紅細(xì)胞血型檢測課件

血型鑒定和交叉配血目的：選擇與患者血型配合的各種血液成分，使之能在患者體內(nèi)有效地存活，無不良反應(yīng)，從而達(dá)到安全、有效輸血的目的。血型鑒定和交叉配血目的：選擇與患者血型配合的各種血液成分，使1輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測內(nèi)容包括以下幾方面。

一、患者的病史和標(biāo)本等的檢查、核對及處理二、受血者和獻(xiàn)血者ABO和Rh

血型鑒定三、交叉配血試驗(yàn)四、特殊不規(guī)則抗體的篩選和鑒定五、血小板輸注前的檢查配血六、標(biāo)簽和發(fā)血輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測內(nèi)容包括以下幾方面2受血者病史和血樣的檢查、核對及處理

輸血申請單血標(biāo)本要求

受血者血樣本

受血者病史和血樣的檢查、核對及處理

受血者血樣本

3接受由醫(yī)護(hù)人員送來的輸血申請單和樣本。核查受血者姓名、性別、年齡、血型、住院號或門診號、臨床診斷、輸血史、妊娠史、申請輸血的品種、數(shù)量、預(yù)定輸血日期、血常規(guī)、血清免疫學(xué)檢測結(jié)果、醫(yī)生簽章、樣管上必須貼有標(biāo)簽，記錄受血者姓名、血型、住院號或門診號。接受由醫(yī)護(hù)人員送來的輸血申請單和樣本。核4試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)酶介質(zhì)試驗(yàn)

菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶抗球蛋白介質(zhì)試驗(yàn)

經(jīng)典方法、加LISS（低離子介質(zhì)溶液）的方法聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)微柱凝集試驗(yàn)試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)5血型鑒定常用試劑及儀器血型鑒定常用試劑及儀器6二.ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)法

1、原理：根據(jù)ABO抗體（IgM型）的特性，室溫下在鹽水中，抗原與抗體發(fā)生肉眼可見的特異性凝集反應(yīng)。二.ABO血型鑒定7鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）。抗A抗B特異性IgG類抗體有時(shí)可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。

鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，82、鑒定方法：正定型(directtyping)：以標(biāo)準(zhǔn)血清(Ab)鑒定紅細(xì)胞上的未知抗原（Ag)。反定型(indirecttyping)：以標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞(Ag)鑒定血清中未知抗體(Ab)。方法：玻片法、試管法

2、鑒定方法：9鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。 鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 10

試驗(yàn)記錄4+（++++）：一個(gè)大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞3+（+++）：數(shù)個(gè)大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞2+（++）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細(xì)胞1+（+）：細(xì)小的凝集塊，背景渾濁W+（±）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果0（-）：無凝集，無溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血試驗(yàn)記錄11試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)12鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)◆結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有無溶血、再觀察有無凝集◆注意事項(xiàng)：細(xì)胞濃度2～5%（嚴(yán)格按說明 書操作）、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱凝集分析

◆優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。◆缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)◆結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 133、定型試劑抗體：人混合標(biāo)準(zhǔn)血清（抗A、抗B、抗AB、抗A1、抗H）來自培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體基因工程制成的抗體紅細(xì)胞：

A1RBC、A2RBCBRBCORBC3、定型試劑抗體：14（1）標(biāo)準(zhǔn)血清要求：抗A、抗B（抗A、B）特異性強(qiáng)效價(jià)高：抗A和抗B1：128以上親和力強(qiáng)，抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間為15s.凝集強(qiáng)度為3min時(shí)，凝塊不小于1mm2.

冷凝集素效價(jià)低：1：4以下不含補(bǔ)體：56度30分鐘滅活不含HIV、HCV、HBV等病毒

另加染液，以區(qū)別。

A亞型應(yīng)用抗A1抗體鑒定。（1）標(biāo)準(zhǔn)血清要求：15(2)單克隆抗體：近年來血型單克隆抗體作為新型的診斷試劑取代了傳統(tǒng)人血清制備的抗體，進(jìn)一步確保了輸血安全。優(yōu)點(diǎn)：（1）特異性抗體，不含其它血型抗體、冷凝集素，使結(jié)果更準(zhǔn)確，不受干擾。（2）不含HBV、HCV、HIV等病毒，避免了使用者受感染。（3）可以形成工業(yè)性生產(chǎn)，節(jié)約了大量人血清的原料。

(2)單克隆抗體：164、ABO血型鑒定出現(xiàn)異常的原因

1、原因：技術(shù)和管理上的問題：責(zé)任心方面技術(shù)方面標(biāo)本紅細(xì)胞或血清本身的問題：血清方面（抗體效價(jià)低或被抑制、假凝集）紅細(xì)胞方面（弱A、類B）4、ABO血型鑒定出現(xiàn)異常的原因17(1)假凝集（串錢狀凝集）較多見，本身不是抗原與抗體的反應(yīng)。原因：

