分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件

分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

分子病理學(xué)的誕生

近十幾年來，醫(yī)學(xué)獲得了分子生物學(xué)理論和實驗的充實，建立起許多完全嶄新的臨床檢驗方法，甚至部分替換某些舊的傳統(tǒng)檢測方法。從廣度上-----擴(kuò)大了臨床觀察視野從深度上-----達(dá)到基因分析境界分子病理學(xué)在此基礎(chǔ)上誕生并發(fā)展起來。分子病理學(xué)作為病理學(xué)的一個現(xiàn)代分支，為國內(nèi)外所公認(rèn)。分子病理學(xué)的誕生近十幾年來，醫(yī)學(xué)獲得了分子病理學(xué)的發(fā)展

分子病理學(xué)的發(fā)展由始即以擁有大量實驗、技術(shù)逐日進(jìn)步為特征，并彼此相輔相成。分子生物學(xué)家不熟悉疾病，臨床學(xué)家忙于臨床防治疾病，使分子生物學(xué)當(dāng)代理論和實驗及時的引進(jìn)、提煉并為臨床診斷、認(rèn)識疾病服務(wù)，這一歷史任務(wù)，落在病理學(xué)工作者的肩上。分子病理學(xué)的發(fā)展分子病理學(xué)的發(fā)展由始即病理診斷技術(shù)經(jīng)典的HE切片觀察輔助技術(shù)1、特殊染色技術(shù)2、免疫組織化學(xué)技術(shù)3、分子生物學(xué)技術(shù)病理診斷技術(shù)經(jīng)典的HE切片觀察病理學(xué)歷史：器官細(xì)胞分子（分子病理）超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)(Ultrastructuralpathology)：E/M觀察器官（解剖）病理學(xué)(Organpathology,1761)：肉眼觀察細(xì)胞（組織）病理學(xué)(Cellularpathology,1854)：L/M觀察免疫病理學(xué)(Immunopathology)：免疫組化分子病理學(xué)（Molecularpathology）遺傳病理學(xué)（Geneticpathology）定量病理學(xué)（Quantitative

pathology）病理學(xué)歷史：器官細(xì)胞分子（分子病理）超微結(jié)構(gòu)病理學(xué)(U一項覆蓋了9個國家和地區(qū)，1217例病人的泛亞洲科研顯示：沒有相關(guān)的靶標(biāo)卻接受了靶向治療，死亡風(fēng)險將增加185%。

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新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志.2009.9.v361(10).一項覆蓋了9個國家和地區(qū)，1217例病人的泛亞洲科研顯示：沒“我知道每個患者不一樣，而且需要個體化治療，但我更需要知道他們有何不一樣，如何根據(jù)這些不一樣來實施個體化治療?！?/p>

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一位中國臨床腫瘤醫(yī)生,2009“我知道每個患者不一樣，而且需要個體化治療，但我更需要知道他分子靶向治療的概念分子靶向治療是指“針對參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和其他生物學(xué)途徑的各種阻抑手段”，其治療靶點可以是細(xì)胞表面的生長因子受體或者細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要酶或蛋白。廣義的分子靶點則包括參與腫瘤細(xì)胞分化、分裂、凋亡、遷移、浸潤、淋巴結(jié)及全身轉(zhuǎn)移過程，從DNA

到蛋白水平的任何亞細(xì)胞分子。分子靶向治療的概念分子靶向治療是指“針對參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程靶向治療與個性化治療醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)領(lǐng)域的革命不斷影響著腫瘤的診斷和治療。在規(guī)范化治療的基礎(chǔ)上逐步發(fā)展為個性（體）化治療。個性（體）化治療的核心是靶向治療。分子病理診斷是靶向治療的基礎(chǔ)。靶向治療與個性化治療醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)領(lǐng)域的革命不斷影響著腫瘤的基因診斷的定義

基因診斷是通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷對疾病作出診斷的方法。基因診斷的探測目的物是DNA或RNA。

DNA----反映了基因的存在狀態(tài)

RNA----反映了基因的表達(dá)狀態(tài)基因診斷的定義探查基因的分類內(nèi)源基因----機(jī)體自身的基因用于診斷基因有無病變外源基因-----如病毒，細(xì)菌等用于診斷有無病原體感染探查基因的分類內(nèi)源基因----機(jī)體自身的基因分子病理學(xué)診斷分子病理學(xué)理論與技術(shù)的應(yīng)用，拓寬了病理診斷的視角，發(fā)展了新的研究領(lǐng)域。分子病理學(xué)診斷在指導(dǎo)腫瘤治療中擁有特殊優(yōu)勢，即在組織學(xué)的基礎(chǔ)上對腫瘤基因狀態(tài)進(jìn)行精細(xì)的分類和檢測：

1增加診斷的準(zhǔn)確性、改善預(yù)后的評估，并指導(dǎo)臨床處理。分子病理學(xué)診斷分子病理學(xué)理論與技術(shù)的應(yīng)用，拓寬了病理診斷的視2區(qū)別不同基因類型的病人，設(shè)計合理的臨床治療方案。

3增加藥物的特異性和安全性，最大限度地優(yōu)化治療。

4識別癌癥易受攻擊部位的信號途徑，選擇藥物的靶點。

5檢測治療中基因表達(dá)的變化，隨時調(diào)整治療方案。2區(qū)別不同基因類型的病人，設(shè)計合理的臨床治療方案。

相對于其他疾病，腫瘤臨床治療的有效率目前仍然偏低。隨著人類基因組學(xué)、藥物基因組學(xué)及腫瘤分子生物學(xué)研究的不斷深入和發(fā)展，人們對腫瘤多成因、異質(zhì)性的特點有了更加全面的認(rèn)識。個體化治療已經(jīng)成為腫瘤臨床治療的發(fā)展方向和最有效的手段。相對于其他疾病，腫瘤臨床治療的有效率目前仍然偏

但是，如何識別具有相同腫瘤發(fā)生部位、相同病理類型及病期的不同患者之間存在的差異成為實施個體化治療的主要障礙。大量的臨床研究和試驗結(jié)果表明：特異腫瘤分子標(biāo)志物（靶標(biāo)）是識別患者個體差異的重要依據(jù)，實現(xiàn)對這些靶標(biāo)的檢測是實施腫瘤個體化治療的前提和基礎(chǔ)。但是，如何識別具有相同腫瘤發(fā)生部位、相同病理類

用于識別腫瘤患者個體差異的靶標(biāo)大致可歸納為三類：1）腫瘤治療性藥物的作用靶標(biāo):

如HER2基因拷貝數(shù)和EGFR基因突變；2）腫瘤藥物代謝相關(guān)的靶標(biāo):

如UGT1A1和CYP2D6等基因多態(tài)性；3）腫瘤藥物作用路徑的相關(guān)靶標(biāo):

如KRAS基因突變和ERCC1基因mRNA表達(dá)水平。用于識別腫瘤患者個體差異的靶標(biāo)大致可歸納為三類：隨著抗腫瘤藥物的不斷增加以及研究的深入，與作用路徑有關(guān)的靶標(biāo)越來越多。檢測也從以前的單一靶標(biāo)發(fā)展為多靶標(biāo)聯(lián)合進(jìn)行。通過針對不同癌種的系統(tǒng)靶標(biāo)檢測，篩選適合患者個體的藥物，提高治療的針對性和有效率。隨著抗腫瘤藥物的不斷增加以及研究的深入，與作用路徑有關(guān)的靶標(biāo)分子病理學(xué)用于基因診斷的常用手段

原位雜交：CISH(顯色原為雜交)；

FISH（包括單色和多色）；

SISH（雙標(biāo)，銀染色）。DNA序列分析：DNA-SEQUENCING;

PCR-RFLP;

PCR-SSCP;

