細(xì)胞工程知識(shí)點(diǎn)

細(xì)胞工程知識(shí)點(diǎn)1、細(xì)胞工程：以細(xì)胞為對(duì)象，應(yīng)用生命科學(xué)理論，借助工程學(xué)原理與技術(shù)，有目的地利用或改造生物遺傳性狀，以獲得特定的細(xì)胞、組織產(chǎn)品或新型物種的一門綜合性科學(xué)技術(shù)。2、細(xì)胞工程的應(yīng)用：1）動(dòng)植物快速繁殖技術(shù)：植物組織培養(yǎng)、人工種子、試管動(dòng)物、克隆動(dòng)物2）新品種的培育:細(xì)胞融合、細(xì)胞水平的重組3）細(xì)胞工程生物制品：?jiǎn)慰寺】贵w制備、疫苗生產(chǎn)4）細(xì)胞療法與組織修復(fù)：2細(xì)胞工程理論基礎(chǔ)1、細(xì)胞全能性：每個(gè)活的體細(xì)胞都具有像胚性細(xì)胞那樣，經(jīng)過誘導(dǎo)能分化發(fā)育成為一個(gè)新個(gè)體的潛在能力，并且具有母體的全部的遺傳信息。2、細(xì)胞分化:指細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程.3、細(xì)胞的脫分化：在一定營養(yǎng)和刺激因素作用下，具有特定結(jié)構(gòu)與功能的植物組織的細(xì)胞被誘導(dǎo)而改變?cè)瓉淼陌l(fā)育途徑，逐步失去原來的分化狀態(tài)，細(xì)胞特性消失,轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂蟹稚鷻C(jī)能的細(xì)胞，并進(jìn)行活躍的細(xì)胞分裂，這一過程稱為去分化。3細(xì)胞工程技術(shù)1、實(shí)驗(yàn)室條件：組成：準(zhǔn)備室、無菌間、操作間、培養(yǎng)室、分析室。2、無菌技術(shù)、顯微技術(shù)、細(xì)胞觀察與分析、細(xì)胞分離、細(xì)胞保存與復(fù)蘇（1）細(xì)胞保存方法傳代培養(yǎng)保存法低溫冷凍保存法（低溫、超低溫保存）液體固化的方式（形成冰晶、形成無定型的玻璃化狀態(tài)）玻璃化指液體轉(zhuǎn)變?yōu)榉蔷B(tài)（玻璃態(tài)）的固定化過程，在此狀態(tài)時(shí)，水分子沒有發(fā)生重排，不產(chǎn)生結(jié)構(gòu)和體積的變化，因此不會(huì)由于機(jī)械或溶液效應(yīng)造成組織和細(xì)胞傷害，化凍后的細(xì)胞仍有活力。冷凍方法（緩慢冷凍法、快速冷凍法預(yù)冷凍法包括逐級(jí)冷凍和兩部冷凍）細(xì)胞復(fù)蘇按一定復(fù)溫速度將細(xì)胞懸液由凍存狀態(tài)恢復(fù)到常溫的過程.復(fù)蘇細(xì)胞廠般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)和代謝調(diào)控：1、細(xì)胞培養(yǎng):模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件,將細(xì)胞從機(jī)體中取出，在人工條件下使其生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問題的研究.2、細(xì)胞培養(yǎng)的操作方式:分批式培養(yǎng)、流加式培養(yǎng)、半連續(xù)式培養(yǎng)、連續(xù)式培養(yǎng)、灌流式培養(yǎng).3、分批式培養(yǎng)（植物細(xì)胞培養(yǎng)）：分批式培養(yǎng)過程的環(huán)境隨時(shí)間變化很大，可分為延滯期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、減速期、平穩(wěn)期和衰退期等五個(gè)階段。4、流加式培養(yǎng)（適合植物）：隨著營養(yǎng)物質(zhì)的不斷消耗，不斷地向系統(tǒng)中補(bǔ)充新的營養(yǎng)成分，使細(xì)胞進(jìn)一步生長(zhǎng)代謝，直到整個(gè)培養(yǎng)結(jié)束后取出產(chǎn)物.5、半連續(xù)式培養(yǎng)（動(dòng)物細(xì)胞）：定期取出部分培養(yǎng)物，或是條件培養(yǎng)基，或是連同細(xì)胞、載體一起取出。6、連續(xù)式培養(yǎng)：該模式是將細(xì)胞接種于一定體積的培養(yǎng)基后，為了防止衰退期的出現(xiàn)，在細(xì)胞達(dá)最大密度之前,以一定速度向生物反應(yīng)器連續(xù)添加新鮮培養(yǎng)基;同時(shí)，含有細(xì)胞的培養(yǎng)物以相同的速度連續(xù)從反應(yīng)器流出，以保持培養(yǎng)體積的恒定.理論上講，該過程可無限延續(xù)下去。