2023屆 二輪復(fù)習(xí) 現(xiàn)代生物科技專題 課件（101張） （湖北版）

專題十現(xiàn)代生物科技專題(1)基因工程的誕生。

(7)細(xì)胞融合與單克隆抗體。(2)基因工程的原理及技術(shù)(含PCR技術(shù))。(8)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程與胚胎工程的理論基礎(chǔ)。(3)基因工程的應(yīng)用。 (9)胚胎干細(xì)胞的移植。(4)蛋白質(zhì)工程。 (10)胚胎工程的應(yīng)用。(5)植物組織培養(yǎng)。 (11)轉(zhuǎn)基因生物的安全性。(6)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與體細(xì)胞克隆。(12)簡(jiǎn)述生態(tài)工程的原理及實(shí)例。梳理核心知識(shí)微專題1微專題2///////123//////////////微專題34///////專題強(qiáng)化練5///////梳理核心知識(shí)1DNA連接酶基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞增殖動(dòng)物細(xì)胞核的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法桑椹胚、囊胚早期胚胎在相同生理環(huán)境條件下空間位置的轉(zhuǎn)移桑椹胚或囊胚原始性腺發(fā)育的全能性1.艾弗里等人通過(guò)不同類型肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，不僅證明了生物的遺傳物質(zhì)是DNA，還證明了DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一種生物個(gè)體。2.PCR技術(shù)擴(kuò)增的過(guò)程是：目的基因DNA受熱(90～95℃)變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合(55～60℃，即“復(fù)性”)，然后在熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)作用下延伸，如此重復(fù)循環(huán)。3.cDNA文庫(kù)是以某一發(fā)育時(shí)期細(xì)胞中的mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成的，cDNA文庫(kù)中的基因中不含有啟動(dòng)子和內(nèi)含子。4.植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基的組成：一般由無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分、激素、瓊脂四部分組成。5.通過(guò)顯微操作去除卵母細(xì)胞中的核，由于MⅡ期卵母細(xì)胞核的位置靠近第一極體，用微型吸管可一并吸出細(xì)胞核與第一極體。6.單克隆抗體制備過(guò)程中涉及兩次篩選，第一次是利用特定的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，排除未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞，只留下雜交瘤細(xì)胞；第二次是克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。1.判斷有關(guān)基因工程和蛋白質(zhì)工程說(shuō)法的正誤 (1)DNA連接酶能將兩堿基間通過(guò)氫鍵連接起來(lái)。(

) (2)E·coliDNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端。(

) (3)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體。(

) (4)將胰島素基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)。(

) (5)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉植株的抗蟲效果必須通過(guò)分子檢測(cè)進(jìn)行鑒定。(

)××√√×(6)用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列。(

)(7)PCR體系中一定要添加從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶。(

)(8)基因工程需要在分子水平對(duì)基因操作，蛋白質(zhì)工程不需要對(duì)基因操作。(

)√××2.判斷有關(guān)細(xì)胞工程和胚胎工程說(shuō)法的正誤 (1)番茄根尖經(jīng)過(guò)植物組織培養(yǎng)獲得番茄植株的過(guò)程中發(fā)生了細(xì)胞的脫分化和再分化。(

)(2)利用物理法或化學(xué)法可以直接將兩個(gè)植物細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)融合。(

)(3)再生出細(xì)胞壁是原生質(zhì)體融合成功的標(biāo)志。(

)(4)制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。(

)(5)肝細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的CO2刺激細(xì)胞呼吸。(

)(6)動(dòng)物細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞必須是卵細(xì)胞。(

)(7)用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用10代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞。(

)√×√×××√1.[2018·全國(guó)卷Ⅰ，38(1)]回答下列問(wèn)題：

博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)粒可以作為載體外，還證明了_________________________________________________________________ (答出兩點(diǎn)即可)。體外重組的質(zhì)粒可以進(jìn)入受體細(xì)胞；真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)2.[2021·全國(guó)甲卷，38(2)(4)](2)PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、________三步，其中復(fù)性的結(jié)果是____________________________________ ________________________。 (4)PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)是指_____________________________________。該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面。延伸

兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)分別與兩條單鏈DNA結(jié)合一種在生物體外快速擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)3.[2019·全國(guó)卷Ⅰ，38(3)]目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是________________________________________________。Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活4.PMI基因存在于下圖的基因組中，若使用PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)需要________________酶催化，可選擇圖中四種引物A、B、C、D中的引物________，原因是__________________________________________________ _______________________________________________________________。熱穩(wěn)定DNA聚合B、C PMI基因位于此片段的中間部位，耐高溫的DNA聚合酶只能從5′→3′延伸子鏈5.為確定轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的______________________作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要在個(gè)體水平上鑒定，后者的具體過(guò)程是__________________________________________________ _________________________________________________________________?？果}基因(或目的基因)