D-HPLC;其他:包括基因芯片、實時定量PCR、Southern、Western等分子病理學(xué)用于基因診斷的常用手段原位雜交：CISH常用的靶向藥物美羅華（利妥昔，Rituximab）赫賽?。ㄇ字閱慰?，Trastuzumab）帕妥珠單抗（Pertuzumab,Omnitarg）格列衛(wèi)（伊馬替尼，Imatinib）西妥昔（Cetuxamab）特羅凱（厄洛替尼，Erlotinib）易瑞沙（吉非替尼，gefitinib）貝伐單抗（Bevacizumab）常用的靶向藥物美羅華（利妥昔，Rituximab）靶向治療應(yīng)用較為廣泛的腫瘤淋巴瘤（CD20陽性）乳腺癌（HER2陽性）胃腸間質(zhì)瘤（CD117/CD34陽性）肺癌胃腸癌隆突性皮膚纖維肉瘤靶向治療應(yīng)用較為廣泛的腫瘤淋巴瘤（CD20陽性）結(jié)直腸癌愛必妥是抗EGFR（表皮生長因子受體）單克隆抗體（單抗），用于治療結(jié)直腸癌的生物靶向治療藥物。結(jié)直腸癌（CRC）屬危害嚴(yán)重的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率約占所有惡性腫瘤的10％－15%，是西方國家導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的第二大疾病。目前，中國CRC發(fā)病也逐年上升速，每年新增病例高達(dá)40萬人。結(jié)直腸癌的治療與其它實體腫瘤一樣，治療方法包括手術(shù)治療、化療、放療。以化療為例，化療藥物從最初單一的藥物，到聯(lián)合的細(xì)胞毒藥物，再到靶向藥物，經(jīng)歷了一代代革新，對疾病的治療效果也出現(xiàn)突破性的進(jìn)展。結(jié)直腸癌愛必妥是抗EGFR（表皮生長因子受體）單克隆抗體（單什么是KRAS基因？KRAS基因跟治療有什么關(guān)系？北京腫瘤醫(yī)院消化內(nèi)科主任琳教授解釋：“它是一個信號傳導(dǎo)重要的路徑，腫瘤信號必然要通過這個途徑進(jìn)行傳導(dǎo)，傳導(dǎo)完成后，腫瘤細(xì)胞才能增值、分化、生存，如果傳導(dǎo)被阻斷，腫瘤細(xì)胞就沒有繁殖能力，就要死掉。”什么是KRAS基因？KRAS基因跟治療有什么關(guān)系？北京腫瘤醫(yī)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院307醫(yī)院消化腫瘤內(nèi)科主任徐建明教授：“K-RAS基因檢測則是了解結(jié)直腸癌患者癌基因狀況最直接、最有效的方法。只有KRAS基因未發(fā)生突變的患者才適合使用EGFR靶向藥物治療。因此，K-RAS基因檢測可以篩選出EGFR受體靶向藥物治療有效的CRC癌患者，實現(xiàn)患者的個體化治療，從而獲得良好的預(yù)后，延長患者的生命。更為重要的是，檢測能夠幫助早期癥狀不明顯的結(jié)直腸癌患者盡早得知病情，實現(xiàn)癌癥的早發(fā)現(xiàn)、早治療，避免錯過最佳治療時機(jī)?！避娛箩t(yī)學(xué)科學(xué)院307醫(yī)院消化腫瘤內(nèi)科主任徐建明教授：“K-R易瑞沙治療肺癌的機(jī)理靶向藥物吉非替尼能夠與EGFR細(xì)胞內(nèi)的ATP結(jié)合位點上的三磷酸腺苷競爭,阻斷其酪氨酸激酶活性,進(jìn)而阻斷EGFR的信號傳導(dǎo)通路,阻礙腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和血管生成,并可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡易瑞沙治療肺癌的機(jī)理靶向藥物吉非替尼能夠與EGFR細(xì)胞內(nèi)的A血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF作用機(jī)理內(nèi)皮抑制素

1核仁素（nucleolin）

2整合素（integrin）

Endostatin

抑制VEGR誘導(dǎo)的NO合成和內(nèi)皮細(xì)胞遷移，促進(jìn)凋亡；與pro-MMP2結(jié)合，抑制MMP2等。

VEGF-R

通過Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK及PI3K-AKT通路血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF作用機(jī)理內(nèi)皮抑制素VEGF抑制劑血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與VEGF受體，VEGFR-1(FIt-1)和VEGFR-2結(jié)合。VEGFR-2的激活是VEGF誘導(dǎo)有絲分裂、血管生成和血管滲透性所必須的。VEGFRs是跨膜受體，在胞漿結(jié)構(gòu)域內(nèi)具有保守的PTK活性，與配基結(jié)合引起VEGFR雙聚體，依次激活激酶的活性和細(xì)胞內(nèi)特異性VEGFR酪氨酸殘基的自動磷酸化。酪氨酸殘基的自動磷酸化進(jìn)一步增加TK的催化活性，并為胞漿信號傳遞分子提供結(jié)合位點。這些細(xì)胞內(nèi)信號蛋白的相互作用，誘導(dǎo)細(xì)胞對VEGF反應(yīng)。VEGF抑制劑血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與VEGF受體，V臨床醫(yī)師的機(jī)遇與挑戰(zhàn)臨床醫(yī)師的機(jī)遇與挑戰(zhàn)傳統(tǒng)的病例診斷沒有過時，但要與時俱進(jìn)！目前，是從規(guī)范化治療到個性化治療的過渡時期。當(dāng)前我們面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)和難逢機(jī)遇，臨床醫(yī)師不會錯過、發(fā)展的大好機(jī)會！傳統(tǒng)的病例診斷沒有過時，但要與時俱進(jìn)！29FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用29FISH技術(shù)在臨床中的應(yīng)用30FISH檢測在臨床中的應(yīng)用血液病檢測產(chǎn)前診斷實體瘤組織檢測30FISH檢測在臨床中的應(yīng)用血液病檢測FISH在實體腫瘤應(yīng)用的目的個體化治療方案確定

腫瘤診斷

預(yù)后判斷FISH在實體腫瘤應(yīng)用的目的個體化治療方案確定

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腫瘤的形成細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)基因發(fā)生異常（癌細(xì)胞）細(xì)胞功能發(fā)生改變細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變癌細(xì)胞不斷異常增殖

腫瘤形成32腫瘤的形成細(xì)胞內(nèi)腫瘤相關(guān)基因發(fā)生異常腫瘤發(fā)生過程腫瘤發(fā)生過程34從分子水平對疾病的重新認(rèn)識不斷提高的診斷技術(shù)和不斷積累的臨床實踐將來的腫瘤治療模式：以分子病理學(xué)診斷為基礎(chǔ)的綜合性靶向治療分子病理學(xué)引起腫瘤治療模式的變化腫瘤部位（實體）腫瘤組織分子病理學(xué)腫瘤的基因類型34從分子水平對疾病的重新認(rèn)識分子病理學(xué)引起腫瘤治療模式的變在乳腺癌檢測中的應(yīng)用在乳腺癌檢測中的應(yīng)用我國女性的乳腺癌發(fā)病率為20.1/10萬GLOBOCAN2002，IARC。我國女性的乳腺癌發(fā)病率為20.1/10萬GLOBOCAN2乳腺癌的流行病學(xué)調(diào)查歐美為高發(fā)地區(qū)，發(fā)病率在60～80/10萬左右，位列女性惡性腫瘤發(fā)生的第一位，且逐年上升。而乳癌的死亡率大約占女性惡性腫瘤死亡的15％左右，僅次于肺癌（25％）。我國的乳癌發(fā)病率在20/10萬左右，在女性惡性腫瘤中位列第三位，而且發(fā)病率也成逐年上升的趨勢。在一些大城市如上海，1999年的調(diào)查顯示，乳癌的發(fā)病率已經(jīng)達(dá)到52.9/10萬。乳腺癌的流行病學(xué)調(diào)查歐美為高發(fā)地區(qū)，發(fā)病率在60～80/10乳腺癌治療新進(jìn)展新的治療理念劑量密度和劑量強(qiáng)度新的治療藥物蒽環(huán)類藥物新的應(yīng)用以紫杉醇為代表的傳統(tǒng)藥物以赫塞汀為代表的靶向藥物乳腺癌治療新進(jìn)展新的治療理念1=-基因拷貝2=-mRNA轉(zhuǎn)錄3=-細(xì)胞表面受體4=-受體細(xì)胞外片斷正常細(xì)胞腫瘤細(xì)胞CytoplasmHER2受體CytoplasmicmembraneNucleusHER2DNAHER2mRNA1234

乳腺癌靶向治療1=-基因拷貝正常細(xì)胞腫瘤細(xì)胞CytoplasmHERHER-2基因擴(kuò)增檢測HER-2基因擴(kuò)增檢測經(jīng)驗性處方藥物現(xiàn)在和將來藥D藥A藥C藥B診斷傳統(tǒng)藥A藥B藥C藥D綜合性治療＋合理處方藥物嘗試、更換確定、治療依據(jù)不同醫(yī)師的經(jīng)驗而有治療差異，化費較多時間、金錢和降低生存機(jī)會依據(jù)醫(yī)師的診斷而采用靶向性治療，節(jié)約大量時間、金錢和獲取較大生存機(jī)會藥物的選擇

