DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件

一、DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)及其意義一、DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)及其意義

1953年，Watson和Crick發(fā)現(xiàn)了DNA雙螺旋（doublehelix)結(jié)構(gòu)模型。1953年，Watson和Crick發(fā)現(xiàn)了DNA雙螺旋（dDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)要點：(Watson和Crick，1953)DNA由兩條反相平行的脫氧核苷酸鏈組成，脫氧核糖-磷酸骨架位于雙鏈的外側(cè)，堿基位于內(nèi)側(cè)，雙鏈的堿基之間以氫鍵相結(jié)合。（堿基互補配對形式：AT；GC)2.DNA是右手螺旋結(jié)構(gòu)，螺旋直徑為2nm，螺距為3.4nm。堿基平面垂直螺旋軸，相鄰堿基平面距離為0.34nm，螺旋一圈包含10對堿基。3.氫鍵維持DNA雙鏈橫向穩(wěn)定性，堿基堆積力維持雙鏈縱向穩(wěn)定性。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)要點：圖1-8DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)示意圖圖1-8DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)示意圖DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件

上述Watson和Crick的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)稱為B型結(jié)構(gòu)，是DNA分子在生理條件下最穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，如果改變?nèi)芤旱碾x子強度或相對濕度，DNA螺旋結(jié)構(gòu)的上述特征就會發(fā)生變化。上述Watson和Crick的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)稱為B型結(jié)構(gòu)右手螺旋，11堿基/螺旋右手螺旋，10堿基/螺旋左手螺旋，12堿基/螺旋可能參與基因的表達和調(diào)控右手螺旋，右手螺旋，左手螺旋，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不同構(gòu)型的意義并不在于其螺旋直徑及其高度的變化，關(guān)鍵是由于這些變化而引起的表面結(jié)構(gòu)的改變，進而影響其生物學(xué)功能。

DNA雙螺旋的這種表面結(jié)構(gòu)有助于DNA結(jié)合蛋白識別并結(jié)合特定的DNA序列。而這種表面構(gòu)型的變化對基因組DNA與其DNA結(jié)合蛋白的特異性相互作用具有重要的意義。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不同構(gòu)型的意義并不在于其螺旋直徑及其高度的二、其它類型的DNA高級結(jié)構(gòu)二、其它類型的DNA高級結(jié)構(gòu)1、三股螺旋DNA

三股螺旋DNA也稱三鏈DNA（triplestrandDNA,tsDNA),其結(jié)構(gòu)是在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成。雙螺旋通過Watson-Crick氫鍵穩(wěn)定，而三股螺旋沿需通過Hoogsteen氫鍵穩(wěn)定。三條鏈均為同型嘌呤（homopurine,Hpu)或同型嘧淀（homopyrimidine,Hpy),即整段的堿基均為嘌呤或嘧啶。1、三股螺旋DNA三股螺旋DNA也稱三鏈DNA（tripl

根據(jù)三鏈的組成和相對位置分為兩種基本類型：嘌呤-嘌呤-嘧啶型（Pu-Pu-Py型)：嘧啶-嘌呤-嘧啶型（Py-Pu-Py型)：——在堿性介質(zhì)中穩(wěn)定——在偏酸性介質(zhì)中穩(wěn)定

三鏈中的兩條鏈為正常雙螺旋，第三條嘧啶鏈位于雙螺旋的大溝中，并隨雙螺旋結(jié)構(gòu)一起旋轉(zhuǎn)。根據(jù)三鏈的組成和相對位置分為兩種基本類型：嘌呤-嘌呤-嘧啶

三鏈中堿基配對符合Hoogsteen模型：在Py-Pu-Py型中為：T=A=T、C+=G=C（與G形成Hoogsteen鍵的C必須質(zhì)子化）；在Pu-Pu-Py中為：G=G=C、A=A=T三鏈中堿基配對符合Hoogsteen模型：

當(dāng)DNA雙鏈中含有H-回文序列時，即某區(qū)段DNA兩條鏈分別為Hpu和Hpy，并且各自為回文結(jié)構(gòu)時，任一條回文結(jié)構(gòu)的5’

和3’部分都可以形成分子內(nèi)三股螺旋及剩余的半條回文游離單鏈。在一定條件下，含回文序列DNA還可形成小瘤DNA（noduleDNA),它在中性溶液中穩(wěn)定。當(dāng)DNA雙鏈中含有H-回文序列時，即某區(qū)段DNA兩條鏈分別