將培育的煙草幼苗栽培于含有一定鹽的土壤中，觀察該煙草植株的生長(zhǎng)狀態(tài)1.(2022·全國(guó)甲卷，38)某牧場(chǎng)引進(jìn)一只產(chǎn)肉性能優(yōu)異的良種公羊，為了在短時(shí)間內(nèi)獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的大量后代，該牧場(chǎng)利用胚胎工程技術(shù)進(jìn)行了相關(guān)操作?；卮鹣铝袉?wèn)題： (1)為了實(shí)現(xiàn)體外受精需要采集良種公羊的精液，精液保存的方法是______________________________________。在體外受精前要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理,其原因是____________________________________________________；精子體外獲能可采用化學(xué)誘導(dǎo)法，誘導(dǎo)精子獲能的藥物是________________________(答出1點(diǎn)即可)。利用該公羊的精子進(jìn)行體外受精需要發(fā)育到一定時(shí)期的卵母細(xì)胞，因?yàn)槁涯讣?xì)胞達(dá)到__________時(shí)才具備與精子受精的能力。放入－196℃的液氮中保存(或冷凍保存)剛排出的精子必需在雌性生殖道內(nèi)發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能受精肝素或鈣離子載體A23187MⅡ中期(2)體外受精獲得的受精卵發(fā)育成囊胚需要在特定的培養(yǎng)液中進(jìn)行，該培養(yǎng)液的成分除無(wú)機(jī)鹽、激素、血清外，還含的營(yíng)養(yǎng)成分有_________________________(答出3點(diǎn)即可)等。將培養(yǎng)好的良種囊胚保存?zhèn)溆谩?3)請(qǐng)以保存的囊胚和相應(yīng)數(shù)量的非繁殖期受體母羊?yàn)椴牧线M(jìn)行操作，以獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。主要的操作步驟是______________________________________________________________________________________________________________________________________。維生素、氨基酸、核苷酸對(duì)受體母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，將保存的囊胚進(jìn)行胚胎移植，對(duì)受體母羊進(jìn)行是否妊娠的檢查，一段時(shí)間后受體母羊產(chǎn)下具有該公羊優(yōu)良性狀的后代解析(1)精液可以放入－196℃的液氮中保存(或冷凍保存)，使用前再將精液解凍離心分離。剛排出的精子必需在雌性生殖道內(nèi)發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能受精，故在體外受精前要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理。通常采用的體外獲能方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法，化學(xué)誘導(dǎo)法是將精子放在一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液中，用化學(xué)藥物誘導(dǎo)精子獲能。卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期(MⅡ中期)才能具備與精子受精的能力。(2)進(jìn)行早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中，除了無(wú)機(jī)鹽、激素、血清外，還含有維生素、氨基酸、核苷酸等。(3)要利用保存的囊胚和相應(yīng)數(shù)量的非繁殖期受體母羊?yàn)椴牧?，獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的后代，主要是利用胚胎移植技術(shù)，即對(duì)受體母羊進(jìn)行同期發(fā)情處理，將保存的囊胚進(jìn)行胚胎移植，對(duì)受體母羊進(jìn)行是否妊娠的檢查，一段時(shí)間后受體母羊產(chǎn)下具有該公羊優(yōu)良性狀的后代。2.(2022·全國(guó)乙卷，38)新冠疫情出現(xiàn)后，病毒核酸檢測(cè)和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用。回答下列問(wèn)題： (1)新冠病毒是一種RNA病毒，檢測(cè)新冠病毒RNA(核酸檢測(cè))可以采取RT—PCR法。這種方法的基本原理是先以病毒RNA為模板合成cDNA，這一過(guò)程需要的酶是________________________，再通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷被檢測(cè)者是否感染新冠病毒。逆轉(zhuǎn)錄酶(或反轉(zhuǎn)錄酶)(2)為了確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的____________________來(lái)進(jìn)行。PCR過(guò)程每次循環(huán)分為3步，其中溫度最低的一步是______________。(3)某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)(檢測(cè)體內(nèi)是否有新冠病毒抗體)，若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明________________________(答出1種情況即可)；若核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明__________________________________________________。特異性核苷酸序列復(fù)性(或退火)曾感染新冠病毒，已康復(fù)已感染新冠病毒，是患者(4)常見的病毒疫苗有滅活疫苗、蛋白疫苗和重組疫苗等。已知某種病毒的特異性蛋白S(具有抗原性)的編碼序列(目的基因)。為了制備蛋白疫苗，可以通過(guò)基因工程技術(shù)獲得大量蛋白S?；蚬こ痰幕静僮髁鞒淌莀___________________________________________________________________。獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→導(dǎo)入受體細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定解析(1)以病毒RNA為模板合成cDNA是逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，這一過(guò)程需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶(或反轉(zhuǎn)錄酶)。獲得cDNA后可通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷被檢測(cè)者是否感染新冠病毒。(2)為確保PCR擴(kuò)增獲得的是特異性序列，從而確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性，設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的特異性核苷酸序列來(lái)進(jìn)行。PCR過(guò)程每次循環(huán)分為3步，即變性(90～95℃)→復(fù)性(55～60℃)→延伸(70～75℃)，其中溫度最低的一步是復(fù)性(或退火)。(3)某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)，若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明他體內(nèi)沒有新冠病毒，但曾感染新冠病毒，已經(jīng)康復(fù)；若核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明他體內(nèi)已感染新冠病毒，是患者。(4)基因工程的基本操作流程是：獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定。微專題1基因工程(含PCR技術(shù))2練·高考重點(diǎn)講·核心要點(diǎn)1.基因工程的基本工具