A某些肝病、腎病等所致的纖維蛋白原及球蛋白的增高。

B玻片法實(shí)驗(yàn)長，水分蒸發(fā)。

C右旋糖酐、輸注某些造影劑等處理：用生理鹽水洗滌多次，重新配制懸液。(1)假凝集（串錢狀凝集）18(2)冷凝集（自身凝集）

冷凝集素正常人血清中存在，但效價(jià)不高，1：16以下，室溫不反應(yīng)。原因：（1）自身免疫性溶血性貧血、病毒性肺炎等（2）室溫過低處理：37℃生理鹽水洗滌，并在37℃做凝集實(shí)驗(yàn)。(2)冷凝集（自身凝集）19高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理

1臨床資料

患者，女，56歲，貧血，Hb30g/L，該患皮膚蒼白，呈極度貧血貌，需輸血治療，血型鑒定為AB型，但與AB型交叉配血分歧。

2ABO定型

重新血型鑒定，正定型為AB型，反定型ABO均凝集，該患者無輸血史，考慮可能為冷凝集素所致。逐將做血型之玻片置于37℃溫箱，10min后觀察可見：抗B側(cè)凝集顆粒變小，抗A側(cè)不變；升溫至45℃，抗B側(cè)凝集消失，抗A測不變。取出室溫1min后，抗B側(cè)復(fù)又出現(xiàn)凝集，初步定型為A型；用37℃鹽水將患者RBC洗滌3次，做正定型為A型；將洗滌RBC1份加患者血清內(nèi)的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也為A型。

高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理

1臨床資料

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3血清冷凝集效價(jià)測定

患者不同稀釋濃度的血清與洗滌后的O型RBC做玻片凝集試驗(yàn)，室溫時(shí)測得冷凝集效價(jià)為1:2000；放2℃冰箱冷凝集效價(jià)為1:105。

4配血及輸血

用A型血按常規(guī)方法做鹽水配血試驗(yàn)，主側(cè)出現(xiàn)凝集次側(cè)因該患RBC自家凝集成顆粒狀，不能進(jìn)行。用37℃鹽水洗滌后的RBC配成0.05L/L的RBC懸液與A型血清做次側(cè)交叉，無凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清與A型RBC做次側(cè)交叉，無凝集及溶血。交叉顯示可以輸血，考慮該患冷凝集素效價(jià)太高，要求臨床保溫輸血，室溫控制在25℃～30℃。輸A型血200ml，無不良反應(yīng)。后按同樣方法兩次繼續(xù)輸A型血800ml?；颊呔鶡o不良反應(yīng)。因本地缺免疫抑制藥，患者自行出院往北京，在中日友好醫(yī)院診斷為冷凝集素引起的免疫性溶血性貧血。經(jīng)北京紅十字中心血站鑒定冷凝集素為抗－I。

3血清冷凝集效價(jià)測定

患者不同稀釋濃度的血清215討論

多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一般不超過1:16，且在20℃時(shí)凝集即可消失。本例患者由于病理變化，血清中出現(xiàn)高效價(jià)冷凝集素抗-I(2℃時(shí)效價(jià)1:105)，在37℃還能與自身RBC發(fā)生明顯凝集，使血型鑒定出現(xiàn)誤判，并影響交叉配血。碰到此種情況應(yīng)該留意：①血型鑒定時(shí)先用37℃鹽水洗滌被檢RBC2～3次，以消除冷凝集素造成的鑒定錯(cuò)誤。②交叉配血時(shí)，次側(cè)RBC也應(yīng)該用37℃鹽水洗3次，主側(cè)血清先做自家吸收試驗(yàn)吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困難。③冷凝集素效價(jià)太高時(shí)，提高室溫25℃～30℃下反應(yīng)是行之有效的方法。

5討論

多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一22(3)類B現(xiàn)象：原因：被腸道桿菌感染的病人（O、A型），其紅細(xì)胞獲得一種“類B”抗原（變成B、AB型），但血清中含有正常的抗B。現(xiàn)象：凝集較疏松，游離RBC多，不受溫度的影響，唾液中無B型血型物質(zhì)，與AB血清不凝集，只與抗B反應(yīng)病情好轉(zhuǎn)，類B消失。處理：用唾液定血型吸收放散試驗(yàn)（吸附的抗體通過加熱等從RBC上釋放出來）(3)類B現(xiàn)象：23ABO正反定型不符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)重新采集獻(xiàn)血者與受血者血液標(biāo)本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細(xì)胞分析O型篩選細(xì)胞檢測結(jié)果ABO正反定型不符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)24錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)溶血現(xiàn)象未能識別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤血清異常紅細(xì)胞致敏近期輸血疾病導(dǎo)致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進(jìn)行大量血漿置換治療錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一25微柱凝膠試驗(yàn)

