非洲豬瘟熒光定量PCR專項(xiàng)測(cè)試卷含答案

非洲豬瘟熒光定量PCR專項(xiàng)測(cè)試卷含答案一.單項(xiàng)選擇題（每題有且只有一個(gè)最優(yōu)選項(xiàng)，每小題3分或5分，共52分）1.配制熒光定量PCR體系最合理的加樣順序是（）A.ASFV-反應(yīng)液→DNA酶混合液→ASFV-內(nèi)標(biāo)(正確答案)B.ASFV-內(nèi)標(biāo)→DNA酶混合液→ASFV-反應(yīng)液C.DNA酶混合液→ASFV-內(nèi)標(biāo)→ASFV-反應(yīng)液D.DNA酶混合液→ASFV-反應(yīng)液→ASFV-內(nèi)標(biāo)2.下列應(yīng)注意事項(xiàng)表述不正確是（）A.對(duì)于人員采樣，主要用濕潤(rùn)的棉簽分別采集人員的頭皮、鼻腔、手掌以及所穿鞋的鞋底B.收到樣品后，首先要檢查樣品數(shù)量、包裝以及類型，核對(duì)樣品信息C.同一批次的試劑可以混合使用，不同批次的試劑不能混合使用D.樣本前處理和PCR檢測(cè)可以在同一個(gè)房間內(nèi)進(jìn)行(正確答案)3.下列實(shí)驗(yàn)操作過程表述不正確是（）A.對(duì)于用10mL離心管裝的2支棉簽擦拭物樣品，首先要加入適量的生理鹽水，充分振蕩后，倒入新1.5mL離心管中B.取新的八聯(lián)管，加入核酸裂解液與待檢樣品，再直接加入Mix混合液，蓋緊八聯(lián)管蓋，充分混勻，離心后即可上機(jī)檢測(cè)(正確答案)C.吸取Mix混合液時(shí)，不小心碰到1.5mL離心管外壁，此時(shí)應(yīng)換新的槍頭D.配制混合體系前，需充分振蕩試劑，隨后瞬時(shí)離心4.下表為試劑配制體系一覽表（部分），現(xiàn)需要配制體系數(shù)為6的混合液。已吸取228μLASFV-反應(yīng)液于離心管中，現(xiàn)需要再吸取12μLDNA酶混合液，該如何操作（）

A.選用規(guī)格為1000μL的單道移液器，調(diào)節(jié)刻度至12μL，吸取DNA酶混合液一次B.選用規(guī)格為200μL的單道移液器，調(diào)節(jié)刻度至12μL，吸取DNA酶混合液一次C.選用規(guī)格為10μL的單道移液器，調(diào)節(jié)刻度至6μL，吸取DNA酶混合液兩次(正確答案)D.選用規(guī)格為10μL的單道移液器，調(diào)節(jié)刻度至10μL，吸取DNA酶混合液一次，再調(diào)節(jié)刻度至2μL，再吸取DNA酶混合液一次5.未開封的檢測(cè)試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存在；已開封的檢測(cè)試劑盒可短期存放在（）A.-20℃；4℃(正確答案)B.-20℃；常溫C.常溫；常溫D.4℃；常溫6.用完移液器后應(yīng)當(dāng)調(diào)到（）量程A.最大量程，扭旋至最大刻度B.額定最大量程，扭旋至額定最大刻度(正確答案)C.最小量程，扭旋至額定最小刻度D.不需要調(diào)動(dòng)，方便下次使用7.現(xiàn)有四支裝有液體的離心管①②③④（如下圖）需要12000rpm/min離心5min，下列選項(xiàng)中離心管位置擺放正確的是（）

A

B(正確答案)

C

D8.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需要用酒精擦拭移液器，最佳擦拭順序?yàn)椋ǎ〢.95%，陰性對(duì)照專用10μL移液器→陽(yáng)性對(duì)照專用10μL移液器→200μL移液器B.75%，陰性對(duì)照專用10μL移液器→陽(yáng)性對(duì)照專用10μL移液器→200μL移液器C.95%，陰性對(duì)照專用10μL移液器→200μL移液器→陽(yáng)性對(duì)照專用10μL移液器D.75%，陰性對(duì)照專用10μL移液器→200μL移液器→陽(yáng)性對(duì)照專用10μL移液器(正確答案)9.下面實(shí)驗(yàn)操作正確的是（）

