N-乙酰-β-D -葡萄糖苷酶（NAG）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)-可見(jiàn)分光光度法UPLC-MS-4212

電話(huà)：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)可見(jiàn)分光光度法UPLC-MS-421250T/24S試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件提取液液體30mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體20mL×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×2瓶-20℃保存試劑三液體60mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：臨用前取一瓶加入2.5mL蒸餾水溶解備用；可-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；2、標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL對(duì)硝基苯酚溶液。N--β-D-（EC2，N-acetyl-β-D-glucosidase，NAG）NAGNAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定400nm下吸光度的變化來(lái)計(jì)算NAG活性。N-β-Acetylglucosamine

NAG

P-Nitrophenol(400nm)注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)?？梢?jiàn)分光光度計(jì)、天平、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸餾水。一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1g）L為15~001g1L，15000g，4℃10min2104（mL）500100015001L0w37，3150，4103、血清（漿）等液體：直接測(cè)定。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm，蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋?zhuān)喝?25μL5μmol/mL對(duì)硝基苯酚溶液，加入875μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.625μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要50μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）3、操作表(在1.5mL離心管中依次加入下列試劑)：試劑名稱(chēng)（μL）測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管空白管試劑一300300300300試劑二150蒸餾水-150150200標(biāo)準(zhǔn)液--50-樣本5050--置于37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)30min--試劑三10001000100010002min400nmAAAA測(cè)定=A-AΔA=A-A1-2次。三、NAG活性計(jì)算1、按蛋白濃度計(jì)算活力單位定義：每mg蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1nmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。NAG(U/mgprot)=ΔA測(cè)定÷（ΔA樣）÷T=20.83×ΔA測(cè)定÷ΔA2活力單位定義：每g樣本在反應(yīng)體系中每分鐘生成1nmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。NAG(U/g質(zhì)量)=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)）×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T=20.83×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W3、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算活力單位定義：每104個(gè)細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成1nmol對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。NAG(U/104cell)=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)）×1000×V樣÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T=20.83×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量4、按液體體積計(jì)算活力單位定義：每毫升液體在反應(yīng)體系中每分鐘催化生成1nmol對(duì)硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。NAG(U/mL)=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)）×1000×V樣÷V樣÷T=20.83×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：0.625μmol/mL；V樣：加入的樣本體積，0.05mL；V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL；