氨基酸生產(chǎn)工藝課件

第十章氨基酸生產(chǎn)工藝(p208-214)本章內(nèi)容：第一節(jié)概述第二節(jié)氨基酸發(fā)酵的代謝控制第三節(jié)氨基酸發(fā)酵的工藝控制第四節(jié)谷氨酸生產(chǎn)工藝目的要求：熟悉谷氨酸生產(chǎn)的流程了解氨基酸生產(chǎn)代謝控制的方法第一節(jié)概述氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本成分。目前世界上可用發(fā)酵法生產(chǎn)氨基酸有20多種。氨基酸氨基酸（aminoacid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。是含有一個堿性氨基和一個酸性羧基的有機化合物，氨基一般連在α-碳上。側(cè)鏈不同，氨基酸的性質(zhì)不同。氨基酸的用途1.食品工業(yè)強化食品:賴氨酸，蘇氨酸，色氨酸于小麥中。增鮮劑：谷氨酸單鈉和天冬氨酸。苯丙氨酸與天冬氨酸可用于制造低熱量二肽甜味劑(α-天冬酰苯丙氨酸甲酯)，此產(chǎn)品1981年獲FDA批準,現(xiàn)在每年產(chǎn)量已達數(shù)萬噸。2.飼料工業(yè)甲硫氨酸等必需氨基酸可用于制造動物飼料。3.醫(yī)藥工業(yè)多種復(fù)合氨基酸制劑可通過輸液治療營養(yǎng)或代謝失調(diào)。苯丙氨酸與氮芥子氣合成的苯丙氨酸氮芥子氣對骨髓腫瘤治療有效，且副作用低。4.化學(xué)工業(yè)谷氨基鈉作洗滌劑，丙氨酸制造丙氨酸纖維。以及在化妝品中的應(yīng)用。5.農(nóng)業(yè)殺蟲、殺菌、除草劑、農(nóng)藥穩(wěn)定劑、植物促進劑、脫葉劑。應(yīng)用新領(lǐng)域的擴展藥物合成原料氨基酸鹽多聚氨基酸（應(yīng)用于食品包裝、保鮮劑、日用洗滌劑等）氨基酸鰲合劑（應(yīng)用于日用化工、洗滌、照相顯影劑）氨基酸塑料作為超導(dǎo)材料等氨基酸的生產(chǎn)方法目前絕大多數(shù)應(yīng)用發(fā)酵法或酶法生產(chǎn)。極少數(shù)為天然提取或化學(xué)合成法生產(chǎn)。發(fā)酵法：直接發(fā)酵法：：野生菌株發(fā)酵酵營養(yǎng)缺陷型突突變發(fā)酵抗氨基酸結(jié)構(gòu)構(gòu)類似物突變變株發(fā)酵抗氨基酸結(jié)構(gòu)構(gòu)類似物突變變株的營養(yǎng)缺缺陷型菌株發(fā)發(fā)酵營養(yǎng)缺陷型回回復(fù)突變株發(fā)發(fā)酵添加前體法主要菌種：谷氨酸棒桿菌菌黃色短桿菌乳糖發(fā)酵短桿桿菌短芽孢桿菌粘質(zhì)賽式桿菌菌還有采用基因因工程菌進行行生產(chǎn)的往往是生物素素缺陷型，也也有些是氨基基酸缺陷型。。酶法：利用微生物細細胞或微生物物產(chǎn)生的酶來來制造氨基酸酸。提取法：蛋白質(zhì)水解，，從水解液中中提取。胱氨氨酸、半胱氨氨酸和酪氨酸酸合成法：DL-蛋氨酸酸、丙氨酸、、甘氨酸、苯苯丙氨酸。傳統(tǒng)的提取法法、酶法和化化學(xué)合成法由由于前體物的的成本高，工工藝復(fù)雜，難難以達到工業(yè)業(yè)化生產(chǎn)的目目的。國外生生產(chǎn)概概況氨基酸酸的制制造始始于1820年年，蛋蛋白質(zhì)質(zhì)酸水水解生生產(chǎn)氨氨基酸酸。1850年年化學(xué)學(xué)合成成氨基基酸。。1956年年分離離到谷谷氨酸酸棒狀狀桿菌菌，日日本采采用微微生物物發(fā)酵酵法工工業(yè)化化生產(chǎn)產(chǎn)谷氨氨酸成成功。。1957年年生產(chǎn)產(chǎn)谷氨氨酸鈉鈉（味味精））商業(yè)業(yè)化，，從此此推動動了氨氨基酸酸生產(chǎn)產(chǎn)的大大發(fā)展展。