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乳鼠腦內(nèi)注射操作流程及注意事項(xiàng)乳鼠腦內(nèi)注射操作流程及注意事項(xiàng)乳鼠腦內(nèi)注射操作流程及注意事項(xiàng)xxx公司乳鼠腦內(nèi)注射操作流程及注意事項(xiàng)文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度乳鼠腦內(nèi)注射操作流程及注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：一日齡KM窩鼠。一、操作流程1、在實(shí)驗(yàn)臺(tái)先鋪一層保鮮膜，再在上面鋪一層墊布。左手固定乳鼠頭部使其側(cè)臥于墊布上，酒精消毒眼耳連線中點(diǎn)處，右手持注射器垂直刺入眼耳連線中點(diǎn)硬腦膜下，進(jìn)針2~3mm，注入20%病毒懸液20~30μl，注射完畢酒精消毒局部。（為了固定進(jìn)針長(zhǎng)度，可用10ultip頭做成針套，剛好露出針頭斜面即可。在刺入針頭時(shí)注意避開(kāi)血管，選擇眼耳連線中點(diǎn)區(qū)域發(fā)白的區(qū)域）2、逐日觀察。48小時(shí)內(nèi)死亡者為非特異性死亡。3、待其發(fā)病垂死前，應(yīng)立即殺死，取出鼠腦-80℃保存。乳鼠發(fā)病癥狀為消瘦，弓背，后肢麻痹，活動(dòng)力減弱。取鼠腦的方法為：酒精消毒乳鼠腦部皮膚，用無(wú)菌的手術(shù)剪刀剪開(kāi)乳鼠腦部皮膚，再剪開(kāi)硬腦膜，并朝上翻起，暴露鼠腦。換一套無(wú)菌剪刀、鑷子，鑷子夾住皮膚和硬腦膜，用剪刀的彎頭挑起鼠腦，放入無(wú)菌EP管中。4、十字研磨器研磨腦組織，用PBS按照20%比例稀釋。離心，取上清后再離心一次，盡可能去除雜質(zhì)后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。二、注意事項(xiàng)：1、乳鼠接種后仍然與母鼠一起喂養(yǎng)。為防止母鼠嗅到乳鼠身上酒精氣味而吃掉乳鼠，可先用酒精棉球檫試母鼠鼻部；一旦乳鼠發(fā)病，立即取出母鼠，以免母鼠吃掉乳鼠。2、生物安全。登革病毒屬于蟲(chóng)媒病毒，不用過(guò)于恐慌，但是在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要注意生物安全，保護(hù)好自己和環(huán)境。不要帶著污染的手套到處亂摸。=1\*GB3①接種，取腦操作過(guò)程中要帶口罩、手套。=2\*GB3②注意在乳鼠接種和觀察過(guò)程中防止蚊蟲(chóng)叮咬。=3\*GB3③用過(guò)的手

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