原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。

微柱凝膠試驗(yàn) 原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化26

結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研室結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研27優(yōu)點(diǎn)：快速（孵育時(shí)間可少到5min）、方便、敏感（較凝聚胺法和抗人球蛋白法敏感）、特異。結(jié)果可保存，操作技術(shù)要求較低。缺點(diǎn)：微柱凝膠易變性，需避光，和防止干裂。成本較高。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格按照試劑說明書操作；患者自身抗體干擾；注意加樣順序；配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。凝膠微柱法凝膠微柱法28二、Rh血型的鑒定1.原理：根據(jù)抗D抗體的特性，IgG，37℃，不能在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，需要介質(zhì)參與，才能發(fā)生可見的凝集反應(yīng)。二、Rh血型的鑒定292.方法：主要是鑒定D抗原（1）低離子強(qiáng)度介質(zhì)法Liss（2）酶介質(zhì)法（3）抗人球蛋白法（Coomb’stest）（4）聚凝胺法Polybrene2.方法：主要是鑒定D抗原30自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞由紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷與正離子團(tuán)外自由正離子間形成的電位差稱為紅細(xì)胞的動電位（zetapotential）自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞由紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷與正離子團(tuán)外31縮小紅細(xì)胞的間距，降低紅細(xì)胞的動電位

1.用水解酶或神經(jīng)氨酸酶處理紅細(xì)胞

2.加入牛血清白蛋白可降低介質(zhì)中離子的介電常數(shù)

3.用低離子強(qiáng)度溶液（如7%葡萄糖溶液、10%蔗糖溶液等）作為反應(yīng)介質(zhì)

物理作用

離心作用

在抗體間搭橋

紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的促進(jìn)因素縮小紅細(xì)胞的間距，降低紅細(xì)胞的動電位紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的促進(jìn)因素32Rh血型鑒定及方法學(xué)評價(jià)

1．低離子強(qiáng)度鹽水試驗(yàn)：其原理是當(dāng)降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度時(shí)，可減少紅細(xì)胞外圍的離子云，促進(jìn)IgG分子在兩個(gè)紅細(xì)胞之間搭橋，使之結(jié)合。2．酶介質(zhì)法：木瓜酶或菠蘿酶可以破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸；同時(shí)酶還可以部分改變紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原得以暴露，增強(qiáng)凝集性，故有利于不完全抗體的檢出。Rh血型鑒定及方法學(xué)評價(jià)33酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)

原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使IgG分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸34酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)

●常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶?！穹椒ǎ孩衿诜?酶液直接加入血清和細(xì)胞的混合物中。

Ⅱ期法-用酶處理細(xì)胞再與血清進(jìn)行反應(yīng)。●兩種方法比較：Ⅰ期法操作方便 Ⅱ期法敏感酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) ●常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰35優(yōu)點(diǎn)：成本低，快速。缺點(diǎn)：（1）破壞某些抗原（如MN，Duffy）（2）酶批次不同，活性不同，難以標(biāo)準(zhǔn)化。（3）需確定最適孵育時(shí)間，處理過度則會降解IgG。（4）假陽性高。應(yīng)用：現(xiàn)已少用，主要用于ABO新生兒溶血病檢查，Rh抗體篩檢。酶介質(zhì)法優(yōu)點(diǎn)：成本低，快速。酶介質(zhì)法36用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。用不完全抗體測定紅細(xì)胞血型，如Rh血型。交叉配血。3．抗人球蛋白法：又稱Coombs試驗(yàn)。是最早用于檢查不完全抗體的方法。主要用于檢測IgG、IgA等抗體參與的抗原-抗體反應(yīng)，也可測定補(bǔ)體組分C3、C4片段參與的免疫反應(yīng)用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。3．抗人球蛋白法：又稱37第一階段致敏階段第二階段

真凝集階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全抗體致敏；間接法可用于鑒定Rh血型及血清中是否存在不完全抗體第一階段第二階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全38抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝標(biāo)本漏加試劑離心過度紅細(xì)胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細(xì)胞過多或過少血清濃度過大孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗(yàn)鹽水保存不當(dāng)紅細(xì)胞直抗陽性抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝39

優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)典，特異（金標(biāo)準(zhǔn)），可測補(bǔ)體致敏，受冷凝集素影響相對少。