生產(chǎn)氨氨基酸酸的大大國為為日本本和德德國。。日本的的味之之素、、協(xié)和和發(fā)酵酵及德德國的的德固固沙是是世界界氨基基酸生生產(chǎn)的的三巨巨頭。。它們們能生生產(chǎn)高高品質(zhì)質(zhì)的氨氨基酸酸，可可直接接用于于輸液液制劑劑的生生產(chǎn)。。日本在在美國國、法法國等等建立立了合合資的的氨基基酸生生產(chǎn)廠廠家，，生產(chǎn)產(chǎn)氨基基酸和和天冬冬甜精精等衍衍生物物。氨基酸酸的世世界市市場中中，谷谷氨酸酸鈉約約占氨氨基酸酸總量量的75％％，其其次為為賴氨氨酸，，占產(chǎn)產(chǎn)量10％％，其其他約約占15％％。發(fā)酵生生產(chǎn)的的原料料國外谷谷氨酸酸采用用甘蔗蔗糖蜜蜜或淀淀粉水水解糖糖為原原料的的強制制發(fā)酵酵工藝藝，產(chǎn)產(chǎn)酸率率13～15％％，糖糖酸轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率率50～60％％；國內(nèi)采采用淀淀粉水水解糖糖或甜甜菜糖糖蜜為為原料料生物物素亞亞適量量發(fā)酵酵工藝藝，產(chǎn)產(chǎn)酸率率10％，，轉(zhuǎn)化化率60％％。我國氨氨基酸酸生產(chǎn)產(chǎn)情況況20世世紀80年年代50種種左右右，80年年代400種，，目前前1000多種種，其其中藥藥物類類已經(jīng)經(jīng)達到到100多多種。。目前前產(chǎn)量量已達達上百百萬t，產(chǎn)產(chǎn)值超超過百百億美美元。。菌種改改良和和新工工藝開開發(fā)，，促進進了中中國氨氨基酸酸產(chǎn)業(yè)業(yè)發(fā)展展，應(yīng)應(yīng)用于于輸液液的18種種氨基基酸原原料只只有絲絲氨酸酸和色色氨酸酸不能能工業(yè)業(yè)化生生產(chǎn)仍仍需進進口外外，其其余16種種均已已投產(chǎn)產(chǎn)，國國產(chǎn)化化80％以以上。。氨基酸酸原料料生產(chǎn)產(chǎn)企業(yè)業(yè)約20多多家，，制劑劑生產(chǎn)產(chǎn)企業(yè)業(yè)30多家家。甘甘氨酸酸3000多噸噸，賴賴氨酸酸及其其鹽酸酸鹽約約1000噸，，天門門冬氨氨酸、、纈氨氨酸、、谷氨氨酸、、亮氨氨酸、、丙氨氨酸等等幾百百噸。。谷氨酸酸鈉的的生產(chǎn)產(chǎn)規(guī)模模最大大，居居世界界首位位。氨基酸酸發(fā)酵酵氨基酸酸發(fā)酵酵：就就是以以糖類類和銨銨鹽為為主要要原料料的培培養(yǎng)基基中培培養(yǎng)微微生物物，積積累特特定的的氨基基酸。。這些方方法成成立的的一個個重要要原因因是使使用選選育成成的氨基酸酸生物物合成成高能能力的的菌株株。第二節(jié)節(jié)氨氨基基酸發(fā)發(fā)酵的的代謝謝控制制控制發(fā)發(fā)酵的的條件件控制細細胞滲滲透性性控制旁旁路代代謝降低反反饋作作用物物的濃濃度消除終終產(chǎn)物物的反反饋抑抑制與與阻遏遏作用用促進ATP的積積累，，以利利氨基基酸的的生物物合成成第三節(jié)節(jié)氨氨基基酸發(fā)發(fā)酵的的工藝藝控制制（p209-210）培養(yǎng)基基溫度pH氧一、培培養(yǎng)基基1、碳碳源作用：：構(gòu)成菌菌體、、合成成氨基基酸的的骨架架及能能量來來源。。種類：：淀粉水水解糖糖、糖糖蜜、醋酸酸、乙乙醇、、烷烴烴碳源濃濃度過過高時時，對對菌體體生長長不利利，氨氨基酸酸的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化率率降低低。