磷酸二酯鍵黏性磷酸二酯鍵黏性①基因工程中的載體與細(xì)胞膜上的載體不同。②若用不同的限制酶切割出不同的黏性末端，則能使基因和載體定向連接，避免自身環(huán)化和反向連接，提高連接的有效性。2.基因工程的四個(gè)操作步驟 (1)目的基因的獲取從cDNA文庫(kù)獲取的目的基因不含啟動(dòng)子和終止子。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建重組質(zhì)粒DNA識(shí)別和結(jié)合受體細(xì)胞①啟動(dòng)子、終止子a.啟動(dòng)子(DNA片段)≠起始密碼子(位于mRNA上)。b.終止子(DNA片段)≠終止密碼子(位于mRNA上)。②目的基因插入位置：?jiǎn)?dòng)子與終止子之間。③利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物時(shí)，應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子連接到一起。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞細(xì)胞類型植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法____________法、基因槍法、____________法__________技術(shù)Ca2＋處理法(感受態(tài)細(xì)胞法)受體細(xì)胞受精卵、體細(xì)胞________原核細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化花粉管通道顯微注射受精卵

辨析農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中的“兩個(gè)兩次”①兩次拼接：第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T－DNA的中間部位；第二次拼接指被插入目的基因的T－DNA被拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上。②兩次導(dǎo)入：第一次導(dǎo)入是將含目的基因的Ti質(zhì)粒重新導(dǎo)入農(nóng)桿菌；第二次導(dǎo)入是指將含目的基因的T－DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定DNA分子雜交抗原—抗體3.PCR技術(shù)及應(yīng)用 (1)PCR技術(shù)原理與條件DNA雙鏈復(fù)制引物(2)PCR技術(shù)的過(guò)程復(fù)性72℃

可通過(guò)引物控制PCR擴(kuò)增的基因片段，并在基因兩側(cè)引入限制酶識(shí)別序列。4.蛋白質(zhì)工程基因合成新的蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)

脫氧核苷酸序列1.(2022·湖南雅禮中學(xué)調(diào)研)科研人員將控制某種動(dòng)物蛋白(S蛋白)的基因(基因包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)，其中可轉(zhuǎn)錄出RNA的是編碼區(qū))成功導(dǎo)入胡蘿卜細(xì)胞并培育出可產(chǎn)生S蛋白的轉(zhuǎn)基因胡蘿卜植株。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)為了獲得S蛋白基因，可采用的方法有PCR技術(shù)擴(kuò)增、從基因文庫(kù)中獲取和____________________。利用S蛋白基因轉(zhuǎn)錄而來(lái)的mRNA，經(jīng)相關(guān)過(guò)程可合成雙鏈cDNA片段，而獲得的雙鏈cDNA片段與S蛋白基因的堿基序列________(填“不同”或“相同”)，理由是______________________________ _________________________________________________________________。用化學(xué)方法人工合成不同

獲得的雙鏈cDNA片段只包含S蛋白基因的編碼區(qū)序列，沒有非編碼區(qū)序列(答案合理即可)(2)利用S蛋白基因與Ti質(zhì)粒構(gòu)建形成重組質(zhì)粒的過(guò)程中，所用的工具酶是____________________。將獲得的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入某種菌，再利用該菌侵染胡蘿卜細(xì)胞，進(jìn)而將S蛋白基因插入胡蘿卜細(xì)胞的______________上，這樣S蛋白基因才能在胡蘿卜細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳。上述將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法最可能是_________________________________________。(3)若要從分子水平檢測(cè)該轉(zhuǎn)基因胡蘿卜植株內(nèi)S蛋白基因是否表達(dá)，則常采用的方法是____________________，該方法利用了__________________________的特點(diǎn)。限制酶和DNA連接酶染色體DNA農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法抗原—抗體雜交法抗原與抗體的結(jié)合具有特異性2.(2022·河南天一大聯(lián)考)脫水素(DHN)是植物細(xì)胞中一種與抗?jié)澈δ芰γ芮邢嚓P(guān)的蛋白質(zhì)，由DHN基因編碼。研究人員將牡丹的DHN基因轉(zhuǎn)移至擬南芥中，以研究脫水素對(duì)植物抗?jié)承阅艿挠绊憽Ｕ?qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)從牡丹葉片細(xì)胞中提取總RNA，以此為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，獲得________文庫(kù)，此類基因文庫(kù)和基因組文庫(kù)中的基因在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是__________________________________________________________________。cDNAcDNA文庫(kù)中的基因不含啟動(dòng)子、終止子、非編碼(或內(nèi)含子)序列(2)利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增的前提是需要利用一段____________________________________，以便合成引物。以1個(gè)目的基因片段為模板進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)5次循環(huán)后，消耗的引物數(shù)量為________。(3)將獲得的基因插入質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體，其目的是使目的基因__________________________________，并可以遺傳給下一代；基因表達(dá)載體中還要有標(biāo)記基因，標(biāo)記基因的作用是_____________________________________________________________________________________________________。已知目的基因(DHN基因)的核苷酸序列62在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在

鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)(4)用花粉管通道法將目的基因轉(zhuǎn)入擬南芥，此方法中，基因表達(dá)載體借助______________進(jìn)入受體細(xì)胞；為觀察轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗?jié)衬芰?，需要將________________________________________________植株進(jìn)行澇害處理，觀察其生理狀態(tài)的變化?；ǚ酃芡ǖ擂D(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥(非轉(zhuǎn)基因擬南芥)解析

(1)利用RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的基因文庫(kù)為cDNA文庫(kù)(部分基因文庫(kù))；cDNA文庫(kù)中的基因不含啟動(dòng)子、終止子和非編碼(或內(nèi)含子)序列。(2)引物需要根據(jù)一段已知目的基因的核苷酸序列來(lái)合成；經(jīng)過(guò)5次擴(kuò)增后，DNA分子的數(shù)量由1個(gè)變?yōu)?5＝32個(gè)，新增2×(32－1)＝62條DNA鏈，故需要消耗62個(gè)引物。(3)將獲得的基因插入質(zhì)粒，構(gòu)建基因表達(dá)載體，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可以遺傳給下一代；標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。(4)花粉管通道法是利用花粉管通道將基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞；為觀察轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗?jié)衬芰?，需要將轉(zhuǎn)基因擬南芥和野生型擬南芥植株進(jìn)行澇害處理，對(duì)比觀察兩種擬南芥的生理狀態(tài)變化，判斷轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗?jié)衬芰?。微專題2細(xì)胞工程3練·高考重點(diǎn)講·核心要點(diǎn)1.植物組織培養(yǎng)的過(guò)程原理：植物細(xì)胞具有全能性細(xì)胞分裂素①植物組織培養(yǎng)中添加蔗糖的目的是提供營(yíng)養(yǎng)和調(diào)節(jié)滲透壓。②脫分化階段不需光，再分化階段需光。③生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比值高時(shí)，促進(jìn)根的分化、抑制芽的形成；比值低時(shí)，促進(jìn)芽的分化、抑制根的形成。④體內(nèi)細(xì)胞未表現(xiàn)全能性的原因：在特定的時(shí)間和空間條件下，基因的表達(dá)具有選擇性。2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)原理：植物細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

原理：細(xì)胞增殖①動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中兩次使用胰蛋白酶的作用不同：第一次：處理剪碎的組織，使其分散成單個(gè)細(xì)胞。第二次：使貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞從瓶壁上脫落下來(lái)。②使用或冷凍保存的是10代以內(nèi)的細(xì)胞，原因是保持細(xì)胞正常的二倍體核型。③避免雜菌污染的措施：培養(yǎng)液及培養(yǎng)用具滅菌處理，加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液。④區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的關(guān)鍵是是否分瓶培養(yǎng)。4.動(dòng)物體細(xì)胞克隆技術(shù)(核移植技術(shù))原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性

核移植獲得的克隆動(dòng)物與提供細(xì)胞核的親本性狀可能不同的三個(gè)原因：①克隆動(dòng)物遺傳物質(zhì)來(lái)自兩個(gè)親本。②發(fā)育過(guò)程中可能發(fā)生基因突變或染色體變異。③外界環(huán)境可能引起性狀的改變。5.單克隆抗體的制備原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的增殖1.(2022·江西南昌調(diào)研)水竹是單子葉禾本科植物，易管理和培植，干凈而雅致。若配上假山奇石，制作成小盆景，極具自然之美感。如圖為通過(guò)植物組織培養(yǎng)大量獲得水竹幼苗的過(guò)程?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)通過(guò)植物組織培養(yǎng)獲得水竹幼苗的原理是____________________________；盡量選擇分裂旺盛、帶有分生區(qū)的部位作為外植體，原因是____________________________________________________________。植物細(xì)胞的全能性這樣的外植體容易誘導(dǎo)形成愈傷組織(2)過(guò)程①為脫分化，脫分化是指______________________________________________________________________________________；②過(guò)程的實(shí)質(zhì)是____________________。(3)一般在9～10月水竹的種子成熟，但其收獲易受氣候的影響，其優(yōu)良雜種的后代也會(huì)因發(fā)生________________而喪失其優(yōu)良特性，利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)制造的人工種子可克服這些缺陷。人工種子是以植物組織培養(yǎng)得到的________________________________________________(至少答出兩點(diǎn))為材料，經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的種子。

已經(jīng)分化的細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程基因的選擇性表達(dá)性狀分離胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等(4)在水竹植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)過(guò)篩選還可能獲得大量有用的突變體，突變體產(chǎn)生的原因是在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)細(xì)胞______________________________________________________________________________________________。(5)研究表明，水竹還可以凈化水質(zhì)，吸收污水中的氮、磷等化學(xué)元素，采收的水竹加工后可用作飼料，因此水竹是城市環(huán)境生態(tài)工程建設(shè)中浮床生態(tài)工藝的常用植物，這體現(xiàn)了生態(tài)工程的__________________________________原理。

一直處于分裂狀態(tài)，容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而產(chǎn)生突變物質(zhì)循環(huán)再生原理、協(xié)調(diào)與平衡解析