真核生物基因組中存在大量可形成三鏈DNA的多聚嘌呤核苷酸和多聚嘧啶核苷酸序列。這些序列有的存在于調(diào)控區(qū)，有的位于DNA復(fù)制的起點或終點，有的則位于染色體重組位點，提示它們可能與基因的表達調(diào)控、DNA的復(fù)制及染色體的重組有關(guān)。真核生物基因組中存在大量可形成三鏈DNA的多聚嘌呤核苷酸和2、十字型結(jié)構(gòu)

十字型結(jié)構(gòu)的分子基礎(chǔ)是DNA分子中存在翻轉(zhuǎn)重復(fù)序列。此時不僅兩條鏈互補。單鏈中的翻轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)也可以互相配對形成雙鏈分子。

DNA變性后或因其他原因引起DNA分子兩條鏈分開，再復(fù)性時翻轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)的DNA可以自我配對，形成突出于雙鏈之外的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，兩個并列的發(fā)夾形成十字結(jié)構(gòu)。2、十字型結(jié)構(gòu)十字型結(jié)構(gòu)的分子基礎(chǔ)是DNA分子中存在翻轉(zhuǎn)重5’

TCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAGGCCGTTTGTTTGTGGGCGACCATCGCCACCAAAAAAACAAACG5’GGTTACGGCCGCGATCGCGATATATTATATAGCGCTAGCGCCGGCATCAC5’---TCCGGCAAACTTTTGTTTGC------AGGCCGTTTGAAAACAAACG---5’

5’TCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGC

與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相比,十字形結(jié)構(gòu)中氫鍵形成減少,而且失去了雙螺旋DNA堿基堆積力的相互作用,因而穩(wěn)定性不如雙螺旋DNA.

十字形結(jié)構(gòu)可能在基因表達調(diào)控中起作用,但其確切的生物學(xué)功能有待研究.與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相比,十字形結(jié)構(gòu)中氫鍵形成減少,而且失去3.DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋進一步盤曲形成更加復(fù)雜的結(jié)構(gòu)稱為DNA的三級結(jié)構(gòu),即超螺旋結(jié)構(gòu).

正超螺旋:DNA的盤曲方向與DNA雙螺旋方向相同.

負(fù)超螺旋:DNA的盤曲方向與DNA雙螺旋方向相反.3.DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋進一步盤曲形成更加復(fù)雜DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(1)(1)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(2)(2)核小體核心組蛋白核小體核心組蛋白第一層次折疊，體積減少6倍。第二層次折疊，直徑30nm纖絲，每周6個核小體，致密度增加40倍。第三層次折疊，30nm纖絲折疊成柱狀結(jié)構(gòu)致密度增加約1000倍。在分裂期的染色體中，約1m長的DNA分子約壓縮8000-10000倍，容納于直徑只有數(shù)微米的細(xì)胞核中。第一層次折疊，體積減少6倍。第二層次折疊，直徑30nm纖絲，超螺旋可能有兩方面的生物學(xué)意義:

超螺旋DNA比松馳型DNA更緊密,使DNA分子體積變得更小,對其在細(xì)胞的包裝過程更為有利;

超螺旋能影響雙螺旋的解鏈程序,因而影響DNA分子與其他分子(如酶、蛋白質(zhì)）之間的相互作用。超螺旋可能有兩方面的生物學(xué)意義:三、DNA的理化性質(zhì)及應(yīng)用三、DNA的理化性質(zhì)及應(yīng)用(一)雙鏈DNA單鏈DNA(一)雙鏈DNA單鏈DNADNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(二)(二)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件

在DNA解鏈過程中，由于更多的共軛雙鍵得以暴露，DNA在紫外區(qū)260nm處的吸光值增加，并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系，這種關(guān)系稱為DNA的增色效應(yīng)。

在DNA解鏈過程中，由于更多的共軛雙鍵得以暴露，DNA在紫DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(三)(三)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件四、核酸分子雜交的應(yīng)用四、核酸分子雜交的應(yīng)用1、RNA酶保護分析（RibonucleaseProtectionAssay,RPA)RPA是以液相雜交為基礎(chǔ)發(fā)展起來的，可用于基因和mRNA的結(jié)構(gòu)分析以及mRNA的定量研究。

其原理為：在體外經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成一個帶有標(biāo)記的單鏈RNA探針，此探針與待測RNA在序列上互補，二者雜交后，用RNA酶處理，未形成雙鏈的RNA單鏈被水解成單核苷酸，雜交形成的雙鏈RNA受到保護，不被降解，然后通過電泳進行RNA-RNA雜交體的檢測。