菌種性性質(zhì)、、生產(chǎn)產(chǎn)氨基基酸種種類和和所采采用的的發(fā)酵酵操作作決定定碳源源種類類。2、氮源種類：銨鹽、尿素素、氨水；；作用：合成菌體蛋蛋白、合成成氨基酸的的來源。同同時調(diào)整pH值。因因此，所需需的氮源比比一般發(fā)酵酵的要多。。營養(yǎng)缺陷型型菌株發(fā)酵酵：添加適量氨氨基酸主要要以添加有有機氮源水水解液。需需生物素和和氨基酸，，以玉米漿漿作氮源。。尿素滅菌時時形成磷酸酸銨鎂鹽，，須單獨滅滅菌。可分分批流加。。氨水用pH自動控制制連續(xù)流加加。3、合適C/N氮源用于調(diào)調(diào)整pH合成菌體生成氨基酸酸因此，比一一般微生物物發(fā)酵的氮氮源高。4、磷酸鹽鹽對發(fā)酵有顯顯著影響。。不足時糖糖代謝受抑抑制。5、鎂是已糖磷酸酸化酶、檸檸檬酸脫氫氫酶和羧化化酶的激活活劑，并促促進葡萄糖糖-6-磷磷酸脫氫酶酶活力。6、鉀促進糖代謝謝。谷氨酸酸產(chǎn)酸期鉀鉀多利于產(chǎn)產(chǎn)酸，鉀少少利于菌體體生長。7、鈉調(diào)節(jié)滲透壓壓作用，一一般在調(diào)節(jié)節(jié)pH值時時加入。8、錳是許多酶的的激活劑。。9、鐵是細胞色素素、細胞色色素氧化酶酶和過氧化化氫酶的活活性基的組組成分，可可促進谷氨氨酸產(chǎn)生菌菌的生長。。10、銅離離子對氨基酸發(fā)發(fā)酵有明顯顯毒害作用用。生長因子：：生物素作用：影響響細胞膜透透性和代謝謝途徑。濃度：過多多促進菌體體生長，氨氨基酸產(chǎn)量量低。過少少菌體生長長緩慢，發(fā)發(fā)酵周期長長。與其它培養(yǎng)養(yǎng)條件的關(guān)關(guān)系：氧供供給不足，，生物素過過量時，發(fā)發(fā)酵向其它它途徑轉(zhuǎn)化化。種類：玉米米漿、麩皮皮水解液、、甘蔗糖蜜蜜和甜菜糖糖蜜為來源源。二、溫度對對氨基酸發(fā)發(fā)酵的影響響及控制菌體生長達達一定程度度后再開始始產(chǎn)生氨基基酸，因此此菌體生長最適溫度和和氨基酸合成的最適溫度度是不同的。。如谷氨酸發(fā)發(fā)酵適宜溫溫度為30～32℃℃，菌體生生長階段溫溫度過高時時，則菌體體易衰老，，pH高，，糖耗慢，，周期長，，酸產(chǎn)量低低。采取措施：：少量多次流流加尿素，，促進菌體體生長維持持最適生長長溫度、適適當通風，，利于谷氨氨酸合成。。三、pH對對氨基酸發(fā)發(fā)酵的影響響及其控制制作用機理：：主要影響酶酶的活性和和菌的代謝謝?？刂苝H方方法：流加尿素和和氨水流加方式：：根據(jù)菌體生生長、pH變化、耗耗糖情況和和發(fā)酵階段段等因素決決定。pH控制措措施：（1）菌體體生長或耗耗糖慢時，，少量多次次流加尿素素，避免pH過高。。（2）菌體體生長或耗耗糖過快時時，流加尿尿素可多些些，以抑制制菌體生長長。（3）發(fā)酵酵后期，殘殘?zhí)巧?，接接近放罐時時，少加或或不加尿素素，以免造造成氨基酸酸提取困難難。（4）氨水水對pH影影響大，應(yīng)應(yīng)采取連續(xù)續(xù)流加。一般發(fā)酵前前期pH控控制在7.5左右，，發(fā)酵后期期pH控制制在7.2左右。四、氧對氨氨基酸發(fā)酵酵的影響及及其控制不同的氨基基酸發(fā)酵需需要氧的量量不同：要求供氧充足的的谷氨酸族氨氨基酸發(fā)酵酵：生物合合成與TCA循環(huán)有有關(guān)。適宜在缺氧條件下下進行的亮氨氨酸、苯丙丙氨酸和纈纈氨酸發(fā)酵酵：菌體呼呼吸受阻時時產(chǎn)量最大大。供氧不足時時產(chǎn)酸受輕微影響響的天冬氨酸族族氨基酸發(fā)發(fā)酵。因此，在發(fā)發(fā)酵過程中中應(yīng)根據(jù)具具體情況對對供氧過程程進行控制制。