7、灌流式培養(yǎng)：灌流式培養(yǎng)是把細(xì)胞和培養(yǎng)基一起加入反應(yīng)器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)8、物形成過程中，不斷地將部分條件培養(yǎng)基取出，同時(shí)又連續(xù)不斷地灌注新的培養(yǎng)基.（動(dòng)物細(xì)胞）9、代謝工程：通過某些特定生化反應(yīng)的修飾來定向的改善細(xì)胞的特性，或是利用重組DNA技術(shù)創(chuàng)造新的化合物.它是利用基因工程或是分子生物學(xué)技術(shù)、將生物技術(shù)內(nèi)的代謝路徑改變，通常改變生體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)的酶。代謝工程技術(shù)目前以微生物利用為主，改變工業(yè)微生物的代謝路徑，生產(chǎn)所需要的化學(xué)物質(zhì)，如抗生素。10、逆代謝工程：是一種采用逆向思維方式進(jìn)行代謝設(shè)計(jì)的新型代謝工程。就是先在異源生物或相關(guān)模型系統(tǒng)中,通過計(jì)算或推理確定所希望的表型，然后確定該表型的決定基因或特定的環(huán)境因子,然后通過基因改造或環(huán)境改造是該表型在特定的生物中表達(dá)。植物人工繁殖11、植物組織培養(yǎng)：是指在無菌條件下，將離體的植物器官（如根尖、莖尖、葉、花、未成熟的果實(shí)、種子等）、組織（如花藥組織、胚乳、皮層等）、細(xì)胞（體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、原生質(zhì)體等培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適當(dāng)?shù)臈l件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織、潛伏芽，或者長(zhǎng)成新的完整植株的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。也稱植物離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng).12、植物組織培養(yǎng)再生植株的途徑：1）.器官發(fā)生途徑：離體培養(yǎng)的組織或細(xì)胞團(tuán)（愈傷組織）分化形成不定根、不定芽等器官的過程2）體細(xì)胞胚發(fā)生途徑：從體細(xì)胞產(chǎn)生胚狀體的過程13、植物組織培養(yǎng)的問題：玻璃化、褐化問題、微生物污染問題.14、玻璃化問題解決方案：1）利用固體培養(yǎng)基，增加瓊脂濃度，選擇適當(dāng)?shù)奶荚?，提高培養(yǎng)基中蔗糖含量從根本上降低培養(yǎng)基中的滲透勢(shì)，造成細(xì)胞吸水阻遏，減少培養(yǎng)基中植物材料可獲得的水分；2）采用通氣性好的封口材料如紗布、脫脂棉等代替聚乙烯塑料膜作為封口材料，可降有效低培養(yǎng)容器內(nèi)部環(huán)境的相對(duì)濕度，減輕有害氣體的積累，使植物光合作用順暢。3）非受傷的物理和化學(xué)協(xié)迫可以增加乙烯的合成。乙烯促進(jìn)葉綠素分解及細(xì)胞的畸形發(fā)展.乙烯處理破壞膜的結(jié)構(gòu)，解離細(xì)胞壁，細(xì)胞內(nèi)積累有少量纖維素及泡狀物質(zhì).4）培養(yǎng)基中BA濃度和培養(yǎng)溫度與玻璃化成正相關(guān)，BA濃度越高或培養(yǎng)溫度越高，玻璃苗比率越大.選擇搭配合適的激素，適當(dāng)降低培養(yǎng)基中BA的濃度均可減輕玻璃苗的出現(xiàn)。通過培養(yǎng)條件（溫度和光照）減少玻璃苗的發(fā)生。適當(dāng)?shù)蜏靥幚砜上ＡЩ?，提高光照?qiáng)度，適當(dāng)延長(zhǎng)光照時(shí)間，充分利用自然光照也可以減低玻璃苗的發(fā)生頻率。5）在培養(yǎng)基中減少或除去NH4NO3,附加活性炭、青霉素、聚乙烯醇（PVA）、Ca、赤霉素（GA）及多效唑（PP333）等,減少繼代培養(yǎng)的次數(shù)等措施均可降低觀賞植物組培過程中玻璃苗的發(fā)生。15、褐變解決途徑:、1）選取適宜的外植體2）選擇適宜的培養(yǎng)條件3）細(xì)胞篩選和預(yù)處理4）使用抑制劑（Vc、檸檬酸、巰基乙醇、谷胱甘肽、DTT等）5）使用吸附劑（活性炭、PVP等）16、微生物污染問題防治措施：1）改進(jìn)外植體消毒方法2）反復(fù)檢查培養(yǎng)物是否污染3）使用抗生素（用兩性霉素B、青霉素、鏈霉素）17、人工種子三部分:人工種皮外層，保護(hù)胚狀體中的水分免于喪失和防止外部力量沖擊；人工胚乳，含有必需的營養(yǎng)成分和某些植物激素；胚狀體或芽。18、極性現(xiàn)象：由細(xì)胞的電場(chǎng)方向決定的。