頭孢拉定膠囊的含量測(cè)定方案

頭孢拉定膠囊的含量測(cè)定方案一、前言頭孢拉定膠囊為β-內(nèi)酰胺類抗生素、頭孢菌素類藥。用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃體炎、中耳炎、支氣管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮膚軟組織感染等。本品主要成分為頭孢拉定，頭孢拉定的含量是決定頭孢拉定膠囊是否合格的重要因素。藥品的含量是指一種藥品制劑中包含的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的有效成分的數(shù)量，藥品的含量或效價(jià)是評(píng)定藥品的主要指標(biāo)之一。因此，設(shè)計(jì)其測(cè)定方法時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥品特性、劑型、處方、鑒別試驗(yàn)和純度檢查綜合考慮，當(dāng)鑒別試驗(yàn)和純度檢查保證了專屬性和純度的情況下，含量測(cè)定方法的選擇要著眼準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性。頭孢拉定為第一代半合成頭孢菌素，化學(xué)名稱為(6R，7R)-7[(R)-2-氨基-2-(1，4-環(huán)已烯基)乙酰氨基]-3-甲基-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環(huán)[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸。根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版第二部記載，實(shí)驗(yàn)中為了檢測(cè)頭孢拉定膠囊中頭孢拉定的含量，建立了高效液相色譜法。二、設(shè)計(jì)依據(jù)根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版第二部記載，檢測(cè)頭孢拉定膠囊中頭孢拉定的含量用的是高效液相色譜法。該法對(duì)頭孢拉定及其主要雜質(zhì)的保留時(shí)間會(huì)因?yàn)榱鲃?dòng)相中有機(jī)相的選擇和配比產(chǎn)生較大影響。通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，選擇合適的有機(jī)相并適當(dāng)提高所占比例，分離度和柱效符合藥典要求，樣品的分析時(shí)間可大大縮短，含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。本設(shè)計(jì)方案依據(jù)現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》，采用高效液相色譜法對(duì)頭孢拉定膠囊進(jìn)行含量測(cè)定。高效液相色譜法以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。測(cè)定頭孢拉定膠囊中頭孢拉定的方法也有紫外分光光度法，但比起紫外分光光度法，明顯高效液相色譜法的精確度更高。三、設(shè)計(jì)方案（一）儀器與試藥1.儀器AGILENT1100SERISE型高效液相色譜儀(安捷倫);分析天平XS105DU(0.1mg;0.01mg)；微量進(jìn)樣器;超聲波清洗器(KQ-200KDE);一次性注射器;0.45μm微孔濾膜;2.試藥頭孢拉定對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);頭孢拉定膠囊作為供試品(上?，F(xiàn)代制藥股份有限公司）;甲醇為色譜純;水為重蒸餾水;其余試劑均為分析純。（二）色譜條件色譜柱(AgilentC185u100A250mm×4.6mm);水-甲醇-3.86%醋酸鈉溶液-4%醋酸溶液(1564:400:30:6);柱溫：室溫。紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。流速：10ml/min。進(jìn)樣量:10μl（三）溶液的制備1.對(duì)照品溶液的制備取頭孢拉定對(duì)照品適量(相當(dāng)于頭孢拉定約35mg)，用分析天平精密稱定,置50mL容量瓶中,加水約6mL,再用超聲儀，超聲振蕩5至10分鐘，再振搖10分鐘，保證對(duì)照品能完全溶解,再加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,靜置，作為頭孢拉定對(duì)照品溶液。2.供試品溶液的制備取頭孢拉定膠囊20粒，用分析天平精密稱定重量后,傾出膠囊內(nèi)的內(nèi)容物(不得損失囊殼),用小刷拭凈囊壁上的殘留內(nèi)容物。分別精密稱定囊殼重量,求出平均裝量。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物,精密稱取適量(相當(dāng)于頭孢拉定70mg),置100mL容量瓶中,加流動(dòng)相70mL,再用超聲儀，超聲振蕩5至10分鐘，再振搖10分鐘,使頭孢拉定供試品細(xì)粉完全溶解,再加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,棄去初濾液，留下續(xù)濾液，靜置。即得頭孢拉定供試品溶液。（四）方法學(xué)考察1.線性關(guān)系考察精密量取上述“對(duì)照品溶液的制備”項(xiàng)下的溶液，配成0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列濃度的溶液,分別移取10μL，依照上述色譜條件，依次進(jìn)樣。