納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響

www.CRTERwww.CRTER.org王巍煒，等.納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響www.CRTERwww.CRTER.org王巍煒，等.納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響PAGE5104P.O.Box10002PAGE5099P.O.Box1200,www.CRTER.org中國組織工程研究第20卷第34期2016–08–19www.CRTER.orgChineseJournalofTissueEngineeringResearchAugust19,2016Vol.20,No.34·研究原著·研究原著·PAGE5098P.O.Box10002納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響王巍煒，王德光，巫正偉，張勇，錢可寶(昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院胸外科，云南省昆明市650011)引用本文：王巍煒，王德光，巫正偉，張勇，錢可寶.納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響[J].中國組織工程研究，2016，20(34):5098-5103.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.34.013ORCID:0000-0001-7874-1421(王巍煒)文章快速閱讀：納米雄黃抑制肺癌A549納米雄黃抑制肺癌A549細(xì)胞增殖及遷移王巍煒，男，1979年生，云南省曲靖市人，漢族，博士，副主王巍煒，男，1979年生，云南省曲靖市人，漢族，博士，副主任醫(yī)師，主要從事肺癌耐藥相關(guān)研究。通訊作者：巫正偉，副主任醫(yī)師，昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院胸外科，云南省昆明市650011中圖分類號:R318文獻標(biāo)識碼:A文章編號:2095-4344(2016)34-05098-06稿件接受：2016-06-16細(xì)胞生長細(xì)胞表面整合素β1和上皮鈣黏素表達納米雄黃可抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)其凋亡細(xì)胞生長細(xì)胞表面整合素β1和上皮鈣黏素表達納米雄黃可抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)其凋亡對照組，加入等量生理鹽水對照組，加入等量生理鹽水細(xì)胞增殖和凋亡細(xì)胞增殖和凋亡分組A549細(xì)胞培養(yǎng)傳代分組A549細(xì)胞培養(yǎng)傳代實驗組，加入100mg/L納米雄黃4μL細(xì)胞生長抑制率細(xì)胞生長抑制率文題釋義：納米雄黃：雄黃可抑制癌癥細(xì)胞DNA合成，誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡，提高機體免疫力，發(fā)揮抗癌作用。但由于雄黃毒性比較大，溶解性比較低，在臨床應(yīng)用中受到限制。將雄黃制備成納米雄黃，納米雄黃的顆粒直徑較小，穿透能力較強，生物利用度顯著提高，毒性顯著降低，在抗腫瘤作用方面有廣泛研究。細(xì)胞增殖：是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞；同時，多細(xì)胞生物可以由一個受精卵，經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化，最終發(fā)育成一個新的多細(xì)胞個體。必須強調(diào)指出，通過細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到2個子細(xì)胞中去?？梢?，細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。摘要背景：有研究發(fā)現(xiàn)雄黃具有抗腫瘤作用，但關(guān)于納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移作用的研究不多。目的：觀察納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響。方法：取生長狀態(tài)良好的肺癌A549細(xì)胞懸液，接種于6孔板，實驗組加入100mg/L納米雄黃4μL，對照組加入等量生理鹽水。