國家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧課件

國家自然科學(xué)基金

研究方案撰寫技巧

成都中醫(yī)藥大學(xué)：丁維俊

2013.11國家自然科學(xué)基金1NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要立項依據(jù)研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費預(yù)算NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要2NSFC研究方案:330分1.研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分）范圍合適：3-5個內(nèi)容：n重點突出：1-2個重點：關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確：2.技術(shù)路線（90分）設(shè)計合理：方法可行：成熟可靠;可重復(fù)性強3.研究方法及手段（90分）方法先進：技術(shù)成熟可靠：有創(chuàng)新：4.研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）：可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表論文：申請專利：可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)：NSFC研究方案:330分1.研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問3摘要的主要內(nèi)容是研究方案

如：“用……方法進行……研究，探索/證明……問題，對闡明……機制／揭示……規(guī)律有重要意義，為……奠定基礎(chǔ)／提供……思路”摘要的主要內(nèi)容是研究方案

如：“用……方法進行4立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系

立論依據(jù)：闡述背景和理由，回答“為什么”

研究方案：是申請書的核心，回答“怎么做”

研究基礎(chǔ)：展示積累和實力，建立“信任感”

立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系

立論5研究方案研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究方法、技術(shù)路線年度研究計劃及預(yù)期進展研究方案研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題61.研究目標(biāo)撰寫要求：有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)

如：探索……問題，明確……關(guān)系，揭示……規(guī)律，闡明…原理（機制），建立……方法等1.研究目標(biāo)撰寫要求：有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)7【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機理，為防治白內(nèi)障提供線索。【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確8研究目標(biāo)

1個目標(biāo):解決…科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題關(guān)鍵問題1－2個，并與目標(biāo)一致問題：目標(biāo)“大、平、淺”

沒有做到“專、精、深”

應(yīng)提倡“小題大做”研究目標(biāo)

1個目標(biāo):解決…科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題9

2、研究內(nèi)容存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。

2、研究內(nèi)容存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容10

研究內(nèi)容:相對集中的有限目標(biāo)和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點和特色。深入的文獻調(diào)研：凝煉出的科學(xué)問題是什么？采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學(xué)問題？解決這個科學(xué)問題對學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義？對社會經(jīng)濟的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價值？研究內(nèi)容:相對集中的有限目標(biāo)113.研究方法（1）病例納入與排除方法

（2）（臨床）檢測指標(biāo)與標(biāo)本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）統(tǒng)計學(xué)處理3.研究方法（1）病例納入與排除方法12材料或研究對象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料可靠，對象可控制；自擬處方要論證。分組(方案)設(shè)計和樣本量要符合統(tǒng)計學(xué)要求，對照要嚴(yán)格。方法在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡可能要有創(chuàng)新。指標(biāo)針對性強是第一位。盡量采用最新的專一性強的指標(biāo)并要論證其可行性和適用性。材料或研究對象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料13

介紹技術(shù)方法的技巧

成熟的方法要簡要介紹，重點闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)

新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。注意：必須對所運用的技術(shù)方法原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。介紹技術(shù)方法的技巧14

研究方法常見問題過于簡單：在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。撰寫要求：以研究項目的需求為前提，盡量采用目前最先進的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。研究方法常見問題154、擬解決的關(guān)鍵問題什么是關(guān)鍵問題？

--研究過程中對達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。

--為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。4、擬解決的關(guān)鍵問題16技術(shù)路線：路線圖，簡單明了

技術(shù)路線：路線圖，簡單明了

17

5、技術(shù)路線

存在問題：不清楚，不詳細(xì)，不可行。

撰寫要求：清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。

撰寫方法：以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫清楚每個具體步驟。5、技術(shù)路線18研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系

1、首先要確定研究目標(biāo)：國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的

具體科學(xué)問題就是項目的研究目標(biāo)

2、依據(jù)目標(biāo)確定研究內(nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法

3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別：

研究內(nèi)容：重點回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。

技術(shù)路線：重點回答怎么做的操作流程。

研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系

196、可行性分析

理論分析：學(xué)術(shù)可行性研究手段、方法分析：技術(shù)可行性預(yù)實驗結(jié)果分析：前期基礎(chǔ)對所具備的實驗條件進行分析對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析國家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧課件20

7、創(chuàng)新性對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。

原始創(chuàng)新：填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。

跟蹤創(chuàng)新：

在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。7、創(chuàng)新性218、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果

年度研究計劃：

按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。預(yù)期研究結(jié)果：

理論成果：建立/豐富/補充/填補......