缺點(diǎn)：煩瑣（需兩次三洗），孵育時(shí)間長，不適用于急診和血庫存的大批量工作。且易受殘留血清蛋白影響。應(yīng)用：適用于血型鑒定，抗體篩選，免疫溶血病檢查（應(yīng)用廣泛）。注意事項(xiàng)：每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽性對照；實(shí)驗(yàn)器材清潔；注意抗原抗體比例、孵育時(shí)間、溫度等條件，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作；排除自身抗體干擾抗人球蛋白法抗人球蛋白法404．聚凝胺法：聚凝胺（Polybrene），是一種高價(jià)陽離子季胺鹽多聚物，溶解后產(chǎn)生正電荷，可中和紅細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的唾液酸，減少細(xì)胞間的排斥力，使紅細(xì)胞發(fā)生非特異凝集。正常紅細(xì)胞可引起非特異性凝集為可逆性的，如果是抗體致敏紅細(xì)胞被凝集成凝塊，則是特異性的不可逆的凝集。4．聚凝胺法：聚凝胺（Polybrene），是一種高價(jià)陽離子411紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1紅細(xì)胞間有一定間距聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸421紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完全抗體的結(jié)合，紅細(xì)胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體1紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之43優(yōu)點(diǎn)：快速，方便，適于急診，試劑易保存，可測IgG、IgM。缺點(diǎn)：易受冷凝集素和肝素等多價(jià)陰離子的干擾，且作效價(jià)測定時(shí)易造成溶血；不能檢測補(bǔ)體致敏。對無唾液酸的紅細(xì)胞無作用（多凝集紅細(xì)胞）。注意事項(xiàng)：抗原抗體比例適當(dāng)；實(shí)驗(yàn)步驟過程中聚凝胺應(yīng)去除干凈。

聚凝胺法聚凝胺法44RhD定型及其常見問題1.Rh定型RhD定型，試管法最經(jīng)典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認(rèn)IgM抗-D陰性三個(gè)廠家IgG抗-D進(jìn)行確認(rèn)抗人球蛋白法進(jìn)行確認(rèn)三種IgG抗-D試劑均為陰性，報(bào)RhD陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性，報(bào)弱DRhD定型及其常見問題1.Rh定型三個(gè)廠家IgG抗-D進(jìn)行確45導(dǎo)致Rh出現(xiàn)假陰性、假陽性原因假陽性：1.RBC已被致敏或有致敏因子存在

2.大分子物質(zhì)存在

3.血液抗凝不全，有小凝塊

4.其它抗體存在

5.多凝細(xì)胞存在

6.標(biāo)本污染假陰性：1.細(xì)胞懸液濃度過高，抗體比例失調(diào)

2.抗血清失效

3.操作出錯(cuò)

4.漏加或錯(cuò)加定型血清導(dǎo)致Rh出現(xiàn)假陰性、假陽性原因假陽性：1.RBC已被致46三.交叉配血（Crossmatching）目的：驗(yàn)證血型、發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體輸血前必做，是安全輸血的根本保證。主側(cè)：檢測病人血清中有無破壞供者RBC的抗體存在。（受血者血清+供血者RBC）次側(cè)：檢測供者血清中有無破壞病人RBC的抗體存在。（供血者血清+受血者RBC）受血者血清對受血者紅細(xì)胞,稱為自身對照三.交叉配血（Crossmatching）受血者血清對47交叉配血的主次側(cè)交叉配血的主次側(cè)48接收申請單和血標(biāo)本

核對無誤（如有錯(cuò)誤與醫(yī)生/護(hù)士聯(lián)系）進(jìn)行交叉配血相合結(jié)果輸入微機(jī)不相合打印發(fā)血單血液中心交叉配血工作流程接收申請單和血標(biāo)本核對無誤進(jìn)行交叉配49交叉配血的要求交叉配血應(yīng)在37C孵育，除了鹽水介質(zhì)法外，至少要有抗球蛋白試驗(yàn)。主側(cè)交配絕對不可以有凝集和溶血現(xiàn)象，次側(cè)交配，在允許條件下可以有凝集現(xiàn)象，但不可以溶血。交叉配血的要求交叉配血應(yīng)在37C孵育，除了鹽水介質(zhì)法外，至少50（一）方法:1.IgM抗體:鹽水法，聚凝胺法2.IgG抗體:（1）酶介質(zhì)法（2）抗人球蛋白法（Coomb’stest）最可靠（3）聚凝胺法：目前臨床應(yīng)用廣泛（4）凝膠微柱法（一）方法:1.IgM抗體:鹽水法，聚凝胺法51（二）交叉配血時(shí)注意：（1）標(biāo)本新鮮，48小時(shí)之內(nèi)，不能溶血。（2）結(jié)果應(yīng)無凝集、無溶血。（顯微鏡為準(zhǔn)）（3）“混合管”一定要做，并鏡檢。（4）原樣本管應(yīng)保留3天。（5）不合：重新定型，并尋找原因。（二）交叉配血時(shí)注意：52（三）交叉配血不合的原因與處理1.重新鑒定血型2.核對亞型3.查明ABO、Rh以外的不規(guī)則抗體4.反應(yīng)條件----如未洗滌或洗滌不全（三）交叉配血不合的原因與處理1.重新鑒定血型53輸血檢查試驗(yàn)，是一項(xiàng)具有高度科學(xué)性和需要高度責(zé)任心的工作，需要熟悉和能靈活應(yīng)用血型血清學(xué)試驗(yàn)的原理和技術(shù)。對所得的試驗(yàn)結(jié)果要能給予全面、細(xì)致的觀察和分析推導(dǎo)，最重要的是要有一顆救死扶傷、全心全意為傷病員服務(wù)的心，時(shí)刻記著自己承擔(dān)著患者安危的重?fù)?dān)，只有這樣，才能使輸血前檢查工作成為患者安全輸血的保障輸血檢查試驗(yàn)，是一項(xiàng)具有高度科學(xué)性54血型鑒定和交叉配血目的：選擇與患者血型配合的各種血液成分，使之能在患者體內(nèi)有效地存活，無不良反應(yīng)，從而達(dá)到安全、有效輸血的目的。血型鑒定和交叉配血目的：選擇與患者血型配合的各種血液成分，使55輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測內(nèi)容包括以下幾方面。

