正交試驗報告課件

“救命仙草"石斛ShihuDENDROBIICAULIS石斛簡介

我石斛屬蘭科石斛屬多年生草本植物，全世界約有1400種，其中鐵皮石斛(DendrobiumcandidumWal.lexLind.l)是我國常見的石斛品種之一。鐵皮石斛具有抗腫瘤、抗氧化、降血糖和降血脂等多種功效，現代藥理學研究表明，石斛多糖是石斛中的主要功能成分。

產地：主產于廣西、貴州、廣東、云南、四川等省區(qū)。制劑開發(fā)

目前市場上已研制開發(fā)出了鐵皮楓斗、鐵皮石斛沖劑（顆粒）、鐵皮石斛飲料、鐵皮石斛微粉、鐵皮石斛酒、鐵皮石斛茶、復方天人百合鐵皮石斛、復方鮮石斛膠囊、復方鮮石斛片、復方鮮石斛丸、納米石斛明目制劑藥物、鮮石斛晶、納米石斛夜光制劑藥物、鐵皮石斛復方制劑等系列保健產品。更多的產品有待于進一步的研究與開發(fā)。國內石斛研究熱點分析鐵皮石斛原球莖多糖提取最佳工藝研究超聲法提取鐵皮石斛多糖工藝的研究正交試驗優(yōu)選鐵皮石斛類原球莖多糖的提取純化工藝石斛中石斛多糖的提取工藝研究棒節(jié)石斛中的多糖分布及提取工藝研究超聲波輔助提取金釵石斛多糖工藝優(yōu)化研究基于正交試驗法的鐵皮石斛原球莖生長和多糖合成研究閃式提取鐵皮石斛多糖石斛多糖提取工藝稀土微肥對鐵皮石斛試管苗壯苗的影響鐵皮石斛原球莖液體懸浮培養(yǎng)的研究霍山石斛原球莖液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化大苞鞘石斛胚組織培養(yǎng)及植株再生研究金釵石斛類原球莖誘導及增殖的正交試驗3種石斛蘭以莖段為外植體的離體快繁技術霍山石斛細胞懸浮培養(yǎng)及條件優(yōu)化春石斛離體培養(yǎng)條件優(yōu)化及其試管開花研究金屬離子對霍山石斛類原球莖增殖及植株再生的影響不同激素濃度對鐵皮石斛高效快繁體系的影響正交試驗優(yōu)選環(huán)草石斛不同氮磷鉀營養(yǎng)水平對鐵皮石斛組培苗生長的影響大苞鞘石斛組織培養(yǎng)快繁研究不同因素對大苞鞘石斛原球莖分化的影響金釵石斛原生質體的制備與融合鐵皮石斛組培苗生根條件優(yōu)化研究石斛ISSR-PCR體系的優(yōu)化春石斛和鐵皮石斛試管苗壯苗生根條件的優(yōu)化石斛明目膠囊藥材水煎醇沉工藝的正交試驗石斛快繁技術石斛多糖提取工藝優(yōu)化考查指標及方法多糖得率=提取得到的多糖質量/原料質量×100%多糖含量：多糖含量=總糖-還原糖。石斛多糖含量的測定方法：苯酚硫酸法苯酚制取:取苯酚200g，加鋁片O.2g和碳酸氫鈉O.1g，蒸餾，收集182攝氏度餾分，稱取一定量重蒸苯酚，加入蒸餾水混勻，溶解即得。置棕色瓶中，放冰箱內備用。多糖工藝流程熱水法回流提取多糖工藝流程：原料→稱重→回流去雜質→熱水浸提→過濾→濾液濃縮→80％乙醇（4～5倍）沉淀→過濾→烘干→復溶→Sevage法除蛋白（多糖粗品的純化過程）→醇沉→烘干→鐵皮石斛類原球莖多糖。影響因素：加水量、水溫、浸提時間、提取次數優(yōu)缺點：是傳統的多糖的提取方法，成本低，取材方便，提取條件易于控制，經濟適用，操作方法相對簡單但是繁雜，重復提取次數較多，提取時間過長，提取效率相對較低。采用L8(24)正交設計，試驗重復2次，各處理內容見表1。多糖提取條件的確立何鐵光,楊麗濤,李揚瑞等.(2006).鐵皮石斛原球莖多糖提取最佳工藝研究.西北農業(yè)學報,15(5),240-243.次數較少時間提取次數溫度加水量整體含量小結果分析：影響響大小順序是:提取次數>溶劑用量>提取溫度>提取時間，各因素的最佳水平為A1B2C1D2。2h4h1次3次80℃100℃10倍20倍

根據多糖性能，選用水煎煮工藝，選擇提取時的加水量、提取時間、提取次數、藥材粉碎度4個試驗因素，每個因素3個水平進行優(yōu)選,采用L9(34)表對石斛進行石斛多糖的提取和測定，并作為考察指標。因素水平表見表1。錢葉,&呂不望.(2005).石斛中石斛多糖的提取工藝研究.中國現代應用藥學,22(4),293-294.結果分析：影響石斛多糖含量的因素依次為粉碎度>提取次數>加水量>提取時間。最佳提取條件為A1B3C3D3,但根據計算，A因素2，3水平間幾乎在同一數量級，從省時節(jié)能，降低成本的角度考慮，選擇A2B1C2D3，即石斛中石斛多糖的最佳提取條件為將藥材粉碎至粗粉，加水20倍量,提取3次,每次4h。4h6h8h10倍20倍30倍2次3次4次飲片小段粗粉多糖粗品的純化原理：石斛多糖粗品中含有蛋白質,為進一步純化多糖粗品需經脫蛋白處理。常用Sevage法即將多糖粗品的水溶液與氯仿和正丁醇混合,使蛋白質變性成為不溶性聚集在氯仿和水的界面上,經離心后可將蛋白質去除。粗多糖脫蛋白時,樣品/氯仿+正丁醇(v/v)為1B0.35,氯仿/正丁醇(v/v)為1B0.4,反應時間以5min最佳。

粗多糖脫蛋白時,樣品/氯仿+正丁醇(v/v)為1：0.35,氯仿/正丁醇(v/v)為1：0.4,反應時間以5min最佳?？偨Y

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