技術(shù)方法：建立/完善…...

專利：可望獲得……

論文：國際、國內(nèi)人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生

8、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果22研究方案寫作要點條理清楚?邏輯性目標(biāo)明確 ?重要性論據(jù)充分 ?科學(xué)性 方法可行 ?可行性基礎(chǔ)良好 ?優(yōu)越性研究方案寫作要點條理清楚?23案例分享題目：溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機理案例分享題目：24【摘

要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜?，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素(Leptin,insulin,Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻?！菊磕c道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及25研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征？針刺減肥作用機理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群？本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三：（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說；（3）構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺，促進肥胖機理研究與藥物研發(fā)。研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含26研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機制，建立證候與腸道菌群研究平臺。研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的272.1研究內(nèi)容基于上述目標(biāo)，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究：2.2.1篩查促進脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。2.2.2分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。2.2.3檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。2.2.4測試肥胖相關(guān)激素(leptin,insulin,Cholecystokinin)與FIAF酶含量。2.2.5體外試驗該核心菌群的能量收獲效率。2.2.6整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機理。2.1研究內(nèi)容基于上述目標(biāo)，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥282.3擬解決的關(guān)鍵問題

宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項目擬解決的關(guān)鍵問題。本項目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題（1）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。（2）巧妙設(shè)計對照。（3）強化檢測指標(biāo)的互補性、相互驗證性。（4）設(shè)計體外驗證實驗。2.3擬解決的關(guān)鍵問題

宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景29采用國內(nèi)常用脾腎兩虛型單純性肥胖標(biāo)準(zhǔn)患者與健康對照各50例驗證研究：確認(rèn)并優(yōu)化研究結(jié)果采用微量培養(yǎng)法檢測上述腸道菌群能量收獲與脂代謝效率整合研究，獲得如下成果：1．脾腎兩虛型單純性肥胖負(fù)責(zé)能量和脂代謝的腸道核心菌群；2．溫腎健脾針法對該核心菌群的調(diào)控機理；3．該核心菌群與患者脂代謝調(diào)控因子(激素、酶)的密切關(guān)系。收集病證結(jié)合納入的典型患者與對照組之血液與大便標(biāo)本；溫腎健脾針法治療3月；收集顯效者前30名隔2周納入的標(biāo)本；

上述兩類標(biāo)本完成如下四方面的檢測：篩查能量收獲與脂代謝之核心菌群：促進、抑制及雙向作用代表菌株。UPLC–MS法分析大便膽汁酸譜；GC–FID法分析大便短鏈脂肪酸譜。Western法測定血清FIAF酶含量；ELISA法測定血漿Leptin等激素含量。氧彈法測定單位大便殘余能量；酶-重量法測定膳食纖維殘留量。

圖2.實驗技術(shù)路線流程簡圖采用國內(nèi)常用脾腎兩虛型單純性肥胖標(biāo)準(zhǔn)患者與健康對照各50例驗303.2研究方法和技術(shù)要點簡述

3.2.1典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為保障試驗結(jié)果具有統(tǒng)計意義，同時考慮不超過20%的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對照。3.2研究方法和技術(shù)要點簡述

3.2.1典型脾腎兩虛型肥313.2.1.2治療方法

脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因為臨床顯著的個體差異，本項目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則：腧穴選擇：主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴：內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針法選擇：選用溫針或溫補法為主。操作方法：在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進行。3.2.1.2治療方法

脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾323.2.2實驗方法簡介

3.2.2.1核心菌群的篩查采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等,2007）：雙歧桿菌屬：BS培養(yǎng)基(但用申請者改進的以新鮮番茄汁代替多種維生素)。乳桿菌屬：LBS培養(yǎng)基;按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類桿菌屬：KV培養(yǎng)基;將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NO：98404)滅菌后冷卻至55℃，加入兔血(5％)、卡那霉素(100μg/m1)、硫酸鏈霉素(5μg/m1)及Vk1(0.1％)，傾注平皿。柔嫩梭菌屬：MRS培養(yǎng)基;M.Smithii菌:MBC培養(yǎng)基（補充3g/Lformate,3g/Lacetate,0.006%Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Shaedler培養(yǎng)基；均按Martin等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實驗時，用無菌稱量紙取糞便0.1g放入0.9ml稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至10-8。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗及相關(guān)文獻報道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20μl滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DY-II型厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48h。計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS3.0統(tǒng)計軟件包，用t檢驗分析不同組別的統(tǒng)計學(xué)差異顯著性。3.2.2實驗方法簡介

3.2.2.1核心菌群的篩查333.2.2.2UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜

擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開放實驗室提供的Waters公司ACQUITYUPLC檢測系統(tǒng)，參照Martin等(2007)建立的方法，完成大便檢測。標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司購買。質(zhì)譜檢測在Waters公司產(chǎn)品TOFLCT-Premier(WatersMSTechnologies,Manchester,UK)完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液調(diào)整濃度至1mg/ml，上ACQUITY?BEHC181.7m柱，以500ul/min流速洗脫12min，洗脫液組成由甲基氰：水40:60比例逐漸調(diào)整為60:40(pH4.0)。將分批收集的洗脫樣品上Q-TOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸－腦啡肽為參照，采用W-optic通路、毛細(xì)管電壓2.6kV、錐體電壓50V、噴霧氣流600ul/h等條件，完成檢測。每個樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。3.2.2.2UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物343.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗

采用Kihara等(2002)建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖(soybeanoligosacchride),乳果糖(lactulose),棉子糖(raffinose),蔗果三糖(kestose)等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20g/L），按0.5ml/孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作10-2,10-3,10-4,10-5稀釋，然后接種于培養(yǎng)板(每個濃度梯度設(shè)置3個重復(fù)樣)。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后，應(yīng)用前述“酶-重量法”測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GC–FID法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。3.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗

采用K353.2.3可行性分析

3.2.3.1學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合理，是本項目得以實現(xiàn)的理論基礎(chǔ)3.2.3.2前期相關(guān)實驗與臨床經(jīng)驗，是本項目順利實施得基本保障3.2.3.3人員搭配合理、技術(shù)熟練，具備完成本項目的知識與人力資源

3.2.3.4實驗設(shè)備基本具備，缺少的設(shè)備也得到落實3.2.3可行性分析

3.2.3.1學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合364本項目的特色與創(chuàng)新之處

4.1首次提出針灸減肥機理中，應(yīng)包括調(diào)節(jié)腸道菌群之新假說。提出在針灸減肥的整體性調(diào)控機理中，尚應(yīng)包括腸道菌群之局部調(diào)節(jié)。結(jié)合申請人研究經(jīng)歷與學(xué)科發(fā)展態(tài)勢看，該假說是對傳統(tǒng)針刺減肥原理的重要補充善，值得深入研究。4.2研究方法的組合創(chuàng)新4.3多學(xué)科整合效應(yīng)明顯，突出中醫(yī)自身的特色與優(yōu)勢4本項目的特色與創(chuàng)新之處

4.1首次提出針灸減肥機理中，應(yīng)375年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果

2009年度:納入患者與健康對照各20例，完成研究內(nèi)容之1~4項；總結(jié)并優(yōu)化研究方案，撰寫研究論文1~2篇。2010年度：納入患者與健康對照各30例，完成研究內(nèi)容之1~4項；撰寫論文2~4篇,發(fā)表論文3~4篇；培養(yǎng)青年科技骨干2名。

2011年度：完成研究內(nèi)容之5、6項研究。發(fā)表SCI論文2~３篇。項目結(jié)題。培養(yǎng)研究生2名。

預(yù)期研究結(jié)果：

理論成果：填補針灸調(diào)控腸道菌群的研究空白。

技術(shù)平臺：完善中醫(yī)藥候與腸道菌群研究平臺。

論

文：國際SCI論文2~3篇、國內(nèi)3~5篇。

人才培養(yǎng)：擬培養(yǎng)青年科技骨干2名、碩士研究生2名。5年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果

