診斷酶學(xué)授課用課件

診斷酶學(xué)診斷酶學(xué)1主要內(nèi)容六、工具酶及其臨床應(yīng)用一、酶的一般特征二、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)三、酶活性濃度測(cè)定技術(shù)四、酶的免疫化學(xué)測(cè)定五、同工酶和亞型的測(cè)定七、血清酶八、臨床常用血清酶及其同工酶主要內(nèi)容六、工具酶及其臨床應(yīng)用一、酶的一般特征2一、基本概念

第一節(jié)酶的一般特征

三、酶的命名分類及編號(hào)

二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用

返回章一、基本概念第一節(jié)酶的一般特征三、酶的31.酶、核酶。2.酶的催化特性：極高的催化效率、高度的特異性、催化作用的可調(diào)節(jié)性。3.酶促反應(yīng)：酶所催化的反應(yīng)。

酶活性：酶催化反應(yīng)的能力。

酶活性單位：在一定條件下使酶促反達(dá)到某一速度時(shí)所需要的酶量。底物(S)：酶所作用的物質(zhì)。

產(chǎn)物(P)：酶促反應(yīng)的生成物。酶的激活劑:

加速酶促反應(yīng)的物質(zhì)。酶的抑制劑:

減慢或終止酶促反應(yīng)的物質(zhì)。

一、基本概念

返回節(jié)1.酶、核酶。一、基本概念返回節(jié)4二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用單純酶和結(jié)合酶單純酶：只含多肽鏈，是單純蛋白質(zhì)。

結(jié)合酶：由酶蛋白和輔因子組成。兩者結(jié)合后形成的復(fù)合物稱為全酶。與酶蛋白結(jié)合疏松的稱為輔酶。與酶蛋白結(jié)合牢固的稱為輔基。

酶的活性中心酶與底物結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物發(fā)生在酶表面的一個(gè)特定區(qū)域。

酶的催化作用機(jī)制誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)。返回節(jié)二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用單純酶和結(jié)合酶返回節(jié)5臨床應(yīng)用酶EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫1.1.1.27乳酸脫氫酶LD、LDH2.7.3.2肌酸激酶CK、CPK1.1.1.37蘋果酸脫氫酶MD、MDH3.1.1.3脂肪酶LPS1.1.1.41異檸檬酸脫氫酶ICD、ICDH3.1.1.8膽堿酯酶CHE1.1.1.496-磷酸葡萄糖脫氫酶G6PDH3.1.3.1堿性磷酸酶ALP、AKP1.4.1.3谷氨酸脫氫酶GLD、GLDH3.1.3.2酸性磷酸酶ACP1.4.3.4單氨氧化酶MOD3.1.3.55'-核苷酸酶5'-NT2.1.3.3鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶OCT3.2.1.1α-淀粉酶AMY、AMS2.3.2.2γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶γ-GT、GGT3.2.1.30β-N-乙酰(基)-D氨基葡萄糖苷酶NAG2.4.1.1糖原磷酸化酶GP3.2.1.51α-L-巖藻糖苷酶α-FU、AFU2.5.1.18谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST3.4.23.1亮氨酸氨基肽酶LAP2.6.1.1門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、GOT4.1.2.13果糖二磷酸醛縮酶ALD2.6.1.2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、GPT三、酶的命名、分類及編號(hào)返回節(jié)臨床應(yīng)用酶EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫16一、米－曼氏方程酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

三、酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線四、影響酶促反應(yīng)的因素二、Km與Vmax返回章一、米－曼氏方程酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)三、酶促反應(yīng)進(jìn)程7如果能準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)的初速度（v），采用標(biāo)用來(lái)計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最A(yù)MY總活性測(cè)定：化學(xué)法、酶偶聯(lián)法。Regan、NagaoALP等。男：12～15歲750U/L，LD-P法：以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向PL）的逆向反應(yīng)（稱LD-P法）。LD、LAP和ALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、反應(yīng)孵育時(shí)酶在細(xì)胞內(nèi)定位和存在形式LD-L法：以乳酸為底物（反應(yīng)方向LP）的順向反應(yīng)（稱LD-L法）。傷時(shí)ASTs顯著升高。AMI后2～4h開始升高，10～24h達(dá)峰值，3～4天恢復(fù)正PL，即LD-P法正常和病理狀況時(shí)瓊脂糖凝膠電泳分析血清CK同工酶可能出現(xiàn)的酶帶基于NADH或NADPH的反應(yīng)原理：LD、α-HBD等原、ChE、Cp及LPL等。物沉淀的原理，減去法可算出同工酶的活性。ChE活性在50％～70％為輕度中

Michaelis和Menten提出的酶作用的中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō):

一、米－曼氏方程E+SK1K2K3返回節(jié)1913年提出了著名的酶促反應(yīng)速度與底物濃度關(guān)系的方程式，即米-曼氏方程(Michaelis-Mentenequation):E+PES如果能準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)的初速度（v），采用標(biāo)

Michaelis8二、Km與Vmax

Km值：等于酶促反應(yīng)的初速率為最大速率Vmax一半時(shí)的底物濃度，即V＝?Vmax時(shí)，則Km＝[S]。Km

在臨床上的應(yīng)用：反映酶與底物的親合力，且與親合力成反比。用來(lái)計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的百分率。根據(jù)Km值選擇酶的最適底物。確定工具酶用量。確定代謝酶系中的限速反應(yīng)和作為鑒別酶的依據(jù)。

Vmax：酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，代表了在一定酶量下的最大反應(yīng)速率。返回節(jié)二、Km與VmaxKm值：等于酶促反應(yīng)的初速率為9酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線(S為底物，P為產(chǎn)物)酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線(S為底物，P為產(chǎn)物)10

三、酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線

如將酶反應(yīng)過(guò)程中測(cè)得的產(chǎn)物[P]或底物[S]變化量對(duì)時(shí)間作圖，可得酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線。圖中產(chǎn)物[P]或底物[S]變化曲線的斜率就代表酶促反應(yīng)的速率。延滯期線性反應(yīng)期底物耗盡期——必須根據(jù)線性反應(yīng)期的反應(yīng)速率才能準(zhǔn)確計(jì)算出酶活性濃度。返回節(jié)三、酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線如將酶反應(yīng)過(guò)程中測(cè)得11四、影響酶促反應(yīng)的因素

底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)的影響（1）當(dāng)[S]<<Km時(shí)，反應(yīng)速率與底物濃度[S]成正比，呈一級(jí)反應(yīng)，

V＝Vmax[S]/Km＝K[S]

用工具酶來(lái)測(cè)定各種代謝物濃度的方法學(xué)基礎(chǔ)。（2）當(dāng)[S]>>Km時(shí)，反應(yīng)速率與底物濃度[S]無(wú)關(guān)，

V＝Vmax＝K[E]

稱為零級(jí)反應(yīng)，反應(yīng)速率與酶濃度[E]成正比。酶學(xué)測(cè)定時(shí)一般底物濃度可選擇為Km的10～20倍。

返回節(jié)四、影響酶促反應(yīng)的因素底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)的影響返回節(jié)12常見酶溫度轉(zhuǎn)化系數(shù)25℃30℃37℃CK0.641.001.56LD0.751.001.44ALT0.761.001.38AST0.731.001.52ALP0.781.001.30GGT0.731.001.31CHE0.811.001.26HBDH0.851.001.10常見酶溫度轉(zhuǎn)化系數(shù)25℃30℃37℃CK0.641.00113

酶活性濃度測(cè)定就是要使酶促反應(yīng)的初速度（v）達(dá)到最大速度Vmax，即在過(guò)量底物存在下的零級(jí)反應(yīng)期的速度，此時(shí)反應(yīng)速度與酶濃度[E]之間存在線性關(guān)系。

第二節(jié)酶活性濃度測(cè)定技術(shù)

一、酶活性濃度測(cè)定方法二、酶偶聯(lián)法三、血清酶活性濃度測(cè)定條件的選擇四、酶活性濃度的單位五、系數(shù)K值的計(jì)算與應(yīng)用六、臨床酶學(xué)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化返回章酶活性濃度測(cè)定就是要使酶促反應(yīng)的初速度（v）141.按反應(yīng)時(shí)間分類:

定時(shí)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法2.按檢測(cè)方法分類：量氣法、分光光度法、熒光法其它方法（放射性核素法、離子選擇電極法，旋光法、極譜法、HPLC或生物發(fā)光法等）。一、酶活性濃度測(cè)定方法返回節(jié)1.按反應(yīng)時(shí)間分類:一、酶活性濃度測(cè)定方法返回節(jié)15按檢測(cè)方法分類——底物或產(chǎn)物濃度的檢測(cè)