應(yīng)用遺傳藥理學(xué)的原理靶向性地選擇藥物經(jīng)驗性處方藥物現(xiàn)在和將來藥D藥A藥C藥B診斷傳統(tǒng)藥A藥B藥C1987著名雜志《科學(xué)》發(fā)表HER2對乳腺癌的意義HER2HER2是有別于腫瘤大小、淋巴結(jié)及激素受體外的乳腺癌重要預(yù)后因子HER2是腫瘤復(fù)發(fā)和生存期長短的獨立預(yù)后因子1987著名雜志《科學(xué)》發(fā)表HER2對乳腺癌的意義HER21998年美國FDA批準(zhǔn)第一個專門針對p185高表達(dá)乳腺癌的抗體治療藥物Herceptin上市,在全世界開創(chuàng)了單抗類分子靶向藥物治療腫瘤的新時代。

HER-2過表達(dá)與生物靶向治療1998年美國FDA批準(zhǔn)第一個專門針對p185高表達(dá)乳腺①下調(diào)細(xì)胞表面的HER一2蛋白②減少血管內(nèi)皮生長因子的產(chǎn)生③介導(dǎo)對過度表達(dá)HER一2的腫瘤細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒作用(ADCC)④抑制HER一2蛋白與受體酪氨酸激酶超家族的其他成員發(fā)生交聯(lián)形成異質(zhì)二聚體⑤減弱細(xì)胞生長信號的傳遞⑥通過誘導(dǎo)P27kipi和RB相關(guān)蛋白P130而大量減少s期細(xì)胞數(shù)目⑦增強(qiáng)化療所致細(xì)胞毒性赫賽汀(Herceptin)抗腫瘤機(jī)制①下調(diào)細(xì)胞表面的HER一2蛋白赫賽汀?——靶向HER2的人源化單抗用于治療HER2陽性乳腺癌生存率提高達(dá)45%療效改善并持續(xù)生活質(zhì)量得以改善95%人源化,5%鼠抗，具有高度親和性(Kd=0.1nM)和特異性，顯著降低免疫原性(HAMA)HER2狀態(tài)是選擇赫賽汀?的重要指標(biāo)赫賽汀?——靶向HER2的人源化單抗用于治療HER2陽性乳腺Her-2的概況Her-2:又名C-erbB-2,Her-2/neu屬于EGFR家族成員為原癌基因,編碼跨膜型酪氨酸激酶生長因子受體25~30%的乳腺癌為Her-2基因的擴(kuò)增/過度表達(dá)

Her2基因擴(kuò)增的乳腺癌被認(rèn)為對內(nèi)分泌治療相對不敏感Her-2的概況Her-2:又名C-erbB-2,Her1.000.750.500.250累計生存率024487296120144無擴(kuò)增擴(kuò)增基因擴(kuò)增:>10拷貝數(shù)無基因擴(kuò)增:<3拷貝數(shù)臨界值:不包括死亡時間(月數(shù))Logrankp<0.001RossJS,FletcherJA.StemCells1998;16:413–428

HER-2擴(kuò)增患者無病生存期縮短淋巴結(jié)陰性SeshadriRetal.JClinOncol1993;11:1936–42100806040200

0122436486072無病生存概率死亡時間(月數(shù))HER2基因<3拷貝數(shù)HER2基因33拷貝數(shù)對數(shù)秩檢驗p=0.001淋巴結(jié)陽性1.00累計生存率024HER-2基因擴(kuò)增檢測約有25%的乳腺癌病人HER2蛋白呈過度表達(dá)。人類表皮生長因子2，是由原癌基因編碼的HER2受體,HER2在調(diào)控正常細(xì)胞的生長和發(fā)育和分化中起重要作用。HER2原癌基因擴(kuò)增導(dǎo)致HER2受體在細(xì)胞表面過度表達(dá)。Ross,J.S.etal.Oncologist2003;8:307-325HER-2基因擴(kuò)增檢測約有25%的乳腺癌病人HER2蛋白呈過分子靶向治療赫賽汀(Herceptin)是針對腫瘤細(xì)胞Her-2基因靶點的第一個分子靶向藥物，為乳腺癌臨床治療帶來了新的突破。赫賽汀二線或三線單藥治療總有效率為19%。一線治療總有效率可達(dá)35%。中位生存期為24.4個月，且具有良好的耐受性。分子靶向治療赫賽汀(Herceptin)是針對腫瘤細(xì)胞HerHER2陽性可以預(yù)示蒽環(huán)類治療的獲益K.I.Pritchard2002.P=0.0307P=0.58HER2陽性

HER2陰性MA-5Trial(CMFvsCEF)DFSbyTreatment:FISH+MA-5Trial(CMFvsCEF)DFSbyTreatment:FISH-PritchardetalNEJM2006HER2陽性可以預(yù)示蒽環(huán)類治療的獲益K.I.Pritch

HER2陰性HER2陽性paclitaxelNopaclitaxelpaclitaxelNopaclitaxelHER2陽性可以預(yù)示紫杉醇的獲益-CALGB9344研究HayesetalASCO2006HER2陰性HER2陽性paclitaxelNoMuss,etal.NEJM1994HER2低表達(dá)HER2過表達(dá)Mussetal,NEJM1995CAF密集方案的療效與HER2狀態(tài)密切相關(guān)CALGB8541Muss,etal.NEJM1994HER2低表達(dá)

HER-2/neuPredictiveTherapeuticOutcome*-Muss,H.B.etal,NEJM330:1260-1226,1994.**使用高劑量的化療藥物(?)對于HER-2/neu（-）患者的病情沒有明顯的改善HER-2/neu（+）的患者使用高劑量的化療藥物(?)后病情有了明顯的改善

HER-2/neuPredictiveTherapeu初診時明確HER2的重要性2000ASCO建議2005StGallen專家共識建議Goldhirschetal2005預(yù)后評估預(yù)后差療效預(yù)測從赫賽汀?的治療中最大獲益芳香化酶抑制劑的療效優(yōu)于三苯氧胺蒽環(huán)類和紫杉類的療效優(yōu)于CMF初診時明確HER2的重要性2000ASCO建議Goldhi內(nèi)分泌治療HER2陽性患者相對耐藥CMF方案 HER2陽性患者相對耐藥蒽環(huán)類 對大劑量蒽環(huán)類相對敏感紫杉類藥物相對敏感HER2陽性狀態(tài)可以預(yù)示腫瘤對常規(guī)治療的反應(yīng)情況內(nèi)分泌治療HER2陽性患者相對耐藥HER2陽性狀態(tài)中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2007版）中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2007版）乳腺癌石蠟組織標(biāo)本

FISHIHC01+2+3+赫賽汀內(nèi)分泌治療CMF蒽環(huán)類藥物紫杉醇乳腺癌石蠟組織標(biāo)本

FISHIHC01+2+3+赫什么是乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增？HER-2基因定位于17q11.2-q12由于17號染色體非整倍體造成的HER-2基因增加不是HER-2基因擴(kuò)增，與赫賽汀治療效果不相關(guān)；只有HER-2基因自身擴(kuò)增才是真正的HER-2擴(kuò)增什么是乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增？HER-2基因定位于17q1確認(rèn)單細(xì)胞在47%的乳腺癌病例中17號染色體發(fā)生倍數(shù)的變化17號染色體非整倍性的擴(kuò)增的不同提供了分類的必要依據(jù)CSP17探針同時也是一個內(nèi)參照

為什么要同時使用CSP17？確認(rèn)單細(xì)胞為什么要同時使用CSP17？HER-2基因擴(kuò)增示例圖1HER-2基因擴(kuò)增示例圖1HER-2基因擴(kuò)增示例圖2HER-2基因擴(kuò)增示例圖2HER-2擴(kuò)增檢測的臨床意義指導(dǎo)臨床赫賽汀的使用指導(dǎo)臨床常規(guī)化療藥物的應(yīng)用風(fēng)險預(yù)測HER-2擴(kuò)增檢測的臨床意義TOP2A基因異常檢測