培養(yǎng)48h，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長；培養(yǎng)24，48，72h，MTT法檢測細(xì)胞增殖；培養(yǎng)24，48h，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡；培養(yǎng)24h，免疫組織化學(xué)法檢測整合素β1和上皮鈣黏素表達。結(jié)果與結(jié)論：①細(xì)胞生長：實驗組細(xì)胞體積縮小變形，數(shù)目減少，形狀變?yōu)閳A形或橢圓形，細(xì)胞呈散在生長；對照組細(xì)胞貼壁生長，體積較大，胞漿比價豐富，形狀呈梭形，生長比較旺盛，大小均勻，部分細(xì)胞融合成片；②細(xì)胞增殖：實驗組不同時間點的A值低于對照組(P<0.05)，不同時間點的細(xì)胞生長抑制率高于對照組(P<0.05)；③細(xì)胞凋亡：實驗組晚期凋亡率、總細(xì)胞凋亡率明顯高于對照組(P<0.05)；④免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：實驗組細(xì)胞整合素β1陽性細(xì)胞面密度、上皮鈣黏素陽性細(xì)胞面密度明顯低于對照組(P<0.05)；⑤結(jié)果表明：納米雄黃可抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)其凋亡。關(guān)鍵詞：主題詞：納米結(jié)構(gòu)；肺腫瘤；細(xì)胞增殖；細(xì)胞凋亡PAGE5101ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH4P.O.Box1200,Shenyang110004kf23385083@基金資助：云南省科技廳-昆明醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合基金項目(2013FB164)；云南省腫瘤醫(yī)院博士科研啟動基金(BS55201510)Nano-realgareffectonA549lungcancercellproliferation,apoptosisandmigrationAbstractBACKGROUND:Studieshavefoundthatrealgarhasanti-tumoreffect,butitseffectonproliferation,apoptosisandmigrationofA549lungcancercellsisrarelyreported.OBJECTIVE:Tostudytheeffectofnano-realgaronA549lungcancercellproliferation,apoptosisandmigration.METHODS:CulturedA549lungcancercellswereseededonto6-wellcultureplatescontaining100mg/Lnano-realgar(experimentalgroup)ornormalsaline(controlgroup).Cellgrowthwasobservedundermicroscopefor48hours.CellproliferationandapoptosisweredetectedusingMTTassay(24,48,72hoursofculture)andflowcytometry(24and48hoursofculture),respectively.Integrinβ1andcadherinexpressionwasdetectedusingimmunohistochemicalmethodat24hoursofculture.RESULTSANDCONCLUSION:Subjectheadings:Nanostructures;LungNeoplasms;CellProliferation;ApoptosisFunding:theJointFundProjectofYunnanProvincialScienceandTechnologyDepartment&KunmingMedicalUniversity,No.2013FB164;Dr.ScientificResearchFoundationofYunnanCitethisarticle:WangWW,WangDG,WuZW,ZhangY,QianKB.Nano-realgareffectonA549lungcancercellproliferation,apoptosisandmigration.