因?yàn)殡妶?chǎng)方向決定著細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)分配，這些物質(zhì)包括無機(jī)鹽類、蛋白質(zhì)、核糖核酸等一些帶電荷物質(zhì)。同時(shí)，生長(zhǎng)素的梯度、pH梯度、滲透壓大小、機(jī)械壓、光照等都能使細(xì)胞形成電場(chǎng)，特別是膜上和Ca2+結(jié)合的蛋白質(zhì)帶有凈的電荷，它在細(xì)胞內(nèi)電場(chǎng)的建立中起著非常重要的作用.19、植物激素的作用：（1）由IAA和一些CTK的組合對(duì)愈傷組織根和芽的誘導(dǎo)。（2）由IAA和GA3（赤霉素）在維管組織分化中的相互作用。（3）由IAA對(duì)莖中皮層和髓組織內(nèi)以及愈傷組織內(nèi)維管束的誘導(dǎo).（4）莖組織對(duì)IAA的反應(yīng)有不定根的發(fā)生。（5）由GA3、IAA和乙烯對(duì)開花的誘導(dǎo)和性別的控制。20、細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制：1）細(xì)胞分化基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，而不是翻譯水平.2）調(diào)節(jié)細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄過程的因素是非組蛋白，組蛋白使基因轉(zhuǎn)錄過程關(guān)閉,非組蛋白使部分基因轉(zhuǎn)錄過程打開.21、植物胚胎培養(yǎng)：對(duì)植物的胚及胚器官（如子房、胚珠）進(jìn)行離體無菌培養(yǎng)、使其發(fā)育成幼苗的技術(shù).包括：成熟胚培養(yǎng)、幼胚培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)和試管受精等。22、植物脫毒方法：1）物理法：高溫處理、低溫處理2）化學(xué)法:利用嘌吟和嘧啶類似物、氨基酸、抗生素等化學(xué)藥品處理患病植物來抑制植物體內(nèi)病毒的復(fù)制。3）生物學(xué)方法：莖尖培養(yǎng)、微體嫁接法、通過愈傷組織培養(yǎng)、珠心培養(yǎng)法、花藥培養(yǎng)脫毒。動(dòng)物人工繁殖1、體外受精:是指將哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù).2、試管動(dòng)物培育過程：（1）精子采集與體外獲能、卵子采集與成熟培養(yǎng).（2）體外受精（3）胚胎體外培養(yǎng)（4）胚胎移植（5）體外發(fā)育、出生3、胚胎移植：是指將受精卵或發(fā)育到一定階段的胚胎移植到與供體同時(shí)發(fā)情排卵、但未經(jīng)配種的“受體"母畜輸卵管或子宮的技術(shù)。4、人工受精：將采集的精子注入發(fā)情處理的母體內(nèi)完成受精過程。5、人工受精繁殖動(dòng)物的意義：1）提高優(yōu)秀種公畜的利用率2）加速品種改良3）家畜配種不受時(shí)間和地域限制4）大幅度減少種公畜的飼養(yǎng)數(shù)量5）克服公母畜體型懸殊和種間交配困難6）防止疾病傳播7）有利于提高母畜的受胎率5、人工授精技術(shù)3個(gè)環(huán)節(jié)：采精、精液處理和輸精.6、細(xì)胞核移植克隆動(dòng)物的技術(shù)路線：1）核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備2）受體細(xì)胞的去核3）細(xì)胞核移植、激活4）重組胚的培養(yǎng)與移植5）核移植后代的鑒定7、胚胎冷凍保存方法：程序冷凍法、玻璃化冷凍法。主要的冷凍損傷機(jī)制包括：一溶液效應(yīng)造成化學(xué)損傷二是細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰造成物理損傷三是細(xì)胞滲透壓異常損傷。冷凍保護(hù)劑:滲透型冷凍保護(hù)劑屬于細(xì)胞內(nèi)液抗凍保護(hù)劑:甘油、二甲亞砜非滲透型冷凍保護(hù)劑葡萄糖、二糖（蔗糖）、三塘（棉子糖）、聚乙烯毗咯烷酮、清蛋白注：抗凍蛋白8、精子冷凍保存方法：常溫保存、低溫保存、冷凍保存9、卵母細(xì)胞保存：玻璃化冷凍法、一步冷凍法、超快速冷凍法細(xì)胞重組與細(xì)胞融合1、細(xì)胞質(zhì)工程:是研究真核細(xì)胞的核一質(zhì)關(guān)系以及細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)基因轉(zhuǎn)移的技術(shù)。