A

B

C

D(正確答案)10.實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上各類耗材、移液器等擺放最合理的是（）

A

B(正確答案)

C

D11.若實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)PCR反應(yīng)陰性質(zhì)控失敗（出現(xiàn)陽(yáng)性或可疑結(jié)果），以下哪個(gè)不是原因（）A.錯(cuò)加樣品，把其他樣品錯(cuò)誤地加入陰性反應(yīng)孔B.操作不嚴(yán)謹(jǐn)，導(dǎo)致陰性反應(yīng)孔被污染C.樣品前處理過程中注射器污染(正確答案)D.八聯(lián)管蓋沒蓋緊12.豬警2000儀器每次最多可以檢測(cè)（）個(gè)樣品。A.24個(gè)B.23個(gè)C.22個(gè)D.21個(gè)(正確答案)13.以下哪項(xiàng)不是PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則（）。A.各區(qū)合并(正確答案)B.標(biāo)志明顯C.分區(qū)合理D.單向流動(dòng)14.使用國(guó)測(cè)生物BTG一步法病原檢測(cè)，核酸裂解后，需要離心（）A.1-5minB.5-10min(正確答案)C.10-15minD.15-20min二.判斷是非題（填“是”或者“否”，每小題2分，共28分）1.ASFV是DNA病毒。（）是(正確答案)否2.檢測(cè)試劑盒反復(fù)凍融的次數(shù)最多不能超過8次。（）是否(正確答案)3.陰陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控失敗，但檢測(cè)樣本全部為陰性，可以直接判定檢測(cè)樣本全部為陰性。（）是否(正確答案)4.核酸裂解前，應(yīng)當(dāng)充分混勻，瞬時(shí)離心，不能有氣泡產(chǎn)生。（）是否(正確答案)5.標(biāo)有陽(yáng)性對(duì)照的10μL移液器均可用于加樣品核酸。（）是否(正確答案)6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，PCR產(chǎn)物可以直接丟進(jìn)垃圾桶，不需要做其它處理。（）是否(正確答案)7.熒光定量PCR檢測(cè)前，八聯(lián)管內(nèi)的液體應(yīng)當(dāng)確保完全沒有氣泡。（）是(正確答案)否8.處理擦拭物樣品時(shí)可隨意加入生理鹽水，只需要保證最后能取出1mL左右液體至1.5mL離心管中。（）是否(正確答案)9.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后整理臺(tái)面，酒精棉球可先擦桌面再擦拭移液器。（）是否(正確答案)10.每天工作結(jié)束后需要把實(shí)驗(yàn)垃圾都帶離實(shí)驗(yàn)區(qū)域。（）是(正確答案)否11.開八連管蓋的正確方式是用左手壓住八聯(lián)管下部，右手從一端直接扯起。（）是否(正確答案)12.主機(jī)在運(yùn)行時(shí)禁止覆蓋任何東西，不準(zhǔn)在機(jī)器運(yùn)行期間打開熱蓋。（）是(正確答案)否13.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后不要立即關(guān)閉電源，保持待機(jī)狀態(tài)10min后再關(guān)閉。（）是(正確答案)否14.實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)陰性對(duì)照質(zhì)控失敗，F(xiàn)AM通道CT值為38.5，而樣本FAM通道無(wú)CT值，此時(shí)可通過調(diào)節(jié)閾值使質(zhì)控合格，不需要重新檢測(cè)。（）是(正確答案)否三.分析簡(jiǎn)答題1.在實(shí)際檢測(cè)過程中，出現(xiàn)如下圖所示的檢測(cè)結(jié)果時(shí)，分析出現(xiàn)這樣檢測(cè)結(jié)果的可能原因并提出下一步的解決措施。（8分）

檢測(cè)結(jié)果如下表所示，

所檢樣品背景信息如下：

()答案解析：原因：唾液中可能含有未消化的飼料（大量的脂肪、蛋白）抑制PCR反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)參無(wú)法正常擴(kuò)增進(jìn)而導(dǎo)致HEX通道無(wú)CT值，樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú)效；

措施：將樣本離心后取上清液做5倍、10倍稀釋，混勻后離心，按常規(guī)步驟再次檢測(cè)。2.實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)提取陰性對(duì)照和反應(yīng)陰性對(duì)照均質(zhì)控失敗，陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控合格，樣本FAM通道有CT值，請(qǐng)分析是何原因，并給出解決方案。（12分