銀杏黃酮提取

.銀杏葉概述銀杏（GinkgobilobaL.）又名白果，或鴨腳、公孫樹，為銀杏科、銀杏屬落葉喬木，是現(xiàn)存種子植物中最古老的孑遺植物，有植物界“活化石”之稱。銀杏是我國的特產(chǎn)植物，占世界總量的70%以上，它的葉和果都有較高的藥用價值。銀杏葉中藥成分主要包括：銀杏黃酮（Flavonoids）、萜內(nèi)酯、聚異戊烯醇、有機酸、銀杏酸等，其中銀杏黃酮和萜內(nèi)酯含量較大，其效用也被廣為認(rèn)可。另外銀杏葉還含有39種營養(yǎng)及功能成分，這其中包括：蛋白質(zhì)、糖、維生素C、維生素E、胡蘿卜素、18種氨基酸、25種礦質(zhì)營養(yǎng)微量元素，其中鈣、磷、硼、硒含量較高，其他如人體所需的鐵、氟、銅、錳、鋅、鉻等含量也較豐富，其中維生素C、維生素E、胡蘿卜素、硒、鋅、銅等作為營養(yǎng)性抗氧化劑與非營養(yǎng)性抗氧化劑-銀杏黃酮、萜內(nèi)酯、兒茶素、多酚類等對保護機體不受自由基所致的氧化和損傷發(fā)揮著重要的作用[1]。表1.1銀杏中的主要化學(xué)成分[2]組成物質(zhì)分子式存在部位白果酸（ginkgoicacid）C22H34O3外種皮、果肉氫化白果酸(hydroginkgoicacid)C22H36O3外種皮、果肉氫化白果亞酸(hydroginkolinicacid)C21H34O3外種皮、果肉白果酚(ginkgol)C21H34O外種皮、果肉銀杏酚酚(bilobol)外種皮、果肉白果醇(ginnolo)C29H60O外種皮白果二酚C21H31O2外種皮銀杏內(nèi)酯A(ginkgolideA)葉、根皮銀杏內(nèi)酯B(ginkgolideB)葉、根皮銀杏內(nèi)酯C(ginkgolideC)葉、根皮銀杏內(nèi)酯D(ginkgolideD)葉、根皮白果葉素C32H22O10葉莽草酸C7H10O5葉白果內(nèi)酯(bilobalide)葉黃酮類化合物(flavonoides)葉、種皮原兒茶酸(protocatechuicacid)種皮兒茶酚(pyrocatechol)種皮胡蘿卜苷(duacosterol)種皮芝麻素C22H18O6莖白果酮C15H20O2莖現(xiàn)存最早文獻《本草品匯精要》(明.劉文泰)記載，5000年前我國用銀杏葉作藥，用于肺虛咳喘、胸悶心痛等癥。隨著科學(xué)進步，對銀杏葉制劑的現(xiàn)代藥理學(xué)較深入研究，以及臨床應(yīng)用已表明，銀杏葉制劑具有擴張冠狀動脈、增加腦血流、改善微循環(huán)、抗血小板聚集、降血黏度、降血脂、降血壓等功效。所以，它能防治冠心病、高血脂癥、高血壓病、腦出血、腦動脈硬化、腦栓塞、腦中風(fēng)和老年性癡呆癥等心腦血管疾病，還能促進毛發(fā)生長、保護皮膚。因此，銀杏葉制劑已成為世界許多國家研究開發(fā)的熱門藥物[3]。隨著研究工作的深入，提取有效成分的工藝也不斷更新，總的趨勢是朝著提高有效成分收率，減少有害成分和雜質(zhì)在藥物中的殘留，減少環(huán)境污染等方向發(fā)展。1.1黃酮類化合物及應(yīng)用1.1.1黃酮類化合物黃酮類化合物屬于酚類化合物。在銀杏葉中黃酮類化合物含量較高。迄今為止，從銀杏葉中已經(jīng)分離出約30多種黃酮類化合物，已經(jīng)明確結(jié)構(gòu)的有20多種，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為3類：單黃酮類、雙黃酮類、兒茶素類。單黃酮苷類的苷元主要有山奈黃素(Keampferrol)、槲皮素(quercetin)、異鼠李黃素(isorhamnetin)、黃色黃素(luteolin)等。山奈黃素和槲皮素相應(yīng)的苷類即在C3-OH上與1或2個糖形成苷，常見的糖有葡萄糖、鼠李糖或葡萄糖與鼠李糖組成的雙糖。槲皮素不溶于水，溶于沸乙醇(1:23ml)，在無水乙醇中衛(wèi)1：290ml的溶解度。槲皮素的C3-OH與云香糖形成苷稱為蘆丁(rutin)，由于在分子中引入強親水基，則溶解度提高。水(1:8L)、沸水(1:200ml)、沸甲醇(1:7ml)、微溶于乙醇。