2、細(xì)胞質(zhì)融合:也叫細(xì)胞雜交，是使用人工方法使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的技術(shù).3、細(xì)胞質(zhì)融合方法：1）生物法:病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合2）化學(xué)法:聚乙二醇誘導(dǎo)、脂質(zhì)體法3）物理法：電融合誘導(dǎo)法4、病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單、成本低.缺點(diǎn):要提前大量培養(yǎng)病毒，并且滅活后才能作為融合劑使用，操作繁瑣,而且一旦滅活不充分，病毒可能感染操作者與親本細(xì)胞5、聚乙二醇介導(dǎo)的細(xì)胞融合優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn):融合成本低，無需特殊設(shè)備;融合產(chǎn)生的異核率較高；融合過程不受物種的限制。缺點(diǎn):融合過程繁瑣，聚乙二醇可能對(duì)細(xì)胞有害。6、點(diǎn)融合誘導(dǎo)法的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：融合率高、重復(fù)性和可操作性強(qiáng)。缺點(diǎn)：可能會(huì)造成不可恢復(fù)的細(xì)胞損傷.新品種的培育1、體細(xì)胞雜交：是指將不同來源地體細(xì)胞融合并使之分化再生，形成新品種的技術(shù).2、多倍體育種的方法：1）化學(xué)方法:一些化學(xué)物質(zhì)可以阻止卵母細(xì)胞第二極體生物釋放或細(xì)胞分裂而產(chǎn)生多倍體。常用的化學(xué)物質(zhì)有：細(xì)胞松弛素、秋水仙素、聚乙二醇等。2）物理方法：主要包括溫變激變、機(jī)械創(chuàng)傷、輻射、水靜壓法和高鹽高堿法等、3）生物法：指體細(xì)胞雜交，利用染色體加倍個(gè)體和為加倍個(gè)體雜交繁殖多倍體后代，常與物理化學(xué)法結(jié)合使用。3、雌核發(fā)育：精子經(jīng)過處理使用其核不參與受精卵卵球的發(fā)育，胚胎的發(fā)育僅在母體遺傳的控制下進(jìn)行的一種發(fā)育方式。4、雄核發(fā)育：卵細(xì)胞不受精，卵核消失，或卵細(xì)胞受精前失活，由精核在在卵細(xì)胞內(nèi)單獨(dú)發(fā)育成單倍體，因此只含有一套雄配子染色體.、5、雌核發(fā)育存在的問題：人工雌核發(fā)育的后代成活率較低,有的個(gè)體還有雌雄間性的特征。6、。植物離體受精：指體外無菌條件下培養(yǎng)未受精的子房、胚珠和花粉、使花粉萌發(fā)進(jìn)入胚珠完成受精的技術(shù)。包括離體傳粉和體外受精兩類。7、胚胎嵌合：將兩枚胚胎細(xì)胞（同種或異種動(dòng)物胚胎）融合共同發(fā)育成為一個(gè)胚胎為嵌合胚胎。將該胚胎移植給受體，妊娠產(chǎn)仔,如該仔畜具有以上兩種動(dòng)物胚胎的細(xì)胞稱之為嵌合體動(dòng)物.植物細(xì)胞代謝產(chǎn)物制備1、植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的生物反應(yīng)器分為兩大類：1）機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器2）氣升式生物反應(yīng)器：鼓泡式生物反應(yīng)器、轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器2、細(xì)胞固定化培養(yǎng):是指游離的細(xì)胞包埋在支持物內(nèi)部或表面進(jìn)行培養(yǎng)的一門技術(shù)。3、植物細(xì)胞固定化培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：1）細(xì)胞經(jīng)包埋后所受的剪切力損傷減少，維持細(xì)胞的穩(wěn)定性，適合脆弱的植物細(xì)胞的培養(yǎng)，同時(shí)也利于采用傳統(tǒng)生物反應(yīng)器的大規(guī)模培養(yǎng)。2）懸浮細(xì)胞體系中的細(xì)胞密度比較高時(shí)會(huì)因粘度增加引起傳質(zhì)困難.固定化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中細(xì)胞密度遠(yuǎn)高于懸浮培養(yǎng),但不會(huì)改變培養(yǎng)液流體性質(zhì)，利于傳質(zhì)。3）大多數(shù)植物次級(jí)代謝產(chǎn)物合成生長(zhǎng)停止后才大量合成。