一、患者的病史和標(biāo)本等的檢查、核對及處理二、受血者和獻(xiàn)血者ABO和Rh

血型鑒定三、交叉配血試驗(yàn)四、特殊不規(guī)則抗體的篩選和鑒定五、血小板輸注前的檢查配血六、標(biāo)簽和發(fā)血輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測輸血前實(shí)驗(yàn)室檢測內(nèi)容包括以下幾方面56受血者病史和血樣的檢查、核對及處理

輸血申請單血標(biāo)本要求

受血者血樣本

受血者病史和血樣的檢查、核對及處理

受血者血樣本

57接受由醫(yī)護(hù)人員送來的輸血申請單和樣本。核查受血者姓名、性別、年齡、血型、住院號或門診號、臨床診斷、輸血史、妊娠史、申請輸血的品種、數(shù)量、預(yù)定輸血日期、血常規(guī)、血清免疫學(xué)檢測結(jié)果、醫(yī)生簽章、樣管上必須貼有標(biāo)簽，記錄受血者姓名、血型、住院號或門診號。接受由醫(yī)護(hù)人員送來的輸血申請單和樣本。核58試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)酶介質(zhì)試驗(yàn)

菠蘿酶，無花果酶，木瓜酶抗球蛋白介質(zhì)試驗(yàn)

經(jīng)典方法、加LISS（低離子介質(zhì)溶液）的方法聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)微柱凝集試驗(yàn)試驗(yàn)方法鹽水介質(zhì)試驗(yàn)59血型鑒定常用試劑及儀器血型鑒定常用試劑及儀器60二.ABO血型鑒定（一）鹽水介質(zhì)法

1、原理：根據(jù)ABO抗體（IgM型）的特性，室溫下在鹽水中，抗原與抗體發(fā)生肉眼可見的特異性凝集反應(yīng)。二.ABO血型鑒定61鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，交叉聯(lián)結(jié)形成肉眼可見的凝集。主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）?？笰抗B特異性IgG類抗體有時(shí)可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細(xì)胞，與紅細(xì)胞表面抗原位點(diǎn)數(shù)目和抗原決定簇位置有關(guān)。

鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)懸浮于鹽水介質(zhì)中的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體分子結(jié)合，622、鑒定方法：正定型(directtyping)：以標(biāo)準(zhǔn)血清(Ab)鑒定紅細(xì)胞上的未知抗原（Ag)。反定型(indirecttyping)：以標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞(Ag)鑒定血清中未知抗體(Ab)。方法：玻片法、試管法

2、鑒定方法：63鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應(yīng)溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗(yàn)陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。 鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結(jié)果 64

試驗(yàn)記錄4+（++++）：一個(gè)大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞3+（+++）：數(shù)個(gè)大凝集塊，背景透明，無游離細(xì)胞2+（++）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細(xì)胞1+（+）：細(xì)小的凝集塊，背景渾濁W+（±）：極細(xì)小凝集塊，要用顯微鏡觀察結(jié)果0（-）：無凝集，無溶血，細(xì)胞呈游離散在狀態(tài)PH：部分溶血H：完全溶血試驗(yàn)記錄65試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)試管法結(jié)果判定紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)66鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)◆結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有無溶血、再觀察有無凝集◆注意事項(xiàng)：細(xì)胞濃度2～5%（嚴(yán)格按說明 書操作）、血清與細(xì)胞比例、反應(yīng)溫度、弱凝集分析

◆優(yōu)點(diǎn)：簡便、快捷、直觀。◆缺點(diǎn)：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。鹽水介質(zhì)凝集試驗(yàn)◆結(jié)果分析：陽性-凝集或溶血 673、定型試劑抗體：人混合標(biāo)準(zhǔn)血清（抗A、抗B、抗AB、抗A1、抗H）來自培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體基因工程制成的抗體紅細(xì)胞：

A1RBC、A2RBCBRBCORBC3、定型試劑抗體：68（1）標(biāo)準(zhǔn)血清要求：抗A、抗B（抗A、B）特異性強(qiáng)效價(jià)高：抗A和抗B1：128以上親和力強(qiáng)，抗A對A1、A2及A2B發(fā)生反應(yīng)開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間分別是15s、30s和45s；抗B對B型紅細(xì)胞開始出現(xiàn)凝集的時(shí)間為15s.凝集強(qiáng)度為3min時(shí)，凝塊不小于1mm2.

