環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗(yàn)證課件

環(huán)境消毒、監(jiān)測與驗(yàn)證

耳輪第一部分：潔凈區(qū)清潔與消毒第二部分：潔凈室環(huán)境監(jiān)測第三部分：設(shè)備清潔本章內(nèi)容：

我們已經(jīng)走得太遠(yuǎn)，以至于忘記了為什么而出發(fā)。

黎巴嫩紀(jì)伯倫（1883～1931）心得：表面擦拭手工噴霧蒸汽熏蒸（熱過程）干霧消毒、滅菌（冷處理）房間消毒的方法一種效果非常好的潔凈房間的消毒方式。在越來越“以人為本”和“環(huán)境保護(hù)”的今天，應(yīng)該格外關(guān)注“甲醛”和“臭氧”等氣體消毒劑的不良影響。熏蒸熏蒸（fumigating）滅菌概念：這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP

，如今已為世界各國普遍接受和采用。在一定溫度和壓力的密閉條件下，化學(xué)毒劑由固態(tài)或液態(tài)迅速轉(zhuǎn)成氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。熏蒸有助于降低潔凈區(qū)內(nèi)死角的微生物污染。

熏蒸消毒：

消毒滅菌時(shí)間：

12小時(shí)接觸時(shí)間（通常推薦）。排氣、通風(fēng)時(shí)間：

24小時(shí)。一個(gè)漫長過程。甲醛熏蒸：殺菌徹底，廣譜可殺滅細(xì)菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。對霉菌也有極強(qiáng)的殺滅作用。無殘留，是一種無污染的消毒劑。臭氧是氣體滅菌，能迅速彌漫到整個(gè)滅菌空間，滅菌無死角。

臭氧滅菌3.1.7.4注意事項(xiàng)

(1)臭氧對人有毒，國家規(guī)定大氣中允許濃度為

0.2mg/m3。

(2)臭氧為強(qiáng)氧化劑，對多種物品有損壞，濃度越高對物品損害越重，可使銅片出現(xiàn)綠色銹斑、橡膠老化，變色，彈性降低，以致變脆、斷裂，使織物漂白褪色等。使用時(shí)應(yīng)注意。

(3)多種因素可影響臭氧的殺菌作用，包括溫度、相對濕度、有機(jī)物、pH、水的渾濁度、水的色度等。使用時(shí)應(yīng)加以控制。

臭氧熏蒸：衛(wèi)生部：消毒技術(shù)規(guī)范2002（4）酸類：如10%的乳酸用于熏蒸消毒。（5）氧化劑：作用于細(xì)菌酶系統(tǒng)。如0.2-0.5%過氧乙酸、高錳酸鉀、過氧化氫和臭氧等。（6）表面活性劑：作用于細(xì)菌質(zhì)膜，主要用于表面消毒、浸潤消毒和手消毒等。如0.1-0.2%新潔爾滅、0.05-0.1%杜滅芬、0.1-0.2%洗必泰。消毒劑：過氧化氫和過氧乙酸消毒方式：干霧消毒系統(tǒng)介紹一種消毒劑和消毒方式干霧：小液滴會(huì)反彈不會(huì)破碎。大液滴破碎而濕滑表面。生產(chǎn)7.5μm的液滴像氣體性質(zhì)

反彈離開表面不濕潤接觸的表面空間分布均勻，符合布朗運(yùn)動(dòng)原理。干霧系統(tǒng)潔凈區(qū)生物負(fù)荷研究（風(fēng)險(xiǎn)分析）潔凈區(qū)操作人員行為的規(guī)范規(guī)范潔凈區(qū)操作人員的行為是維持潔凈區(qū)平衡不可或缺的！潔凈區(qū)潔凈度平衡的維持細(xì)菌數(shù)：在細(xì)菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。真菌數(shù)：在真菌培養(yǎng)基上菌落形成單位的平均數(shù)。微生物總數(shù)=細(xì)菌數(shù)+真菌數(shù)微生物總數(shù)細(xì)菌、真菌培養(yǎng)基：細(xì)菌培養(yǎng)基上生長的真菌如何計(jì)數(shù)？真菌培養(yǎng)基上生長的細(xì)菌如何計(jì)數(shù)？微生物計(jì)數(shù)的困惑

！定義：在TSA（大豆酪蛋白瓊脂）培養(yǎng)基上生長的包括真菌的菌落形成單位總的數(shù)量。培養(yǎng)溫度/時(shí)間：1、細(xì)菌：30～35℃5天。