測(cè)定項(xiàng)目方法原理測(cè)定手段膽堿酯酶氯化乙酰膽堿做底物產(chǎn)生乙酸根電位滴定法脂肪酶三油酸甘油酯懸乳液做底物，生成油酸甘油一酯，濁度下降濁度法淀粉酶淀粉做底物，一定時(shí)間后，剩余的淀粉不足以使碘呈蘭色時(shí)間滴定法丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶賴氏法比色法丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶IFCC推薦法分光光度法丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶固定化谷氨酸氧化酶膜生成過(guò)氧化氫，利用過(guò)氧化氫電極生物傳感器N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶4-甲基傘形酮N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷做底物熒光葡萄糖6磷酸脫氫酶NADPH在365nm激發(fā)下產(chǎn)生熒光熒光返回節(jié)按檢測(cè)方法分類——底物或產(chǎn)物濃度的檢測(cè)測(cè)定項(xiàng)目方法原16定時(shí)法（固定時(shí)間法）

測(cè)定酶與底物作用反應(yīng)一定時(shí)間后底物或產(chǎn)物變化的總量，計(jì)算酶促反應(yīng)平均速度。優(yōu)點(diǎn)：比較簡(jiǎn)單，最后測(cè)定時(shí)因酶促反應(yīng)已被終止，故所用儀器無(wú)需恒溫裝置，顯色劑的選擇也可不考慮對(duì)酶活性的影響。缺點(diǎn)：無(wú)法知道在整個(gè)酶促反應(yīng)進(jìn)程中是否都處于線性期。

利用該法測(cè)定酶活性濃度，必須保證酶和底物在所選定的溫度下作用時(shí)間要非常精確，否則會(huì)引起較大誤差。返回節(jié)定時(shí)法（固定時(shí)間法）返回節(jié)17連續(xù)監(jiān)測(cè)法

又稱速率法或動(dòng)力學(xué)法，指在酶促反應(yīng)過(guò)程中用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物的濃度隨時(shí)間的變化量，求出酶反應(yīng)初速度，間接計(jì)算酶活性濃度的方法。優(yōu)點(diǎn)：無(wú)須終止酶促反應(yīng)，不需添加其它成色試劑，就反應(yīng)物變化的多點(diǎn)測(cè)定結(jié)果連接成線，觀察到整個(gè)反應(yīng)過(guò)程，選擇線性反應(yīng)期來(lái)計(jì)算酶活性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

要求檢測(cè)儀器具有恒溫裝置及自動(dòng)檢測(cè)功能，自動(dòng)生化分析儀都能達(dá)到這些要求。返回節(jié)連續(xù)監(jiān)測(cè)法返回節(jié)18連續(xù)監(jiān)測(cè)法的種類

直接法

是指待測(cè)酶酶促反應(yīng)的底物或產(chǎn)物有特征性的理化性質(zhì)，然后通過(guò)特殊的儀器直接檢測(cè)。基于NADH或NADPH的反應(yīng)原理：LD、α-HBD等基于人工合成色素原底物：ALP、GGT、AMS等基于氧的消耗：各種氧化酶

間接法

是指酶促反應(yīng)底物和產(chǎn)物之間沒有特征性的理化性質(zhì)，需通過(guò)另一個(gè)化學(xué)反應(yīng)或生化反應(yīng)，將底物或產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為有明顯特征理化性質(zhì)的另一個(gè)化合物。用直接法來(lái)測(cè)定的酶類非常有限，很多情況下不得不使用間接法?；瘜W(xué)法：如ChE的丁酰硫代膽堿測(cè)定法。酶偶聯(lián)法

返回節(jié)連續(xù)監(jiān)測(cè)法的種類直接法返回節(jié)19用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定同一酶，條件固定時(shí)，從理論上來(lái)講V、v和L均為固定值，為常數(shù)，則將公式簡(jiǎn)化為如LD活性濃度，已知NADH的為103·cm-1.mol-1，血清量為50l，底物液為1ml，比色杯光徑為1cm，則

1061031=3376五、系數(shù)K值的計(jì)算與應(yīng)用返回節(jié)用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定同一酶，條件固定時(shí)，從理論20連續(xù)監(jiān)測(cè)法中常數(shù)K值的設(shè)置測(cè)定酶的判斷值或參考范圍上限，保證測(cè)定的可靠，所以轉(zhuǎn)氨酶的常數(shù)K一般在3000左右，不少人寧愿在1500

左右。應(yīng)考慮到測(cè)定時(shí)間，測(cè)定時(shí)間短到分，此時(shí)嗓音對(duì)每分鐘△A誤差將是，反之，測(cè)定時(shí)間延長(zhǎng)到2分鐘，誤差也小一半。即測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)，則K值可以設(shè)置大一些，如測(cè)定時(shí)間只有分鐘，K值一般不超過(guò)4000。改變K值最方便的途徑就是改變標(biāo)本稀釋度，稀釋倍數(shù)愈大，K值愈大。返回節(jié)連續(xù)監(jiān)測(cè)法中常數(shù)K值的設(shè)置返回節(jié)21

第七節(jié)工具酶及其臨床應(yīng)用

一、工具酶二、代謝物的酶法測(cè)定返回章第七節(jié)工具酶及其臨床應(yīng)用一、工具酶二、代22概念作為試劑用于測(cè)定化合物濃度或酶活性的酶稱為工具酶。工具酶參與的指示反應(yīng)

偶聯(lián)H2O2工具酶及指示反應(yīng)：如常用的Trinder反應(yīng)。

NAD(P)+或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應(yīng)：利用氧化-還原酶反應(yīng)使其連接到NAD(P)-NAD(P)H的正/逆反應(yīng)后，直接測(cè)定NAD(P)H的變化量。一、工具酶返回節(jié)概念一、工具酶返回節(jié)23工具酶的其他應(yīng)用酶循環(huán)法固相酶酶循環(huán)法測(cè)定膽汁酸返回節(jié)工具酶的其他應(yīng)用酶循環(huán)法測(cè)定膽汁酸返回節(jié)24多酶體系中酶促偶聯(lián)反應(yīng)分析多酶體系中酶促偶聯(lián)反應(yīng)分析25二、代謝物的酶法測(cè)定終點(diǎn)法概念：在代謝物酶促反應(yīng)中，隨著時(shí)間的延續(xù)，待測(cè)物濃度逐漸減少而產(chǎn)物逐漸增多，一定時(shí)間后待測(cè)物全部轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，反應(yīng)趨于平衡，測(cè)定反應(yīng)完全后待測(cè)物或產(chǎn)物變化的總量，即終點(diǎn)法（又稱平衡法）。測(cè)定的基本條件：待測(cè)物濃度[S]應(yīng)遠(yuǎn)小于其米氏常數(shù)Km，此時(shí)任何時(shí)刻的反應(yīng)速度v=V[S]/Km，呈一級(jí)反應(yīng)。反應(yīng)配方中所用酶量（V）應(yīng)足夠大，而Km應(yīng)小，以保證有較快的反應(yīng)速度完成測(cè)定。返回節(jié)二、代謝物的酶法測(cè)定終點(diǎn)法返回節(jié)26直接法

待測(cè)物與產(chǎn)物在理化性質(zhì)上有可直接進(jìn)行檢測(cè)的差異，這種是最簡(jiǎn)單的代謝物濃度測(cè)定方法。

如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在293nm有特異的吸收峰，膽紅素在膽紅素氧化酶作用下生成膽綠素造成450nm處的吸光度下降等。體內(nèi)還有很多代謝物可以直接測(cè)定，關(guān)鍵是需要相對(duì)應(yīng)的酶。

代謝物的酶法測(cè)定—終點(diǎn)法的類型返回節(jié)直接法代謝物的酶法測(cè)定—終點(diǎn)法的類型返回節(jié)27酶偶聯(lián)法

與酶活性測(cè)定一樣，直接法測(cè)定的項(xiàng)目是有限的。每種代謝物可以使用不同的酶而建立多種檢測(cè)方法。

如甘油三酯、肌酐都有多種酶試劑法。指示反應(yīng)主要分兩大類：NAD（P）H和過(guò)氧化物酶（POD）系統(tǒng)。代謝物的酶法測(cè)定—終點(diǎn)法的類型返回節(jié)酶偶聯(lián)法代謝物的酶法測(cè)定—終點(diǎn)法的類型返回節(jié)28

Ex為待測(cè)酶，A為底物，B為中間產(chǎn)物。

A、B二物質(zhì)的變化無(wú)法直接監(jiān)測(cè)，此時(shí)可外加第二個(gè)酶Ei(為指示酶)，其底物為B，反應(yīng)產(chǎn)物為P可直接測(cè)定。二、酶偶聯(lián)法返回節(jié)

酶偶聯(lián)反應(yīng)

最簡(jiǎn)單的模式為：Ex為待測(cè)酶，A為底物，B為中間產(chǎn)物。A、B二物質(zhì)29輔助反應(yīng)如果一些酶促反應(yīng)找不到合適的指示酶與其直接偶聯(lián)，此時(shí)還可在始發(fā)反應(yīng)和指示反應(yīng)之間加入另一種酶，將二者連在一起，此反應(yīng)稱為輔助反應(yīng)。模式為：返回節(jié)