冷凝集素效價(jià)低：1：4以下不含補(bǔ)體：56度30分鐘滅活不含HIV、HCV、HBV等病毒

另加染液，以區(qū)別。

A亞型應(yīng)用抗A1抗體鑒定。（1）標(biāo)準(zhǔn)血清要求：69(2)單克隆抗體：近年來血型單克隆抗體作為新型的診斷試劑取代了傳統(tǒng)人血清制備的抗體，進(jìn)一步確保了輸血安全。優(yōu)點(diǎn)：（1）特異性抗體，不含其它血型抗體、冷凝集素，使結(jié)果更準(zhǔn)確，不受干擾。（2）不含HBV、HCV、HIV等病毒，避免了使用者受感染。（3）可以形成工業(yè)性生產(chǎn)，節(jié)約了大量人血清的原料。

(2)單克隆抗體：704、ABO血型鑒定出現(xiàn)異常的原因

1、原因：技術(shù)和管理上的問題：責(zé)任心方面技術(shù)方面標(biāo)本紅細(xì)胞或血清本身的問題：血清方面（抗體效價(jià)低或被抑制、假凝集）紅細(xì)胞方面（弱A、類B）4、ABO血型鑒定出現(xiàn)異常的原因71(1)假凝集（串錢狀凝集）較多見，本身不是抗原與抗體的反應(yīng)。原因：

A某些肝病、腎病等所致的纖維蛋白原及球蛋白的增高。

B玻片法實(shí)驗(yàn)長，水分蒸發(fā)。

C右旋糖酐、輸注某些造影劑等處理：用生理鹽水洗滌多次，重新配制懸液。(1)假凝集（串錢狀凝集）72(2)冷凝集（自身凝集）

冷凝集素正常人血清中存在，但效價(jià)不高，1：16以下，室溫不反應(yīng)。原因：（1）自身免疫性溶血性貧血、病毒性肺炎等（2）室溫過低處理：37℃生理鹽水洗滌，并在37℃做凝集實(shí)驗(yàn)。(2)冷凝集（自身凝集）73高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理

1臨床資料

患者，女，56歲，貧血，Hb30g/L，該患皮膚蒼白，呈極度貧血貌，需輸血治療，血型鑒定為AB型，但與AB型交叉配血分歧。

2ABO定型

重新血型鑒定，正定型為AB型，反定型ABO均凝集，該患者無輸血史，考慮可能為冷凝集素所致。逐將做血型之玻片置于37℃溫箱，10min后觀察可見：抗B側(cè)凝集顆粒變小，抗A側(cè)不變；升溫至45℃，抗B側(cè)凝集消失，抗A測不變。取出室溫1min后，抗B側(cè)復(fù)又出現(xiàn)凝集，初步定型為A型；用37℃鹽水將患者RBC洗滌3次，做正定型為A型；將洗滌RBC1份加患者血清內(nèi)的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也為A型。

高效價(jià)冷凝集素患者的血型鑒定及配輸血的處理

1臨床資料

74

3血清冷凝集效價(jià)測定

患者不同稀釋濃度的血清與洗滌后的O型RBC做玻片凝集試驗(yàn)，室溫時(shí)測得冷凝集效價(jià)為1:2000；放2℃冰箱冷凝集效價(jià)為1:105。

4配血及輸血

用A型血按常規(guī)方法做鹽水配血試驗(yàn)，主側(cè)出現(xiàn)凝集次側(cè)因該患RBC自家凝集成顆粒狀，不能進(jìn)行。用37℃鹽水洗滌后的RBC配成0.05L/L的RBC懸液與A型血清做次側(cè)交叉，無凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清與A型RBC做次側(cè)交叉，無凝集及溶血。交叉顯示可以輸血，考慮該患冷凝集素效價(jià)太高，要求臨床保溫輸血，室溫控制在25℃～30℃。輸A型血200ml，無不良反應(yīng)。后按同樣方法兩次繼續(xù)輸A型血800ml?；颊呔鶡o不良反應(yīng)。因本地缺免疫抑制藥，患者自行出院往北京，在中日友好醫(yī)院診斷為冷凝集素引起的免疫性溶血性貧血。經(jīng)北京紅十字中心血站鑒定冷凝集素為抗－I。

