Transwell細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計

Transwell細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計實驗一：探究共培養(yǎng)條件分泌組是否有變化即細(xì)胞A和細(xì)胞B在共培養(yǎng)條件下其各自分泌組是否受到影響（暫且不討論誰對誰的影響）。設(shè)計實驗：1.使用Transwell培養(yǎng)技術(shù)，上層培養(yǎng)細(xì)胞A（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為1*10A5個＜舉例＞）下層培養(yǎng)細(xì)胞B（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為2*10A5個＜舉例〉）共培養(yǎng)h小時，從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白（記為蛋白i）。Transwell1相同培養(yǎng)條件（培養(yǎng)基含量，細(xì)胞數(shù)，培養(yǎng)時間，溫度等）設(shè)置兩個Transwell：⑴上層培養(yǎng)細(xì)胞A（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為1*10八5個＜舉例〉）下層不放置細(xì)胞，⑵上層不放置細(xì)胞，下層培養(yǎng)細(xì)胞B（細(xì)胞數(shù)設(shè)置為2*10A5個＜舉例＞）,培養(yǎng)h小時，從培養(yǎng)液中提取分泌蛋白（記為蛋白ii）。Transwell2-(1)Transwell2-⑵質(zhì)譜分析蛋白i和蛋白ii的差別，初步分析共培養(yǎng)條件下分泌組是否影響。置換細(xì)胞A，細(xì)胞B培養(yǎng)的上下層條件，相同方法培養(yǎng)細(xì)胞，打質(zhì)譜分析蛋白，分析結(jié)果是否與實驗一有差別，進(jìn)一步分析原因。細(xì)齟卡I細(xì)胞編胞A細(xì)齟卡I細(xì)胞編胞A總結(jié)：該方法盡可能的同一了共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)的差異，即排除了其他影響條件，只對比在共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)條件下分泌組的變化，從而為得到可信數(shù)據(jù)提供了條件，對照分析了在共培養(yǎng)條件下與單獨培養(yǎng)條件下分泌組的變化情況。缺點：由于細(xì)胞均未標(biāo)記，即便結(jié)果顯示共培養(yǎng)和單獨培養(yǎng)分泌組確實有變化，仍無法得出兩種細(xì)胞誰影響誰，由此，可利用標(biāo)記培養(yǎng)基的方法，繼續(xù)優(yōu)化實驗。實驗二：優(yōu)化設(shè)計，將單獨培養(yǎng)的細(xì)胞A培養(yǎng)基用Leud-d3標(biāo)記，細(xì)胞B用Lys-C13標(biāo)記，而對共同培養(yǎng)的Transwell不做任何標(biāo)記。如圖所示：鄒施A未標(biāo)記鄒施A未標(biāo)記用蚱未標(biāo)記Transwell1Transwell2-(1) Transwell2-(2)同實驗一，經(jīng)過相同條件的培養(yǎng)，提取分泌組，質(zhì)譜分析(另做AB細(xì)胞上下層交換的實驗)，對比單獨培養(yǎng)并分別標(biāo)記與共培養(yǎng)但不標(biāo)