急性肝損傷模型的建立課件

大鼠急性肝損傷的動物模型

前景目前,肝損傷動物模型的復(fù)制主要有生物性、免疫性、化學(xué)性等方法,生物學(xué)方法要求實驗條件高且費用昂貴,限制了應(yīng)用。免疫方法是造成免疫肝損傷,主要用于通過免疫機制而抗肝損傷的藥物研究。如：卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)誘導(dǎo)法、刀豆蛋白A誘導(dǎo)法?；瘜W(xué)方法則是通過化學(xué)性肝毒物質(zhì),如四氯化碳、氨基半乳糖、硫代乙酰胺、黃曲霉素等致肝損傷。這里我們以四氯化碳性肝損傷模型的建立來淺談一下。實驗?zāi)康?.掌握四氯化碳對肝臟的毒性機理，成功建立其急性肝損傷模型。2.熟悉建模過程中的各個環(huán)節(jié)，并能解決相關(guān)問題，真正感受造模的過程，為將來真正進入實驗做鋪墊。四氯化碳性肝損傷的機制引起氧化應(yīng)激氧化應(yīng)激在CCl4引發(fā)肝損傷的早期發(fā)揮著重要作用。

(1)引起自由基變化;(2)引發(fā)與COX介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相關(guān);(3)導(dǎo)致肝星形細胞活化。2引起體內(nèi)相關(guān)酶系變化(1)轉(zhuǎn)氨酶上升。CCl4引發(fā)肝實質(zhì)損害時,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活力升高,且酶活力的高低與肝細胞受損的程度相一致。(2)酶性抗氧化物改變。它們具有強烈的清除自由基的作用,且互相依賴和支持,形成網(wǎng)絡(luò)式的抗氧化酶系統(tǒng)來拮抗CCl4對肝臟造成的損傷。(3)細胞色素P450酶系改變。CYP450酶在CCl4肝損傷發(fā)生過程中起到了十分重要的作用,以CYP2E1最為受到關(guān)注。3改變細胞因子活性CCl4引發(fā)機體產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,如丙二醛和42羥基壬醛,可引發(fā)轉(zhuǎn)化生長因子2β1、TNF2α,白細胞介素等細胞因子的高表達,后者在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化的過程中發(fā)揮著重要作用。4引起細胞凋亡CCl4引發(fā)機體產(chǎn)生的自由基的代謝紊亂會引起脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的積累,進而促進肝細胞的直接死亡或者凋亡。其中,羥基自由基是促使肝細胞凋亡的重要體內(nèi)物質(zhì)。CCl4引發(fā)肝細胞凋亡的機制復(fù)雜,一般認為都是通過激活死亡受體實現(xiàn)的。另外,CCl4也可引起肝星形細胞的凋亡。CCl4可激活核因子2κB,引起細胞凋亡。建立模型方法急性肝功能衰竭模型：a.腹腔注射法：采用Wistar或SD大鼠，重200±10g，約20只大鼠。實驗組：用四氯化碳(CCl4)溶于精致植物油,配成濃度為10%、20%或更高40%的四氯化碳，予3-10ml/kg分組腹腔注射給藥，12～24h（更早或更晚）后處死動物。取材，檢測指標。對照組：予相同劑量的精致植物油腹腔注射，余同上。b.皮下注射法：頸背部或后肢外側(cè)皮下注射，拔針是要注意藥液外漏。c.灌胃染毒法：試驗前對動物隔夜禁食。四氯化碳性肝損傷的關(guān)鍵點1.急性肝損傷是一個短期過程，一般在12-48h內(nèi)成模，因此，分組建模、取材、標本固定的時間安排等很重要。2.腹腔注射CCl4溶液，要注意進針部位、深度。對給藥濃度和劑量，因為鼠源不同或相