2、細(xì)菌：30～35℃2天；霉菌或酵母菌：20～25℃3天?？偤醚跷⑸飻?shù)（TAMC）：1、TAMC時(shí)，如果真菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被作為TAMC計(jì)數(shù)的一部分。2、TYMC時(shí)，如果細(xì)菌被發(fā)現(xiàn)生長，應(yīng)該被作為TYMC計(jì)數(shù)的一部分。3、當(dāng)TYMC由于細(xì)菌的生長而超過了可接受標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)當(dāng)使用含有抗生素的SDA培養(yǎng)基。計(jì)數(shù)原則：潔凈室環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基的選擇？

（關(guān)鍵區(qū)域使用培養(yǎng)基的特殊要求）潔凈區(qū)微生物監(jiān)測的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)（GMP2011版）《中國藥典》2010年版二部

附錄XIXQ“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”用于環(huán)境監(jiān)測的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。附錄B:B.3培養(yǎng)基平皿培養(yǎng)及保存制備好的培養(yǎng)基平皿宜在2～8℃保存，一般以一周為宜或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。采用適宜的方法在平皿上做好培養(yǎng)基的名稱、制備日期的標(biāo)記。

GB/T16293-2010/GB/T16293-20101、TSA用于細(xì)菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：30～35℃

不少于2天。2、SDA用于霉菌和酵母菌取樣。

培養(yǎng)溫度/時(shí)間：20～25℃不少于5天。環(huán)境測試培養(yǎng)基：3、用戶認(rèn)可并驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。以上摘自：GB/T16293-2010GB/T16294-2010環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素2、忽視培養(yǎng)基的選擇環(huán)境監(jiān)測中常忽視的兩個(gè)方面：（1）API的殘留（2）消毒劑/殺孢子劑的殘留1、忽視潔凈環(huán)境中的影響因素抗菌素藥物活性成分API

消毒劑/殺孢子劑常見的化學(xué)消毒劑：1、酚類2、醛類3、過氧化氫類4、季胺鹽類化合物5、以上混合物（1）選擇性低下，營養(yǎng)全面（2）含有中和劑（3）“無菌”平板培養(yǎng)基2、忽視培養(yǎng)基的選擇營養(yǎng)瓊脂胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）培養(yǎng)基的選擇參見：“中國藥典”2010年版附錄109頁附錄XIJ表1：“常見干擾物中和劑或滅活方法”中和劑的使用：青霉素酶（β-內(nèi)酰胺酶）

可以有效的水解β-內(nèi)酰胺類抗生素。

包括：

-青霉素G-氨基青霉素類，如氨芐西林、阿莫西林、匹氨西等

-羧基青霉素類，如羧芐西林、替卡西林等

-脲基青霉素類，如呋芐西林、美洛西林等

-頭孢Ⅰ、Ⅱ酶（1）：青霉素酶頭孢菌素酶

可以有效水解頭孢類抗生素Ⅲ及以上的頭孢類抗生素。

包括：頭孢羥氨芐、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢克肟、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松等。

酶（2）：頭孢菌素酶抵抗消毒劑的中和劑：1、吐溫-80

能夠消除六氯酚和含汞類消毒劑的影響。2、卵磷脂能夠消除洗必泰類消毒劑的影響。3、卵磷脂、吐溫-80

能夠消除季胺類化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響。

無菌平板培養(yǎng)基（預(yù)灌裝無菌培養(yǎng)基）理想的環(huán)境測試培養(yǎng)基：1、A級、B級、C級潔凈區(qū)直接使用2、室溫儲(chǔ)存3、有效期長4、無菌包裝、包裝完整5、特制平板6、培養(yǎng)基灌裝量大無菌平板培養(yǎng)基優(yōu)點(diǎn)：55mm接觸平板（RodacPlate）