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2016;20(34):5098-5103.WangWei-wei,M.D.,Associatechiefphysician,DepartmentofThoracicSurgery,ThirdAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,WangWei-wei,M.D.,Associatechiefphysician,DepartmentofThoracicSurgery,ThirdAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650011,YunnanProvinceCorrespondingauthor:WuZheng-wei,Associatechiefphysician,DepartmentofThoracicSurgery,ThirdAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunming650011,YunnanProvince,China0引言Introduction肺癌是呼吸系統(tǒng)比較常見的原發(fā)性惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率較高，中國由于空氣污染和吸煙情況比較嚴(yán)重，是世界肺癌高發(fā)的國家。降低肺癌死亡率的關(guān)鍵是對肺癌進行早期診斷和治療，肺癌有小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌以肺腺癌居多，肺腺癌以女性比較多見，有一部分肺腺癌診斷時既已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差[1-6]。提高肺癌治療效果的主要方法是采取多學(xué)科綜合治療，中醫(yī)在肺癌治療中起著舉足輕重的作用，尤其對于晚期肺癌患者。中醫(yī)認(rèn)為肺癌發(fā)生的關(guān)鍵是癌毒的作用，發(fā)病的主要原因為情志勞倦、邪毒入侵、飲食內(nèi)傷等[7-12]，以毒攻毒是中醫(yī)的一種傳統(tǒng)治療方法，在肺癌治療的整個過程中均可采用以毒攻毒的治療方法。雄黃即為以毒攻毒理論治療的中藥之一，由于雄黃難以溶解，在胃腸道內(nèi)的吸收較差，藥效難以較好的發(fā)揮[13-18]。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，出現(xiàn)了納米藥物技術(shù)，可將雄黃制備成納米雄黃，納米雄黃的顆粒直徑較小，穿透能力較強，生物利用度顯著提高。實驗通過制備納米雄黃，并將其于肺癌A549細(xì)胞共同培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)納米雄黃可抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖，增加其凋亡，抑制其整合素β1和上皮鈣黏素的表達。1材料和方法Materialsandmethods1.1設(shè)計對比觀察細(xì)胞學(xué)實驗。1.2時間及地點實驗于2014年5月至2015年7月在昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院實驗室完成。1.3材料A549肺癌細(xì)胞株購自山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞室。納米雄黃抑制肺癌A549細(xì)胞增殖實驗的主要試劑和儀器：試劑和儀器 來源雄黃陜西康惠制藥有限公司RPMI1640培養(yǎng)液美國公司Gibco公司PBS北京中山生物技術(shù)公司胰蛋白酶、二甲基亞砜、MTT液、TrionX-100、一抗兔抗人Integrinβ1抗體、兔抗人E-cd抗體、羊抗兔血清封閉液美國Sigma公司胎牛血清天津四季生物研究所納米雄黃抑制肺癌A549細(xì)胞增殖實驗的主要試劑和儀器：試劑和儀器 來源雄黃陜西康惠制藥有限公司RPMI1640培養(yǎng)液美國公司Gibco公司PBS北京中山生物技術(shù)公司胰蛋白酶、二甲基亞砜、MTT液、TrionX-100、一抗兔抗人Integrinβ1抗體、兔抗人E-cd抗體、羊抗兔血清封閉液美國Sigma公司胎牛血清天津四季生物研究所甲醇、醋酸上海晶純試劑有限公司山羊血清封閉液、SABC試劑盒武漢博士德生物工程有限公司DAB北京中杉公司CO2培養(yǎng)箱德國Heraeus公司離心機北京時代北利有限公司倒置相差顯微鏡日本Olympus公司細(xì)胞計數(shù)板上海求精生化試劑儀器有限公司細(xì)胞培養(yǎng)板美國Costar公司流式細(xì)胞儀沈陽精博科技有限公司1.4實驗方法制備納米雄黃[19]：用精研機將雄黃研磨納米化，由光子相關(guān)納米激光粒度分析儀(型號Winner801)測定納米雄黃顆粒的大小和粒徑分布，平均粒徑約70.01nm，符合納米藥物制劑要求。