2009年度:納入患者與健38

祝：

各位申報成功！祝：39飯卡打開巴士風(fēng)格反對廣泛的的非官是大蘇打發(fā)的發(fā)非官方共和國符合國家和國際撒的方大哥給飛得更高是個搜狗是歸屬感是搞后呵呵敢死隊敢死隊敢死隊好地方個地方豆腐花哈哈動畫的發(fā)揮和家具風(fēng)格就國防軍廣泛幾個房間房管局房管局法國加工費交付給交付給交付給警方根據(jù)高房價法國警方交付給飯卡打開巴士風(fēng)格反對廣泛的的非官是大蘇打發(fā)的發(fā)非官方共和國40地方官梵蒂岡地方官方的說法暗室逢燈啊的非官是大蘇打發(fā)發(fā)射機的驕傲給大家仨個地方大師傅艱苦絕對是九回復(fù)肯定是解放后肯定是國防部換個風(fēng)格大富大貴士大夫但是發(fā)交付給地方官梵蒂岡地方官方的說法暗室逢燈啊的非官是大蘇打發(fā)發(fā)射機41地方大師傅大大規(guī)劃風(fēng)格化地方士大夫時的感到十分的官方電話獎和國家的驕傲還是看見好看的順豐單號健康博客程序客戶貸款空間很大防空識別的看不舒服的看不到看見對方看世界杯的咖啡酒吧的設(shè)備發(fā)的空降兵反抗波斯的反抗波斯的包括舍不得放開白色的反饋博客大巴是否看不上大夫開博客大巴發(fā)地方大師傅大大規(guī)劃風(fēng)格化地方士大夫時的感到十分的官方電話獎和42發(fā)的高科技恢復(fù)的很快就北方港口賓館飯店免費感受到覅好的傷口縫合第三部分難道是擴大解放和開始變得反抗集散地和反抗精神美女部門你先吃吧每年從小便考多少分可接受的反抗集散地和付款計劃的司法環(huán)境快遞費還是給客服電話給客服電話高考加分梵蒂岡回復(fù)后可見風(fēng)華高科點擊返回高科技發(fā)的高科技恢復(fù)的很快就北方港口賓館飯店免費感受到覅好的傷口縫43輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的科級干部科技發(fā)達(dá)韓國可接受的和都是方面你身邊的負(fù)面報道隨便翻開基本上都李開復(fù)倒過來看發(fā)動了攻擊附加山東南面分別明尼蘇達(dá)白發(fā)魔女十點半分工合理分擔(dān)和管理費的后果都是免費表面蛋白和風(fēng)格和規(guī)范輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的44我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)備方面你的身邊每年頒發(fā)的身份決定勝負(fù)看得十分愧疚和第三方?jīng)]辦法每個部門的婦女不敢面對瘋牛病而微軟微軟微軟為法國空軍東方科技很發(fā)達(dá)客戶給開發(fā)經(jīng)費的士大夫大師傅似的犯得上廣泛的和廣泛化工艱苦戶籍科戶籍科我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)45輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的科級干部科技發(fā)達(dá)韓國可接受的和都是方面你身邊的負(fù)面報道隨便翻開基本上都李開復(fù)倒過來看發(fā)動了攻擊附加山東南面分別明尼蘇達(dá)白發(fā)魔女十點半分工合理分擔(dān)和管理費的后果都是免費表面蛋白和風(fēng)格和規(guī)范輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的46我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)備方面你的身邊每年頒發(fā)的身份決定勝負(fù)看得十分愧疚和第三方?jīng)]辦法每個部門的婦女不敢面對瘋牛病而微軟微軟微軟為法國空軍東方科技很發(fā)達(dá)客戶給開發(fā)經(jīng)費的士大夫大師傅似的犯得上廣泛的和廣泛化工艱苦戶籍科戶籍科我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)47輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的科級干部科技發(fā)達(dá)韓國可接受的和都是方面你身邊的負(fù)面報道隨便翻開基本上都李開復(fù)倒過來看發(fā)動了攻擊附加山東南面分別明尼蘇達(dá)白發(fā)魔女十點半分工合理分擔(dān)和管理費的后果都是免費表面蛋白和風(fēng)格和規(guī)范輔導(dǎo)功課變得瘋狂進攻的傷口縫合可視電話的生命發(fā)表的但是發(fā)布的48我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)備方面你的身邊每年頒發(fā)的身份決定勝負(fù)看得十分愧疚和第三方?jīng)]辦法每個部門的婦女不敢面對瘋牛病而微軟微軟微軟為法國空軍東方科技很發(fā)達(dá)客戶給開發(fā)經(jīng)費的士大夫大師傅似的犯得上廣泛的和廣泛化工艱苦戶籍科戶籍科我卻哦網(wǎng)球餓哦我去哦欸開始的方便快捷反對蒙蔽動漫被父母電腦設(shè)49國家自然科學(xué)基金