RPA的檢測方法十分靈敏，結(jié)果可靠，是進行mRNA定量、mRNA末端定位以及確定內(nèi)含子位置的常用方法。1、RNA酶保護分析（RibonucleaseProtec總RNA標(biāo)記探針雜交RNA酶水解滅活RNA酶沉淀RNAPAGE電泳膜轉(zhuǎn)移與生物素探針雜交洗膜、封閉膜與抗生物素蛋白-堿性磷酸酶一起孵育加入發(fā)光劑X光片曝光RNA酶保護分析示意圖：總RNA標(biāo)記探針雜交RNA酶水解滅活RNA酶沉淀RNAPAG2、濾膜雜交：

濾膜雜交是固相雜交的一種，是將待測核酸分子結(jié)合到不同的濾膜上，然后同存在于液相中的標(biāo)記探針進行雜交。待測核酸樣品可以直接點在濾膜上（稱為斑點雜交）；也可以先將核酸樣品經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離，再通過印跡技術(shù)將核酸從凝膠中按原來的位置和順序轉(zhuǎn)移到濾膜上。這樣可以比較準(zhǔn)確地保持待測核酸片段在電泳圖譜中的位置，同時又可以進行分子量測定。這一技術(shù)通常用于DNA的限制性內(nèi)切酶圖譜分析、判斷DNA的限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性以及DNA的定性、定量等研究。2、濾膜雜交：濾膜雜交是固相雜交的一種，是將待測核酸分子結(jié)3、原位雜交(insituhybridization)：

原位雜交是用標(biāo)記探針與細(xì)胞或組織切片中的核酸進行雜交.這一方法可以保持組織或細(xì)胞的完整結(jié)構(gòu),因此可以精確地進行DNA或RNA在組織或細(xì)胞內(nèi)的定位.此外,結(jié)合共聚焦顯微鏡的應(yīng)用,這一方法還可以將特異的基因或DNA片段經(jīng)熒光標(biāo)記后在染色體上進行定位(fluorescenceinsituhybridization,FISH).3、原位雜交(insituhybridization)：4、DNA芯片(DNAchips)：DNA芯片技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項融合分子生物學(xué)與微電子等多學(xué)科的高新技術(shù).其基本原理類似于原位雜交.4、DNA芯片(DNAchips)：DNA芯片技術(shù)是近在特定的固相支持物表面(常用計算機硅芯片)原位合成寡核苷酸,或者將預(yù)先制備的DNA片段以顯微打印的方式有順序地固化于支持物表面經(jīng)熒光、生物素或放射性核素標(biāo)記的核酸樣品與之雜交具有與芯片DNA序列互補的核酸樣品即可與芯片上的探針結(jié)合通過對雜交信號的檢測分析，便可以得到樣品的遺傳信息（基因序列、基因表達等）在特定的固相支持物表面(常用計算機硅芯片)原位合成寡核苷酸,

固定于芯片的探針可以是合成的寡核苷酸、克隆的DNA片段、PCR產(chǎn)物、單鏈的DNA片段或RNA片段.

待測的樣品可以是DNA，也可以是mRNA.由于DNA芯片可以容納大量的探針，可以對樣品進行平行、快速、高效、敏感的檢測，因此其成為分子生物學(xué)研究的重要手段。同時，在臨床醫(yī)學(xué)和藥物研究與開發(fā)方面得到了廣泛的應(yīng)用。固定于芯片的探針可以是合成的寡核苷酸、克隆的DNA片段、

選擇=結(jié)果匯報結(jié)束

謝謝觀看！歡迎提出您的寶貴意見！選擇=結(jié)果匯報結(jié)束謝謝觀看！一、DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)及其意義一、DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)及其意義

1953年，Watson和Crick發(fā)現(xiàn)了DNA雙螺旋（doublehelix)結(jié)構(gòu)模型。1953年，Watson和Crick發(fā)現(xiàn)了DNA雙螺旋（dDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)要點：(Watson和Crick，1953)DNA由兩條反相平行的脫氧核苷酸鏈組成，脫氧核糖-磷酸骨架位于雙鏈的外側(cè)，堿基位于內(nèi)側(cè)，雙鏈的堿基之間以氫鍵相結(jié)合。（堿基互補配對形式：AT；GC)2.DNA是右手螺旋結(jié)構(gòu)，螺旋直徑為2nm，螺距為3.4nm。堿基平面垂直螺旋軸，相鄰堿基平面距離為0.34nm，螺旋一圈包含10對堿基。3.氫鍵維持DNA雙鏈橫向穩(wěn)定性，堿基堆積力維持雙鏈縱向穩(wěn)定性。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)要點：圖1-8DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)示意圖圖1-8DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)示意圖DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件