其中，B、C均為中間產(chǎn)物，Ea、Ei都為工具酶。最后一個(gè)酶稱指示酶Ei，其他外加的酶都為輔助酶（Ea）。返回節(jié)30酶偶聯(lián)反應(yīng)原理

(1)

當(dāng)用酶偶聯(lián)法測(cè)定時(shí)，在偶聯(lián)反應(yīng)中存在幾個(gè)時(shí)期：

預(yù)孵育期、延滯期、恒態(tài)期、非恒態(tài)期。

(2)

延滯期是酶偶聯(lián)反應(yīng)與一般酶反應(yīng)的一個(gè)重要區(qū)別。從酶反應(yīng)開始至穩(wěn)態(tài)期間，指示酶反應(yīng)較慢且不穩(wěn)定，稱為延滯期。在這期間指示酶反應(yīng)速度不能代表測(cè)定酶量多少。

(3)

設(shè)計(jì)和選擇酶偶聯(lián)測(cè)定方法時(shí)，延滯期越短越好，測(cè)定時(shí)間要避開此期。返回節(jié)酶偶聯(lián)反應(yīng)原理返回節(jié)31

對(duì)酶偶聯(lián)反應(yīng)的要求

指示酶反應(yīng)必須是一級(jí)反應(yīng)酶反應(yīng)速度與指示酶底物濃度相關(guān)。工具酶催化的最大反應(yīng)速度必須遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于測(cè)定酶，其所催化的反應(yīng)必須在中間產(chǎn)物濃度很低的條件下進(jìn)行，并且將此很快轉(zhuǎn)變?yōu)樽罱K產(chǎn)物，反應(yīng)體系中不應(yīng)有中間產(chǎn)物堆積，否則導(dǎo)致誤差。

工具酶作為試劑用于測(cè)定化合物濃度或酶活性的酶稱為工具酶。返回節(jié)對(duì)酶偶聯(lián)反應(yīng)的要求返回節(jié)32酶偶聯(lián)法測(cè)定ALT的吸光度變化圖

返回節(jié)酶偶聯(lián)法測(cè)定ALT的吸光度變化圖返回節(jié)33動(dòng)力學(xué)法概念：根據(jù)米氏方程，當(dāng)[S]<<Km，一般，最好，[S]+Km≈Km，此時(shí)呈一級(jí)反應(yīng)，反應(yīng)初速度v=k[S]。如果能準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)的初速度（v），采用標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)照法即可求得待測(cè)物的濃度。實(shí)際操作中，測(cè)定兩個(gè)固定時(shí)間的吸光度差值，只要此期間待測(cè)物消耗<5%，就可以采用標(biāo)準(zhǔn)濃度對(duì)照法計(jì)算樣本濃度，所以動(dòng)力學(xué)法有時(shí)又稱為定時(shí)法。

返回節(jié)動(dòng)力學(xué)法返回節(jié)34與終點(diǎn)法相比，動(dòng)態(tài)法測(cè)定中待測(cè)物無(wú)需完全轉(zhuǎn)化，故工具酶的用量較少，為了保證有足夠的測(cè)定線性，所用酶的Km應(yīng)足夠大。兩者對(duì)于測(cè)定儀器的要求不同。終點(diǎn)法測(cè)定對(duì)于儀器的電噪聲和溫控要求不嚴(yán)，而動(dòng)態(tài)法要求儀器的電噪聲小，吸光度應(yīng)讀準(zhǔn)到，溫度變化<0.1%。產(chǎn)物的堆積和樣品色原對(duì)動(dòng)態(tài)法影響較小，而對(duì)終點(diǎn)測(cè)定法影響較大。如碰到乳糜或溶血，在做終點(diǎn)法測(cè)定時(shí)，有時(shí)需設(shè)樣本空白。終點(diǎn)法與動(dòng)力學(xué)法的主要區(qū)別返回節(jié)與終點(diǎn)法相比，動(dòng)態(tài)法測(cè)定中待測(cè)物無(wú)需完全轉(zhuǎn)化，故工具酶終點(diǎn)法35

第六節(jié)同工酶及亞型的測(cè)定

一、同工酶的概念及分類二、同工酶的分析方法返回章第六節(jié)同工酶及亞型的測(cè)定一、同工酶的概念及分36概念：同工酶是催化相同的化學(xué)反應(yīng)，而酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)不同的一組酶。亞型指基因在編碼過(guò)程中由于翻譯后修飾的差異形成的多種形式的一類酶。往往在基因編碼產(chǎn)物從細(xì)胞內(nèi)釋入血漿時(shí)因肽酶作用降解而形成。分類：簡(jiǎn)單分類——原級(jí)同工酶和次級(jí)同工酶?；蚍诸悺獑位驔Q定的同工酶、復(fù)等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾的同工酶等四類。

一、同工酶的概念及分類返回節(jié)概念：一、同工酶的概念及分類返回節(jié)37二、同工酶的分析方法方法同工酶(或亞型)的性質(zhì)差異同工酶、亞型電泳法電荷不同所有同工酶、亞型層析法(離子交換層析、親和層析)電荷不同CK，LD，ALP免疫分析法免疫抑制法特異性抗體反應(yīng)性不同CK、LD、ACP免疫化學(xué)測(cè)定法特異性抗體反應(yīng)性不同CK、LD、ACP、ALP、AMY動(dòng)力學(xué)分析法底物特異性分析法底物Km、親和力不同ACP、CK、LD（-羥丁酸）抑制劑分析法對(duì)小分子量的抑制劑的特異性抑制不同LD（草酸）、ACP（L-酒石酸）、ALP（L-苯丙氨酸）

pH分析法最適pH不同AST熱失活分析法熱穩(wěn)定性不同ALP蛋白酶水解法對(duì)蛋白水解酶敏感度不同LD、AST返回節(jié)二、同工酶的分析方法方法同工酶(或亞型)的性質(zhì)差異同38電泳法

電泳材料：醋酸纖維素薄膜、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、等電聚焦及毛細(xì)管電泳等。

區(qū)帶顯色：各同工酶區(qū)帶進(jìn)行酶促反應(yīng)顯色后，掃描定量，而顏色的深淺與同工酶活性成正比。

巨分子酶產(chǎn)生的原因：酶與免疫球蛋白形成復(fù)合物，如CK-BB-IgG。

酶與其他蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，如LD-β-脂蛋白。

酶亞基或分子之間形成聚合物，如CK-Mt聚合物、LD亞基自身聚合等。返回節(jié)電泳法電泳材料：醋酸纖維素薄膜、瓊脂糖凝膠、聚丙烯39層析法：利用同工酶分子量大小、所帶電荷多少的不同，以及受某些離子交換劑吸附的強(qiáng)弱程度不同來(lái)進(jìn)行分離鑒定的方法。柱層析，如離子交換層析和親和層析等。因操作方法費(fèi)時(shí)繁瑣，一般不用于臨床同工酶常規(guī)檢測(cè)，而主要用于同工酶的分離、制備、純化。層析法返回節(jié)層析法：利用同工酶分子量大小、所帶電荷多少的不層析法40

免疫抑制法根據(jù)同工酶的某一種亞基與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，酶活性受到抑制，可算出該型同工酶的活性。如CK-MB活性測(cè)定。免疫沉淀法該法利用同工酶抗體形成抗原抗體復(fù)合物沉淀的原理，減去法可算出同工酶的活性。其他免疫學(xué)方法測(cè)定酶蛋白利用酶是蛋白類抗原但含量極微的特點(diǎn)，可應(yīng)用免疫電泳、RIA、EIA和

CLIA等方法。這類方法的最大特點(diǎn)就是與酶活性無(wú)關(guān)，測(cè)定酶的質(zhì)量。免疫分析法返回節(jié)免疫抑制法根據(jù)同工酶的某一種亞基與相應(yīng)的抗體免疫分析法41底物特異性分析法利用不同的同工酶對(duì)底物的親和力的差異即可進(jìn)行分析。抑制劑分析法利用同工酶之間結(jié)構(gòu)的不同而對(duì)同一種抑制劑有不同的親和性和反應(yīng)性來(lái)進(jìn)行分析。pH分析法利用不同的同工酶可有不同的最適pH進(jìn)行分析。熱失活分析法利用不同同工酶的耐熱性不同來(lái)進(jìn)行分析與鑒定。動(dòng)力學(xué)分析法返回節(jié)底物特異性分析法利用不同的同工酶對(duì)底物的親和力動(dòng)力學(xué)分析42一、血清酶的來(lái)源

第七節(jié)血清酶

三、血清酶的生理變異四、血清酶變化的病理機(jī)制二、血清酶的去路返回章一、血清酶的來(lái)源第七節(jié)血清酶三、血清酶的43血漿特異酶為血漿蛋白的固有成分，在血漿中發(fā)揮特定的催化作用。多數(shù)由肝臟合成并以酶原形式分泌入，在一定條件下被激活起作用。與凝血有關(guān)的酶或酶原、ChE、Cp及LPL等。非血漿特異酶外分泌酶：由外分泌腺合成并分泌進(jìn)入血漿的酶,包括P-AMY、P-LPS、前列腺ACP等。