由于山奈黃素、黃色黃素、異鼠李黃素等苷元衍生的各類苷的溶解度變化和槲皮素相似，因此，黃酮苷類的提取以選用熱水或熱的甲醇、乙醇或其水溶液作為提取劑居多【4】。圖1.2黃酮類化合物雙黃酮類化合物有六種：銀杏黃素(ginkgetin)、異銀杏黃素(isoginkgetin)、白果黃素(pliobetin)、阿曼托黃素(amentolflavone)、西阿多黃素和5’-甲氧基白果黃素。兒茶素根據(jù)母核2位碳原子旋光度不同及5’位是否含有羥基分為4種：兒茶素、表兒茶素、沒食子酸兒茶素和表沒食子酸兒茶素。1.1.2應(yīng)用銀杏葉黃酮類化合物能促進大腦循環(huán)代謝，改善記憶功能，增加腦缺血時組織ATP和磷酸肌酸的含量，降低乳酸含量，對腦缺血具有明顯保護作用；能促進毛發(fā)生長，減少脫發(fā)，因此可應(yīng)用于護發(fā)劑中，能存進體表毛細(xì)血管的血液循環(huán)，清除皮膚表面的過氧化物和自由基，所以提取物添加到護膚化妝品中能滋潤皮膚，減少黑色素的形成，延緩皮膚的衰老過程；具有抗菌消炎、抑制致癌啟動因子(TPA)及治療過敏癥和老年癡呆病等作用[5]。黃酮類化合物對治療冠心病、心絞痛、高血壓和支氣管哮喘等有顯著效果，能夠調(diào)節(jié)生理功能，延緩衰老，增強免疫力[6]，防治由于血管老化和腦血管供血不足所致的疾病。銀杏黃酮有強烈的清除細(xì)胞內(nèi)自由基的作用，能降低細(xì)胞的氧化代謝,對腦和四肢動脈血流失調(diào)引起的一系列心腦血管疾病有明顯和獨特的療效[7-11]。銀杏葉黃酮類化合物除用于醫(yī)藥和化妝品上外，今年來又?jǐn)U展到食品、飲料和防治農(nóng)作物病蟲害等方面。黃酮類化合物在食品工業(yè)上有著廣泛的應(yīng)用，可作為天然著色劑、抗氧化劑和功能性食品的原料。1.2萜內(nèi)酯及應(yīng)用1.2.1萜內(nèi)酯類化合物萜內(nèi)酯類化合物是銀杏葉中獨有的具有特殊分子結(jié)構(gòu)和顯著藥理活性的成分，包括二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯，其中二萜內(nèi)酯有5種，即銀杏內(nèi)酯(ginkgolide)A、B、C和M，倍半萜內(nèi)酯一種即白果內(nèi)酯(bilobalide，BB)。結(jié)構(gòu)式如下：圖1.1內(nèi)酯類化合物的結(jié)構(gòu)式1.2.2應(yīng)用銀杏萜內(nèi)酯A、B、C、J和M，是血小板活化因子的拮抗劑，能有效地抗血栓形成，對防治血管栓賽療效顯著，已用于臨床。在已知血小板活化因子對抗劑中，銀杏萜內(nèi)酯B對新陳代謝有較全面的調(diào)理作用，收到當(dāng)今藥學(xué)家的關(guān)注，導(dǎo)致半合成及這類化合物細(xì)胞組織培養(yǎng)的研究。白果內(nèi)酯對神經(jīng)疾病(精神病、腦病、脊髓等)具有治療作用，它能確保神經(jīng)元和軸突完整無缺[12]。2.銀杏葉黃酮提取方法黃酮類化合物多具有游離額酚羥基，一般易溶于極性較大的有機溶劑和堿性溶液中。黃酮類化合物多以黃酮苷的形式存在，少數(shù)以黃酮苷元的形式存在。黃酮苷易溶于水、無水乙醇、甲醇和乙酸乙酯等，不溶于非極性有機溶劑。由于結(jié)構(gòu)上具有酚羥基，在稀堿液中能增加其溶解度。但提取此類化合物時，除了考慮溶解度外，還需考慮其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、羥基存在部位及后處理工藝、設(shè)計合理的提取方法。目前，銀杏葉黃酮類化合物的提取方法主要有：有機溶劑法、微波法、超臨界流體萃取法、超聲波法、吸附樹脂法等。2.1溶劑法溶劑法即通過有機溶劑(乙醇、丙酮、甲醇等)浸泡葉子，濃縮水析，離心過濾，得到銀杏浸膏，產(chǎn)率為12~15%，黃酮含量為2.10~5.10%；再用液-液萃取法，得率約0.17~1.10%，黃酮含量15~18%。溶劑提取法是目前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的銀杏黃酮的提取方法之一。常用的溶劑主要有：甲醇、乙醇、丙酮、石油醚等。