3血清冷凝集效價(jià)測定

患者不同稀釋濃度的血清755討論

多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一般不超過1:16，且在20℃時(shí)凝集即可消失。本例患者由于病理變化，血清中出現(xiàn)高效價(jià)冷凝集素抗-I(2℃時(shí)效價(jià)1:105)，在37℃還能與自身RBC發(fā)生明顯凝集，使血型鑒定出現(xiàn)誤判，并影響交叉配血。碰到此種情況應(yīng)該留意：①血型鑒定時(shí)先用37℃鹽水洗滌被檢RBC2～3次，以消除冷凝集素造成的鑒定錯(cuò)誤。②交叉配血時(shí)，次側(cè)RBC也應(yīng)該用37℃鹽水洗3次，主側(cè)血清先做自家吸收試驗(yàn)吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困難。③冷凝集素效價(jià)太高時(shí)，提高室溫25℃～30℃下反應(yīng)是行之有效的方法。

5討論

多數(shù)正凡人的血清中有低效價(jià)冷凝集素，但效價(jià)一76(3)類B現(xiàn)象：原因：被腸道桿菌感染的病人（O、A型），其紅細(xì)胞獲得一種“類B”抗原（變成B、AB型），但血清中含有正常的抗B?，F(xiàn)象：凝集較疏松，游離RBC多，不受溫度的影響，唾液中無B型血型物質(zhì)，與AB血清不凝集，只與抗B反應(yīng)病情好轉(zhuǎn)，類B消失。處理：用唾液定血型吸收放散試驗(yàn)（吸附的抗體通過加熱等從RBC上釋放出來）(3)類B現(xiàn)象：77ABO正反定型不符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)重新采集獻(xiàn)血者與受血者血液標(biāo)本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標(biāo)本紅細(xì)胞應(yīng)用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細(xì)胞分析O型篩選細(xì)胞檢測結(jié)果ABO正反定型不符分析基本程序重復(fù)試驗(yàn)78錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細(xì)胞與血清間比例不適當(dāng)溶血現(xiàn)象未能識別漏加試劑結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤血清異常紅細(xì)胞致敏近期輸血疾病導(dǎo)致抗原減弱抗體減弱不規(guī)則抗體年齡近期進(jìn)行大量血漿置換治療錯(cuò)加試劑或標(biāo)本技術(shù)和操作受血者紅細(xì)胞或血清ABO正反定型不一79微柱凝膠試驗(yàn)

原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化學(xué)物質(zhì)做成微型凝膠柱，柱的上端有一個(gè)加樣反應(yīng)室?？乖贵w反應(yīng)后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細(xì)胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細(xì)胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。

微柱凝膠試驗(yàn) 原理：微柱凝膠技術(shù)是用特定的化80

結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研室結(jié)果判定新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三臨床檢驗(yàn)教研81優(yōu)點(diǎn)：快速（孵育時(shí)間可少到5min）、方便、敏感（較凝聚胺法和抗人球蛋白法敏感）、特異。結(jié)果可保存，操作技術(shù)要求較低。缺點(diǎn)：微柱凝膠易變性，需避光，和防止干裂。成本較高。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格按照試劑說明書操作；患者自身抗體干擾；注意加樣順序；配制細(xì)胞濃度準(zhǔn)確。凝膠微柱法凝膠微柱法82二、Rh血型的鑒定1.原理：根據(jù)抗D抗體的特性，IgG，37℃，不能在鹽水介質(zhì)中與紅細(xì)胞發(fā)生凝集，需要介質(zhì)參與，才能發(fā)生可見的凝集反應(yīng)。二、Rh血型的鑒定832.方法：主要是鑒定D抗原（1）低離子強(qiáng)度介質(zhì)法Liss（2）酶介質(zhì)法（3）抗人球蛋白法（Coomb’stest）（4）聚凝胺法Polybrene2.方法：主要是鑒定D抗原84自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞由紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷與正離子團(tuán)外自由正離子間形成的電位差稱為紅細(xì)胞的動電位（zetapotential）自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞由紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷與正離子團(tuán)外85縮小紅細(xì)胞的間距，降低紅細(xì)胞的動電位

1.用水解酶或神經(jīng)氨酸酶處理紅細(xì)胞

2.加入牛血清白蛋白可降低介質(zhì)中離子的介電常數(shù)

3.用低離子強(qiáng)度溶液（如7%葡萄糖溶液、10%蔗糖溶液等）作為反應(yīng)介質(zhì)

物理作用

離心作用

在抗體間搭橋

紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的促進(jìn)因素縮小紅細(xì)胞的間距，降低紅細(xì)胞的動電位紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的促進(jìn)因素86Rh血型鑒定及方法學(xué)評價(jià)