細(xì)胞內(nèi)酶：存在于細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行物質(zhì)代謝的酶，隨著細(xì)胞的不斷更新或破壞可少量釋入血液。當(dāng)其大量出現(xiàn)于血清中時(shí)，提示酶的來(lái)源組織細(xì)胞受損，最常用于臨床診斷。一、血清酶的來(lái)源返回節(jié)血漿特異酶一、血清酶的來(lái)源返回節(jié)44二、血清酶的去路

血清酶的半壽期(T1/2)

定義：酶失活至原來(lái)一半時(shí)所需時(shí)間。

半壽期代表酶從血中清除的快慢。半壽期長(zhǎng)的酶，在血清中持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。

血清酶的失活和排泄

酶的清除主要是在血管內(nèi)失活或分解。

血清酶經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)物（多肽或氨基酸）可經(jīng)小腸粘膜排至腸腔，再?gòu)氐追纸獬砂被岷蟊恢匚?，其中大部分可被組織利用，不能利用的氨基酸則隨尿排出體外。返回節(jié)二、血清酶的去路血清酶的半壽期(T1/2)返回45

方法條件的選擇盡可能采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法；減少步驟,

化學(xué)試劑有一定純度,雙蒸水,使用雙試劑。測(cè)定參數(shù)的設(shè)置方法類型、波長(zhǎng)、樣品量與試劑量、稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、反應(yīng)孵育時(shí)間、延遲,監(jiān)測(cè)時(shí)間、底物耗盡限額、線性范圍及計(jì)算因子F值。標(biāo)本的采集、運(yùn)輸與保存

影響因素：溶血、抗凝劑、溫度等。干擾因素的控制反應(yīng)干擾。污染。底物自行發(fā)生反應(yīng)。三、血清酶活性濃度測(cè)定條件的選擇返回節(jié)方法條件的選擇盡可能采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法；減少步驟,三、血清46不同貯存溫度時(shí)體液酶的穩(wěn)定性

酶室溫（25℃）冷藏（0～4℃）冰凍（-25℃）LD1周1～3d§1～3d§-GT2d1周1月ALD2d2d不穩(wěn)定*ALT2d5d不穩(wěn)定*AST3d1周1月CK1周1周1月ChE1周1周1周ALP2～3d2～3d1月ACP4h※3d#3d#5’-NT24h1周3月AMY1月7月2月LPS1周3周3周LAP1周1周1周*酶不耐融化；§與同工酶類型有關(guān)；※標(biāo)本未酸化；#標(biāo)本加枸櫞酸或醋酸至pH5不同貯存溫度時(shí)體液酶的穩(wěn)定性酶室溫（25℃）冷藏（47臨床常用血清酶的測(cè)定方法與參考范圍（37℃）

*國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC）參考方法；

#實(shí)際為擬膽堿酯酶（PChE）酶方法參考范圍ALT連續(xù)監(jiān)測(cè)法底物中含磷酸吡哆醛底物中不含磷酸吡哆醛男：≤45U/L；女：≤34U/L*5～40U/LAST連續(xù)監(jiān)測(cè)法底物中含磷酸吡哆醛底物中不含磷酸吡哆醛男：≤35U/L；女：≤33U/L*8～40U/LALP連續(xù)監(jiān)測(cè)法（磷酸對(duì)硝基苯酚法）1～12歲；500U/L；男：12～15歲750U/L，25歲40～150U/L；女：15歲40～150U/LACP比色法（磷酸麝香草酚法）0.5～1.9U/LLD連續(xù)監(jiān)測(cè)法LP，即LD-L法

PL，即LD-P法≤252U/L*200～380U/LCK連續(xù)監(jiān)測(cè)法（酶偶聯(lián)法）男：≤169U/L；女：≤143U/L*-GT連續(xù)監(jiān)測(cè)法（L--谷氨酰-3-羧基-對(duì)硝基苯胺法）連續(xù)監(jiān)測(cè)法（L--谷氨酰-對(duì)硝基苯胺法）男：≤55U/L；女：≤38U/L*

男：≤50U/L；女：≤30U/LAMY連續(xù)監(jiān)測(cè)法[對(duì)-硝基苯麥芽庚糖苷（4NP-G7）法]≤220U/LLPS固定時(shí)間法（乳化液比濁法）≤110U/LChE#連續(xù)監(jiān)測(cè)法（丁酰硫代膽堿法）5000～12000U/L返回節(jié)臨床常用血清酶的測(cè)定方法與參考范圍（37℃）*國(guó)48三、血清酶的生理變異

1.性別少數(shù)酶如CK、ALP及GGT等有性別差異，與血清酶的來(lái)源組織有關(guān)。2.年齡血清酶的活性隨年齡而變化，ALP和GGT到老年時(shí)可有輕度升高。年齡差異也見于同工酶。3.進(jìn)食過(guò)量飲酒可使血清GGT明顯升高。4.運(yùn)動(dòng)多種血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT

等，其升高的幅度與運(yùn)動(dòng)量、持續(xù)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)頻率及骨骼肌所含的酶量有關(guān)。5.妊娠胎盤組織可分泌一些酶進(jìn)入母體血液，如耐熱ALP、

LD、LAP和ALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升高。6.其他一些酶活性與體重、身高的增長(zhǎng)、體位改變、晝夜變化及家庭因素有關(guān)。返回節(jié)三、血清酶的生理變異1.性別少數(shù)酶如CK、ALP及49

酶合成異常合成減少合成增多

酶釋放增加:

大多數(shù)血清酶增高的主要原因細(xì)胞內(nèi)外酶濃度差異酶蛋白分子量的大小酶的組織分布酶在細(xì)胞內(nèi)定位和存在形式

酶的清除異常不同疾病和不同的酶從血中清除時(shí)間和機(jī)制不同。如AMY和ALP經(jīng)腎臟或膽道排出異常而致血清酶升高。返回節(jié)四、血清酶變化的病理機(jī)制酶合成異常返回節(jié)四、血清酶變化的病理機(jī)制50一、血清酶的來(lái)源

第七節(jié)血清酶

三、血清酶的生理變異四、血清酶變化的病理機(jī)制二、血清酶的去路返回章一、血清酶的來(lái)源第七節(jié)血清酶三、血清酶的51血漿特異酶為血漿蛋白的固有成分，在血漿中發(fā)揮特定的催化作用。多數(shù)由肝臟合成并以酶原形式分泌入，在一定條件下被激活起作用。與凝血有關(guān)的酶或酶原、ChE、Cp及LPL等。非血漿特異酶外分泌酶：由外分泌腺合成并分泌進(jìn)入血漿的酶,包括P-AMY、P-LPS、前列腺ACP等。

細(xì)胞內(nèi)酶：存在于細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行物質(zhì)代謝的酶，隨著細(xì)胞的不斷更新或破壞可少量釋入血液。當(dāng)其大量出現(xiàn)于血清中時(shí)，提示酶的來(lái)源組織細(xì)胞受損，最常用于臨床診斷。一、血清酶的來(lái)源返回節(jié)血漿特異酶一、血清酶的來(lái)源返回節(jié)52二、血清酶的去路

血清酶的半壽期(T1/2)

定義：酶失活至原來(lái)一半時(shí)所需時(shí)間。

半壽期代表酶從血中清除的快慢。半壽期長(zhǎng)的酶，在血清中持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。

血清酶的失活和排泄

酶的清除主要是在血管內(nèi)失活或分解。

血清酶經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)物（多肽或氨基酸）可經(jīng)小腸粘膜排至腸腔，再?gòu)氐追纸獬砂被岷蟊恢匚眨渲写蟛糠挚杀唤M織利用，不能利用的氨基酸則隨尿排出體外。返回節(jié)二、血清酶的去路血清酶的半壽期(T1/2)返回53

方法條件的選擇盡可能采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法；減少步驟,

化學(xué)試劑有一定純度,雙蒸水,使用雙試劑。測(cè)定參數(shù)的設(shè)置方法類型、波長(zhǎng)、樣品量與試劑量、稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、反應(yīng)孵育時(shí)間、延遲,監(jiān)測(cè)時(shí)間、底物耗盡限額、線性范圍及計(jì)算因子F值。標(biāo)本的采集、運(yùn)輸與保存

影響因素：溶血、抗凝劑、溫度等。干擾因素的控制反應(yīng)干擾。污染。底物自行發(fā)生反應(yīng)。三、血清酶活性濃度測(cè)定條件的選擇返回節(jié)方法條件的選擇盡可能采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法；減少步驟,三、血清54不同貯存溫度時(shí)體液酶的穩(wěn)定性