以KCl飽和硝酸溶液溶解納米雄黃，配成2g/L的混懸液，NaOH調(diào)pH至7.0，PBS定容，過濾除菌，4℃A549肺癌細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：將A549肺癌細(xì)胞從液氮罐中取出，置入37℃水浴箱中融解，800r/min離心3min，離心后棄上層液，加入PBS，離心，棄上層液，將細(xì)胞接種到RPMI1640完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)，培養(yǎng)制備A549肺癌細(xì)胞懸液：取生長良好的A549細(xì)胞，經(jīng)胰蛋白酶消化，接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，貼壁后置培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，24h后去掉培養(yǎng)液，經(jīng)胰酶消化后，收集細(xì)胞待用。細(xì)胞分組培養(yǎng)：將A549肺癌細(xì)胞分2組培養(yǎng)，實驗組給予100mg/L納米雄黃4μL進行干預(yù)，對照組給予等量的生理鹽水。1.5主要觀察指標(biāo)細(xì)胞生長情況：細(xì)胞濃度為(1-2.5)×108L細(xì)胞增殖情況：細(xì)胞濃度為1×106L-1。培養(yǎng)24，48，72h，在培養(yǎng)結(jié)束前4h加入MTT液，培養(yǎng)4h加入二甲基亞砜，酶聯(lián)免疫法檢測490nm波長的吸光度值(A490)，計算A549細(xì)胞生長抑制率，生長抑制率=(對照組A值-納米雄黃組A值)/對照組A值細(xì)胞凋亡情況：細(xì)胞濃度為5×108L-1。培養(yǎng)24，細(xì)胞整合素β1和上皮鈣年素表達的檢測：細(xì)胞濃度為(1-2.5)×108L-1。培養(yǎng)24h，PBS洗滌，乙醇固定，PBS洗滌，加入TritonX-100孵育，PBS洗滌，去離子水孵育，PBS洗滌，山羊血清封閉液封閉，加入一抗兔抗人Integrinβ1抗體以及兔抗人E-cd抗體孵育，PBS洗滌，加入二抗羊抗兔血清封閉液孵育，PBS洗滌，加入SABC試劑孵育，PBS洗滌，DAB染色，蒸餾水洗滌，蘇木精復(fù)染，蒸餾水洗滌，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下進行觀察，計算陽性細(xì)胞所占的比例(陽性細(xì)胞面密度1.6統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)輸入SPSS18.0軟件進行處理，計量資料用±s表示，組間比較采用t檢驗，取P=0.05為顯著標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果Results2.1細(xì)胞生長情況培養(yǎng)48h后，顯微鏡下發(fā)現(xiàn)，實驗組細(xì)胞體積縮小變形，數(shù)目減少，形狀變?yōu)閳A形或橢圓形，細(xì)胞呈散在生長；對照組細(xì)胞貼壁生長，體積較大，胞漿比較豐富，形狀呈梭形，生長比較旺盛，大小均勻，部分細(xì)胞融合成片，見圖1。2.2細(xì)胞增殖情況實驗組細(xì)胞培養(yǎng)不同時間點的A值均明顯低于對照組(P<0.05)，表明納米雄黃對A549細(xì)胞具有毒作用，見表1。由表2看出，實驗組培養(yǎng)不同時間點的生長抑制率均明顯高于對照組(P<0.05)，表明納米雄黃對A549細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用。2.3細(xì)胞凋亡情況實驗組細(xì)胞早期凋亡率稍高于對BA組別整合素β1上皮鈣黏素實驗組53.42±6.3747.53±7.03對照組BA組別整合素β1上皮鈣黏素實驗組53.42±6.3747.53±7.03對照組84.47±8.4388.54±7.49t14.45312.579P00表4實驗組與對照組A549細(xì)胞整合素β1、上皮鈣黏素的表達情況(±s，陽性細(xì)胞面密度)Table4TheexpressionofA549cellsurfaceintegrinβ1andcadherininthetwogroups圖1圖1實驗組與對照組細(xì)胞培養(yǎng)48h后的形態(tài)(×200)Figure1MorphologyofA549cellsafter48hoursofcultureinthetwogroups(×200)圖注：圖中A為對照組，細(xì)胞貼壁生長，體積較大，胞漿比較豐富，形狀呈梭形，生長比較旺盛，大小均勻，部分細(xì)胞融合成片；B為實驗組，細(xì)胞體積縮小變形，數(shù)目減少，形狀變?yōu)閳A形或橢圓形，細(xì)胞呈散在生長。