由于甲醇、丙酮等毒性強、揮發(fā)性較高，因此一般采用乙醇作為萃取劑比較適宜。乙醇作為萃取劑具有選擇性好、產(chǎn)品得率高等優(yōu)點，但是采用乙醇生產(chǎn)的較高成本使其應(yīng)用受到一定的限制。王曉等[13]采用乙醇為溶劑，用正交實驗法確定制備銀杏葉提取物的最佳工藝條件：乙醇體積濃度60錒，回流溫度80℃，提取時間3h。張濟龍[14]等對幾種銀杏葉黃酮提取溶劑研究結(jié)果表明，NaOH-水溶液提取效果最好，NaOH-乙醇溶液次之。在0.25%NaOH-乙醇溶液中，銀杏葉黃酮的最大提取率比用乙醇提取提高28.4%，提取時間縮短0.5h；在0.1%NaOH-水溶液中，銀杏葉黃酮的最大提取率提高46.5%，提取時間縮短1h。2.2微波法微波法利用不同組分吸收微波能力的不同，選擇加熱一些成分，使之從體系中分離進入萃取劑。近年來，微波因促進反應(yīng)的高效性和強選擇性及其操作簡便，副產(chǎn)物少，產(chǎn)率高及產(chǎn)物易提純等優(yōu)點，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于生化蛋白質(zhì)水解和有機合成、酯化等反應(yīng)，科研人員已將微波應(yīng)用于天然產(chǎn)物的浸提過程，有效地提高了效率。陳金娥等[15]，利用單因素試驗和正交實驗確定了微波法提取銀杏葉黃酮的最佳條件：溫度55℃，功率800W，液固質(zhì)量比70：1，時間6min，提取率可達(dá)3.578%。實驗表明，提取率比傳統(tǒng)的溶劑法提高，提取速度也顯著提高，所需時間大幅度縮短，且溶劑較后者損耗少得多。因此，微波法較傳統(tǒng)索氏提取等優(yōu)勢顯著。微波能快速促進銀杏葉細(xì)胞中有效活性成分的溶出，可能是交頻磁場、電場作用下，極性分子取向隨電場方向改變而變化，從而導(dǎo)致分子旋轉(zhuǎn)、振動或擺動，加劇反應(yīng)物分子運動及相線間碰撞頻繁率，使分子在極短時間內(nèi)達(dá)到活化狀態(tài)，比傳統(tǒng)加熱方式均勻、高效；且分子的劇烈運動導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的破壞，使黃酮分子從細(xì)胞里擴散到細(xì)胞外的溶劑中，阻滯擴散過程不存在了，只有黃酮分子的自由擴散過程，擴散阻力減少很多，所以微波提取的效率比傳統(tǒng)提取高得多，有效強化擴散過程[16]。微波應(yīng)用于提取，特點是：快速升溫，省時，提高效率；加熱過程不需對介質(zhì)加熱而直接加熱物料，能耗低[17]。與超臨界CO2萃取相比，微波萃取設(shè)備簡單價廉，操作簡便，適用面大更利于普及。微波法的局限在于不適合熱不穩(wěn)定成分的提取，而銀杏黃酮是熱穩(wěn)定的，理論上適用。2.3超聲波法植物藥材的有效成分多存在于細(xì)胞內(nèi)，結(jié)構(gòu)致密的細(xì)胞壁無疑是阻礙提取的重要屏障。超聲波提取利用超聲產(chǎn)生的強烈振動，形成空化效應(yīng)，破壞植物藥材的細(xì)胞壁，從而促進溶媒進入細(xì)胞內(nèi)，加速有效成分溶解到溶媒中，超聲波提取可縮短提取時間，提高有效成分的提取率，減少溶劑用量，不需高溫條件，避免了對熱不穩(wěn)定成分的破壞，可與其他提取技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用。王延峰等[18]研究了銀杏葉黃酮的超聲提取法，并于連續(xù)熱回流中的索氏提取作了比較研究，得出了超聲提取法優(yōu)于索氏提取法的提取的結(jié)論。2.4酶解法藥材的有效成分多存在于細(xì)胞內(nèi)，結(jié)構(gòu)致密的細(xì)胞壁有纖維素等物質(zhì)構(gòu)成，則提取過程中需克服細(xì)胞壁產(chǎn)生的阻力。因此可采用酶解法破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，減少傳質(zhì)阻力，酶解法即是在提取中利用酶催化的專一、高效且較溫和地分解植物組織的一種新方法，利用酶解加強提取的傳質(zhì)過程是酶解法的實質(zhì)。