TOP2AAberrationsin

BreastCancerTOP2A基因異常檢測

TOP2AAberrationsTOP2A拓?fù)洚悩?gòu)酶α由于TOP2A基因也定位與17q染色體，并且與Her-2基因相隔很近，而且，拓?fù)洚悩?gòu)酶IIα是蒽環(huán)類抗生素的靶酶，因此有推斷稱使用TOP2A基因狀態(tài)來預(yù)測患者對含蒽環(huán)類藥物治療方案，更為準(zhǔn)確。TOP2A拓?fù)洚悩?gòu)酶α由于TOP2A基因也定位與17q染色什么是TOP2A基因異常?TOP2A基因定位于17q21.1，是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的基因；TOP2A基因異常包括擴(kuò)增和缺失兩種情況。什么是TOP2A基因異常?TOP2A基因定位于17q21.1蒽環(huán)類藥物治療的機(jī)制蒽環(huán)類藥物是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，研究表明它可能是通過抑制腫瘤細(xì)胞DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的活性而抑制腫瘤細(xì)胞的分化發(fā)育。蒽環(huán)類藥物治療的機(jī)制蒽環(huán)類藥物是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，研究表檢測TOP2A基因的意義TOP2A基因異常的病人預(yù)示著更短的無復(fù)發(fā)生存期（recurrence-freesurvival，RFS）但總生存期并無改變，TOP2A缺失的病人預(yù)后更差由于TOP2A基因也定位與17q染色體，并且與Her-2基因相隔很近，而且，TOP2A基因所編碼的蛋白拓?fù)洚悩?gòu)酶IIα是蒽環(huán)類抗生素的靶酶，研究發(fā)現(xiàn)使用TOP2A基因狀態(tài)來預(yù)測患者對含蒽環(huán)類藥物治療方案，更為準(zhǔn)確；檢測TOP2A基因的意義TOP2A基因異常的病人預(yù)示著更短的檢測TOP2A基因的意義在對晚期乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn),TopoⅡα的基因表達(dá)和腫瘤細(xì)胞對拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的敏感性明顯相關(guān)TOP2A基因異常的病人可以明顯受益于含有拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的輔助化療方案；TOP2A擴(kuò)增的病人使用CEF方案進(jìn)行治療可以降低61%的復(fù)發(fā)風(fēng)險和51%的死亡風(fēng)險，而沒有TOP2A擴(kuò)增的患者使用CEF方案只能降低6%的復(fù)發(fā)風(fēng)險和10%的死亡風(fēng)險。檢測TOP2A基因的意義在對晚期乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn),TopoTOP2A與HER-2的相關(guān)性TOP2A和Her-2/neu原癌基因在染色體上的位置非常鄰近，均定位于17q11.2-22區(qū)域；研究證實，在乳腺癌中Her-2/neu基因擴(kuò)增又與其鄰近位點上的TOP2A基因改變呈正相關(guān)；當(dāng)Her-2/neu基因在乳腺癌中過度表達(dá)時，通過多種途徑參與跨膜信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)及促進(jìn)細(xì)胞的增殖，這可能是TOP2A基因擴(kuò)增的原因；TOP2A與HER-2的相關(guān)性TOP2A和Her-2/neuTOP2A與HER-2的相關(guān)性研究表明，對于her-2擴(kuò)增陽性的乳腺癌患者，使用赫賽汀后會得到更好的預(yù)后效果，并且，使用大劑量蒽環(huán)類藥物的治療效果要優(yōu)于常規(guī)劑量的治療效果，這可能是由于HER-2與TOP2A的正相關(guān)性原因所致；盡管大部分her-2擴(kuò)增的患者都存在TOP2A基因的擴(kuò)增，但并不能使用her-2狀態(tài)來預(yù)測TOP2A基因的狀態(tài)；而且，并不是所有存在TOP2A基因擴(kuò)增的患者都會有topoIIα蛋白的高表達(dá)，如果使用topoIIα蛋白對腫瘤的增生狀態(tài)進(jìn)行評測，結(jié)果將會收到一定的影響TOP2A與HER-2的相關(guān)性研究表明，對于her-2擴(kuò)增陽預(yù)測含蒽環(huán)類藥物治療方案的療效

ActaOncologica,2008;47:725_734TOP2A異常，使用恩環(huán)類藥物的RFS和OS比使用CMF的長CEFCMFCEFCMFTOP2A基因異常檢測試劑盒臨床意義(一)預(yù)測含蒽環(huán)類藥物治療方案的療效ActaOncologic對患者預(yù)后進(jìn)行判斷ActaOncologica,2008;47:725_734正常擴(kuò)增缺失正常擴(kuò)增缺失TOP2A基因異常檢測試劑盒臨床意義(二)

TOP2A基因異常的患者預(yù)后差對患者預(yù)后進(jìn)行判斷ActaOncologica,2008;預(yù)測含蒽環(huán)類藥物治療方案的療效

對患者預(yù)后進(jìn)行判斷TOP2A基因異常檢測TOP2A基因異常檢測分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件在膀胱癌中的應(yīng)用在膀胱癌中的應(yīng)用概述FISH技術(shù)膀胱癌FISH探針方法學(xué)FISH結(jié)果分析和判斷概述

膀胱鏡檢查及細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測是診斷及監(jiān)測膀胱癌最重要的二種手段。然而，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測敏感性低，膀胱鏡檢查病人痛苦，難以接受。從尿液中檢測與膀胱癌發(fā)生相關(guān)的抗原雖靈敏性高于細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測，但特異性較低，不能成為可靠的診斷指標(biāo)。概述1概述1

隨著對膀胱癌遺傳學(xué)改變的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)9號染色體部分（如p16位點）或全部丟失是最常見遺傳學(xué)改變，且這一改變與膀胱癌的早期發(fā)生密切相關(guān)。此外，膀胱癌的發(fā)展與染色體不穩(wěn)定性也緊密相連，特別是與3號、7號及17號染色體的非整倍性密切相關(guān)。目前的臨床研究顯示，對尿液或膀胱沖洗液中細(xì)胞進(jìn)行以上遺傳學(xué)改變的檢測對膀胱癌的早期診斷及病程監(jiān)測有很大的價值，其靈敏度高于細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測，特異性則與細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測相當(dāng)。概述2隨著對膀胱癌遺傳學(xué)改變的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)9號染

檢測以上遺傳學(xué)改變標(biāo)準(zhǔn)方法為FISH技術(shù)。故在歐美等國，由于尿液檢測的非創(chuàng)傷性及非痛苦性FISH技術(shù)已成為排除血尿病人患膀胱癌的最有效的方法之一。

有報道,FISH檢測膀胱癌的靈敏度大約80%,特異性大約96%概述3檢測以上遺傳學(xué)改變標(biāo)準(zhǔn)方法為FISH

膀胱癌檢測FISH探針膀胱癌檢測FISH探針膀胱癌FISH

探針組(一)膀胱癌FISH探針組(一)膀胱癌FISH探針組(二)膀胱癌FISH探針組(二)FISH結(jié)果分析和判斷FISH結(jié)果分析和判斷

分析方法閾值建立結(jié)果判斷臨床意義

分析方法分析方法

檢測每組探針在間期細(xì)胞中信號.確定結(jié)果是否為陽性或陰性分析方法檢測每組探針在間期細(xì)胞中信號.分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件結(jié)果判斷如果檢測值大于閾值(M+3SD),判定為陽性結(jié)果如果檢測值小于閾值(M+3SD),判定為陰性結(jié)果如果檢測值等于閾值,增加觀測樣本細(xì)胞的數(shù)量結(jié)果判斷如果檢測值大于閾值(M+3SD),判定為陽性結(jié)果臨床意義發(fā)現(xiàn)一種異常,提示被檢測人患膀胱癌可能性較高.發(fā)現(xiàn)兩種異?；蛲环N異常的多次出現(xiàn),