分別記錄不同濃度的頭孢拉定對(duì)照品溶液的峰面積，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，峰面積的計(jì)算是由工作站采用峰面積歸一化法，每個(gè)濃度測(cè)定3次，以峰面積的平均值對(duì)濃度進(jìn)行線形回歸。寫出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)r。根據(jù)回歸方程，判斷線性關(guān)系是否良好。2.重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)的頭孢拉定膠囊20粒,按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法，平行制備6份供試品溶液,6份供試品溶液分別過(guò)膜，取過(guò)膜后的濾液10μL，按選定的色譜條件，分別進(jìn)樣,注入高效液相色譜儀中，記錄峰面積,測(cè)定并計(jì)算含量。根據(jù)樣品的色譜圖峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值。判斷方法是否具有良好的重復(fù)性。3.回收率試驗(yàn)取適量的頭孢拉定供試品,研細(xì),取6份，每份精密稱定。分別精密加入等量的頭孢拉定對(duì)照品,按照“供試品溶液的制備”項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液,6份供試品溶液分別過(guò)膜。取過(guò)膜后的濾液10μL，按選定的色譜條件分別進(jìn)樣,注入高效液相色譜儀中，記錄峰面積,用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量,計(jì)算加樣回收率。4.精密度試驗(yàn)取“對(duì)照品溶液的制備”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液(約為0.6mg/ml)適量，按選定的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次,分別記錄色譜圖。將峰面積進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,得到鹽頭孢拉定峰面積的RSD值。根據(jù)RSD值的結(jié)果，確定儀器的精密度是否良好。5.穩(wěn)定性試驗(yàn)取“供試品溶液的制備”項(xiàng)下的供試品溶液，在室溫下放置0,2,4,8h，按選定的色譜條件，分別進(jìn)樣10ul，測(cè)定5次峰面積，計(jì)算RSD值。（六）樣品含量測(cè)定取不同批號(hào)的頭孢拉定膠囊20粒，用分析天平精密稱定重量后,傾出膠囊內(nèi)的內(nèi)容物(不得損失囊殼),用小刷拭凈囊壁上的殘留內(nèi)容物。分別精密稱定囊殼重量,求出平均裝量。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物,精密稱取適量(相當(dāng)于頭孢拉定70mg),置100mL容量瓶中,加流動(dòng)相70mL,再用超聲儀，超聲振蕩5至10分鐘，再振搖10分鐘,使頭孢拉定供試品細(xì)粉完全溶解,再加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,棄去初濾液，留下續(xù)濾液，靜置。得到頭孢拉定供試品溶液。按此方法平行制備3份,供試品溶液分別過(guò)膜。取頭孢拉定對(duì)照品適量(相當(dāng)于頭孢拉定約35mg)，用分析天平精密稱定,置50mL容量瓶中,加水約6mL,再用超聲儀，超聲振蕩5至10分鐘，再振搖10分鐘，保證對(duì)照品能完全溶解,再加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,靜置，作為頭孢拉定對(duì)照品溶液。對(duì)照品溶液過(guò)膜。分別取過(guò)膜后的供試品濾液和對(duì)照品濾液各10μL，注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,測(cè)定峰面積,并按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算百分標(biāo)示量，并計(jì)算RSD值。。四、設(shè)計(jì)小結(jié)（一）檢測(cè)波長(zhǎng)的確定精密吸取"對(duì)照品溶液的制備"項(xiàng)下的已定對(duì)照品溶液50μL，注入高效液相色譜儀，在190nm～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描（儀器：Agilent高效液相色譜儀，檢測(cè)器：AgilentDAD），并記錄色譜圖，然后找出最大吸收波長(zhǎng)后，以實(shí)際最大的吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。（二）供試品溶液制備提取方式的選擇供試品提取方式有振搖、加熱回流和超聲振蕩三種常用方式。加熱回流操作較繁瑣且會(huì)使被測(cè)成分頭孢拉定不穩(wěn)定;振搖溶解速度較慢且占用人工效率低下;超聲振蕩不僅操作方便快捷而且還有被測(cè)成分穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。所以選擇超聲振蕩提取制備供試品溶液。五、參考資料1.國(guó)家藥典委員會(huì)，