第四節(jié)谷谷氨酸生生產(chǎn)工藝（p210～214）工業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)開始于由由水解小麥麥面筋或大大豆蛋白質(zhì)質(zhì)而制取。。1957年年，日本率率先采用微微生物發(fā)酵酵法生產(chǎn)，，并投入大大規(guī)模工業(yè)業(yè)化生產(chǎn)，，這是被譽譽為現(xiàn)代發(fā)發(fā)酵工業(yè)的的重大創(chuàng)舉舉，使發(fā)酵酵工業(yè)進入入調(diào)節(jié)代謝謝的調(diào)控階階段。目前世界產(chǎn)產(chǎn)谷氨酸鈉鈉30噸/年，占氨氨基酸總量量的2/3。我國現(xiàn)已有有200余余家生產(chǎn)，，年產(chǎn)量達達15萬噸噸，居世界界首位。產(chǎn)生菌株特特點：革蘭氏陽性性。不形成芽胞胞。沒有鞭毛，，不能運動動。需要生物素素作為生長長因子。在通氣條件件下才能產(chǎn)產(chǎn)生谷氨酸酸。谷氨酸生物物合成機理理：由三羧酸循循環(huán)中產(chǎn)生生的a-酮戊戊二酸，在在谷氨酸脫氫酶酶和氫供體體（NH4+）存在下進進行還原性氨化化作用而得得到。谷氨酸的生生產(chǎn)：一、淀粉水水解糖的制制備二、菌種擴擴大培養(yǎng)三、谷氨酸酸發(fā)酵時期期四、谷氨酸酸發(fā)酵控制制五、谷氨酸酸的提取六、谷氨酸酸發(fā)酵研究究新進展七、非糖質(zhì)質(zhì)原料的谷谷氨酸發(fā)酵酵一、淀粉水水解糖的制制備酸水解:1、調(diào)漿：：干淀粉用水水調(diào)成10～11Bx的淀粉粉乳，加鹽鹽酸量約為為干淀粉的的0.5～～0.8％，調(diào)pH1.5。2、糖化：：蒸汽加熱，，加壓糖化化25min。冷卻卻至80℃℃下中和。。3、中和：：燒堿中和，，至pH4.0～～5.0。。4、脫色：：活性炭脫色色和脫色樹樹脂?；钚孕蕴坑昧繛闉?.6～～0.8％％，在70℃及酸性條件件下攪拌后后過濾。酶法糖化：：以大米或碎碎米為原料料時采用。。大米進行浸浸泡磨漿，，再調(diào)成15Bx，，調(diào)pH6.0，加加細菌a-淀粉酶進進行液化，，85℃℃30min，加糖糖化酶60℃糖化化24h，，過濾后可可供配制培培養(yǎng)基。糖蜜原料：：不宜直接用用來作為谷谷氨酸發(fā)酵酵的碳源，，因含豐富富的生物素素。預(yù)處理方法法：活性碳或樹樹脂吸附法法和亞硝酸酸法吸附或或破壞生物物素。也可可以在發(fā)酵酵液中加入入表面活性性劑吐溫60或添加加青霉素。。1、斜面培培養(yǎng)主要產(chǎn)生菌菌:棒狀桿菌屬屬、短桿菌菌屬、小桿桿菌屬、節(jié)節(jié)桿菌屬。。我國各工廠廠目前使用用的菌株主主要是鈍齒齒棒桿菌和和北京棒桿桿菌及各種種誘變株。。生長特點：：適用于糖質(zhì)質(zhì)原料，需需氧，以生生物素為生生長因子。。斜面培養(yǎng)基基：蛋白胨、牛牛肉膏、氯氯化鈉組成成的pH7.0～7.2瓊脂脂培養(yǎng)基，，32℃培培養(yǎng)18～～24h。。二、菌種擴擴大培養(yǎng)2、一級種種子培養(yǎng)由葡萄糖、、玉米漿、、尿素、磷磷酸氫二鉀鉀、硫酸鎂鎂、硫酸鐵鐵及硫酸錳錳組成。pH6.5～6.8。1000mL裝裝200～～250mL振蕩，，32℃培培養(yǎng)12h。3、二級種種子培養(yǎng)用種子罐培培養(yǎng)，料液液量為發(fā)酵酵罐投料體體積的1％％，用水解解糖代替葡葡萄糖，于于32℃進進行通氣氣攪拌7～～10h。。種子質(zhì)量要要求：二級級種子培養(yǎng)養(yǎng)結(jié)束時，，無雜菌或或噬菌體污污染，菌體體大小均一一，呈單個個或八字排排列?