采用固定化培養(yǎng)可以將細(xì)胞生長(zhǎng)與產(chǎn)物合成分成兩個(gè)階段.4、固定化培養(yǎng)方法:吸附固定法、共價(jià)結(jié)合法、包埋法、交聯(lián)法.5、固定化培養(yǎng)生物反應(yīng)器：1）采用合適的機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器、氣升式生物反應(yīng)器、鼓泡式生物反應(yīng)器等進(jìn)行培養(yǎng).2）也可將細(xì)胞直接吸附或包埋在特殊設(shè)計(jì)的生物反應(yīng)器內(nèi)的介質(zhì)表面或內(nèi)部進(jìn)行培養(yǎng)：如中空纖維生物反應(yīng)器。6、看護(hù)培養(yǎng)：用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織來看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，使其持續(xù)分裂和增值。這塊愈傷組織被稱為看護(hù)組織。7、飼養(yǎng)層培養(yǎng):把處理過的無分裂能力或分裂很慢的細(xì)胞來飼養(yǎng)所需要的細(xì)胞，使其分裂和生長(zhǎng).8、兩步培養(yǎng)法:非生長(zhǎng)偶聯(lián)型的細(xì)胞培養(yǎng)一般采取兩步法：第一步：采用利于細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基使細(xì)胞達(dá)到高的細(xì)胞濃度。第二步：更換利于細(xì)胞產(chǎn)物合成的培養(yǎng)基或者添加代謝產(chǎn)物的前體物質(zhì)或誘導(dǎo)子促進(jìn)產(chǎn)物的合成.9、兩相培養(yǎng)：在培養(yǎng)體系中加入水溶性或脂溶性的有機(jī)物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培養(yǎng)體系形成上、下兩相，細(xì)胞在水相中生長(zhǎng)合成次級(jí)代謝產(chǎn)物，分泌出來的產(chǎn)物被轉(zhuǎn)移至有機(jī)相中。10、毛狀根培養(yǎng)生產(chǎn)次級(jí)代謝產(chǎn)物:一些植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物在根里大量合成，但正常艮的培養(yǎng)非常困難，生長(zhǎng)緩慢，收獲困難，而許多毛狀根在離題培養(yǎng)條件下表現(xiàn)出次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成，產(chǎn)物較正常植物及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞要高。利用RI質(zhì)粒致根區(qū)誘導(dǎo)毛狀根產(chǎn)生。11、毛狀根：是發(fā)根農(nóng)桿菌感染雙子葉植物后，形成的類似頭發(fā)一樣的組織。12、毛狀根誘導(dǎo)的方法：外植體接種法、莖桿接種法、原生質(zhì)體一農(nóng)桿菌共培養(yǎng)法.微藻培養(yǎng)及應(yīng)用1、適合培養(yǎng)的微藻：藍(lán)藻門、綠藻門、金藻門、紅藻門.2、微藻應(yīng)用：1）微藻在能源、醫(yī)藥、食品、水產(chǎn)養(yǎng)殖、化工、環(huán)保、農(nóng)業(yè)及航天等領(lǐng)域有著重要的應(yīng)用價(jià)值.2）保健品、功能食品：片劑、粉劑、添加劑3）水產(chǎn)養(yǎng)殖:餌料4）航天：安保系統(tǒng)5）轉(zhuǎn)基因藥物:可以食用6）能源:生物柴油、氫動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生物制藥1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng):是模擬體內(nèi)生理環(huán)境使分離的動(dòng)物細(xì)胞在體外生存、增殖的一門技術(shù)。2、貼壁型細(xì)胞的分類:成纖維細(xì)胞、上皮型細(xì)胞、游走型細(xì)胞、多形型細(xì)胞.3、接觸性抑制：接觸性抑制是某些動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)特性之一，是指由于細(xì)胞相互接觸而抑制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性的現(xiàn)象。4、密度抑制：細(xì)胞接觸后匯合成片后，只要營養(yǎng)充分，細(xì)胞仍能進(jìn)行增殖分裂。但當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到一定程度后,營養(yǎng)相對(duì)缺乏，代謝產(chǎn)物增多，發(fā)生密度抑制現(xiàn)象。