環(huán)酰胺115251680-=cm、VOC117501800-=cm~VOCNHV=13300-cmCOOHV-114101600-cm、羧基102最新課件β-內(nèi)酰胺環(huán)酰胺115251680-=cm、VOC11750（三）茚三酮反應(yīng)某些具有α-氨基的本類藥物，如氨芐西林，遇茚三酮即顯藍(lán)紫色。

△103最新課件（三）茚三酮反應(yīng)某些具有α-氨基的本類藥物，如氨芐西林，遇茚α-氨基、伯胺某些羥基胺類酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍(lán)紫色104最新課件α-氨基、伯胺酮式烯醇式茚三酮茚三酮縮合藍(lán)紫色23最新課件（四）各種鹽的反應(yīng)

青霉素族、頭孢菌素族藥品中，許多制成鉀鹽或鈉鹽供臨床使用，因而可利用其火焰反應(yīng)進(jìn)行鑒別。1.火焰反應(yīng)105最新課件（四）各種鹽的反應(yīng)青霉素族、頭孢菌素族藥品中，許多制三、特殊雜質(zhì)的檢查

本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用HPLC法控制其限量，也有采用測(cè)定雜質(zhì)的吸收度來控制雜質(zhì)量的。106最新課件三、特殊雜質(zhì)的檢查本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚

（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體

例：頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查（反相HPLC法）取本品，流動(dòng)相，成0.4mg/ml，得供試液供試液，流動(dòng)相，成4ug/ml，得對(duì)照液①②對(duì)照品，流動(dòng)相，成4ug/ml，得雜質(zhì)對(duì)照液

雜質(zhì)①②，外標(biāo)法。其他雜質(zhì)，主成分自身對(duì)照法。頭孢氨芐以青霉素鉀為原料，經(jīng)氧化、擴(kuò)環(huán)、裂解得7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（7-ADCA）①，再與側(cè)鏈a-苯甘氨酸②縮合而成。這兩種原料有可能成為主要雜質(zhì)。107最新課件（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體26最新課件

（三）雜質(zhì)吸收度的檢查例：青霉素鈉（鉀）

取本品，加水，成1.80mg/ml。A280nm[控制雜質(zhì)]不得大于0.10，A264nm

[控制青霉素鈉（鉀）的含量]應(yīng)為0.80-0.88。108最新課件（三）雜質(zhì)吸收度的檢查27最新課件（四）有機(jī)溶劑氨芐西林鈉：CH2Cl2GC頭孢哌酮：丙酮GC頭孢他啶：吡啶HPLC

109最新課件（四）有機(jī)溶劑氨芐西林鈉：CH2Cl2GC28最新課件四、含量測(cè)定青霉族和頭孢菌素族的含量測(cè)定大多采用理化測(cè)定方法中的HPLC法內(nèi)標(biāo)法＋校正因子外標(biāo)法特點(diǎn)

快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好一法多用（鑒別、檢查、含測(cè)）110最新課件四、含量測(cè)定青霉族和頭孢菌素族的含量測(cè)定大多采用理化測(cè)定方法哌拉西寧原料藥含量測(cè)定色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇–0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液–10％氫氧化四乙基銨溶液–水（400︰50︰3︰547）用磷酸調(diào)節(jié)pH值至5.5為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。111最新課件哌拉西寧原料藥含量測(cè)定30最新課件二氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素112最新課件二氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素3鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元鏈霉雙糖胺鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺鏈霉胍113最新課件鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺慶大霉素

糖

苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖

絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺114最新課件慶大霉素糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H

慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3115最新課件慶大霉素C復(fù)合物34最新課件一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心（一）堿性水溶性（二）溶解性（三）

UV（四）苷的水解與穩(wěn)定性鏈霉素pH5～7.5慶大霉素pH2～12

穩(wěn)定鏈霉素在230nm處有吸收，慶大霉素、奈替米星無116最新課件一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素3個(gè)慶大霉素坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)117最新課件坂口反應(yīng)N-甲基葡萄麥芽酚反應(yīng)36最新課件二、鑒別

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)硫酸慶大霉素鑒別(1)取本品約5mg，加水1ml溶解后，加0.1％茚三酮的水飽和正丁醇溶液1ml與吡啶

0.5ml，在水浴中加熱5分鐘，即顯紫藍(lán)色。

118最新課件二、鑒別茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)硫酸慶（二）Molisch反應(yīng)