酶室溫（25℃）冷藏（0～4℃）冰凍（-25℃）LD1周1～3d§1～3d§-GT2d1周1月ALD2d2d不穩(wěn)定*ALT2d5d不穩(wěn)定*AST3d1周1月CK1周1周1月ChE1周1周1周ALP2～3d2～3d1月ACP4h※3d#3d#5’-NT24h1周3月AMY1月7月2月LPS1周3周3周LAP1周1周1周*酶不耐融化；§與同工酶類型有關(guān)；※標(biāo)本未酸化；#標(biāo)本加枸櫞酸或醋酸至pH5不同貯存溫度時(shí)體液酶的穩(wěn)定性酶室溫（25℃）冷藏（55臨床常用血清酶的測(cè)定方法與參考范圍（37℃）

*國(guó)際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC）參考方法；

#實(shí)際為擬膽堿酯酶（PChE）酶方法參考范圍ALT連續(xù)監(jiān)測(cè)法底物中含磷酸吡哆醛底物中不含磷酸吡哆醛男：≤45U/L；女：≤34U/L*5～40U/LAST連續(xù)監(jiān)測(cè)法底物中含磷酸吡哆醛底物中不含磷酸吡哆醛男：≤35U/L；女：≤33U/L*8～40U/LALP連續(xù)監(jiān)測(cè)法（磷酸對(duì)硝基苯酚法）1～12歲；500U/L；男：12～15歲750U/L，25歲40～150U/L；女：15歲40～150U/LACP比色法（磷酸麝香草酚法）0.5～1.9U/LLD連續(xù)監(jiān)測(cè)法LP，即LD-L法

PL，即LD-P法≤252U/L*200～380U/LCK連續(xù)監(jiān)測(cè)法（酶偶聯(lián)法）男：≤169U/L；女：≤143U/L*-GT連續(xù)監(jiān)測(cè)法（L--谷氨酰-3-羧基-對(duì)硝基苯胺法）連續(xù)監(jiān)測(cè)法（L--谷氨酰-對(duì)硝基苯胺法）男：≤55U/L；女：≤38U/L*

男：≤50U/L；女：≤30U/LAMY連續(xù)監(jiān)測(cè)法[對(duì)-硝基苯麥芽庚糖苷（4NP-G7）法]≤220U/LLPS固定時(shí)間法（乳化液比濁法）≤110U/LChE#連續(xù)監(jiān)測(cè)法（丁酰硫代膽堿法）5000～12000U/L返回節(jié)臨床常用血清酶的測(cè)定方法與參考范圍（37℃）*國(guó)56三、血清酶的生理變異

1.性別少數(shù)酶如CK、ALP及GGT等有性別差異，與血清酶的來(lái)源組織有關(guān)。2.年齡血清酶的活性隨年齡而變化，ALP和GGT到老年時(shí)可有輕度升高。年齡差異也見于同工酶。3.進(jìn)食過(guò)量飲酒可使血清GGT明顯升高。4.運(yùn)動(dòng)多種血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT

等，其升高的幅度與運(yùn)動(dòng)量、持續(xù)時(shí)間、運(yùn)動(dòng)頻率及骨骼肌所含的酶量有關(guān)。5.妊娠胎盤組織可分泌一些酶進(jìn)入母體血液，如耐熱ALP、

LD、LAP和ALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升高。6.其他一些酶活性與體重、身高的增長(zhǎng)、體位改變、晝夜變化及家庭因素有關(guān)。返回節(jié)三、血清酶的生理變異1.性別少數(shù)酶如CK、ALP及57

酶合成異常合成減少合成增多

酶釋放增加:

大多數(shù)血清酶增高的主要原因細(xì)胞內(nèi)外酶濃度差異酶蛋白分子量的大小酶的組織分布酶在細(xì)胞內(nèi)定位和存在形式

酶的清除異常不同疾病和不同的酶從血中清除時(shí)間和機(jī)制不同。如AMY和ALP經(jīng)腎臟或膽道排出異常而致血清酶升高。返回節(jié)四、血清酶變化的病理機(jī)制酶合成異常返回節(jié)四、血清酶變化的病理機(jī)制58

第八節(jié)臨床常用血清酶及其同工酶

二、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶三、肌酸激酶及其同工酶四、乳酸脫氫酶及其同工酶五、堿性磷酸酶及其同工酶六、酸性磷酸酶及其同工酶七、淀粉酶及其同工酶八、脂肪酶九、膽堿酯酶一、轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶返回章第八節(jié)臨床常用血清酶及其同工酶二、-谷氨酰59

一、轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶生化特性

ALT、AST

以磷酸吡哆醛（維生素B6）作為輔基，單純的酶蛋白無(wú)催化活性。組織分布

ALTs、ALTm，AST、ASTm正常血清主要為ASTs，當(dāng)細(xì)胞受到輕度損傷時(shí)ASTs顯著升高。若血清中出現(xiàn)大量的ASTm，則表示細(xì)胞嚴(yán)重受損。返回節(jié)

一、轉(zhuǎn)氨酶及其同工酶生化特性返回節(jié)60轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定方法目前，國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室多采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法進(jìn)行測(cè)定。返回節(jié)ALT速率法測(cè)定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：AST速率法測(cè)定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式為：

轉(zhuǎn)氨酶的測(cè)定方法返回節(jié)ALT速率法測(cè)定中酶偶聯(lián)反應(yīng)式61轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定的臨床意義急性肝損害

ALT的升高常與病情輕重相平行，可作為判斷急性肝炎是否恢復(fù)的指標(biāo)。常是肝壞死的前兆。心臟、骨骼肌等組織受損、肝膽疾病時(shí)

血清ALT水平也可出現(xiàn)不同程度的升高。在AMI患者胸前區(qū)疼痛發(fā)作后6～8h，血清AST可明顯升高，發(fā)病后48～60h達(dá)峰值，4～5天可降至正常。轉(zhuǎn)氨酶輕度增加(1～3ULN)：胰腺炎、酒精性脂肪肝、肝硬化、肉芽腫、腫瘤等。中度增加(3～10ULN)的疾?。簜魅拘粤馨驮龆喟Y、慢性活動(dòng)性肝炎、肝外膽道梗塞、心肌梗死等。重度增加(>20ULN)的疾?。翰《拘愿窝住⒅卸拘愿窝?。返回節(jié)轉(zhuǎn)氨酶測(cè)定的臨床意義返回節(jié)62二、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶生化特性

-GT或GGT是一種含巰基的線粒體酶。組織分布

分布于腎、胰、肺、肝、腸和前列腺等多種組織中，其中以腎臟含量最多。

GGT在細(xì)胞中有膜結(jié)合型（疏水型）和可溶型（親水型）兩種。血清中GGT主要來(lái)源于肝膽系統(tǒng)。返回節(jié)二、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶及其同工酶生化特性返回節(jié)63GGT的測(cè)定方法

以往國(guó)內(nèi)多以L--谷氨酰--萘胺或L--谷氨酰-對(duì)硝基苯胺等人工合成底物進(jìn)行比色法測(cè)定（即重氮試劑法）。由于底物水溶性差，緩沖液和pH對(duì)結(jié)果影響較大，現(xiàn)已較少應(yīng)用。目前國(guó)內(nèi)外多采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定血清-GT活性。返回節(jié)GGT的測(cè)定方法返回節(jié)64IFCC參考方法采用L--谷氨酰-3-羧基-對(duì)硝基苯胺(GCNA)作為底物，以甘氨酰甘氨酸（雙甘肽）作為-谷氨酰基的受體。在的條件下，-GT催化底物生成-谷氨酰雙甘肽和黃色的2-硝基-5-氨基苯甲酸，在410nm波長(zhǎng)處直接連續(xù)監(jiān)測(cè)，吸光度的增高速率與-GT活性成正比關(guān)系。返回節(jié)IFCC參考方法返回節(jié)65GGT測(cè)定的臨床意義(1)膽道疾病膽石癥、膽道炎癥、肝外梗阻等升高明顯。(2)肝實(shí)質(zhì)疾病肝炎、脂肪肝、肝硬化時(shí)中度升高。慢性肝炎活動(dòng)期GGT多增高，非活動(dòng)期則多正常。原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性肝癌時(shí)不同程度的增高。(3)誘導(dǎo)作用對(duì)乙醇性中毒的判斷有一定的價(jià)值。長(zhǎng)期接受巴比妥類藥物、含雌激素的避孕藥者升高。(4)同工酶用醋酸纖維薄膜電泳可將GGT同工酶分為GGT1、GGT2、GGT3和

GGT4四種，正常人只有GGT2和GGT3。重癥肝膽疾病和肝癌時(shí)有GGT1出現(xiàn)；乙醇性肝壞死、膽總管結(jié)石及胰腺炎時(shí)GGT2增加；GGT4與膽紅素增高相關(guān)。返回節(jié)GGT測(cè)定的臨床意義返回節(jié)66三、肌酸激酶及其同工酶生化特性肌酸激酶為巰基酶，易受金屬離子Ca2＋、Cu2＋、Zn2＋、Mn2＋等的抑制，Mg2＋是CK的必需激活劑。由兩種不同亞基（M和B亞基）組成的二聚體。按電泳速率的快慢分為：CK-BB（CK1）、CK-MB（CK2）、CK-MM（CK3）和CK–Mt(CK4)四種同工酶。組織分布廣泛分布于全身，骨骼肌含量最高，其次是心肌和腦組織。