5、培養(yǎng)基的類型:1）天然培養(yǎng)基：血清、組織提取液、雞胚汁2）合成培養(yǎng)基3）無血清培養(yǎng)基6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)分類：貼壁培養(yǎng)、固定化培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)7、動(dòng)物細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的過程：游離期、吸附期、繁殖期、退化期。8、動(dòng)物細(xì)胞小規(guī)模培養(yǎng)有哪幾種類型：懸滴培養(yǎng)法、灌注小式培養(yǎng)法、培養(yǎng)板培養(yǎng)法、轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法、培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法。9、傳代培養(yǎng):是指將原代培養(yǎng)的細(xì)胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的過程。細(xì)胞的體外大量增殖以及細(xì)胞系的建立是通過傳代培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)的。10、細(xì)胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)傳代培養(yǎng)純化，獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長(zhǎng)期生存的不均一的細(xì)胞群體。第一次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞即為細(xì)胞系.不能連續(xù)培養(yǎng)的為有限細(xì)胞系、能連續(xù)培養(yǎng)下去的是連續(xù)細(xì)胞系。11、細(xì)胞株：是指從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或篩選的方法，由單細(xì)胞增值形成的細(xì)胞群.12、微載體培養(yǎng)基本流程：1）選擇合適的微載體類型2）浸泡水化及消毒3）接種4）培養(yǎng)觀察與細(xì)胞記數(shù)5）傳代培養(yǎng)6）消化與收獲13、微載體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：1）模擬了體內(nèi)三維生長(zhǎng)環(huán)境，減輕了接觸抑制，可以多層生長(zhǎng)2）很好地解決了生物反應(yīng)器的空間分布問題，單位體積培養(yǎng)液的細(xì)胞產(chǎn)率高；培養(yǎng)系統(tǒng)占地面積和空間?。蝗菀追糯?。3）把懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)融合在一起4）接種和收獲方便：可循環(huán)、連續(xù)收獲與培養(yǎng)，培養(yǎng)基利用率高16動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器機(jī)械攪拌式槳葉改造，充氣攪拌式改造，微載體培養(yǎng)，中空纖維式培養(yǎng)17球傳球接種技術(shù)，將貼滿細(xì)胞的微載體與新鮮微載體混合實(shí)現(xiàn)細(xì)胞因隨機(jī)碰撞而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移貼附在新載體表面的技術(shù)14、病毒疫苗的類型：滅活疫苗、減毒活疫苗15、干擾素：是一種細(xì)胞因子,是真核細(xì)胞對(duì)各種刺激反應(yīng)后形成的一組復(fù)雜的蛋白質(zhì)。轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器1、轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器：將外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞或動(dòng)植物，利用細(xì)胞增殖或者動(dòng)植物代謝準(zhǔn)備外源基因的表達(dá)產(chǎn)物的技術(shù).2、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：：是指在基因組內(nèi)穩(wěn)定地整合以實(shí)驗(yàn)方法導(dǎo)入的外源基因，并且外源基因可以穩(wěn)定地遺傳給后代的遺傳工程動(dòng)物.一般用胚胎干細(xì)胞法，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法產(chǎn)生的第一代轉(zhuǎn)基因動(dòng)物均為嵌合體動(dòng)物，而顯微注射法得到的第一代轉(zhuǎn)基