研究方案撰寫技巧

成都中醫(yī)藥大學(xué)：丁維俊

2013.11國家自然科學(xué)基金50NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要立項依據(jù)研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費預(yù)算NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要51NSFC研究方案:330分1.研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分）范圍合適：3-5個內(nèi)容：n重點突出：1-2個重點：關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確：2.技術(shù)路線（90分）設(shè)計合理：方法可行：成熟可靠;可重復(fù)性強3.研究方法及手段（90分）方法先進：技術(shù)成熟可靠：有創(chuàng)新：4.研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）：可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表論文：申請專利：可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)：NSFC研究方案:330分1.研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問52摘要的主要內(nèi)容是研究方案

如：“用……方法進行……研究，探索/證明……問題，對闡明……機制／揭示……規(guī)律有重要意義，為……奠定基礎(chǔ)／提供……思路”摘要的主要內(nèi)容是研究方案

如：“用……方法進行53立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系

立論依據(jù)：闡述背景和理由，回答“為什么”

研究方案：是申請書的核心，回答“怎么做”

研究基礎(chǔ)：展示積累和實力，建立“信任感”

立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系

立論54研究方案研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究方法、技術(shù)路線年度研究計劃及預(yù)期進展研究方案研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題551.研究目標(biāo)撰寫要求：有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)

如：探索……問題，明確……關(guān)系，揭示……規(guī)律，闡明…原理（機制），建立……方法等1.研究目標(biāo)撰寫要求：有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)56【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機理，為防治白內(nèi)障提供線索。【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確57研究目標(biāo)

1個目標(biāo):解決…科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題關(guān)鍵問題1－2個，并與目標(biāo)一致問題：目標(biāo)“大、平、淺”

沒有做到“專、精、深”

應(yīng)提倡“小題大做”研究目標(biāo)

1個目標(biāo):解決…科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題58

2、研究內(nèi)容存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。

2、研究內(nèi)容存在問題：內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容59

研究內(nèi)容:相對集中的有限目標(biāo)和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點和特色。深入的文獻調(diào)研：凝煉出的科學(xué)問題是什么？采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學(xué)問題？解決這個科學(xué)問題對學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義？對社會經(jīng)濟的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價值？研究內(nèi)容:相對集中的有限目標(biāo)603.研究方法（1）病例納入與排除方法

（2）（臨床）檢測指標(biāo)與標(biāo)本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）統(tǒng)計學(xué)處理3.研究方法（1）病例納入與排除方法61材料或研究對象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料可靠，對象可控制；自擬處方要論證。分組(方案)設(shè)計和樣本量要符合統(tǒng)計學(xué)要求，對照要嚴(yán)格。方法在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡可能要有創(chuàng)新。指標(biāo)針對性強是第一位。盡量采用最新的專一性強的指標(biāo)并要論證其可行性和適用性。材料或研究對象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料62

介紹技術(shù)方法的技巧

成熟的方法要簡要介紹，重點闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)

新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。注意：必須對所運用的技術(shù)方法原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。介紹技術(shù)方法的技巧63

研究方法常見問題過于簡單：在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。撰寫要求：以研究項目的需求為前提，盡量采用目前最先進的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。研究方法常見問題644、擬解決的關(guān)鍵問題什么是關(guān)鍵問題？