(1)植物組織培養(yǎng)過(guò)程的原理是植物細(xì)胞的全能性，在外植體的選擇上，一般選擇分裂旺盛、帶有分生區(qū)的部位，原因是這樣的外植體分化程度較低，容易誘導(dǎo)形成愈傷組織。(2)脫分化是指已經(jīng)分化的細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過(guò)程。②過(guò)程為再分化，其實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)。(3)雜種后代自交易發(fā)生性狀分離而喪失其優(yōu)良特性，而利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可克服這些缺陷。人工種子是以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)過(guò)人工薄膜包裝得到的種子。(4)在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，可能獲得大量的突變體，突變體產(chǎn)生的原因是在培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞一直處于分裂狀態(tài)，容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力的影響而產(chǎn)生突變。(5)水竹可以凈化水質(zhì)，吸收污水中的氮、磷等化學(xué)元素，還可以用作飼料，也是城市環(huán)境生態(tài)工程建設(shè)中浮床生態(tài)工藝的常用植物，這體現(xiàn)了生態(tài)工程的物質(zhì)循環(huán)再生原理和協(xié)調(diào)與平衡的原理。2.(2021·重慶卷，26)為了研究PDCD4基因?qū)π∈笞訉m內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。 (1)取小鼠子宮時(shí)，為避免細(xì)菌污染，手術(shù)器具應(yīng)進(jìn)行______________處理；子宮取出剪碎后，用_______________________處理一定時(shí)間，可獲得分散的子宮內(nèi)膜組織細(xì)胞，再分離獲得基質(zhì)細(xì)胞用于培養(yǎng)。 (2)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)有_____________________________________________ __________________(填寫兩種)；培養(yǎng)箱中CO2濃度為5%，其主要作用是________________。滅菌(或消毒)胰蛋白酶或膠原蛋白酶

無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿維持培養(yǎng)液的pH(3)在含PDCD4基因的表達(dá)載體中，啟動(dòng)子的作用是_____________________________________________________。為了證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，以含PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，還應(yīng)設(shè)立兩個(gè)對(duì)照組，分別為______________________________________________。經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組中PDCD4表達(dá)水平和細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明該基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡具有________(填“抑制”或“促進(jìn)”)作用。 RNA聚合酶的識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA基質(zhì)細(xì)胞懸浮液和空載體與基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液促進(jìn)解析

本題考查基因工程和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。(1)手術(shù)器具應(yīng)滅菌或消毒處理；分散動(dòng)物組織細(xì)胞用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、微量元素、促生長(zhǎng)因子、血清或血漿；培養(yǎng)箱中濃度為5%的CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。(3)啟動(dòng)子的作用是與RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA。要證明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡的作用，實(shí)驗(yàn)組是含有PDCD4基因的表達(dá)載體和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液，為了能對(duì)比得出結(jié)果和排除載體本身與培養(yǎng)液的作用，對(duì)照組有兩組，一組為等量的只含基質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)液，另一組為等量的空載體(載體上無(wú)PDCD4基因)和基質(zhì)細(xì)胞的混合培養(yǎng)液。若實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組，說(shuō)明PDCD4基因?qū)|(zhì)細(xì)胞凋亡有促進(jìn)作用。3.(2022·武漢市質(zhì)檢)通過(guò)咽拭子取樣進(jìn)行RT—PCR技術(shù)檢測(cè)是目前臨床上診斷新型冠狀病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸檢測(cè)的RT—PCR試劑盒的部分工作原理如下?；卮鹣铝袉?wèn)題：

樣本(痰、鼻咽拭子)→裂解提純→病毒RNA→RT—PCR→DNA (1)根據(jù)上述原理分析，RT—PCR技術(shù)中需要用到的酶有_________________，用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過(guò)程中，復(fù)性是指_____________________________ _________________________________________________________________。逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶

兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合(2)接種新冠疫苗能有效預(yù)防新冠病毒的感染，原因是疫苗使機(jī)體產(chǎn)生了________________反應(yīng)，通過(guò)這種反應(yīng)，人體內(nèi)產(chǎn)生了抗體和_____________；當(dāng)人體遇到新冠病毒時(shí)，后者可以迅速識(shí)別病毒并______________________________________，從而增強(qiáng)人體的免疫力。(3)除核酸檢測(cè)外，研究人員還研發(fā)了基于病毒蛋白的檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)的關(guān)鍵是生產(chǎn)出能與新冠病毒結(jié)合的特異性抗體?？梢岳妹庖吆蟮男∈驜細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞制備單克隆抗體，該過(guò)程使用的生物技術(shù)包括_____________________________，經(jīng)多次篩選、檢測(cè)獲得所需的雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是____________________________________________________________。特異性免疫記憶細(xì)胞迅速增殖分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生大量抗體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生專一性抗體解析

