夏小落的SOD制備方案課件

超氧化物歧化酶（SOD）的生產(chǎn)----夏小落任務(wù)1SOD制備方案的制定1一、概述超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)，作為一種專一清除生物體內(nèi)超氧陰離子自由基(O2-)的酶，催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，減少超氧陰離子自由基對(duì)生物體的毒害。它是1968年由Mocord和Fmidovich發(fā)現(xiàn)的。此酶屬金屬酶，廣泛存在于動(dòng)植物、微生物細(xì)胞中。目前，人們已從動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)分離得到，并且通過(guò)多種方法應(yīng)用到實(shí)際中，如應(yīng)用到醫(yī)藥方面、食品、農(nóng)業(yè)、化妝品及人和動(dòng)植物許多疾病的監(jiān)測(cè)方面等。2自由基引發(fā)的疾病

腦：老年癡呆、帕金森氏癥、腦循環(huán)障礙

皮膚：異位性皮膚炎、色素沉著黑斑、老人斑、皮膚過(guò)敏

心血管：高血壓、動(dòng)脈硬化、心肌梗塞、心肌無(wú)力、心律不整

眼睛：白內(nèi)障、退化性眼底病變，新生兒視網(wǎng)膜病變

呼吸系統(tǒng)：鼻子過(guò)敏、氣喘、肺氣腫、肺纖維化、成人呼吸窘迫癥

泌尿系統(tǒng)：腎臟病、蛋白尿、膀胱炎、腎絲球發(fā)炎

其它：便秘、口臭、糖尿病及共并發(fā)癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、化療副作用手術(shù)、器官移植、肝炎、更年期。3SOD平衡清除中和修復(fù)5SOD在各產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用比例6SOD在食品中的應(yīng)用比例最大抗炎癥

抗衰老

滋養(yǎng)保健及美容

抗輻射

抗腫瘤

抗自身免疫性疾病

SOD7ＳＯＤ在醫(yī)藥上的應(yīng)用治療炎癥

老年性白內(nèi)障治療心肌缺血與缺血再灌注綜合癥

治療自身免疫性疾病

1238三、SOD的理化性質(zhì)SOD是一種金屬蛋白，因此它對(duì)熱、對(duì)pH值在某些性質(zhì)上表現(xiàn)出異常的穩(wěn)定性。1、對(duì)熱穩(wěn)定性：構(gòu)象熔點(diǎn)溫度Tm的測(cè)定表明SOD是迄今發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定性最高的球蛋白之一。2、pH值對(duì)SOD的影響：SOD在pH=5.3-10.5范圍內(nèi)其催化速度不受影響。但pH=3.6是SOD中Zn要脫落95%；pH=12.2時(shí)，SOD的構(gòu)象會(huì)發(fā)生不可逆的轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致酶活性喪失。3、吸收光譜：取決于酶蛋白和金屬輔基，幾乎所有的Cu，Zn-SOD的紫外吸收光譜的共同特點(diǎn)是在250-270nm均有不同程度的吸收，而在280nm的吸收將不存在或不明顯。Cu，Zn-SOD的可見(jiàn)光吸收光譜反應(yīng)二價(jià)銅離子的光學(xué)性質(zhì)，不同來(lái)源的SOD都在680nm處附近呈現(xiàn)最大吸收。4、金屬輔基與酶活性：Zn僅與酶分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，而與催化活性無(wú)關(guān)；Cu與催化活性有關(guān)（透析去除Cu則酶活性全部喪失）11四、SOD十大功效1，清除自由基，提高免疫力，改善睡眠，增強(qiáng)記憶力，延緩衰老

2，有效降低血脂，血壓，膽固醇，血粘度，預(yù)防老年性癡呆

3，增強(qiáng)肝膽功能

4，預(yù)防老年性白內(nèi)障，提高視力

5，對(duì)糖尿病有明顯的輔助治療作用

6，調(diào)節(jié)女性生理周期，推遲更年期，防治前列腺炎

7，提高關(guān)節(jié)活動(dòng)能力，防治骨性關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

8，有效預(yù)防腫瘤，癌癥的發(fā)生發(fā)展

9，防治黑色素的形成，美白祛斑，祛皺，祛痘

10，增強(qiáng)創(chuàng)傷愈合能力12二、儀器、試劑和材料1、研缽，石英砂，燒杯（50mL），玻璃棒，pH計(jì)，冷凍離心機(jī)，離心管。2、新鮮蒜瓣，市售。3、打碎細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)獲得。4、磷酸緩沖液：0.05mol/LpH7.8的磷酸緩沖液。5、氯仿-乙醇混合溶劑氯仿：無(wú)水乙醇=3:5（V:V）。6、丙酮用前冷卻至4~10℃。7、碳酸鹽緩沖液0.05mol/LpH10.2。8、EDTA溶液0.1mol/L。9、腎上腺素2mol/L（用于檢測(cè)）14三、操作步驟基本步驟：

原料→清洗→破碎→浸提→熱變性→高速冷凍離心→調(diào)整PH→高速冷凍離心→加丙酮沉淀→高速冷凍離心→溶解沉淀→透析→冷凍干燥→成品15三、操作步驟1組織或細(xì)胞破碎稱取5g左右大蒜蒜瓣或大蒜細(xì)胞,至于研磨器中研磨,使組織或細(xì)胞破碎。2、SOD的提?。?/p>

將上述破碎的組織或細(xì)胞，加入2-3倍體積的0.05mol/LpH7.8的磷酸緩沖液，繼續(xù)研磨攪拌20min，使SOD充分溶解到緩沖液中，然后在5000r/min下，離心15min，棄沉淀，得提取液。16三、操作步驟3、除雜蛋白提取液加入0.25倍體積的氯仿-乙醇混合劑攪拌15min，5000r/min離心15min，去雜蛋白沉淀，得粗酶液。17三、操作步驟

4、SOD的沉淀分離

將上述粗酶液加入等體積的冷丙酮，攪拌15min,5000r/min離心15min,得SOD沉淀。將SOD沉淀溶于0.05mol/LpH7.8的磷酸緩沖液中，于55-60℃熱處理15min,離心棄沉淀，得到SOD酶液。18四、超氧化物歧化酶的檢測(cè)

在加入腎上腺素前，充分搖勻并在30℃水浴中預(yù)熱5min至恒溫。加入腎上腺素（空白管不加）繼續(xù)保溫2min，然后立即測(cè)定個(gè)管在480nm處的光密度。對(duì)照管與樣品管的光密度值。酶活力（單位）=2x(A-B)x

N/AＮ———樣品稀釋倍數(shù)；２———抑制腎上腺素自氧化５０％的