PAGE5103ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH4P.O.Box1200,Shenyang110004kf23385083@表1實驗組與對照組A549細(xì)胞的增殖(±s，A值表1實驗組與對照組A549細(xì)胞的增殖(±s，A值)Table1ProliferationofA549lungcancercellsinthetwogroups組別24h48h72h實驗組28.43±1.4534.41±2.4736.49±3.88對照組6.12±0.879.02±1.0210.78±1.03t15.47917.23416.459P000組別早期凋亡率晚期凋亡率總凋亡率實驗組4.03±0.4222.16±4.8426.19±4.12對照組3.51±0.533.99±0.857.50±0.79t1.34211.42610.453P0.08400組別24h48h72h實驗組0.42±0.080.54±0.050.73±0.11對照組0.57±0.230.89±0.071.26±0.09t4.7565.7947.498P0.0070.0040表表2實驗組與對照組A549細(xì)胞的生長抑制率(±s，%)Table2GrowthinhibitionratioofA549lungcancercellsinthetwogroups表表3實驗組與對照組A549細(xì)胞凋亡情況(±s，%)Table3ApoptosisofA549lungcancercellsinthetwogroups照組，但差異無顯著性意義(P>0.05)；實驗組細(xì)胞晚期凋亡率明顯高于對照組(P<0.05)，細(xì)胞總凋亡率明顯高于對照組(P<0.05)，表明A549細(xì)胞經(jīng)納米雄黃處理后，凋亡率增加，以細(xì)胞晚期凋亡為主，見表3。2.4細(xì)胞整合素β1與上皮鈣黏素表達情況細(xì)胞整合素β1表達：實驗組細(xì)胞整合素β1陽性細(xì)胞面密度明顯低于對照組(P<0.05)，表明納米雄黃對A549細(xì)胞整合素β1表達有抑制作用，見表4。上皮鈣黏素表達：實驗組細(xì)胞上皮鈣黏素陽性細(xì)胞面密度明顯低于對照組(P<0.05)，表明納米雄黃對A549細(xì)胞上皮鈣黏素表達有抑制作用，見表4。3討論Discussion目前肺癌的治療主要有手術(shù)治療、化學(xué)治療及放射治療，另外中醫(yī)治療在肺癌的治療中也起著舉足輕重的作用，尤其聯(lián)合化學(xué)治療，取得了良好效果。常用的中藥聯(lián)合化療治療方法有：①經(jīng)驗方聯(lián)合化療治療：半夏泄心湯、百合固金湯、補陽還五湯、龜鹿二仙湯等聯(lián)合化療治療肺癌均取得了顯著療效，保護了患者化療過程對機體的傷害，有利于化療的順利進行，并且參與肺癌的發(fā)生發(fā)展，與肺癌的預(yù)后密切相關(guān)[19-22]；參苓白術(shù)加味湯、桃紅四物湯加減方、現(xiàn)當(dāng)歸補血湯、六君子湯加減等聯(lián)合化療能夠降低肺癌患者的臨床癥狀，減輕化療副反應(yīng)，提高肺癌患者的生活質(zhì)量[23-26]。沙參麥冬湯、補中益氣湯、桑菊飲和參芪瀉白散等聯(lián)合化療可減輕化療的不良反應(yīng)，改善臨床癥狀，延長患者壽命，提高生活質(zhì)量[27-29]。②自創(chuàng)中藥方聯(lián)合化療治療：自創(chuàng)中藥方有肺癌方、固本解毒湯、健脾潤肺解毒湯、抗瘤增效方、下氣散結(jié)湯等[30-34]，肺癌方可穩(wěn)定肺癌，減輕肺癌的毒反應(yīng)，減輕骨髓抑制，提高臨床效果。③單純中藥制劑聯(lián)合化療治療：薏苡仁油聯(lián)合化療治療肺癌效果顯著[35]；華蟾素聯(lián)合化療治療晚期肺癌效果顯著，可減少不良反應(yīng)，保護骨髓[36]；康萊特注射液聯(lián)合化療可抑制肺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力，保護免疫功能，提高臨床效果；鴉膽子油乳和苦參堿聯(lián)合化療的治療效果也優(yōu)于單純化療[37-38]。雄黃作為一種中藥，具有抗腫瘤的作用，但由于雄黃溶解性差，使其在臨床應(yīng)用中受到一定限制。雄黃是砷硫化物的一種，呈桔紅色，為土塊狀或密粒狀，熔點比價低，在農(nóng)業(yè)、軍事工業(yè)以及冶煉工業(yè)中有廣泛應(yīng)用，在醫(yī)學(xué)方面也可被用作藥物。雄黃作為中藥的一種，具有殺菌、抗病毒、清熱解毒、殺蟲及抗腫瘤等作用，在臨床上被用于治療淋巴結(jié)核及慢性粒細(xì)胞白血病等[38]，由于雄黃的毒性比較大，單獨服藥危險性比較大，常在復(fù)方制劑中應(yīng)用，可降低雄黃的毒性[39]。隨著科技的不斷進步，出現(xiàn)了納米技術(shù)，納米技術(shù)是將材料或者物質(zhì)在100nm以下進行處理，創(chuàng)造新的物質(zhì)的技術(shù)，在制藥方面被廣泛應(yīng)用[40]。