王敏等[19]利用纖維素酶輔助提取銀杏葉黃酮類化合物的提取，實驗表明，此方法提出的黃酮含量高于EGB761的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提取率在傳統(tǒng)的醇提法的基礎(chǔ)上提高近三分之一。2.5吸附樹脂法以上幾種提取方法得到的一般是銀杏黃酮的粗提物，黃酮含量不高，還需進一步精制以提高銀杏黃酮、萜內(nèi)酯的含量，降低銀杏酚酸類物質(zhì)的量。吸附樹脂法是最常用的提純方法之一，用樹脂吸附時，效果主要取決于樹脂的吸附性能，吸附作用的本質(zhì)是吸附劑與吸附物質(zhì)分子間的范德華力，采用的樹脂主要有聚酰胺吸附樹脂、聚苯乙烯樹脂、硅膠、大孔樹脂以及硅藻土等。欽富華等[20]探討大孔吸附樹脂同時純化銀杏葉黃酮苷和萜類內(nèi)酯的工藝，實驗表明，采用D101型大孔樹脂分離純化效果最佳，工藝條件為：上樣液生藥質(zhì)量與樹脂比為1：1，20%(體積分?jǐn)?shù))乙醇濃度作為除雜溶劑，洗脫體積為5BV，60%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液作為洗脫液，洗脫體積為4BV.純化物中黃酮苷和萜類內(nèi)酯平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.93%和7.36%。Zhang等[21]使用聚酰胺吸附樹脂，優(yōu)化分離操作工藝，將銀杏提取物中總黃酮含量從24.0%提純至55.0%。2.6超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取技術(shù)是一種環(huán)境友好的新興技術(shù)，應(yīng)用最普遍的萃取劑是CO2.超臨界流體是溫度及壓力均處于臨界點以上的流體(如圖2.1)，具有很強的溶解低揮發(fā)性物質(zhì)的能力。在超臨界條件下，流體的很多性質(zhì)都處于氣體和液體之間(黏度和擴散系數(shù)與氣體相近，密度與液體相近)，此時溶解性能和傳質(zhì)能力良好。圖2.1純物質(zhì)經(jīng)典相圖超臨界萃取過程分萃取和分離兩個過程。萃取階段即改變條件(溫度和壓力)來改變?nèi)芙舛?，溶出目?biāo)成分，進行萃??；分離階段即改變條件使CO2以氣態(tài)形式揮發(fā)與組分分離，萃取劑無殘留，且可循環(huán)使用，節(jié)約而環(huán)保。張玉祥等利用超臨界CO2萃取技術(shù)提取銀杏葉有效成分，所得GEB高于銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)提取物的國際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，黃酮含量可高達(dá)27%。超臨界CO2萃取技術(shù)省時、節(jié)能，同時適用于對于熱不穩(wěn)定和易氧化物質(zhì)的提取。但該技術(shù)的局限性在于設(shè)備投資費用高，且為高壓設(shè)備存在安全等問題，在工業(yè)上難于廣泛推廣。3.黃酮類化合物的測定3.1含量測定方法目前，國內(nèi)外沒有有關(guān)銀杏葉黃酮類化合物的測定公開普遍的控制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，常用的方法有：分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、毛細(xì)管電泳法(CE)和超臨界流體色譜法(SFC)等。3.1.1分光光度法國內(nèi)使用較多的是分光光度法，黃酮類化合物與Al(NO3)3在堿性條件下絡(luò)合產(chǎn)生有色反應(yīng)，其機制是黃酮類物質(zhì)在堿性條件下骨架的1，2號碳氧鍵打開成查耳酮而顯色，蘆丁溶液為標(biāo)準(zhǔn)溶液，于510nm處測其吸光度。該方法簡單易學(xué)，但若樣品未純化，含有雜質(zhì)，測定值略高于實際黃酮含量。