--研究過程中對達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。

--為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。4、擬解決的關(guān)鍵問題65技術(shù)路線：路線圖，簡單明了

技術(shù)路線：路線圖，簡單明了

66

5、技術(shù)路線

存在問題：不清楚，不詳細(xì)，不可行。

撰寫要求：清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。

撰寫方法：以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫清楚每個具體步驟。5、技術(shù)路線67研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系

1、首先要確定研究目標(biāo)：國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的

具體科學(xué)問題就是項目的研究目標(biāo)

2、依據(jù)目標(biāo)確定研究內(nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法

3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別：

研究內(nèi)容：重點回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。

技術(shù)路線：重點回答怎么做的操作流程。

研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系

686、可行性分析

理論分析：學(xué)術(shù)可行性研究手段、方法分析：技術(shù)可行性預(yù)實驗結(jié)果分析：前期基礎(chǔ)對所具備的實驗條件進行分析對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析國家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧課件69

7、創(chuàng)新性對創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進性是有根本區(qū)別的。

原始創(chuàng)新：填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。

跟蹤創(chuàng)新：

在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。7、創(chuàng)新性708、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果

年度研究計劃：

按年度列出：研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。預(yù)期研究結(jié)果：

理論成果：建立/豐富/補充/填補......

技術(shù)方法：建立/完善…...

專利：可望獲得……

論文：國際、國內(nèi)人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生

8、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果71研究方案寫作要點條理清楚?邏輯性目標(biāo)明確 ?重要性論據(jù)充分 ?科學(xué)性 方法可行 ?可行性基礎(chǔ)良好 ?優(yōu)越性研究方案寫作要點條理清楚?72案例分享題目：溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機理案例分享題目：73【摘

要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜?，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素(Leptin,insulin,Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻?！菊磕c道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及74研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征？針刺減肥作用機理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群？本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三：（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說；（3）構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺，促進肥胖機理研究與藥物研發(fā)。研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含75研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機制，建立證候與腸道菌群研究平臺。研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂代謝的762.1研究內(nèi)容基于上述目標(biāo)，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究：2.2.1篩查促進脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。2.2.2分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。2.2.3檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。2.2.4測試肥胖相關(guān)激素(leptin,insulin,Cholecystokinin)與FIAF酶含量。2.2.5體外試驗該核心菌群的能量收獲效率。2.2.6整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機理。2.1研究內(nèi)容基于上述目標(biāo)，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥772.3擬解決的關(guān)鍵問題

宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項目擬解決的關(guān)鍵問題。本項目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題（1）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。（2）巧妙設(shè)計對照。（3）強化檢測指標(biāo)的互補性、相互驗證性。（4）設(shè)計體外驗證實驗。2.3擬解決的關(guān)鍵問題

宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景78采用國內(nèi)常用脾腎兩虛型單純性肥胖標(biāo)準(zhǔn)患者與健康對照各50例驗證研究：確認(rèn)并優(yōu)化研究結(jié)果采用微量培養(yǎng)法檢測上述腸道菌群能量收獲與脂代謝效率整合研究，獲得如下成果：1．脾腎兩虛型單純性肥胖負(fù)責(zé)能量和脂代謝的腸道核心菌群；2．溫腎健脾針法對該核心菌群的調(diào)控機理；3．該核心菌群與患者脂代謝調(diào)控因子(激素、酶)的密切關(guān)系。收集病證結(jié)合納入的典型患者與對照組之血液與大便標(biāo)本；溫腎健脾針法治療3月；收集顯效者前30名隔2周納入的標(biāo)本；

上述兩類標(biāo)本完成如下四方面的檢測：篩查能量收獲與脂代謝之核心菌群：促進、抑制及雙向作用代表菌株。UPLC–MS法分析大便膽汁酸譜；GC–FID法分析大便短鏈脂肪酸譜。Western法測定血清FIAF酶含量；ELISA法測定血漿Leptin等激素含量。氧彈法測定單位大便殘余能量；酶-重量法測定膳食纖維殘留量。