在中藥方法，應(yīng)用納米技術(shù)可制造中藥的有效成分、部位，制成原藥或者復(fù)方制劑，納米中藥具有節(jié)約中藥資源，提高中藥的生物利用度，降低中藥的毒副作用，增加中藥的靶向性，增加中藥的新功能，改變藥性等優(yōu)點。雄黃可以抑制癌癥細(xì)胞DNA合成，誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞凋亡，提高機體免疫力，發(fā)揮抗癌作用。但由于雄黃毒性比較大，溶解性比較低，在臨床應(yīng)用中受到限制。納米雄黃的制備提高了雄黃在臨床中的應(yīng)用，納米雄黃生物利用度顯著提高，毒性顯著降低，在抗腫瘤作用方面有廣泛研究。實驗通過培養(yǎng)A549肺癌細(xì)胞，制備納米雄黃并將其與肺癌A549細(xì)胞共同培養(yǎng)，同時設(shè)立對照組，分析A549細(xì)胞的生長情況、增殖情況、凋亡情況及整合素β1和上皮鈣黏素表達情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實驗組A549細(xì)胞體積縮小變形，數(shù)目減少，形狀變?yōu)閳A形或橢圓形，細(xì)胞呈散在生長；對照組A549細(xì)胞貼壁生長，體積比較大，胞漿比價豐富，形狀呈梭形，生長比較旺盛，大小均勻，部分細(xì)胞融合成片，可見納米雄黃能夠破壞A549肺癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)，阻礙A549肺癌細(xì)胞的正常生長。MTT法測定納米雄黃對A549細(xì)胞作用增殖作用結(jié)果顯示，實驗組A549細(xì)胞不同時間點的A值均明顯低于對照組，不同時間點的生長抑制率均明顯高于對照組，可見納米雄黃可抑制A549肺癌細(xì)胞的增殖。處理48h后，AnnexinV/PI染色結(jié)果顯示，實驗組A549細(xì)胞早期凋亡率稍高于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，晚期凋亡率、總凋亡率明顯高于對照組，可見納米雄黃可誘導(dǎo)A549肺癌細(xì)胞的凋亡。流式細(xì)胞儀對納米雄黃干預(yù)后的A549細(xì)胞整合素β1表達情況監(jiān)測結(jié)果顯示，實驗組A549細(xì)胞整合素β1的陽性面密度比值明顯低于對照組。流式細(xì)胞儀對納米雄黃干預(yù)后的A549細(xì)胞上皮鈣黏素的表達情況監(jiān)測結(jié)果顯示，實驗組A549細(xì)胞上皮鈣黏素陽性比值明顯低于對照組，整合素β1和上皮鈣黏素與肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可見納米雄黃具有抗A549細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。綜上所述，納米雄黃可抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖，增加其凋亡，抑制肺其整合素β1和上皮鈣黏素的表達，具有抗A549細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。作者貢獻：王巍煒進行實驗設(shè)計，實驗實施為王巍煒、王德光，實驗評估為王巍煒、巫正偉，資料收集為王巍煒、張勇、錢可寶，王巍煒成文，張勇審校。利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章無相關(guān)利益沖突。倫理問題：未涉及倫理沖突內(nèi)容。文章查重：文章出版前已經(jīng)過CNKI反剽竊文獻檢測系統(tǒng)進行3次查重。文章外審：文章經(jīng)國內(nèi)小同行外審專家審核，符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：第一作者與通訊作者對于研究和撰寫的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)(包括計算機數(shù)據(jù)庫)記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷毀，可接受核查。文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。4參考文獻References肺癌篩查白皮書[J].中國腫瘤臨床與康復(fù),2015,22(12):1511.聶立功.肺癌的篩查——機遇與挑戰(zhàn)[J].中國肺癌雜志,2015,18(12):721-724.侯晶晶,王慧娟,張國偉,等.多原發(fā)肺癌的診斷與治療[J].