CK-BB在腦和脊髓內(nèi)含量最高稱為腦型同工酶。分為氧化型、中間型和還原型3種亞型。

CK-MB主要存在于心肌細(xì)胞內(nèi)稱為心型同工酶。分為CK-MB1\CK-MB2亞型。骨骼肌中幾乎全部為CK-MM，稱為肌型同工酶。分為CK-MM1\CK-MM2\CK-MM3亞型。返回節(jié)三、肌酸激酶及其同工酶生化特性返回節(jié)67CK的測(cè)定方法有比色法、紫外分光光度法和熒光法等。由于以磷酸肌酸為底物的逆向反應(yīng)速度快，約為正向反應(yīng)速度的6倍，所以采用逆向反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定較為普及。如肌酸顯色法和酶偶聯(lián)法，其中以后者最常用，有兩種工具酶及指示酶參與反應(yīng)。IFCC測(cè)定CK的參考方法為酶偶聯(lián)法。

返回節(jié)CK的測(cè)定方法返回節(jié)68CK同工酶和亞型的測(cè)定方法臨床常規(guī)測(cè)定CK同工酶多用電泳和免疫抑制法，但二法均會(huì)受溶血和巨CK的干擾，免疫抑制法還會(huì)受到CK-BB的干擾?，F(xiàn)推薦用免疫化學(xué)方法直接測(cè)定CK-MBmass，可不受溶血和巨CK的干擾。

CK同工酶亞型（CK-MM亞型和CK-MB亞型）多用瓊脂糖凝膠高壓電泳和等電聚焦電泳等。返回節(jié)CK同工酶和亞型的測(cè)定方法返回節(jié)69CK同工酶亞型（CK-MM亞型和CK-MB亞型）多用瓊脂糖凝膠高壓電泳和等電聚焦電泳等。一類以乙酰膽堿為底物，測(cè)定水解反應(yīng)生成的酸。GGT4與膽紅素增高相關(guān)。4-氨基安替比林(4-AAP)4-氨基安替比林(4-AAP)三、血清酶的生理變異時(shí)的底物濃度，即V＝?Vmax時(shí)，則Km＝[S]。比濁法（以橄欖油懸液為底物），以連續(xù)監(jiān)測(cè)法為常用。用來(lái)計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最量氣法、分光光度法、熒光法——必須根據(jù)線性反應(yīng)期的反應(yīng)速率才能準(zhǔn)確計(jì)算出酶活性濃度。女：≤30U/L連續(xù)監(jiān)測(cè)法（酶偶聯(lián)法）三、肌酸激酶及其同工酶運(yùn)動(dòng)多種血清酶活性升高，如CK、LD、AST、ALD和ALT正常和病理狀況時(shí)瓊脂糖凝膠電泳分析血清CK同工酶可能出現(xiàn)的酶帶

返回節(jié)CK同工酶亞型（CK-MM亞型和CK-MB亞型）多用瓊脂糖凝70CK及其同工酶測(cè)定的臨床意義主要用于早期診斷AMI（1）血清CK總活力

AMI后2～4h開始升高，10～24h達(dá)峰值，3～4天恢復(fù)正常。（2）CK同工酶及亞型

AMI胸痛發(fā)作后，血清CK-MB的上升先于其CK總活性，CK-MB/CK＞可診斷為AMI。

CK-MM亞型的測(cè)定：以CK-MM3/CK-MM1＞作為診斷AMI的標(biāo)準(zhǔn)。

CK-MB2亞型：在AMI早期診斷和判斷有無(wú)再灌注上同樣有很高的靈敏度和特異性。一般以CK-MB2＞或CK-MB2/CK-MB1＞作為AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)。返回節(jié)CK及其同工酶測(cè)定的臨床意義返回節(jié)71四、乳酸脫氫酶及其同工酶生化特性

乳酸脫氫酶是糖酵解途徑中的一種重要酶。LD除催化L-乳酸外還可催化α-羥丁酸、γ-酮丁酸進(jìn)行脫氫反應(yīng)。組織分布

LD位于細(xì)胞質(zhì)中，是一種含鋅的糖酵解酶。LD是由H（心型）和M型（肌型）兩種不同亞基組成的四聚體。5種同工酶。若用-羥基丁酸作為底物，可測(cè)定H亞基的活性。返回節(jié)四、乳酸脫氫酶及其同工酶生化特性返回節(jié)72LD的測(cè)定方法目前多用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。LD-P法：以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向PL）的逆向反應(yīng)（稱LD-P法）。LD-L法：以乳酸為底物（反應(yīng)方向LP）的順向反應(yīng)（稱LD-L法）。為IFCC參考方法（pH為）。通過(guò)在340nm波長(zhǎng)處監(jiān)測(cè)NAD+

還原成NADH吸光度的增加速率而計(jì)算LD活性。返回節(jié)LD的測(cè)定方法返回節(jié)73LD同工酶的測(cè)定方法常用電泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。目前以瓊脂糖凝膠電泳法更多用。一般成年人存在如下規(guī)律：LD2＞LD1＞LD3＞LD4＞LD5，部分正常兒童血中可見LD1＞LD2。返回節(jié)LD同工酶的測(cè)定方法返回節(jié)74LD及其同工酶測(cè)定的臨床意義心肌梗死

LD心肌酶中升高最晚，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。急性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎和肝癌(尤其轉(zhuǎn)移性肝癌)時(shí)，LD明顯升高。LD同工酶主要用于AMI和肝病的診斷AMILD1升高最為顯著，LD1/LD2＞1，視為診斷AMI的一個(gè)特異指標(biāo)。肝膽疾病LD5升高常表示有肝細(xì)胞壞死。肝細(xì)胞性黃疸時(shí)LD5＞LD4，阻塞性黃疽時(shí)LD4＞LD5。腫瘤肝癌(尤其轉(zhuǎn)移癌)時(shí)可伴有LD4和LD5明顯增高；白血病、膠原病時(shí)以LD3、LD4增高為主。惡性貧血LD活性極度升高(原始巨幼紅細(xì)胞可產(chǎn)生并釋放LD)，伴有LD1明顯升高，LD1＞LD2。返回節(jié)LD及其同工酶測(cè)定的臨床意義返回節(jié)75AMI時(shí)心肌酶時(shí)相變化返回節(jié)AMI時(shí)心肌酶時(shí)相變化返回節(jié)76五、堿性磷酸酶及其同工酶生化特性堿性磷酸酶是一組底物特異性較低,在堿性條件下（最適pH為10左右）能水解很多磷酸單酯化合物的酶。組織分布

ALP廣泛分布定位于細(xì)胞膜表面，其含量依次為肝、腎、胎盤、小腸、骨骼等。血清中的ALP主要來(lái)自肝臟和骨骼，是膽汁淤滯的酶學(xué)指標(biāo)。根據(jù)ALP的來(lái)源不同可以3大類，即胎盤ALP、腸ALP和肝/骨/腎ALP同工酶。在病理時(shí)還可能出現(xiàn)肝ALP和膽汁ALP等“高分子ALP”

，以及一些和腫瘤有關(guān)的變異ALP，如Regan、NagaoALP等。返回節(jié)五、堿性磷酸酶及其同工酶生化特性返回節(jié)77ALP的測(cè)定方法(1)磷酸苯二鈉比色法：測(cè)定ALP水解底物產(chǎn)生的酚。(2)連續(xù)監(jiān)測(cè)法：我國(guó)及IFCC的推薦方法。

返回節(jié)ALP的測(cè)定方法返回節(jié)78ALP測(cè)定的臨床意義肝膽疾病各種肝內(nèi)、外膽管阻塞引起的膽汁淤積性疾病，ALP明顯升高，且ALP升高與膽紅素平行甲亢、惡性骨損傷、佝僂病、Pagets病、骨折、指端肥大癥所致骨損傷等，均可引起ALP活性升高，尤其是骨ALP同工酶的增高妊娠后期及兒童生長(zhǎng)期ALP增高血清ALP活性降低：主要見于呆小病、維生素C缺乏癥、甲狀腺功能低下、惡性貧血等。返回節(jié)ALP測(cè)定的臨床意義返回節(jié)79六、酸性磷酸酶及其同工酶生化特性酸性磷酸酶是一組對(duì)底物專一性不強(qiáng)、在酸性條件下水解各種正磷酸單酯的酶。組織分布

ACP主要存在于體內(nèi)所有細(xì)胞的溶酶體中。血清中ACP主要來(lái)源于前列腺，稱為前列腺ACP（PAP），它可被酒石酸抑制；其活性約為其他組織中酶活性的100倍。非前列腺ACP，不被酒石酸抑制。正常男性血清中的ACP約有1/3～1/2來(lái)自前列腺，其余則與女性血中的ACP一樣可能來(lái)自血小板或破骨細(xì)胞。返回節(jié)六、酸性磷酸酶及其同工酶生化特性返回節(jié)80ACP的測(cè)定方法