(1)根據(jù)題干中RT—PCR技術(shù)的過(guò)程可知，需要先將RNA通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA，再進(jìn)行PCR過(guò)程，因此，RT—PCR技術(shù)中需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶。用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA的過(guò)程中，復(fù)性是指兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合。(2)接種新冠疫苗后，人體可產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，通過(guò)這種反應(yīng)，人體內(nèi)產(chǎn)生了抗體和記憶細(xì)胞，當(dāng)人體遇到新冠病毒時(shí)，記憶細(xì)胞可以迅速識(shí)別病毒并迅速增殖分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生大量抗體，從而增強(qiáng)人體的免疫力。(3)制備單克隆抗體過(guò)程中，需要將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和免疫后的小鼠B細(xì)胞融合，形成雜交瘤細(xì)胞，還要進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，因此，制備單克隆抗體過(guò)程中用到的生物技術(shù)有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合。雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生專一性抗體。微專題3胚胎工程與生態(tài)工程4練·高考重點(diǎn)講·核心要點(diǎn)1.準(zhǔn)確記憶哺乳動(dòng)物的早期胚胎發(fā)育過(guò)程(1)桑椹胚是由受精卵分裂形成的，沒有分化；而囊胚期雖然已進(jìn)行細(xì)胞分化，但囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)仍具有全能性。(2)早期胚胎培養(yǎng)液成分：2“鹽”——無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽；2“酸”——氨基酸和核苷酸；2“素”——維生素和激素；2“液體”——水和血清。2.胚胎移植的操作流程及生理基礎(chǔ) (1)操作流程超數(shù)排卵妊娠①精子獲能的方法有培養(yǎng)法和化學(xué)誘導(dǎo)法。②卵母細(xì)胞須培養(yǎng)到MⅡ中期才能參與受精。③細(xì)胞分化開始于囊胚，桑椹胚的形成沒有經(jīng)過(guò)細(xì)胞分化。(2)胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)3.胚胎分割

無(wú)性繁殖或克隆桑椹胚或囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)滋養(yǎng)層4.胚胎干細(xì)胞(ES或EK細(xì)胞)早期胚胎或原始性腺發(fā)育的全能性增殖而不分化5.生態(tài)工程基本原理的判斷方法(連線)1.(2021·湖南卷，22)[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過(guò)核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過(guò)程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是________________________________，這類酶能將特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的________________________斷開。(2)在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是______________________________________________________________________________________________________________。限制酶(或限制性核酸內(nèi)切酶)磷酸二酯鍵

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，同時(shí)給細(xì)胞提供足夠的營(yíng)養(yǎng)(3)與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是_________________________________________________________________。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為_______________________________________(答出兩點(diǎn)即可)，功能上具有________________。(4)鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的________淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡(jiǎn)要寫出利用此抗體確定克隆動(dòng)物A中M基因是否失活的實(shí)驗(yàn)思路：__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，所以恢復(fù)其全能性十分困難體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯發(fā)育的全能性B

取該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的肝組織細(xì)胞，提取其蛋白質(zhì)，加入適量的M蛋白的單克隆抗體，觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象(或有無(wú)抗原—抗體特異性結(jié)合的現(xiàn)象)，若有則說(shuō)明M基因不失活，若無(wú)則說(shuō)明M基因失活解析

(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割質(zhì)粒DNA要用到限制性核酸內(nèi)切酶，即限制酶，限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。(2)在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，要定時(shí)更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。(3)動(dòng)物細(xì)胞核移植分為胚胎細(xì)胞核移植和體細(xì)胞核移植，其中體細(xì)胞核移植由于動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，所以恢復(fù)其全能性十分困難。胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯，在功能上，具有發(fā)育的全能性，即可以分化成為動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。(4)在進(jìn)行單克隆抗體制備時(shí)，首先要誘導(dǎo)相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合。在應(yīng)用單克隆抗體進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，主要原理是抗原—抗體特異性結(jié)合，所以實(shí)驗(yàn)思路是取該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的肝組織細(xì)胞，提取其蛋白質(zhì)，加入適量的M蛋白的單克隆抗體，觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象(抗原—抗體特異性結(jié)合的現(xiàn)象)，若有則說(shuō)明M基因不失活，否則說(shuō)明M基因失活。2.(2022·南陽(yáng)五中調(diào)研)印度沙漠貓是一種珍稀貓科動(dòng)物，通過(guò)胚胎工程技術(shù)，可以讓家貓代孕而繁育，主要步驟如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)圖中誘導(dǎo)超數(shù)排卵所注射的激素是________________，作用的靶器官是________。(2)步驟甲是_________________過(guò)程、乙是_________________過(guò)程。促性腺激素卵巢(體外)受精作用胚胎移植(3)受精卵卵裂期所需營(yíng)養(yǎng)主要來(lái)自________(填“受精卵”或者“母體”)，外來(lái)胚胎在受體內(nèi)存活的生理學(xué)基礎(chǔ)是___________________________________________________________。(4)早期胚胎培養(yǎng)所用的培養(yǎng)液除了一些無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸外，還需添加________等。受精卵