圖2.實驗技術(shù)路線流程簡圖采用國內(nèi)常用脾腎兩虛型單純性肥胖標(biāo)準(zhǔn)患者與健康對照各50例驗793.2研究方法和技術(shù)要點簡述

3.2.1典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為保障試驗結(jié)果具有統(tǒng)計意義，同時考慮不超過20%的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對照。3.2研究方法和技術(shù)要點簡述

3.2.1典型脾腎兩虛型肥803.2.1.2治療方法

脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因為臨床顯著的個體差異，本項目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則：腧穴選擇：主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴：內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針法選擇：選用溫針或溫補法為主。操作方法：在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進行。3.2.1.2治療方法

脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾813.2.2實驗方法簡介

3.2.2.1核心菌群的篩查采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等,2007）：雙歧桿菌屬：BS培養(yǎng)基(但用申請者改進的以新鮮番茄汁代替多種維生素)。乳桿菌屬：LBS培養(yǎng)基;按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類桿菌屬：KV培養(yǎng)基;將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NO：98404)滅菌后冷卻至55℃，加入兔血(5％)、卡那霉素(100μg/m1)、硫酸鏈霉素(5μg/m1)及Vk1(0.1％)，傾注平皿。柔嫩梭菌屬：MRS培養(yǎng)基;M.Smithii菌:MBC培養(yǎng)基（補充3g/Lformate,3g/Lacetate,0.006%Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Shaedler培養(yǎng)基；均按Martin等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實驗時，用無菌稱量紙取糞便0.1g放入0.9ml稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至10-8。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗及相關(guān)文獻報道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20μl滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DY-II型厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48h。計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS3.0統(tǒng)計軟件包，用t檢驗分析不同組別的統(tǒng)計學(xué)差異顯著性。3.2.2實驗方法簡介

3.2.2.1核心菌群的篩查823.2.2.2UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜

擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開放實驗室提供的Waters公司ACQUITYUPLC檢測系統(tǒng)，參照Martin等(2007)建立的方法，完成大便檢測。標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司購買。質(zhì)譜檢測在Waters公司產(chǎn)品TOFLCT-Premier(WatersMSTechnologies,Manchester,UK)完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液調(diào)整濃度至1mg/ml，上ACQUITY?BEHC181.7m柱，以500ul/min流速洗脫12min，洗脫液組成由甲基氰：水40:60比例逐漸調(diào)整為60:40(pH4.0)。將分批收集的洗脫樣品上Q-TOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸－腦啡肽為參照，采用W-optic通路、毛細(xì)管電壓2.6kV、錐體電壓50V、噴霧氣流600ul/h等條件，完成檢測。每個樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。3.2.2.2UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物833.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗

采用Kihara等(2002)建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖(soybeanoligosacchride),乳果糖(lactulose),棉子糖(raffinose),蔗果三糖(kestose)等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20g/L），按0.5ml/孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作10-2,10-3,10-4,10-5稀釋，然后接種于培養(yǎng)板(每個濃度梯度設(shè)置3個重復(fù)樣)。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后，應(yīng)用前述“酶-重量法”測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GC–FID法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。3.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗

采用K843.2.3可行性分析

3.2.3.1學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合理，是本項目得以實現(xiàn)的理論基礎(chǔ)3.2.3.2前期相關(guān)實驗與臨床經(jīng)驗，是本項目順利實施得基本保障3.2.3.3人員搭配合理、技術(shù)熟練，具備完成本項目的知識與人力資源

3.2.3.4實驗設(shè)備基本具備，缺少的設(shè)備也得到落實3.2.3可行性分析

3.2.3.1學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合854本項目的特色與創(chuàng)新之處

4.1首次提出針灸減肥機理中，應(yīng)包括調(diào)節(jié)腸道菌群之新假說。提出在針灸減肥的整體性調(diào)控機理中，尚應(yīng)包括腸道菌群之局部調(diào)節(jié)。結(jié)合申請人研究經(jīng)歷與學(xué)科發(fā)展態(tài)勢看，該假說是對傳統(tǒng)針刺減肥原理的重要補充善，值得深入研究。4.2研究方法的組合創(chuàng)新4.3多