ACP的測(cè)定底物、原理和方法與ALP相似，只是反應(yīng)pH為酸性。如利用磷酸苯二鈉法和磷酸對(duì)硝基酚法等在酸性條件下測(cè)定ACP。國(guó)外多推薦使用磷酸麝香草酚為底物的比色法?？赏ㄟ^(guò)用L-酒石酸這類抑制劑鑒別和估量PAP活性。由于ACP不穩(wěn)定，酶活性測(cè)定困難，目前已發(fā)展一些免疫學(xué)方法特異而靈敏地測(cè)定ACP（特別是PAP）。血標(biāo)本采取后必須盡快分離血清并立即測(cè)定。不同方法參考范圍也不同。返回節(jié)返回節(jié)81ACP測(cè)定的臨床意義前列腺疾病血清PAP測(cè)定是診斷前列腺癌最重要的指標(biāo)之一。在前列腺肥大、前列腺炎、急性尿潴留時(shí)亦可升高。酒石酸抑制試驗(yàn)可區(qū)別PAP與非PAP。骨病惡性骨腫瘤、變形性骨炎、多發(fā)性骨髓瘤、骨質(zhì)疏松、代謝性骨病等輕度增高。肝病肝癌、肝硬化肝炎時(shí)ACP增高。血液病溶血性疾病、白血肉、血小板疾病等，ACP均有不同程度的升高。返回節(jié)ACP測(cè)定的臨床意義返回節(jié)82七、淀粉酶及其同工酶生化特性

α-amylase（AMY或AMS）是一種不均一性的鈣依賴金屬蛋白酶。AMY作用的最適pH在～，鹵素和其他陰離子有激活作用（Cl>Br>NO3>I）。分子量40000～50000，易從腎臟排出。半壽期很短，約為2h。返回節(jié)七、淀粉酶及其同工酶生化特性返回節(jié)83組織分布

α-AMY分為兩種同工酶：S-AMY和P-AMY。利用醋酸纖維薄膜電泳或瓊脂糖電泳可將S-AMY分為S1、S2、S3和S4四個(gè)亞型；P-AMY分為P1、P2、P3三個(gè)亞型。

P-AMY和S-AMY可單獨(dú)或聯(lián)合與抗淀粉酶自身抗體以非共價(jià)形式結(jié)合，形成高分子循環(huán)復(fù)合物，稱為巨淀粉酶（M-AMY）。M-AMY的分子量較大，不易從腎小球?yàn)V過(guò)，因此容易造成高淀粉酶血癥。返回節(jié)組織分布返回節(jié)84AMY的測(cè)定方法

AMY總活性測(cè)定：化學(xué)法、酶偶聯(lián)法。根據(jù)底物不同分為兩類。一類是以天然淀粉為底物的測(cè)定方法。如碘淀粉比色法等。另一類底物是人工合成的麥芽多糖為底物的測(cè)定方法，這類方法是國(guó)內(nèi)外目前應(yīng)用最多的方法。如2-氯-對(duì)硝基苯麥芽三糖苷（CNP-G3）和亞乙基封閉的對(duì)硝基苯麥芽庚糖苷（4NP-G7）法（亦稱EPS法），以后者最常用。EPS法測(cè)定AMY返回節(jié)AMY的測(cè)定方法返回節(jié)85AMY測(cè)定的臨床意義AMY活性增高

急性胰腺炎發(fā)病后3～6h開始升高，12～24h達(dá)峰值，2～5天下降恢復(fù)至正常。超過(guò)500U有意義。慢性胰腺炎急性發(fā)作、胰腺癌等AMY升高。急腹癥如急性闌尾炎、腸梗阻、潰瘍現(xiàn)穿孔等，血清AMY可升高。這些病變可波及胰腺，較急性胰腺炎為低。AMY活性降低主要見于肝炎、肝硬化等。AMY同工酶增高

急性胰腺炎和慢性胰腺炎急性發(fā)作P型增高。腮腺炎、肺癌、卵巢癌等S型增高。返回節(jié)AMY測(cè)定的臨床意義返回節(jié)86八、脂肪酶生化特性

脂肪酶（lipase，LPS）又稱甘油三酯酶，其專一性不高，是一種單鏈糖蛋白?？杀粠€基化合物、膽汁酸、Ca2+及輔脂肪酶等激活劑激活，而被重金屬、絲氨酸所抑制。組織分布

血清中LPS主要來(lái)源于胰腺的腺泡細(xì)胞。返回節(jié)八、脂肪酶生化特性返回節(jié)87LPS的測(cè)定方法比濁法（以橄欖油懸液為底物），以連續(xù)監(jiān)測(cè)法為常用。分光光度法：酶偶聯(lián)顯色比色法（多用1,2-甘油二酯為底物）采用人工合成底物1,2-二月桂基-rac-丙三氧基-3-戊二酸試靈酯設(shè)計(jì)的連續(xù)監(jiān)測(cè)法。此法為一步速率法，具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、穩(wěn)定和抗干擾能力強(qiáng)等特點(diǎn)。返回節(jié)LPS的測(cè)定方法返回節(jié)88LPS測(cè)定的臨床意義

主要用于診斷胰腺疾病，血清LPS在急性胰腺炎時(shí)活性升高的時(shí)間早，上升幅度大，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，故其診斷價(jià)值優(yōu)于AMY。在急性胰腺炎發(fā)作后2～12h，血清LPS可顯著升高，24h至峰值，48～72h可能恢復(fù)正常，但隨后又可持續(xù)升高8～15天。在酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝膽疾患等血清LPS也可有不同程度的升高。返回節(jié)LPS測(cè)定的臨床意義返回節(jié)89九、膽堿酯酶

生化特性

膽堿酯酶（ChE）是一類催化酰基膽堿水解的酶類。又稱?；憠A水解酶。人體主要有兩種，即乙酰膽堿酯酶（AChE）又稱真性膽堿酯酶或膽堿酯酶Ⅰ、丁酰膽堿酯酶（BuChE）又稱假性膽堿酯酶或稱擬乙酰膽堿酯酶（PChE）或膽堿酯酶Ⅱ。臨床常規(guī)檢查的膽堿酯酶(SChE)即指后者，通常簡(jiǎn)稱為ChE。返回節(jié)九、膽堿酯酶生化特性返回節(jié)90

組織分布

AChE主要分布于神經(jīng)組織、肌肉、紅細(xì)胞、肺等處，其生理功能是催化水解乙酰膽堿，能使神經(jīng)細(xì)胞反復(fù)去極化。ChE/BuChE主要在肝臟合成，也分布于胰臟、心臟、小腸黏膜、大腦灰質(zhì)、血漿及淋巴液等處。

返回節(jié)組織分布返回節(jié)91ChE的測(cè)定方法測(cè)定方法有兩類：一類以乙酰膽堿為底物，測(cè)定水解反應(yīng)生成的酸。常用指示劑（如間-硝基酚或溴百里酚藍(lán)）測(cè)pH法。特別是紙片法簡(jiǎn)便快速，適用于急診有機(jī)磷中毒的快速篩查。但此類方法準(zhǔn)確度較差。另一類是以人工合成的底物測(cè)定膽堿衍生物的生成。丁酰硫代膽堿法是目前測(cè)定血清ChE最常用的方法。返回節(jié)ChE的測(cè)定方法返回節(jié)92ChE測(cè)定的臨床意義用于肝臟損傷和有機(jī)磷中毒的診斷。

有機(jī)磷中毒兩種ChE活性均減低，因?yàn)橛袡C(jī)磷與ChE活性中心結(jié)合，使其喪失催化能力。ChE活性在50％～70％為輕度中毒；30％～50％為中度中毒；30％以下為重度中毒。亞急性及慢性中毒，AcbE可降至O。

肝實(shí)質(zhì)損害肝臟具有合成膽堿酯酶的功能。肝實(shí)質(zhì)性損傷時(shí)，ChE合成降低；當(dāng)肝功能恢復(fù)后，ChE合成亦隨之逐漸轉(zhuǎn)為正常。

增高腎臟疾病(排泄障礙或合成亢進(jìn))；脂肪肝、甲亢、糖尿病等可出現(xiàn)ChE的增高。

返回節(jié)返回章ChE測(cè)定的臨床意義返回節(jié)返回章93酶學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目的選擇及應(yīng)用檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)用肝病有關(guān)酶ALT與AST肝細(xì)胞損害輕、中度損傷ALT升高為主，重度損傷以AST升高明顯。ALP與GGT膽汁淤滯，在膽汁排泄受阻的肝膽疾病時(shí)升高。骨疾病時(shí)升高。