中國肺癌雜志,2015,18(12):764-769.KilburnJM,SoikeMH,LucasJT,etal.Imageguidedradiationtherapymayresultinimprovedlocalcontrolinlocallyadvancedlungcancerpatients.PractRadiatOncol.2016;6(3):e73-80.GantiAK,ShostromV,AlorabiM,etal.EarlyStageNon-Small-CellLungCancerinOctogenarianandOlderPatients:ASEERDatabaseAnalysis.ClinLungCancer.2016;17(4):285-291.YangJC,SrimuninnimitV,AhnMJ,etal.First-LinePemetrexedplusCisplatinfollowedbyGefitinibMaintenanceTherapyversusGefitinibMonotherapyinEastAsianNever-SmokerPatientswithLocallyAdvancedorMetastaticNonsquamousNon-SmallCellLungCancer:FinalOverallSurvivalResultsfromaRandomizedPhase3Study.JThoracOncol.2016;11(3):370-379.李超.中醫(yī)綜合方案維持治療晚期非小細(xì)胞肺癌對疾病進展時間和生活質(zhì)量的影響[J].實用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2015,15(4):36-37.鄭東京,許鑫,鄭偉達.名老中醫(yī)鄭偉達治療原發(fā)性支氣管肺癌經(jīng)驗探析[J].中醫(yī)臨床研究,2015,7(18):1-4.王富文.中醫(yī)防護治療對非小細(xì)胞肺癌化療患者臨床癥狀干預(yù)作用的隨機對照研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué),2015.JiangHW,HuQ,HeDF,etal.ClinicalApplicationofImmune-relatedResponseCriteriainEvaluatingChineseMedicalTreatmeforAdvancedNon-smallCellLungCancer.ZhongguoZhongXiYiJieHeZaZhi.2015;35(9):1074-1077.WuM,LuP,ShiL,etal.TraditionalChinesepatentmedicinesforcancertreatmentinChina:anationwidemedicalinsurancedataanalysis.Oncotarget.2015;6(35):38283-38295.CuiS,ZhaoY,GuA,etal.EfficacyandtolerabilityofcrizotinibinthetreatmentofALK-positive,advancednon-smallcelllungcancerinChinesepatients.MedOncol.2015;32(6):626.齊元富,李慧杰,于連洋.納米雄黃干預(yù)肺癌A549細(xì)胞對血管內(nèi)皮生長因子及缺氧誘導(dǎo)因子-1表達的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2015,35(3):720-722.齊元富,李慧杰,劉寨東.納米雄黃對肺癌A549細(xì)胞增殖影響及其機制的探討[J].中華腫瘤防治雜志,2013,20(1):27-30.劉寨東,齊元富,李秀榮.納米雄黃協(xié)同順鉑對人肺癌A_(549)細(xì)胞b-FGF、MMP-9表達的影響[J].中國中醫(yī)藥科技,2013,20(3):252-253.ShiZT.ReportofalungcancersurveyinHunanrealgarminers.ZhonghuaJieHeHeHuXiZaZhi.1989;12(4):230-231,255-256.DingW,ZhangL,KimS,etal.Arsenicsulfideasapotentialanticancerdrug.MolMedRep.2015;11(2):968-974.TianY,WangX,XiR,etal.Enhancedantitumoractivityofrealgarmediatedbymillingittonanosize.IntJNanomedicine.2014;9:745-757.閻麗珠,周潔.半夏瀉心湯治療非小細(xì)胞肺癌化療所致惡心嘔吐40例[J].福建中醫(yī)藥,2012,43(2):4-5.劉黎,周強,曠云祥.百合固金湯對肺癌患者生活質(zhì)量的干預(yù)的觀察[J].四川醫(yī)學(xué),2