上述Watson和Crick的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)稱為B型結(jié)構(gòu)，是DNA分子在生理條件下最穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，如果改變?nèi)芤旱碾x子強度或相對濕度，DNA螺旋結(jié)構(gòu)的上述特征就會發(fā)生變化。上述Watson和Crick的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)稱為B型結(jié)構(gòu)右手螺旋，11堿基/螺旋右手螺旋，10堿基/螺旋左手螺旋，12堿基/螺旋可能參與基因的表達和調(diào)控右手螺旋，右手螺旋，左手螺旋，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不同構(gòu)型的意義并不在于其螺旋直徑及其高度的變化，關(guān)鍵是由于這些變化而引起的表面結(jié)構(gòu)的改變，進而影響其生物學(xué)功能。

DNA雙螺旋的這種表面結(jié)構(gòu)有助于DNA結(jié)合蛋白識別并結(jié)合特定的DNA序列。而這種表面構(gòu)型的變化對基因組DNA與其DNA結(jié)合蛋白的特異性相互作用具有重要的意義。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)不同構(gòu)型的意義并不在于其螺旋直徑及其高度的二、其它類型的DNA高級結(jié)構(gòu)二、其它類型的DNA高級結(jié)構(gòu)1、三股螺旋DNA

三股螺旋DNA也稱三鏈DNA（triplestrandDNA,tsDNA),其結(jié)構(gòu)是在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上形成。雙螺旋通過Watson-Crick氫鍵穩(wěn)定，而三股螺旋沿需通過Hoogsteen氫鍵穩(wěn)定。三條鏈均為同型嘌呤（homopurine,Hpu)或同型嘧淀（homopyrimidine,Hpy),即整段的堿基均為嘌呤或嘧啶。1、三股螺旋DNA三股螺旋DNA也稱三鏈DNA（tripl

根據(jù)三鏈的組成和相對位置分為兩種基本類型：嘌呤-嘌呤-嘧啶型（Pu-Pu-Py型)：嘧啶-嘌呤-嘧啶型（Py-Pu-Py型)：——在堿性介質(zhì)中穩(wěn)定——在偏酸性介質(zhì)中穩(wěn)定

三鏈中的兩條鏈為正常雙螺旋，第三條嘧啶鏈位于雙螺旋的大溝中，并隨雙螺旋結(jié)構(gòu)一起旋轉(zhuǎn)。根據(jù)三鏈的組成和相對位置分為兩種基本類型：嘌呤-嘌呤-嘧啶

三鏈中堿基配對符合Hoogsteen模型：在Py-Pu-Py型中為：T=A=T、C+=G=C（與G形成Hoogsteen鍵的C必須質(zhì)子化）；在Pu-Pu-Py中為：G=G=C、A=A=T三鏈中堿基配對符合Hoogsteen模型：

當(dāng)DNA雙鏈中含有H-回文序列時，即某區(qū)段DNA兩條鏈分別為Hpu和Hpy，并且各自為回文結(jié)構(gòu)時，任一條回文結(jié)構(gòu)的5’

和3’部分都可以形成分子內(nèi)三股螺旋及剩余的半條回文游離單鏈。在一定條件下，含回文序列DNA還可形成小瘤DNA（noduleDNA),它在中性溶液中穩(wěn)定。當(dāng)DNA雙鏈中含有H-回文序列時，即某區(qū)段DNA兩條鏈分別

真核生物基因組中存在大量可形成三鏈DNA的多聚嘌呤核苷酸和多聚嘧啶核苷酸序列。這些序列有的存在于調(diào)控區(qū)，有的位于DNA復(fù)制的起點或終點，有的則位于染色體重組位點，提示它們可能與基因的表達調(diào)控、DNA的復(fù)制及染色體的重組有關(guān)。真核生物基因組中存在大量可形成三鏈DNA的多聚嘌呤核苷酸和2、十字型結(jié)構(gòu)

十字型結(jié)構(gòu)的分子基礎(chǔ)是DNA分子中存在翻轉(zhuǎn)重復(fù)序列。此時不僅兩條鏈互補。單鏈中的翻轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)也可以互相配對形成雙鏈分子。

DNA變性后或因其他原因引起DNA分子兩條鏈分開，再復(fù)性時翻轉(zhuǎn)重復(fù)區(qū)的DNA可以自我配對，形成突出于雙鏈之外的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，兩個并列的發(fā)夾形成十字結(jié)構(gòu)。2、十字型結(jié)構(gòu)十字型結(jié)構(gòu)的分子基礎(chǔ)是DNA分子中存在翻轉(zhuǎn)重5’

TCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAGGCCGTTTGTTTGTGGGCGACCATCGCCACCAAAAAAACAAACG5’GGTTACGGCCGCGATCGCGATATATTATATAGCGCTAGCGCCGGCATCAC5’---TCCGGCAAACTTTTGTTTGC------AGGCCGTTTGAAAACAAACG---5’

5’TCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGC

與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相比,十字形結(jié)構(gòu)中氫鍵形成減少,而且失去了雙螺旋DNA堿基堆積力的相互作用,因而穩(wěn)定性不如雙螺旋DNA.