MAO肝臟纖維化，肝纖維化病變及肝硬化時(shí)可升高。

ChE肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞功能，肝實(shí)質(zhì)損害致肝功能不全時(shí)，ChE減低。心肌損傷有關(guān)酶CK與CK-MBAMI、心肌炎和肌病、骨骼肌損傷指標(biāo)。AMI時(shí)出現(xiàn)變化及達(dá)峰值時(shí)間早，但持續(xù)時(shí)間短；CK-MB敏感性高于CK。

ASTAMI時(shí)可升高，其變化僅晚于CK和CK-MB，但早于LD及LD1。LD及LD同工酶AMI等心肌病變、肝臟及骨骼肌病變的指標(biāo)。AMI時(shí)LD及LD1升高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，晚于CK、AST；肝臟病變時(shí)LD及LD5升高。胰腺疾病有關(guān)酶AMS血、尿AMS升高反映急性胰腺炎、慢性胰腺炎急性發(fā)作、胰腺癌和胰腺導(dǎo)管阻塞。血AMS變化早于尿，但尿AMS升高持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。

LPS急性胰腺炎時(shí)LPS明顯升高，但晚于AMS，而持續(xù)時(shí)間比AMS長(zhǎng)，可用于急性胰腺炎晚期診斷。與AMS同時(shí)測(cè)定可提高診斷敏感度。其他酶

ACP血清ACP升高反映前列腺癌等前列腺疾??；骨病、肝病和血液病時(shí)，ACP也可升高。酶學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目的選擇及應(yīng)用檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)用肝病有關(guān)酶A94謝謝！

退出謝謝！退出95臨床化學(xué)中常用的共通性呈色反應(yīng)呈色系統(tǒng)酶底物顯色劑呈色氧化酶oxidase過(guò)氧化物酶（POD）供氧體（oxygendonor）鄰聯(lián)甲苯胺(OT)四甲基聯(lián)苯胺（TMB）四甲基聯(lián)苯胺加硫酸鄰聯(lián)茴香胺(ODA)鄰聯(lián)茴香胺加硫酸4-氨基安替比林(4-AAP)3-甲基-2-苯并噻唑酮腙（MBTH）藍(lán)色藍(lán)色黃色黃色紅色紅色深紅色脫氫酶NADH/NADPH過(guò)氧化氫酶（catalase）

脫氫酶dehydrogenase甲醇

NAD/NADP變色酸(CTA)Hantzsch反應(yīng)

[紫外光比色]吩嗪甲酯硫酸鹽(PMS)硝基四氮唑藍(lán)(NBT)紅紫色黃色

無(wú)色紅色藍(lán)紫色返回節(jié)臨床化學(xué)中常用的共通性呈色反應(yīng)呈色系統(tǒng)酶底物顯色96感謝觀看感謝觀看97診斷酶學(xué)診斷酶學(xué)98主要內(nèi)容六、工具酶及其臨床應(yīng)用一、酶的一般特征二、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)三、酶活性濃度測(cè)定技術(shù)四、酶的免疫化學(xué)測(cè)定五、同工酶和亞型的測(cè)定七、血清酶八、臨床常用血清酶及其同工酶主要內(nèi)容六、工具酶及其臨床應(yīng)用一、酶的一般特征99一、基本概念

第一節(jié)酶的一般特征

三、酶的命名分類及編號(hào)

二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用

返回章一、基本概念第一節(jié)酶的一般特征三、酶的1001.酶、核酶。2.酶的催化特性：極高的催化效率、高度的特異性、催化作用的可調(diào)節(jié)性。3.酶促反應(yīng)：酶所催化的反應(yīng)。

酶活性：酶催化反應(yīng)的能力。

酶活性單位：在一定條件下使酶促反達(dá)到某一速度時(shí)所需要的酶量。底物(S)：酶所作用的物質(zhì)。

產(chǎn)物(P)：酶促反應(yīng)的生成物。酶的激活劑:

加速酶促反應(yīng)的物質(zhì)。酶的抑制劑:

減慢或終止酶促反應(yīng)的物質(zhì)。

一、基本概念

返回節(jié)1.酶、核酶。一、基本概念返回節(jié)101二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用單純酶和結(jié)合酶單純酶：只含多肽鏈，是單純蛋白質(zhì)。

結(jié)合酶：由酶蛋白和輔因子組成。兩者結(jié)合后形成的復(fù)合物稱為全酶。與酶蛋白結(jié)合疏松的稱為輔酶。與酶蛋白結(jié)合牢固的稱為輔基。

酶的活性中心酶與底物結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物發(fā)生在酶表面的一個(gè)特定區(qū)域。

酶的催化作用機(jī)制誘導(dǎo)契合學(xué)說(shuō)。返回節(jié)二、酶的結(jié)構(gòu)與催化作用單純酶和結(jié)合酶返回節(jié)102臨床應(yīng)用酶EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫1.1.1.27乳酸脫氫酶LD、LDH2.7.3.2肌酸激酶CK、CPK1.1.1.37蘋果酸脫氫酶MD、MDH3.1.1.3脂肪酶LPS1.1.1.41異檸檬酸脫氫酶ICD、ICDH3.1.1.8膽堿酯酶CHE1.1.1.496-磷酸葡萄糖脫氫酶G6PDH3.1.3.1堿性磷酸酶ALP、AKP1.4.1.3谷氨酸脫氫酶GLD、GLDH3.1.3.2酸性磷酸酶ACP1.4.3.4單氨氧化酶MOD3.1.3.55'-核苷酸酶5'-NT2.1.3.3鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶OCT3.2.1.1α-淀粉酶AMY、AMS2.3.2.2γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶γ-GT、GGT3.2.1.30β-N-乙酰(基)-D氨基葡萄糖苷酶NAG2.4.1.1糖原磷酸化酶GP3.2.1.51α-L-巖藻糖苷酶α-FU、AFU2.5.1.18谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST3.4.23.1亮氨酸氨基肽酶LAP2.6.1.1門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST、GOT4.1.2.13果糖二磷酸醛縮酶ALD2.6.1.2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT、GPT三、酶的命名、分類及編號(hào)返回節(jié)臨床應(yīng)用酶EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫EC編號(hào)習(xí)慣用名英語(yǔ)縮寫1103一、米－曼氏方程酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

三、酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線四、影響酶促反應(yīng)的因素二、Km與Vmax返回章一、米－曼氏方程酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)三、酶促反應(yīng)進(jìn)程104如果能準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)的初速度（v），采用標(biāo)用來(lái)計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最A(yù)MY總活性測(cè)定：化學(xué)法、酶偶聯(lián)法。Regan、NagaoALP等。男：12～15歲750U/L，LD-P法：以丙酮酸為底物（反應(yīng)方向PL）的逆向反應(yīng)（稱LD-P法）。LD、LAP和ALT（少數(shù)）等，引起血清中這些酶活性升稀釋水量、試劑吸光度上下限、空白速率、反應(yīng)孵育時(shí)酶在細(xì)胞內(nèi)定位和存在形式LD-L法：以乳酸為底物（反應(yīng)方向LP）的順向反應(yīng)（稱LD-L法）。傷時(shí)ASTs顯著升高。AMI后2～4h開始升高，10～24h達(dá)峰值，3～4天恢復(fù)正PL，即LD-P法正常和病理狀況時(shí)瓊脂糖凝膠電泳分析血清CK同工酶可能出現(xiàn)的酶帶基于NADH或NADPH的反應(yīng)原理：LD、α-HBD等原、ChE、Cp及LPL等。物沉淀的原理，減去法可算出同工酶的活性。ChE活性在50％～70％為輕度中

Michaelis和Menten提出的酶作用的中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō):

一、米－曼氏方程E+SK1K2K3返回節(jié)1913年提出了著名的酶促反應(yīng)速度與底物濃度關(guān)系的方程式，即米-曼氏方程(Michaelis-Mentenequation):E+PES如果能準(zhǔn)確測(cè)定反應(yīng)的初速度（v），采用標(biāo)

Michaelis105二、Km與Vmax

Km值：等于酶促反應(yīng)的初速率為最大速率Vmax一半時(shí)的底物濃度，即V＝?Vmax時(shí)，則Km＝[S]。Km

在臨床上的應(yīng)用：反映酶與底物的親合力，且與親合力成反比。用來(lái)計(jì)算不同底物濃度時(shí)酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的百分率。根據(jù)Km值選擇酶的最適底物。確定工具酶用量。確定代謝酶系中的限速反應(yīng)和作為鑒別酶的依據(jù)。

Vmax：酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度，代表了在一定酶量下的最大反應(yīng)速率。返回節(jié)二、Km與VmaxKm值：等于酶促反應(yīng)的初速率為106酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線(S為底物，P為產(chǎn)物)酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線(S為底物，P為產(chǎn)物)107

三、酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線

如將酶反應(yīng)過(guò)程中測(cè)得的產(chǎn)物[P]或底物[S]變化量對(duì)時(shí)間作圖，可得酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線。圖中產(chǎn)物[P]或底物[S]變化曲線的斜率就代表酶促反應(yīng)的速率。延滯期線