提示被檢測病人患膀胱癌.臨床意義發(fā)現(xiàn)一種異常,提示被檢測人患膀胱癌可能性較高.分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件分子病理學(xué)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用課件在子宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用及治療策略探討在子宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用及治療策略探討一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進(jìn)展內(nèi)容介紹二、宮頸癌致病原因的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展四、宮頸癌的常用臨床方法應(yīng)用介紹五、宮頸癌早期診斷及臨床治療策略三、臨床檢測TERC基因的意義一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進(jìn)展內(nèi)容介紹二、宮頸癌致病原因一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W研究進(jìn)展一、宮頸癌的概述及其病因?qū)W宮頸癌－－最常見的婦科惡性腫瘤據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計，每年大約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的5%，其中80%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年宮頸癌新發(fā)病例約13.15萬，占世界宮頸癌新發(fā)病例總數(shù)的28.8%，發(fā)病率僅次于乳腺癌位居第二。隨著篩查制度的建立，世界宮頸癌的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)大幅下降。我國由70年代的10.28/10萬下降到90年代的3.25/10萬，但在高發(fā)病區(qū)，死亡率仍高居不下。宮頸癌－－最常見的婦科惡性腫瘤據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計，每生物學(xué)因素：如細(xì)菌、病毒和衣原體等各種微生物的感染。行為危險因素：如性生活過早、多個性伴侶、多孕多產(chǎn)、社會經(jīng)濟(jì)地位低下、營養(yǎng)不良及性混亂等；目前僅有少量研究表明宮頸癌可能存在著家族聚集現(xiàn)象。子宮頸癌的危險因素子宮頸癌的危險因素二、宮頸癌致病原因的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展二、宮頸癌致病原因的*早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniStern最早提出結(jié)婚與否與宮頸癌的發(fā)生可能有關(guān)；

*60－70年代，人們的主要研究對象是HSV,HCMV等病原體；

*1974年zurHausen首次提出HPV感染與宮頸腫瘤有密切關(guān)系；

*1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭狀瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）顆粒；

*1995年IARC專題討論會：高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要病因。

---99.7％的宮頸癌患者都能發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染。

宮頸癌的生物學(xué)病因研究進(jìn)展*早在十九世紀(jì)四十年代，一位意大利醫(yī)生RegoniSterHPV的致癌機(jī)理HPV以游離態(tài)感染上皮細(xì)胞后，可以持續(xù)存在于染色體外，不引起任何病變，或引起良性病變和低度病變，如尖銳濕疣或輕度不典型增生等。而癌變則與病毒DNA整合入宿主染色體密切相關(guān)。高危型HPVDNA鏈通常在E1或E2的開放讀碼框內(nèi)斷裂，使HPVDNA整合入染色體脆弱區(qū)。E6和E7具有促進(jìn)和維持整合狀態(tài)的功能HPVE6蛋白間接抑制p53活性，阻礙細(xì)胞對DNA損傷的反應(yīng)。（負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和分化）HPVE7蛋白與pRb結(jié)合后使其功能失活，改變細(xì)胞周期的正常調(diào)控HPV的致癌機(jī)理

型別：已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型（如果DNA序列同源性小于90％，則定為新的亞型）。其中超過35種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關(guān)。

1）低危型：宮頸上皮內(nèi)低度病變，引起外生殖器濕疣等良性性病（HPV6、11、42、43、44

）；

2）高危型：宮頸上皮內(nèi)高度病變，與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、

52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4

）；

分布：有些亞型和地區(qū)、宮頸癌的病理類型有關(guān)。

HPV45在非洲西部很常見，HPV39和59在美洲中部和南部常見，HPV52，58在中國常見。

在宮頸鱗狀上皮細(xì)胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鱗癌中HPV18分別占56％和39％。型別與分布型別：已發(fā)現(xiàn)100多種不同的亞型（如果DNA序列同1995年IARC專題討論會：高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的主要病因。

---99.7％的宮頸癌患者都能發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染。1995年IARC專題討論會：高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌的正常婦女HPV暴露主要是性傳播感染幾率：>40％HPV年齡<30歲一過性，80％平均8個月年齡>30歲平均8~24個月CINI（組織學(xué)）CINII/III（組織學(xué)）無細(xì)胞學(xué)改變/HPV消除子宮頸浸潤癌機(jī)體免疫機(jī)制輔助致癌因素

HPV感染與宮頸病變的自然過程潛伏感染期亞臨床感染期臨床癥狀期HPV相關(guān)腫瘤期8－10年正常婦女HPV暴露主要是性傳播HPV年齡<30歲一過性，80細(xì)胞非典型性發(fā)育異常細(xì)胞癌變阻止細(xì)胞正常凋亡高危型HPV持續(xù)性感染人類染色體端粒酶基因(hTERC)擴(kuò)增致癌基因E6/E7編碼的原癌蛋白表達(dá)TERC基因的擴(kuò)增可阻止細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生細(xì)胞非典型性發(fā)育異常細(xì)胞癌變阻止細(xì)胞正常凋亡高危型HPV持續(xù)hTERC基因與宮頸癌

hTERC基因是人染色體端粒酶的編碼基因端粒酶在大多數(shù)正常體細(xì)胞中無活性，隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加，端?？s短，細(xì)胞死亡。在宮頸癌中，端粒酶活性增加，維持端粒長度，細(xì)胞永生化，免于凋亡，發(fā)生癌變。hTERC基因與宮頸癌hTERC基因是人染色體端粒酶的編碼子宮頸細(xì)胞hTERC位點擴(kuò)增檢測試劑盒CSP3hTERC

hTERC基因定位于3q26.3

3號染色體著絲粒信號子宮頸細(xì)胞hTERC位點擴(kuò)增檢測試劑盒子宮頸細(xì)胞hTERC位點擴(kuò)增檢測試劑盒CSP3hTERC三、臨床檢測TERC基因的意義三、臨床檢測TERC基因的意義FISH在宮頸癌診斷中的應(yīng)用宮頸癌發(fā)生及發(fā)展階段正?！鶤SCUS→CIN1→CIN2→CIN3（原位癌）→浸潤癌人類染色體端粒酶（hTERC）基因，GLPTERC:3q26.3FISH在宮頸癌診斷中的應(yīng)用有效進(jìn)行子宮頸癌前病變的病理分級有效進(jìn)行子宮頸癌前病變的病理分級以hTERC基因擴(kuò)增陽性診斷CIN2或CIN2以上病變的敏感度為82.17%,特異度為95.02%輔助病理分級以hTERC基因擴(kuò)增陽性診斷CIN2或CAmJPathol2003,163:1405–1416

參考文獻(xiàn)以hTERC基因擴(kuò)增陽性診斷HSLI以上病變的敏感性為92%，特異性為91%。輔助TBS分級AmJPathol2003,參考文獻(xiàn)輔助TBS分級衛(wèi)生部多中心臨床試驗

FISH檢測子宮頸上皮細(xì)胞hTERC基因擴(kuò)增的臨床應(yīng)用研究：

本課題全國共86個單位參加。共檢測8443例宮頸細(xì)胞學(xué)樣本。其中7271例有病理結(jié)果。衛(wèi)生部多中心臨床試驗FISH檢測子宮頸上皮細(xì)胞hTER宮頸癌FISH檢測臨床意義伴有hTERC基因擴(kuò)增的癌前病變的病人有52%－96%的惡變可能。

可預(yù)測CIN1/CIN2向CIN3發(fā)展的風(fēng)險因素，其靈敏度是100%，特異性是70%.

FISH是進(jìn)行篩查，早期診斷和風(fēng)險預(yù)測的有效手段(AJPApril2005,Vol.166,No.4)宮頸癌FISH檢測臨床意義伴有hTERC基因擴(kuò)增的癌前病變的明確病理分級：將ASC-US/CIN1(低度癌前發(fā)育異常)和CIN2/CIN3(高度癌前病變)進(jìn)行區(qū)分，指導(dǎo)臨床治療方案選擇風(fēng)險預(yù)測，評估癌變可能性：對于CIN1/CIN2患者，TERC基因擴(kuò)增陽性的子宮頸病變患者發(fā)生進(jìn)展/惡變的可能性超過50%監(jiān)測癌變的發(fā)生和發(fā)展：對于Ascus以上級病變的隨訪及經(jīng)leep治療后復(fù)發(fā)的監(jiān)測TERC基因檢測的臨床意義明確病理分級：將ASC-US/CIN1(低度癌前發(fā)育異常)四、宮頸癌的常用臨床方法應(yīng)用介紹四、宮頸癌的常用臨床方法

臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最終發(fā)展為宮頸癌大約需要8-10年。因此，必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防和篩查措施，才能夠阻止宮頸癌的發(fā)生并有望最終消滅宮頸癌。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的支持下，婦科醫(yī)生應(yīng)該大有作為。篩查是早診早治關(guān)鍵臨床提示，從HPV的持續(xù)感染到一般的宮頸癌前病變并最宮頸癌的常規(guī)臨床檢測方法臨床檢查：如肉眼觀察、陰道鏡等操作簡便，但準(zhǔn)確率和特異性有待提高（50-70％）細(xì)胞學(xué)檢測：觀察宮頸上皮細(xì)胞的變異，常見方法有：巴氏涂片、LCT、TCT等（70%以上）