具五碳或六碳糖的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸（或硫酸）作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛。這些產(chǎn)物遇α-萘酚或蒽酮呈色。紅紫色119最新課件（二）Molisch反應(yīng)具五碳或六碳糖的氨基糖蒽酮呈色原理：藍(lán)紫色阿米卡星鑒別(1)取本品約10mg，加水1ml溶解后，加0.1％蒽酮的硫酸溶液4ml，即顯藍(lán)紫色。

120最新課件蒽酮呈色原理：藍(lán)紫色阿米卡星鑒別39最新課件N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）H+121最新課件N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基

麥芽酚反應(yīng)（四）

鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排擴(kuò)環(huán)122最新課件麥芽酚反應(yīng)（四）鏈霉糖特有反應(yīng)H+分子重排擴(kuò)環(huán)紫紅麥芽酚123最新課件紫紅麥芽酚42最新課件鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（五）α-萘酚124最新課件鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（五）α-（六）反應(yīng)H+光譜法（八）慶大霉素?zé)oUV吸收色譜法（七）125最新課件（六）反應(yīng)H+光譜法（八）慶大霉素?zé)oUV吸收色譜法（七）44三、檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）方法TLC中的對(duì)照品法（BP）1.來源反應(yīng)中間體126最新課件三、檢查鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）對(duì)微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同工藝差別C組分比例不一致規(guī)定控制各組分的相對(duì)百分含量HPLCChPUSPBPJP慶大霉素C組分的測(cè)定（二）127最新課件對(duì)微生物的活性無明顯差異毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同C組λmax=330nm1.衍生化原理

1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物128最新課件λmax=330nm1.衍生化原理1-烷基硫代-2-烷RP－HPLC方法2.規(guī)定C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%計(jì)算3.峰面積歸一化法129最新課件RP－HPLC方法2.規(guī)定C1130最新課件49最新課件四、

含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法

本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。131最新課件四、含量測(cè)定鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法50最新離子交換色譜法離子對(duì)色譜法RP-HPLC法HPLC法132最新課件離子交換色譜法HPLC法51最新課件第四節(jié)四環(huán)素類抗生素(TetracyclineAntibiotics)133最新課件第四節(jié)四環(huán)素類抗生素(TetracyclineAnti苯并蒽環(huán)結(jié)構(gòu),C-4為α結(jié)構(gòu),是由放線菌產(chǎn)生的,天然有

一、天然四環(huán)素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)ABCD4R1R2R3R4四環(huán)素HOHCH3H53年得到土霉素OHOHCH3H50年得到金霉素HOHCH3Cl48年得到134最新課件苯并蒽環(huán)結(jié)構(gòu),C-4為α結(jié)構(gòu),是由放線菌產(chǎn)生的,天然有二、作用：廣譜抗生素，G+、G-、部分立克次體、病毒、原蟲等近年來四環(huán)素類抗生素新藥開發(fā)不理想三、作用機(jī)制:干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的生物合成與細(xì)菌中的Mn+形成金屬離子絡(luò)合物135最新課件二、作用：廣譜抗生素，G+、G-、部分立克近年來四環(huán)素類抗生四、理化性質(zhì)：黃色結(jié)晶性粉末1、酸堿兩性：Ar10-OH、=C3-OH為酸性

C4–N=為堿性?？扇芩釅A臨床用其堿，成HCl鹽136最新課件四、理化性質(zhì)：黃色結(jié)晶性粉末1、酸堿兩性：Ar10-OH、=2、穩(wěn)定性：PH=2脫水產(chǎn)物（C6-OH；C5α-H）1)在酸性條件下發(fā)生消除反應(yīng),失活137最新課件2、穩(wěn)定性：PH=2脫水產(chǎn)物（C6-OH；C5α-H）1)在PH=2-6差向異枸化（C4-N；由α→β）難易：土（氫鍵）＞四＞金（位阻）2)pH2-6,C-4二甲胺基易發(fā)生差向異構(gòu)化,失活138最新課件PH=2-6差向異枸化（C4-N；由α→βPH＞7成內(nèi)酯（C環(huán)，C6-OH；C11=O）3)OH-下C環(huán)開裂,失活139最新課件PH＞7成內(nèi)酯（C環(huán)，C6-OH；C11=O）3)OH-五、臨床用缺點(diǎn)：耐藥性嚴(yán)重吸收不好，血藥濃度低影響骨骼生長(zhǎng)孕婦及兒童為何不可用四環(huán)素：牙齒變黃、骨骼生長(zhǎng)抑制4)