1．低離子強(qiáng)度鹽水試驗(yàn)：其原理是當(dāng)降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度時(shí)，可減少紅細(xì)胞外圍的離子云，促進(jìn)IgG分子在兩個(gè)紅細(xì)胞之間搭橋，使之結(jié)合。2．酶介質(zhì)法：木瓜酶或菠蘿酶可以破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸；同時(shí)酶還可以部分改變紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原得以暴露，增強(qiáng)凝集性，故有利于不完全抗體的檢出。Rh血型鑒定及方法學(xué)評價(jià)87酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)

原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸，帶有負(fù)電荷，使紅細(xì)胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷以及紅細(xì)胞之間的排斥力，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使IgG分子能與有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集。酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) 原理：紅細(xì)胞表面有豐富的唾液酸88酶介質(zhì)凝集試驗(yàn)

●常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。●方法：Ⅰ期法-酶液直接加入血清和細(xì)胞的混合物中。

Ⅱ期法-用酶處理細(xì)胞再與血清進(jìn)行反應(yīng)?！駜煞N方法比較：Ⅰ期法操作方便 Ⅱ期法敏感酶介質(zhì)凝集試驗(yàn) ●常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰89優(yōu)點(diǎn)：成本低，快速。缺點(diǎn)：（1）破壞某些抗原（如MN，Duffy）（2）酶批次不同，活性不同，難以標(biāo)準(zhǔn)化。（3）需確定最適孵育時(shí)間，處理過度則會降解IgG。（4）假陽性高。應(yīng)用：現(xiàn)已少用，主要用于ABO新生兒溶血病檢查，Rh抗體篩檢。酶介質(zhì)法優(yōu)點(diǎn)：成本低，快速。酶介質(zhì)法90用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。用不完全抗體測定紅細(xì)胞血型，如Rh血型。交叉配血。3．抗人球蛋白法：又稱Coombs試驗(yàn)。是最早用于檢查不完全抗體的方法。主要用于檢測IgG、IgA等抗體參與的抗原-抗體反應(yīng)，也可測定補(bǔ)體組分C3、C4片段參與的免疫反應(yīng)用于測定在體外能引起紅細(xì)胞致敏的抗體。3．抗人球蛋白法：又稱91第一階段致敏階段第二階段

真凝集階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全抗體致敏；間接法可用于鑒定Rh血型及血清中是否存在不完全抗體第一階段第二階段直接法可檢查受檢者的紅細(xì)胞是否已被不完全92抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝標(biāo)本漏加試劑離心過度紅細(xì)胞、血清及試劑質(zhì)量洗滌不充分操作過程不連續(xù)離心過度紅細(xì)胞過多或過少血清濃度過大孵育時(shí)間和溫度不當(dāng)前帶現(xiàn)象間接抗球蛋白試驗(yàn)鹽水保存不當(dāng)紅細(xì)胞直抗陽性抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細(xì)胞洗滌已凝集紅細(xì)胞質(zhì)量不抗凝93

優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)典，特異（金標(biāo)準(zhǔn)），可測補(bǔ)體致敏，受冷凝集素影響相對少。

缺點(diǎn)：煩瑣（需兩次三洗），孵育時(shí)間長，不適用于急診和血庫存的大批量工作。且易受殘留血清蛋白影響。應(yīng)用：適用于血型鑒定，抗體篩選，免疫溶血病檢查（應(yīng)用廣泛）。注意事項(xiàng)：每次試驗(yàn)要設(shè)有陰性和陽性對照；實(shí)驗(yàn)器材清潔；注意抗原抗體比例、孵育時(shí)間、溫度等條件，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)方法操作；排除自身抗體干擾抗人球蛋白法抗人球蛋白法944．聚凝胺法：聚凝胺（Polybrene），是一種高價(jià)陽離子季胺鹽多聚物，溶解后產(chǎn)生正電荷，可中和紅細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的唾液酸，減少細(xì)胞間的排斥力，使紅細(xì)胞發(fā)生非特異凝集。正常紅細(xì)胞可引起非特異性凝集為可逆性的，如果是抗體致敏紅細(xì)胞被凝集成凝塊，則是特異性的不可逆的凝集。4．聚凝胺法：聚凝胺（Polybrene），是一種高價(jià)陽離子951紅細(xì)胞間有一定間距2加入聚凝胺后，可以縮短紅細(xì)胞之間的距離，使其非特異性凝集3加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4紅細(xì)胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉1紅細(xì)胞間有一定間距聚凝胺交叉配血技術(shù)示意圖1聚凝胺枸櫞酸961紅細(xì)胞上已有不完全抗體致敏2加入聚凝胺后，縮短紅細(xì)胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時(shí)與兩個(gè)紅細(xì)胞結(jié)合使其特異性凝集3加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4由于不完