受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)血清解析

(1)為了獲得更多的卵母細(xì)胞，需用促性腺激素對(duì)雌性印度沙漠貓進(jìn)行處理，該激素作用的靶器官是卵巢。(3)由于受精卵中的卵細(xì)胞體積較大，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此受精卵卵裂期所需營(yíng)養(yǎng)主要來(lái)自受精卵細(xì)胞，胚胎移植過(guò)程中，受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)是外來(lái)胚胎在受體內(nèi)存活的生理學(xué)基礎(chǔ)。專題強(qiáng)化練5（時(shí)間：45分鐘）微專題1基因工程(含PCR技術(shù))1.(2022·河南百校聯(lián)盟)回答有關(guān)基因工程的問(wèn)題： (1)構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生________末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生________(填“相同”或“不同”)黏性末端的限制酶。平相同(2)利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是______________________________________________________________。在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用________處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為_______________________。為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成________，常用抗原—抗體雜交技術(shù)。 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄成RNACa2＋分子雜交技術(shù)蛋白質(zhì)(3)如果要將某目的基因通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的______________中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過(guò)DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的______________上。T－DNA片段染色體DNA2.(2022·河北邯鄲調(diào)研)植物抗寒基因cor是一種誘導(dǎo)基因，cor基因只有在低溫條件下才被激活并產(chǎn)生冷調(diào)節(jié)蛋白，以提高植物的耐冷性。科研人員將擬南芥的抗寒基因cor導(dǎo)入煙草細(xì)胞中，培育出了抗寒煙草，培育過(guò)程如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)某實(shí)驗(yàn)小組提取常溫環(huán)境下生長(zhǎng)的擬南芥的mRNA，欲通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄的方式獲得cor基因，你認(rèn)為該實(shí)驗(yàn)小組________(填“能”或“不能”)獲得cor基因，并說(shuō)明理由_____________________________________________________________________________________________________________。PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，設(shè)計(jì)的引物只能與模板鏈在3′端配對(duì)，其原因是___________________________________________________________________。不能

因?yàn)閏or基因只有在冷刺激下才會(huì)被激活表達(dá)，常溫條件下cor基因未表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)沒有cor基因的mRNA(答案合理即可)DNA聚合酶只能從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸(答案合理即可)(2)如上圖所示，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法為____________，該方法更易將目的基因?qū)霟煵菔軗p部位的傷口處細(xì)胞，原因是___________________________________________________________________。導(dǎo)入的cor基因能在煙草細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定并表達(dá)的關(guān)鍵是__________________________________________________________________。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞cor基因能隨Ti質(zhì)粒的T－DNA片段轉(zhuǎn)移并整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上(3)抗寒轉(zhuǎn)基因煙草培育過(guò)程依據(jù)的生物學(xué)原理有________________________，培育的抗寒轉(zhuǎn)基因煙草(僅導(dǎo)入了一個(gè)cor基因)自交后代__________________(填“全部抗寒”“全部不抗寒”或“部分抗寒，部分不抗寒”)。基因重組和細(xì)胞的全能性部分抗寒，部分不抗寒解析

(1)根據(jù)題意可知，cor基因只有在低溫條件下才被激活并產(chǎn)生冷調(diào)節(jié)蛋白，因此常溫條件下cor基因未表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)沒有cor基因的mRNA；PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，因?yàn)镈NA聚合酶只能從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸，因此設(shè)計(jì)的引物只能與模板鏈在3′端配對(duì)。(2)圖中利用農(nóng)桿菌將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞，該方法為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法更易將目的基因?qū)霟煵菔軗p部位的傷口處細(xì)胞，原因是傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞；導(dǎo)入的cor基因能在煙草細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定并表達(dá)的關(guān)鍵是cor基因能隨Ti質(zhì)粒的T－DNA片段轉(zhuǎn)移并整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上。(3)抗寒轉(zhuǎn)基因煙草培育過(guò)程涉及基因工程和植物組織培養(yǎng)，基因工程的原理是基因重組，植物組織培養(yǎng)的原理是細(xì)胞的全能性。培育的抗寒轉(zhuǎn)基因煙草的抗寒基因位于細(xì)胞核內(nèi)的染色體DNA上，其遺傳遵循分離定律，自交后代會(huì)發(fā)生性狀分離，因此后代部分抗寒，部分不抗寒。3.(2022·濟(jì)南市質(zhì)檢)奧密克戎的抗原性與感染性與其表面的S蛋白(刺突糖蛋白)密切相關(guān)，現(xiàn)利用基因工程的方法生產(chǎn)相關(guān)疫苗。圖甲為構(gòu)建S蛋白基因表達(dá)載體的過(guò)程，圖乙為重組質(zhì)粒被相關(guān)酶酶切后的電泳結(jié)果。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。(1)①過(guò)程所使用的酶為________，為保證采用PCR技術(shù)擴(kuò)增S蛋白基因的正常進(jìn)行，反應(yīng)體系的主要成分有________________________________。PCR技術(shù)中低溫復(fù)性的目的是____________________________________________。(2)通過(guò)PCR技術(shù)可在cDNA分子中專一性擴(kuò)增出S蛋白基因，其原因是___________________________________________________________________________________。在PCR反應(yīng)體系中加入1個(gè)S蛋白基因，經(jīng)過(guò)4次循環(huán)，需要的引物數(shù)量是________個(gè)。逆轉(zhuǎn)錄酶模板DNA、dNTP、引物、Taq酶使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的(或引物能與S蛋白基因特異性結(jié)合)30(3)構(gòu)建好的重組質(zhì)粒長(zhǎng)度為2000bp，用限制酶HindⅢ及限制酶HindⅢ和BamHⅠ分別對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行切割并電泳，結(jié)果如圖乙所示，可推測(cè)BamHⅠ在重組質(zhì)粒上有________個(gè)酶切位點(diǎn)。為使S蛋白基因在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把S蛋白基因正確插入重組質(zhì)粒的_________________之間。(4)目前人們注射的新冠疫苗中有一種為腺病毒載體疫苗。該疫苗是將S蛋白基因插入到改造之后的腺病毒基因組中，待腺病毒侵染人體后，可引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)。請(qǐng)用文字和箭頭表示出腺病毒載體疫苗進(jìn)入機(jī)體后產(chǎn)生抗體的過(guò)程______________________________________________________________。3啟動(dòng)子和終止子S蛋白基因→mRNA→S蛋白作為抗原→體液免疫→抗體解析