在測定提取液中黃酮含量時可將顯色后的溶液先離心或過濾，除去絮凝物，再測定吸光值，這樣可改善分析結(jié)果。3.1.2高效液相色譜法(HPLC)HPLC是測定銀杏葉及制劑中黃酮類化合物的有效方法，黃酮類化合物是重要的天然產(chǎn)物，是HPLC最早分析的樣品之一，Hasler[C3-4]在1990年用HPLC方法定量地測定了銀杏葉中的黃酮含量并建立了模糊表征銀杏中33種黃酮的指紋圖譜。HPLC既可以直接分析黃酮苷的含量，也可以水解分析苷元的含量，再通過轉(zhuǎn)化系數(shù)求得黃酮總含量。3.1.3毛細(xì)管電泳法(CE)毛細(xì)管電泳(CE)是一類以毛細(xì)管為分離通道、高壓電流電場為驅(qū)動力的新型液相分離技術(shù)，其原理是在緩沖體系中引入表面活性劑，利用溶質(zhì)在水相和膠束相中的分配差異進行分離，具有高效、快速、用樣量少、重現(xiàn)性好、不易污染等優(yōu)點。YuhuaCao等[22]建立了快速、高效、高靈敏度、相對簡單的毛細(xì)管電泳-電極法測定銀杏黃酮的方法，通過記錄圖形完成電色層分析,在最佳條件下分離并鑒定了表兒茶素、兒茶素、蘆丁、芹黃素、木犀草素、棚皮黃酮6種銀杏葉黃酮類化合物。3.2抗氧化性能測定方法3.1.1黃酮類化合物的抗氧化性黃酮類化合物是天然的強抗氧化劑[23],主要表現(xiàn)在以下3個方面：一是清除自由基和活性氧[24]。黃酮具有很強的供氫能力，在體外具有清除自由基如羥基、超氧陰離子和過氧化氫自由基等功能；二是螯合金屬離子[25]。黃酮可以和金屬離子如銅離子等結(jié)合，催化脂質(zhì)過氧化物的分解反應(yīng)，引起自由基的減少。三是保護和還原體內(nèi)的抗氧化劑[26]。銀杏黃酮是使體內(nèi)的抗氧化劑如VE、VC重新恢復(fù)活性，起到抗氧化的作用。3.1.2抗氧化性的測定方法抗氧化劑的活性的測定方法有很多，蘇俊鋒等指出測定抗氧化劑活性有三要素：基質(zhì)體系、方式添加和測定方法種類，改變其中任一要素都會引起結(jié)果的不同。因此，用一種測定方法準(zhǔn)確測定抗氧化劑活性是不可能的，需要多種體系多種方法的考察才能全面客觀的反映抗氧化劑的活性。黃酮類化合物主要通過清除自由基來實現(xiàn)抗氧化作用的，不僅能清除自由基，而且可以直接捕獲自由基反應(yīng)鏈中的自由基，阻斷自由基鏈反應(yīng)，起到預(yù)防和斷鏈的雙重作用。黃酮類化合物的抗氧化性測定方法主要有：DPPH自由基清除實驗、羥自由基清除能力實驗、還原力測定實驗、H2O2清除能力測定實驗、對抑制鼠腦組織勻漿中脂質(zhì)氧化的效果實驗、對大豆油脂過氧化值的影響實驗。4.本論文的意義及思路4.1意義銀杏是我國的特產(chǎn)植物，占世界總量的70%以上，它的葉和果都有較高的藥用價值。黃酮類化合物為銀杏葉的主要有效成分，具有抗氧化、抗癌、降血糖、防治心腦血管疾病及抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，可以應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品及農(nóng)林病蟲害防治上。我國雖是世界銀杏的最大產(chǎn)地，但國內(nèi)黃酮類化合物開發(fā)利用技術(shù)較國外落后，且黃酮類化合物在植物中的含量不高，提純工藝復(fù)雜得率不高，純度低，投資大，限制了其在實際中的應(yīng)用。綜上所述，研究銀杏黃酮的提取分離技術(shù)，研發(fā)出快速、有效、低耗的提取提取分離方法，朝著提高有效成分收率，減少有害成分和雜質(zhì)在藥物中的殘留，減少環(huán)境污染等方向發(fā)展，明確銀杏黃酮的有效活性形式，制備高質(zhì)量的銀杏黃酮提取物對提高我國銀杏產(chǎn)品的國際競爭力，加快開發(fā)利用銀杏資源具有重要的意義。4.2思路本論文主要內(nèi)容有兩大部分，一是銀杏黃酮的提取分離方法研究，二是銀杏黃酮的表征。關(guān)于銀杏黃酮類化合物的提取分離方法研究，目前國內(nèi)大多采用醇提法，但醇提法的局限在于用時長、溶劑耗損大且雜質(zhì)難以控制，所以應(yīng)該對此改善，結(jié)合其他方法。