十字形結(jié)構(gòu)可能在基因表達調(diào)控中起作用,但其確切的生物學(xué)功能有待研究.與DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)相比,十字形結(jié)構(gòu)中氫鍵形成減少,而且失去3.DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋進一步盤曲形成更加復(fù)雜的結(jié)構(gòu)稱為DNA的三級結(jié)構(gòu),即超螺旋結(jié)構(gòu).

正超螺旋:DNA的盤曲方向與DNA雙螺旋方向相同.

負(fù)超螺旋:DNA的盤曲方向與DNA雙螺旋方向相反.3.DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋進一步盤曲形成更加復(fù)雜DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(1)(1)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(2)(2)核小體核心組蛋白核小體核心組蛋白第一層次折疊，體積減少6倍。第二層次折疊，直徑30nm纖絲，每周6個核小體，致密度增加40倍。第三層次折疊，30nm纖絲折疊成柱狀結(jié)構(gòu)致密度增加約1000倍。在分裂期的染色體中，約1m長的DNA分子約壓縮8000-10000倍，容納于直徑只有數(shù)微米的細(xì)胞核中。第一層次折疊，體積減少6倍。第二層次折疊，直徑30nm纖絲，超螺旋可能有兩方面的生物學(xué)意義:

超螺旋DNA比松馳型DNA更緊密,使DNA分子體積變得更小,對其在細(xì)胞的包裝過程更為有利;

超螺旋能影響雙螺旋的解鏈程序,因而影響DNA分子與其他分子(如酶、蛋白質(zhì)）之間的相互作用。超螺旋可能有兩方面的生物學(xué)意義:三、DNA的理化性質(zhì)及應(yīng)用三、DNA的理化性質(zhì)及應(yīng)用(一)雙鏈DNA單鏈DNA(一)雙鏈DNA單鏈DNADNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(二)(二)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件

在DNA解鏈過程中，由于更多的共軛雙鍵得以暴露，DNA在紫外區(qū)260nm處的吸光值增加，并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系，這種關(guān)系稱為DNA的增色效應(yīng)。

在DNA解鏈過程中，由于更多的共軛雙鍵得以暴露，DNA在紫DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件(三)(三)DNA高級結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)及應(yīng)用2課件四、核酸分子雜交的應(yīng)用四、核酸分子雜交的應(yīng)用1、RNA酶保護分析（RibonucleaseProtectionAssay,RPA)RPA是以液相雜交為基礎(chǔ)發(fā)展起來的，可用于基因和mRNA的結(jié)構(gòu)分析以及mRNA的定量研究。

其原理為：在體外經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成一個帶有標(biāo)記的單鏈RNA探針，此探針與待測RNA在序列上互補，二者雜交后，用RNA酶處理，未形成雙鏈的RNA單鏈被水解成單核苷酸，雜交形成的雙鏈RNA受到保護，不被降解，然后通過電泳進行RNA-RNA雜交體的檢測。

RPA的檢測方法十分靈敏，結(jié)果可靠，是進行mRNA定量、mRNA末端定位以及確定內(nèi)含子位置的常用方法。1、RNA酶保護分析（RibonucleaseProtec總RNA標(biāo)記探針雜交RNA酶水解滅活RNA酶沉淀RNAPAGE電泳膜轉(zhuǎn)移與生物素探針雜交洗膜、封閉膜與抗生物素蛋白-堿性磷酸酶一起孵育加入發(fā)光劑X光片曝光RNA酶保護分析示意圖：總RNA標(biāo)記探針雜交RNA酶水解滅活RNA酶沉淀RNAPAG2、濾膜雜交：

濾膜雜交是固相雜交的一種，是將待測核酸分子結(jié)合到不同的濾膜上，然后同存在于液相中的標(biāo)記探針進行雜交。待測核酸樣品可以直接點在濾膜上（稱為斑點雜交）；也可以先將核酸樣品經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離，再通過印跡技術(shù)將核酸從凝膠中按原來的位