1）長期宮頸糜爛可導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞形態(tài)變異，但非HPV引起的細(xì)胞形態(tài)異常與宮頸癌病變沒有直接聯(lián)系。

2）在感染早期，細(xì)胞往往不會出現(xiàn)形態(tài)變化，但此時HPV對細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的損傷可能已經(jīng)產(chǎn)生。

病毒學(xué)檢測：HPVDNA檢測（PCR方法），常見方法有：基因芯片分型檢測、HC-2、熒光PCR等特異性強(qiáng)、靈敏度高，操作簡便快捷(98%)FISH檢查，尋找癌變前細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)的改變宮頸癌的常規(guī)臨床檢測方法五、宮頸癌早期診斷及臨床治療策略五、宮頸癌早期診斷及CINⅠ轉(zhuǎn)歸65%自行消退20%持續(xù)存在15%進(jìn)展？？CIN（CervicalIntraepithelialNeoplasm)病變的進(jìn)展CINⅠ轉(zhuǎn)歸65%自行消退20%持續(xù)存在15%進(jìn)展？？子宮頸癌篩查及診斷程序FISHFISH

FISH子宮頸細(xì)胞學(xué)篩查結(jié)果正常ASC—US非典型鱗狀上皮增生ASC—H不能排除HSIL的非典型臨床鱗狀上皮細(xì)胞HSIL高級鱗狀上皮內(nèi)病變LSIL低級鱗狀上皮內(nèi)病變陰道鏡檢查4-6個月后復(fù)查宮頸細(xì)胞學(xué)進(jìn)行HPV檢測12個月后行子宮頸細(xì)胞學(xué)篩查HPV陰性（高危型）重復(fù)宮頸細(xì)胞學(xué)檢查（6個月），或HPVDNA檢測（一年后）宮頸錐切陰道鏡檢查不滿意宮頸錐切?HPV陽性（高危型）CIN1,無CIN2,3CIN2,3陰道鏡檢查滿意子宮頸癌篩查及診斷程序FISHFISHFISH子宮頸細(xì)胞學(xué)陰道鏡檢查結(jié)果滿意隨訪（涂片、HPV）≥Asc-us或HPV（+）連續(xù)二次涂片（-）HPV（-）合并宮頸糜爛等陰道鏡檢每年隨診物理治療LEEPCIN1持續(xù)CIN1消退進(jìn)展CIN2/3TERC（－）TERC（＋）CINⅠ/LSIL的處理陰道鏡檢查結(jié)果滿意隨訪（涂片、HPV）≥Asc-us或HPV陰道鏡檢查不滿意診斷性切除孕期，青春期隨診動態(tài)觀察TERC（＋）TERC（－）陰道鏡不滿意的CIN1患者的處理陰道鏡檢查診斷性切除孕期，青春期隨診動態(tài)觀察TERC（＋）T陰道鏡檢查不滿意診斷性切除陰道鏡滿意破壞性物理治療病變局部切除TERC（＋）TERC（－）陰道鏡不滿意的CIN2患者的處理陰道鏡檢查診斷性切除陰道鏡滿意破壞性物理治療TERC（＋）T檢測TERC基因結(jié)果及推薦解決方案檢測TERC基因結(jié)果及推薦解決方案FISH檢測技術(shù)

在產(chǎn)前、產(chǎn)后診斷中的應(yīng)用FISH檢測技術(shù)

在產(chǎn)前、產(chǎn)后診斷中的應(yīng)用出生缺陷（birthdefects）：是指胚胎或胎兒在發(fā)育過程中發(fā)生解剖學(xué)和功能上的異常。國家人口和計劃生育委員會發(fā)布:

我國每年有2000萬名新生兒，出生缺陷患兒占全部出生人口的4%～6%,占全世界500萬出生缺陷兒的1/5。出生缺陷現(xiàn)狀其中大約有2.6萬個唐氏綜合癥患兒出生，全部治療要花掉20多億人民幣。大約有22萬先天性心臟病患兒出生，全部治療，要花掉160多億人民幣出生缺陷（birthdefects）：是指胚胎或胎兒在發(fā)育出生缺陷性疾病

染色體病：13三體綜合征、18三體綜合征、唐氏綜合癥Turner綜合征（45，X）、克氏綜合癥(47,XXY)等。單基因遺傳病：血友病、假性肥大性肌營養(yǎng)不良等。多基因遺傳?。荷窠?jīng)管畸形出生缺陷性疾病染色體病：13三體綜合征、18三體綜合征、可以檢測的疾病唐氏綜合癥（21三體）面部扁平、發(fā)育遲緩、智力低下;20~24歲,發(fā)病率1/800Patau綜合癥（13三體）智力嚴(yán)重缺陷，兔唇，易發(fā)心臟病；發(fā)病率1/8000Edward綜合癥（18三體）早夭，智障，殘指等；發(fā)病率在1/2000到1/8000，第二大染色體疾病Turner綜合癥(45，X)

先天性卵巢發(fā)育不全；活產(chǎn)女性新生兒發(fā)病率大約為1/2500Klinefelter綜合癥（47，XXY）先天性睪丸發(fā)育不全

Turner綜合癥13三體，唇腭裂可以檢測的疾病唐氏綜合癥（21三體）Turner綜合癥1FISH檢測的臨床特點FISH可以準(zhǔn)確且快速的檢測出13、18、21、X和Y染色體的數(shù)目異常，24小時出結(jié)果。FISH對樣本要求比較低，不需要細(xì)胞培養(yǎng)，間期細(xì)胞即可檢測。FISH檢測的臨床特點FISH可以準(zhǔn)確且快速的檢測出13、1FISH在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用(一)FISH技術(shù)在歐美國家產(chǎn)前診斷中起重要作用，獨立應(yīng)用FISH檢測占50%，與細(xì)胞學(xué)互補(bǔ)檢測廣泛應(yīng)用。2000年美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)院（ACMG）宣布，F(xiàn)ISH技術(shù)產(chǎn)前診斷結(jié)果可靠，與細(xì)胞染色體分析價值等同。2004年英國國立監(jiān)測委員會（UKNSC）建議唐篩高危孕婦，不需要常規(guī)核型分析，單純應(yīng)用21，18和13的探針進(jìn)行FISH診斷。FISH在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用(一)FISH技術(shù)在歐美國家產(chǎn)前診PrenatDiagn2001;21:293–301.FISH在產(chǎn)前遺傳性疾病中的應(yīng)用(一)結(jié)論：FISH和核型分析相比,檢測結(jié)果一致PrenatDiagn2001;21:293–301在50多家產(chǎn)前診斷中心完成有效病例總計5558例。FISH診斷成功率100%。核型分析8例羊水細(xì)胞培養(yǎng)失敗。8例羊水細(xì)胞培養(yǎng)失敗的病例，經(jīng)FISH診斷，1例為21-三體，1例為47,XXY，其余6例診斷正常。兩例異常病例后被核實，診斷正確。FISH在產(chǎn)前遺傳性疾病中的應(yīng)用(一)衛(wèi)生部多中心臨床試驗在50多家產(chǎn)前診斷中心完成有效病例總計5558例。FISH在產(chǎn)前染色體數(shù)目檢測臨床意義針對唐氏篩查陽性結(jié)果快速檢測。核型分析和FISH檢測是產(chǎn)前診斷的雙重保險。用于意外流產(chǎn)的胎兒的流產(chǎn)原因檢測？？產(chǎn)前染色體數(shù)目檢測臨床意義針對唐氏篩查陽性結(jié)果快速檢測。FISH熒光原位雜交平臺--基因檢測有力工具選擇靶向治療藥物輔助診斷癌癥預(yù)測疾病惡化風(fēng)險膀胱癌：P16基因、3、7、17號染色體數(shù)目非小細(xì)胞肺癌：EGFR基因乳腺癌/胃癌：Her-2基因、TOP2A基因?qū)m頸癌：TERC基因多發(fā)性骨髓瘤：P53、IGH、RB1、1q21慢淋：P53、ATM、RB1、D13S25急粒：AML1/ETO、ASS淋巴瘤：ＩＧＨ／ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、１１１１ＩＧＨ／ＣＣＮＤ１、C-MYC急/慢粒：BCR/ABL、PML/RARA融合基因FISH熒光原位雜交平臺--基因檢測有力工具選擇靶向治療藥物基因測序技術(shù)在臨床中應(yīng)用基因測序技術(shù)在臨床中應(yīng)用基因測序技術(shù)在癌癥基因研究及臨床治療領(lǐng)域的應(yīng)用將不但使我們能更快速可靠地對癌癥進(jìn)行診斷,對其發(fā)生的內(nèi)在分子機(jī)理也將有更深入的了解,同時也將對癌癥治療藥物的開發(fā)提供極大幫助?；驕y序技術(shù)在癌癥基因研究及臨床治療領(lǐng)域的應(yīng)用將不但使我們能與臨床醫(yī)學(xué)及病理密切相關(guān)的基因檢測項目

P53BRCA1、BRCA2APCK-rasApoEEGFRC-kitFVYMDDHNPCC片段分析尿路腫瘤微衛(wèi)星片段分析

與臨床醫(yī)學(xué)及病理密切相關(guān)的基因檢測項目P53P53基因P53基因定位于17號染色體短臂17p13.1，含有11個外顯子和10個內(nèi)含子，編碼由393個氨基酸組成，分子量為53KD核酸蛋白，包括DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄和激活結(jié)構(gòu)域。P53幾乎參與了所有惡性腫瘤和癌變的腫瘤發(fā)生和演進(jìn)過程。P53基因病理改變主要有突變、重排、缺失等。突變是主要的致病方式，最常見的突變部位在第5－9外顯子區(qū)域。P53基因P53基因定位于17號染色體短臂17p13.1，含臨床應(yīng)用

腫瘤診斷：肝癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、腸癌、前列腺癌、肺癌、食道癌、卵巢癌、腦腫瘤、軟組織肉瘤、骨肉瘤、白血病、淋巴瘤。癌前及癌相關(guān)家族：萎縮性胃炎、大腸息肉、腺瘤、宮頸異型增生、乙肝和丙肝、子宮內(nèi)膜不典型增生、痰、膀胱、糞便中異型細(xì)胞、乳腺囊性增生癥及腺病等、骨髓異常增生綜合癥、低惡肉瘤、淋巴造血疾病等。臨床應(yīng)用腫瘤診斷：肝癌、乳癌、膀胱癌、胃癌、腸癌、前列腺癌藥物分子靶點和耐藥基因：P53蛋白丟失，腫瘤細(xì)胞侵襲性增強(qiáng)，化療凋亡作用受抑。某些肉瘤如腦腫瘤和癌的分子藥物基因靶點治療和化療效果不佳。檢出P53基因突變，有利于對昂貴且毒副作用大的治療方案進(jìn)行科學(xué)調(diào)整，有突變者用P53腺病毒（今又生）治療更有針對性。臨床預(yù)后分析：P53基因突變癌癥患者的生存預(yù)期短，易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移且家族血親之間具腫瘤易感性。藥物分子靶點和耐藥基因：P53蛋白丟失，腫瘤細(xì)胞侵襲性增強(qiáng)，BRCA1基因

BRCA1外顯子約5.2KB全長序列，可分成44項完成全基因組檢測。BRCA2基因位于13q12-13，BRCA1抑癌基因位于染色體17q21，是目前極受重視與乳腺癌明確相關(guān)的易感基因，BRCA癌基因異常者在一生中患乳腺癌的理論概率為100％。BRCA1基因BRCA1外顯子約5.2KB全長序列，臨床應(yīng)用腫瘤診斷：BRCA1基因突變：主要為乳腺癌、卵巢癌，同時也有胰腺癌、胃癌、膽囊癌、惡性黑色素瘤、白血病、前列腺癌、子宮癌等。其中60％為1-5bp的缺失框移，19％為小插入，14％為無義突變，也有大缺失或插入及剪接子突變。伴卵巢癌的乳癌家系約有80%是由BRCA1的異常引起B(yǎng)RCA2基因突變：主要與家族性乳癌和男性乳癌發(fā)病有關(guān)，另也有上述其它系統(tǒng)的惡性腫瘤發(fā)生概率。臨床應(yīng)用腫瘤診斷：癌的分化：

BRCA1的突變及雜合子缺失與乳癌的中－低分化生物學(xué)行為有關(guān)，臨床上多表現(xiàn)為Ⅲ－Ⅳ期及早－晚期患者。癌前及癥前診斷：主要用于乳癌、卵巢癌及消化系統(tǒng)癌癥家族患者的基因突變檢測。癌的分化：APC基因APC基因位于第五號染色體的長臂（5q21-22），長達(dá)120KB，共有21個外顯子。APC基因突變主要位于基因中段的第9-11外顯子，其中密碼子第1061，1309的突變占了20%。患者可次序發(fā)生1000個以上的息肉，年齡輕，癌變早。APC基因前、后段的基因突變與數(shù)量較少的小息肉有關(guān)，發(fā)病年齡較晚?？砂橛欣w維瘤病，后者與第1444位密碼子突變有關(guān)。如在第386和1465位的突變，對野生型APC基因干擾弱，息肉少，發(fā)病年齡較晚。APC基因突變分為有害（輕，中，重），多態(tài)性，和意義不明性。須結(jié)合病理形態(tài)診斷來評估基因突變的臨床病理意義APC基因APC基因位于第五號染色體的長臂（5q21-22臨床應(yīng)用家族性腺瘤性息肉?。‵AP）：APC致病基因突變，幾乎100%的預(yù)示該家族成員的息肉存在（WHO資料）惡變可能，需密切復(fù)查腸鏡病理檢查。

Gardner綜合征：除了腸腺瘤外，病人還有表皮樣囊腫，骨瘤，牙疾和纖維瘤病。

特克綜合征（Turkotsyndrome）：多發(fā)性腸腺瘤伴腦髓母細(xì)胞瘤。

減性家族性腺瘤性息肉（AtteneuatedFAP）:腺瘤少于100個，發(fā)病晚，癌變率較低。臨床應(yīng)用家族性腺瘤性息肉?。‵AP）：APC致病基因突變，幾其他：APC基因突變相關(guān)的疾病和腫瘤還有遺傳性大腸癌組織APC基因突變率高達(dá)70%-90%以上，散發(fā)性大腸癌組織中也有30%以上的突變率.癌組織體細(xì)胞APC基因突變，意味著癌變的早期分子事件，腫瘤的亞克隆選擇，去分化惡性演進(jìn)，浸潤轉(zhuǎn)移耐藥等生物學(xué)行為暫未發(fā)生，預(yù)后尚好。肺癌、胃癌、食道癌、肝癌、乳腺癌等也有不同比例的APC基因突變。其他：APC基因突變相關(guān)的疾病和腫瘤還有遺傳性大腸癌組織AP注意事項：檢查材料主要是腸鏡病理活檢息肉或腫瘤組織，石蠟包埋病變組織，血液等。APC基因與NHPCC微衛(wèi)星不穩(wěn)定都是早期癌基因檢測互補(bǔ)項目，最好結(jié)合應(yīng)用。大腸多發(fā)性腺瘤性息肉病APC基因突變測序，也可檢測胃癌，乳腺癌，胰腺癌及癌前病變和少數(shù)肉瘤的APC癌基因突變。它反映早期的癌變趨勢。注意事項：Ras基因Ras基因家族由H-ras、K-ras和N-ras組成。我們檢測K-RAS最常突變第一外顯子點突變常位于第12、13、59或61密碼子處，不同的ras基因突變在不同的腫瘤中呈優(yōu)勢激活。Ras基因Ras基因家族由H-ras、K-ras和N-ras臨床應(yīng)用：