近年來，研究出了很多銀杏葉黃酮的提取新技術(shù)，比如：超臨界流體萃取技術(shù)、超聲法、微波法、酶解法等。超臨界流體萃取技術(shù)是環(huán)境友好的新興技術(shù)，萃取劑無殘留，且可循環(huán)使用，但其設(shè)備要求高，費用高，難以在工業(yè)中推廣，所以本論文不采用該方法。本論文擬采用纖維素酶輔助微波提取工藝，采用單因素實驗方法確定最佳工藝條件，考慮影響因素主要有纖維素酶的濃度、酶解時間、酶解溫度及酶解酸堿度、微波時間、料液比、乙醇濃度等，用石油醚萃取除去葉綠素及脂質(zhì)，再旋蒸濃縮干燥，采用分光光度法測定其濃度，得出得率及含量，確定其最佳工藝條件。黃酮類化合物的表征：對實驗產(chǎn)品進行紅外、紫外-可見、高效液相色譜法進行表征，且對實驗產(chǎn)品進行抗氧化性能測定。參考文獻[1]張迪清，何照范.銀杏葉資源化學(xué)研究[M].北京:中國輕工業(yè)出版社，2000.191.[2]董雯雯.銀杏葉黃酮類化合物的提取與分離技術(shù)的研究[D].山東科技大學(xué)，2008.[3]安鑫南.林產(chǎn)化學(xué)工藝學(xué)[M]北京：中國林業(yè)出版社，2002.355.[4]吳忠萌.林產(chǎn)精細(xì)化學(xué)品工藝學(xué)[M]北京：中國林業(yè)出版社，2002.303.[5]盧元芳，宮霞.銀杏葉黃酮類化合物的提取和藥理作用[J].曲阜師范大學(xué)學(xué)報，1999,25(3):95-96.[6]高晗，孫俊良，孔瑾等.銀杏葉中黃酮類化合物的最佳提取工藝研究[J].食品研究與開發(fā)，2005，2(1)：82-84.[7]周維書，黃振安，鄭愛云編著.銀杏葉及其制劑[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，1995.22～45，73～75.[8]OyamaY,HayashiA,UehaT.Ca2+-inducedincreaseinoxidativemetabolismofdissociatedmammalianbrainneurosis:EffectofextractofGinkgobilobaleaves.JapanJPharmacol,1993,61(2):367～370.[9]OyamaY,FuchsPA,KatayamaN,etal.Myricetinandquercetin,theflavonoidconstituentsofGinkgobilobaextract,greatlyreduceoxidativemetabolisminbothrestingandCa2+--loadedbrainneurons.BrainResearch,1994,635(1):125～129.[10]RapinJR,YoaRG,BouvierC,etal.EffectsofrepeatedtreatmentswithanextractofGinkgobiloba(EGb761)andbilobalideonliverandmuscleglucogencontentsinthenon2insulin2dependantrat.DrugDevelopmentResearch,1997,40(1):68～74.[11]ImdronaiM,MarcocciL.PeroxylradicascavengingactivityofGinkgobilobaextractEGb761.BiochemicalPharmology,1995,49(11):1649～1655.[12]安鑫南.林產(chǎn)化學(xué)工藝學(xué)[M]北京：中國林業(yè)出版社，2002.357.[13]王曉，廖克儉，戴躍玲.銀杏葉有效成分提取工藝研究.東華理工學(xué)院學(xué)報.2007,30(2):181-184.[14]張濟龍，張光先，張鳳秀等.銀杏葉黃酮提取溶劑研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報.1999，21(2):68-70.[15]陳金娥，匡強民，張海容.正交優(yōu)化-微波輔助提取提取銀杏葉黃