ReplicateOrganismDetectionandCounting

GMP2011和EUGMP:-平板尺寸：15X55mm-取樣單位面積：25cm2

接觸板的取樣面積：24～30cm2

USP〈1116〉

潔凈室和其它控制環(huán)境的微生物評估

取樣面積：不小于20cm2

。取樣方法：

采樣時(shí)培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點(diǎn)接觸不少于10s，向整個(gè)接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動(dòng)，裝置有接觸并拿開后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。ISO14698潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境目前各類官方的指導(dǎo)原則中，很少有對潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測方法提出要求的。目前各類官方的指導(dǎo)原則中，各種微生物只有生長在如下兩種固體表面上的測試方法：瓊脂培養(yǎng)基和濾膜，才能夠得到確認(rèn)。潔凈環(huán)境微生物檢測：方法確認(rèn)培養(yǎng)基就是微生物檢驗(yàn)員的“分析儀器”。培養(yǎng)基的質(zhì)量控制相當(dāng)于“培養(yǎng)基驗(yàn)證”。培養(yǎng)基=“分析儀器”TSATSA+吐溫80+卵磷脂TSA+酶關(guān)鍵區(qū)域環(huán)境監(jiān)測培養(yǎng)基：第三部分：設(shè)備清潔第一百四十三條清潔方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，證實(shí)其清潔的效果，以有效防止污染和交叉污染。清潔驗(yàn)證應(yīng)當(dāng)綜合考慮設(shè)備使用情況、所使用的清潔劑和消毒劑、取樣方法和位置以及相應(yīng)的取樣回收率、殘留物的性質(zhì)和限度、殘留物檢驗(yàn)方法的靈敏度等因素。GMP2011年版：一、FDA對設(shè)備清潔“警告信”匯總二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？1、沒有定期對設(shè)備和器具進(jìn)行清潔與維護(hù)，有可能造成污染，并對藥品的安全性、鑒別特性、濃度/效價(jià)、質(zhì)量和純度造成影響。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：2、生產(chǎn)中所用的設(shè)備（包括器具）的清潔維護(hù)沒有建立完善的規(guī)程。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：3、沒有保存藥品生產(chǎn)中所用設(shè)備的維護(hù)、清潔、消毒和檢查記錄，無設(shè)備清潔、維護(hù)使用的記錄，包括日期及使用時(shí)間。FDA關(guān)于設(shè)備潔凈“警告信”統(tǒng)計(jì)：寫好要做的做好所寫的記好所做的“GMP”口號：二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？活性成分殘留輔料殘留物（非水溶性）清潔劑和溶劑殘留生物細(xì)胞及代謝物殘留微生物潤滑油殘留物分類：制劑殘留關(guān)注點(diǎn)：二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？1、實(shí)際的2、可以被驗(yàn)證的3、可實(shí)現(xiàn)的4、能夠經(jīng)得起科學(xué)推敲的限度和可接受標(biāo)準(zhǔn)制定原則：PDA技術(shù)報(bào)告：1998增刊52卷第6號1、目檢（肉眼檢測）2、化學(xué)檢驗(yàn)3、微生物檢驗(yàn)限度規(guī)格制定的三個(gè)層面：原則：目檢不得有可見殘留。是直觀、定性、簡單評估清潔的方式經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)：目見能發(fā)現(xiàn)最低的殘留物限度是1～4μg/cm2這是換品種生產(chǎn)時(shí)設(shè)備清潔的最低標(biāo)準(zhǔn)！1、肉眼檢測限度：該種方法不適用于高效、低劑量的產(chǎn)品。1)殘留物濃度限度：10X10-6(百萬分之十)2)生物活性度：正常治療劑量的1/10003)殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)2、化學(xué)檢驗(yàn)—?dú)埩粑锵薅鹊拇_定10X10-6/百萬分之十/10ppm含義：上批產(chǎn)品殘留在設(shè)備里的物質(zhì)全部溶解到下批產(chǎn)品中的濃度限度≤10X10-6

檢測：最終沖洗水中殘留物的濃度限度

≤10X10-6（1）殘留物濃度限度正常治療劑量的1/1000含義：最低日治療劑量（MTDD）的1/1000檢測：

MTDD=

每次給藥數(shù)X活性成分含量X每日最少給藥次數(shù)允許殘留物總量（μg/cm2

）=

MTDDX最小生產(chǎn)批量X1000

單個(gè)制劑質(zhì)量X每日最多使用制劑數(shù)X設(shè)備內(nèi)表面積（2）生物活性度（安全系數(shù)）：

可用于清洗的化學(xué)溶劑(三級溶劑)在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留小于初始溶液濃度的0.5%。（3）殘留溶劑限度標(biāo)準(zhǔn)：特殊產(chǎn)品，如致敏性產(chǎn)品（青霉素、頭孢類）或高活性產(chǎn)品在使用最好的檢測手段的前提下，不應(yīng)被檢出。實(shí)際上意味著對于這類產(chǎn)品需要采用專用生產(chǎn)設(shè)施。特殊產(chǎn)品的限度：二、清潔驗(yàn)證的關(guān)注點(diǎn)

1、殘留物如何確定？

2、殘留物限度規(guī)格制定？

3、分析方法如何驗(yàn)證？

4、日常監(jiān)控如何實(shí)施？分析方法、取樣方法、以及殘留限度的關(guān)系取樣方法、分析方法、殘留限度、棉簽回收率或其它取樣工具的回收率。必須對以上因素的關(guān)聯(lián)性的進(jìn)行評價(jià)。設(shè)備清洗的正確評價(jià)：專屬的方法只能檢測到其關(guān)心的殘留物，其他的殘留物不會(huì)被檢測到?；钚猿煞謱俚那鍧嵭Ч麢z測方法，可能只能檢測到單一的活性成分殘留物。制劑生產(chǎn)的清潔驗(yàn)證都要用專屬的測試方法進(jìn)行檢測。

（1）專屬性的分析方法非專屬的方法將能夠檢測到許多不同的殘留物。非專屬的方法可以用于原料藥生產(chǎn)的早期階段，或者作為日