總抗氧化能力（T-AOC）檢測試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4552

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁總抗氧化能力（T-AOC）檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4552規(guī)格：50T/48S

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體35mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體20mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體5mL×1瓶2-8℃保存標準品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：1、提取液：使用前置于4℃冰箱或冰上預(yù)冷；210mgFeSO4·7H2O0.9mL蒸餾水，20μL40μmol/mLFeSO4標準溶液備用；37:1:137℃37℃10min。產(chǎn)品說明：測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學、醫(yī)學和藥學研究中常常檢測血漿、(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。在酸性環(huán)境下，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪（Fe3+-TPTZ）產(chǎn)生藍色的Fe2+-TPTZ的能力反映了總抗氧化能力。技術(shù)指標：

Fe3+-Tripyridyltriazine

AntioxidantH+

Fe2+-Tripyridyltriazine(593nm)最低檢出限：0.00056μmol/mL線性范圍：0.00078125-0.05μmol/mL2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、低溫離心機、細胞超聲破碎儀、研缽/勻漿器、濃硫酸、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1、血清、血漿、唾液或尿液樣本血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）5000r/min離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣本直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30d）后再測定。2、細胞或細菌樣本收集細胞或細菌于離心管中。按照細胞或細菌數(shù)量（104：提取液體積（mL）為50~1001的比例，加入1.mL建議取5001L00W3s93in，然后1000rpm410n3、組織樣本1︰5~10（0.1g1mL預(yù)冷的提取液）10000rpm，4℃10min，取上清置于冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至593nm，蒸餾水調(diào)零。240μmol/mL0.10.050.0250.01250.06250.003125μmol/mL標準溶液備用。3、標準液稀釋可參考下表：序號（μmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（μmol/mL）1405095022210019000.130.1100010000.0540.05100010000.02550.025100010000.012560.0125100010000.0062570.00625100010000.003125備注：實驗中每個標準管需500μL標準溶液。4500μL（蒸餾水作空白500μL10min593nnm下的吸光ΔA標準=A標準-AFe2+0.050.0250.01250.006250.0031250.00156μmol/mL。1-2次。4、操作表：試劑名稱空白管測定管混合液（μL）900900樣本（μL）-30蒸餾水（μL）1209010min1mL1mL593nmΔA測定=A測定-A空白，空白管只需測1-2次。三、總抗氧化能力計算1、標準曲線繪制根據(jù)e2終濃度（xμmomL）ΔA標準（y，A標準A測（，ΔA測定（xμmomL。2、計算公式：單位定義：樣本的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值（ΔA）所需的標準液離子濃度（μmol/mL）表示。按蛋白濃度計算總抗氧化能力（μmol/mgprot）=x×V反總÷（V樣×Cpr）=34×x÷Cpr按樣本質(zhì)量計算總抗氧化能力（μmol/g質(zhì)量）=x×V反總÷（V樣÷V樣總×W）=34×x÷W按細胞數(shù)量計算總抗氧化能力（μmol/104cell）=x×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數(shù)量）=34×x÷細胞數(shù)量按液體體積計算總抗氧化能力（μmol/mL）=x×V反總÷V樣=34×xV樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應(yīng)總體積，1.02mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數(shù)量：以104為單位，萬個。注意事項：試劑二對人體有刺激性，請采取適