腫瘤診斷：

K-ras突變：腸癌、胃癌、胰腺癌、肺癌等為主

H-ras突變：急慢性淋巴造血系腫瘤為主

N-ras突變:泌尿系腫瘤為主癌前及家系檢查：癌前疾病患者ras基因突變提示細(xì)胞早期的惡性轉(zhuǎn)化。癌病家族受檢者ras基因突變提示正常細(xì)胞的惡性演進(jìn)和癌變。臨床應(yīng)用：腫瘤診斷：ApoE基因APOE（載脂蛋白E）基因位于19q，全長3.7Kb，含有4個外顯子，產(chǎn)生的APOE功能蛋白是低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白和乳糜微粒受體的配基。既進(jìn)行脂質(zhì)代謝，也活化水解脂肪的酶類。APOE表型異常患者表現(xiàn)為脂質(zhì)代謝疾?。ǜ吣懝檀及Y）、心腦血管病、高血壓、肥胖、糖尿病、腦卒中和冠心病、神經(jīng)再生退行性變（老年性癡呆）和免疫調(diào)節(jié)紊亂（橋本甲狀腺功能低下和腫瘤易感）、它汀降脂類耐藥及高血壓耐藥等。ApoE基因APOE（載脂蛋白E）基因位于19q，全長3.7APOE基因在正常人群中呈多態(tài)性表現(xiàn)，即人群中有不同的APOE類型，導(dǎo)致人類發(fā)病種類和危險頻率呈明顯的差異性。APOE在同一基因座位有三個不同的等位基因（ε2ε3ε4）可編碼成三個純合子（ε2/2，ε3/3、ε4/4）和三個雜合子（ε2/3、ε2/4ε3/4），形成6種不同的基因型，從而表現(xiàn)出不同的致病狀態(tài)。APOE的等位基因中ε3頻度最高達(dá)60-80％，ε4的頻度約10％，ε2頻度小于10％，這正是人類檢測APOE多態(tài)性的目的意義。APOE基因在正常人群中呈多態(tài)性表現(xiàn)，即人群中有不同的APO臨床應(yīng)用：

預(yù)報老年性癡呆發(fā)病率可能概率，特別是家族性受檢者。檢查高脂血癥發(fā)病和分型，治療療效和耐藥。監(jiān)測腦血管病復(fù)發(fā)性出血（腦梗塞）并作出警示性預(yù)報。監(jiān)測冠心病發(fā)病狀況。監(jiān)測糖尿病和腎病發(fā)病狀況。對原發(fā)性高血壓可評估家族性發(fā)病，治療耐藥及內(nèi)臟器質(zhì)損害現(xiàn)象。對絕經(jīng)和更年期婦女進(jìn)行激素替代治療。ε2基因者可使總膽固醇明顯升高，故需事先檢測APOE基因。評價婦女絕經(jīng)期綜合征。臨床應(yīng)用：預(yù)報老年性癡呆發(fā)病率可能概率，特別是家族性受檢者ε4/4基因型者比ε3/4者老年癡呆尤其是血管型癡呆發(fā)病率更高，且發(fā)病年齡明顯提前，程度加重，對治療AD的他克林類藥呈耐藥性，并且是早發(fā)冠心病中年猝死的獨立致病因子。缺血性心腦血管病（ICVD）也呈高發(fā)，對調(diào)脂的他汀類呈耐藥性。ε4/4基因型者Ⅳ型高脂血癥明顯增高并與高TC、LDL-C和APOB水平密切相關(guān)。ε3/4基因型者是高膽固醇血癥和遺傳易感性高危因子，發(fā)生心肌梗塞的年齡提前，且老年性癡呆的發(fā)病率比非ε4者高3倍以上。高血壓呈耐藥性。ε2/4基因型有中等量的腦復(fù)發(fā)出血梗塞率和糖尿病腎病綜合癥發(fā)生率。高血壓呈一定耐藥性。ε4/4基因型者比ε3/4者老年癡呆尤其是血管型癡呆發(fā)病率

ε3/3基因型者為缺血性腦血管病低發(fā)性保護(hù)因子，尚使保護(hù)性高密度脂蛋白呈高水平，故屬優(yōu)良的APOE基因型。但可在腦缺血腦梗塞患者中致復(fù)發(fā)致死性出血。高血壓患者經(jīng)適當(dāng)藥物保護(hù)可明顯減少內(nèi)臟器質(zhì)病變。ε2/3基因型老年癡呆發(fā)病率低，發(fā)病年齡晚，與長壽有關(guān)，屬保護(hù)性基因型。但可發(fā)生缺血性腦病（ICVD）。婦女更年期后激素替代治療時總膽固醇可明顯升高。ε2/2基因型者幾乎均為Ⅲ型高脂血癥，早期發(fā)生動脈硬化，但對心臟呈保護(hù)性，對糖尿病呈低發(fā)性，但有糖尿病的治療性胰島素抵抗。女性絕經(jīng)激素替代治療時總膽固醇明顯升高。ε3/3基因型者為缺血性腦血管病低發(fā)性保護(hù)因子，尚使保護(hù)EGFR基因EGFR基因家族最常應(yīng)用為Her1（受體酪氨酸激酶TK）和Her2（Cerb-B2）兩類，其中EGFR-TK調(diào)控癌細(xì)胞的浸潤，分化，轉(zhuǎn)移。近年來針對該基因的靶向藥物Iressa（易瑞沙）和Tarciva（它西瓦）治療非小細(xì)胞肺癌為首的上皮性腫瘤起到神奇的療效。最關(guān)鍵的機(jī)理已經(jīng)明確，當(dāng)EGFR第18，19，21外顯子發(fā)生各種突變時，易瑞沙療效達(dá)90％以上,而沒有化療的毒副作用。EGFR基因EGFR基因家族最常應(yīng)用為Her1（受體酪氨酸激臨床應(yīng)用：

各種非小細(xì)胞肺癌占肺癌發(fā)病率80％以上，尤其是在經(jīng)過Ⅲ、Ⅳ期晚期癌癥化療后病人，轉(zhuǎn)移的病人，體弱的老年性病人；特別適合檢測亞洲婦女肺腺癌和不吸煙者，突變率高達(dá)26-40％；各種惡性上皮性腫瘤如大腸癌，乳腺癌，前列腺癌，甲狀腺癌，胃癌，食道癌，肝癌；體檢發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變，意味著機(jī)體細(xì)胞的增生/凋亡比例發(fā)生異常，需立即對機(jī)體相關(guān)器官進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查和隨訪，比如提示子宮平滑肌瘤的增生。臨床應(yīng)用：各種非小細(xì)胞肺癌占肺癌發(fā)病率80％以上，尤其是在

c-kit基因C－kit基因t（8；21）（q22；q22）的慢?；颊哂蠦CR/ABL融合基因疾病而受體酪氨酸激酶通路突變，主要是C-kit基因的第8外顯子常發(fā)生突變及缺失。針對該類基因靶點的藥物格列衛(wèi)（Gleveev伊馬替尼）可以修飾上述基因缺陷，也可抑制BCR/ABL融合基因腫瘤細(xì)胞。近來發(fā)現(xiàn)在抑制PDGF受體SCF（干細(xì)胞）和C－kit基因突變的其他肉瘤和胃腸間質(zhì)瘤有明確的療效，主要依賴于C-KIT基因的突變，因此療效直接依賴基因測序的結(jié)果。c-kit基因C－kit基因t（8；21）（q22；q22臨床應(yīng)用：

胃腸道間質(zhì)瘤的術(shù)前術(shù)后的單藥治療，該類腫瘤除了手術(shù)切除外，不能進(jìn)行有效的化療，而服用40ng/日的格列衛(wèi)可達(dá)到良好的療效；對胃腸道外的間質(zhì)細(xì)胞腫瘤某些所謂的平滑肌瘤也有良好的療效；對慢性粒細(xì)胞白血病（CML）的急變期，母化期和干擾素治療失敗后的慢?；颊?，甚至某些骨髓纖維化的患者也有相當(dāng)?shù)寞熜?；對上述患者的惡性程度提高的惡性轉(zhuǎn)化應(yīng)用有效。臨床應(yīng)用：胃腸道間質(zhì)瘤的術(shù)前術(shù)后的單藥治療，該類腫瘤除了手FV基因FV基因位于染色體1q21－25，全長為80Kb，包含25個外顯子和24個內(nèi)含子。FV的功能是多方面的，一方面通過參與構(gòu)成凝血酶原復(fù)合物而促進(jìn)凝血；另一方面通過APC途徑而抑制凝血。后者包括FV可直接被APC滅活以及FV參與APC對FⅧ的滅活兩個方面。FV基因FV基因位于染色體1q21－25，全長為80Kb，包臨床應(yīng)用大手術(shù)病人，骨科手術(shù)病人，腫瘤病人，長期臥床病人和長途飛行者，如攜帶F5基因突變，易發(fā)生肺、腦梗死意外。臨床應(yīng)用大手術(shù)病人，骨科手術(shù)病人，腫瘤病人，長期臥床病人和長尿路腫瘤微衛(wèi)星片段分析

根據(jù)WHO尿路上皮癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，按照遺傳學(xué)穩(wěn)定和不穩(wěn)定把尿路癌分為浸潤型和非浸潤型，依據(jù)中國，日本等亞洲國家遺傳學(xué)特點，設(shè)計了D9S283、D9S162、IFNA、D4S243、D17S695、D9S171、TGFbRⅡ