(1)據(jù)圖甲分析可知，①過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，因此①過(guò)程所使用的酶為逆轉(zhuǎn)錄酶，為保證采用PCR技術(shù)擴(kuò)增S蛋白基因的正常進(jìn)行，反應(yīng)體系中的主要成分有模板DNA、dNTP、引物、Taq酶。PCR技術(shù)中低溫復(fù)性的目的是使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上。(2)引物是根據(jù)S蛋白基因的一段已知序列設(shè)計(jì)合成的，因此通過(guò)PCR技術(shù)可在cDNA分子中專一性擴(kuò)增出S蛋白基因。PCR過(guò)程經(jīng)過(guò)4次循環(huán)，擴(kuò)增出24個(gè)DNA分子，其中含有模板鏈的兩個(gè)DNA分子中各含有一個(gè)引物，其他DNA分子中都含有兩個(gè)引物，因此共需要的引物數(shù)量是14×2＋2＝30(個(gè))。(3)據(jù)題圖乙可知，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒長(zhǎng)度為2000bp，用限制酶HindⅢ切割的結(jié)果是產(chǎn)生三個(gè)不同長(zhǎng)度的DNA分子，且DNA分子長(zhǎng)度之和為2000bp，說(shuō)明該重組質(zhì)粒中含有三個(gè)限制酶HindⅢ的酶切位點(diǎn)；在限制酶HindⅢ切割的基礎(chǔ)上，再用限制酶BamHⅠ進(jìn)行切割并電泳，結(jié)果顯示，與用限制酶HindⅢ切割的結(jié)果相比，長(zhǎng)度為400bp的DNA片段消失，說(shuō)明該片段上存在一個(gè)限制酶BamHⅠ的切割位點(diǎn)，長(zhǎng)度為1400bp的DNA片段消失，出現(xiàn)長(zhǎng)度為420bp和560bp的DNA片段，說(shuō)明原1400bp的DNA片段上存在兩個(gè)限制酶BamHⅠ的切割位點(diǎn)，因此BamHⅠ在重組質(zhì)粒上有三個(gè)酶切位點(diǎn)。為使S蛋白基因在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把S蛋白基因正確插入重組質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間。(4)據(jù)題意可知，該疫苗是將S蛋白基因插入到改造之后的腺病毒基因組中，待腺病毒侵染人體后，S蛋白基因先轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA，再翻譯合成S蛋白，S蛋白作為抗原，引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，在體液免疫中，由漿細(xì)胞分泌產(chǎn)生抗體。微專題2細(xì)胞工程4.(2022·廈門市質(zhì)檢)細(xì)胞培養(yǎng)是指在人工模擬環(huán)境中，使細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。無(wú)論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程?；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題： (1)儲(chǔ)存某種生物的基因離不開基因工程和微生物培養(yǎng)，用特定的________________酶將某種生物的總DNA切割成含有該種生物不同基因的許多DNA片段，再用___________酶將這些片段隨機(jī)地連接在質(zhì)粒等載體上，然后轉(zhuǎn)移到大腸桿菌或酵母菌等受體菌細(xì)胞中儲(chǔ)存。各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為___________。限制DNA連接基因文庫(kù)(2)植物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基中常需要添加適量的____________________(填激素)，以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂。在反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng)離體細(xì)胞可以獲得人參皂甙、紫草素等藥物成分，此時(shí)添加到反應(yīng)器中的是________(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。(3)在細(xì)胞離體培養(yǎng)中，最困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，它需要支持物、O2和CO2、動(dòng)物血清等條件，動(dòng)物細(xì)胞貼附在玻璃等支持物上生長(zhǎng)繁殖的特點(diǎn)稱為____________；提供的CO2的主要作用是__________________；使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)需要加入血清，原因是_____________________________________________________________________________________________。生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素液體細(xì)胞貼壁維持培養(yǎng)液的pH

人們對(duì)動(dòng)物細(xì)胞所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，而血清等含有細(xì)胞所需要的成分(4)早期胚胎培養(yǎng)是對(duì)動(dòng)物早期胚胎發(fā)育過(guò)程的模擬，哺乳動(dòng)物的早期胚胎發(fā)育過(guò)程是在___________________