；罹鷶?shù)為108～109/mL。三、谷氨酸酸發(fā)酵的幾幾個時期1、適應(yīng)期期尿素分解出出氨使pH上升，糖糖不利用，，2～4h。措施：接種量和發(fā)發(fā)酵條件控控制使其縮縮短。2、對數(shù)生生長期糖耗快，尿尿素大量分分解使pH上升，氨氨被利用pH又迅速速下降。溶溶氧急劇下下降后維持持在一定水水平。菌體體濃度迅速速增大，菌菌體形態(tài)為為排列整齊齊的八字形形，不產(chǎn)酸酸，12h。措施：及時供給菌菌體生長必必須的氮源源及調(diào)節(jié)pH，在pH7.5～8.0時流加尿尿素；維持持溫度30～32℃3、菌體生生長停止期期：谷氨酸合成成。措施：提供供必須的氨氨及pH維維持在7.2～7.4。大量量通氣，控控制溫度34～37℃。4、發(fā)酵后后期：菌體衰老，，糖耗慢，，殘?zhí)堑汀?。措施：營養(yǎng)養(yǎng)物耗盡酸酸濃度不增增加時，及及時放罐。。發(fā)酵周期一一般為30h。四、谷氨酸酸發(fā)酵控制制（1）生物物素作為催化脂脂肪酸生物物合成最初初反應(yīng)的關(guān)關(guān)鍵酶乙酰酰CoA的的輔酶，參參與脂肪酸酸的生物合合成，進而而影響磷酯酯的合成。。當磷酯含量量減少到正正常時的一一半左右時時，細胞發(fā)發(fā)生變形，，谷氨酸能能夠從胞內(nèi)內(nèi)滲出，積積累于發(fā)酵酵液中。生物素過量量，則發(fā)酵酵過程菌體體大量繁殖殖，不產(chǎn)或或少產(chǎn)谷氨氨酸，代謝謝產(chǎn)物中乳乳酸和琥珀珀酸明顯增增多。一般生物素素要控制在在亞適量，，才能得到到高產(chǎn)的谷谷氨酸。（2）種齡齡和種量的的控制一級種子控控制在11～12h，二級控控制在7～～8h。種量為1％％。過多，，菌體嬌嫩嫩，不強壯壯，提前衰衰老自溶，，后期產(chǎn)酸酸量不高。。（3）pH發(fā)酵前期，，幼齡細胞胞對pH較較敏感，pH過低，，菌體生長長旺盛，營營養(yǎng)成分消消耗大，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入正常發(fā)發(fā)酵慢，長長菌不長酸酸。谷氨酸脫氫氫酶最適pH為7.0～7.2，轉(zhuǎn)氨氨酶最適pH7.2～7.4。在發(fā)發(fā)酵中后期期，保持pH不變。。過高轉(zhuǎn)為為谷氨酰胺胺，過低氨氨離子不足足。（4）通風風不同種齡、、種量，培培養(yǎng)基成分分，發(fā)酵階階段及發(fā)酵酵罐大小要要求通風量量不同。在菌體生長長階段，通通風量過大大，生物素素缺乏，抑抑制菌體生生長。在發(fā)酵產(chǎn)酸酸階段，需需要大量通通風供氧，，以防過量量生成乳酸酸和琥珀酸酸，但過大大通風，則則大量積累累a-酮戊戊二酸。防止噬菌體和和雜菌的污染染從空氣過濾、、培養(yǎng)基、設(shè)設(shè)備、環(huán)境等等環(huán)節(jié)嚴格把把關(guān)。五、谷氨酸的的提取1、等電點法法操作簡單，收收率60％。。周期長，占占地面積大。。2、離子交換換法用陽離子交換換樹脂提取吸吸附谷氨酸形形成的陽離子子，再用熱堿堿洗脫，收集集相應(yīng)流分，，再加鹽酸結(jié)結(jié)晶。六、谷氨酸發(fā)發(fā)酵研究新進進展繼續(xù)選育各種種生化突變菌菌株：轉(zhuǎn)化率提高，，或可在富含含生物素的培培養(yǎng)基中保持持較高產(chǎn)酸水水平。提高原原料利用率，，拓寬原料來來源或簡化操操作工藝。生物工程新技技術(shù)的應(yīng)用：：體外DNA重重組的基因工工程和原生質(zhì)質(zhì)體融合技術(shù)術(shù)和固定化細細胞技術(shù)使產(chǎn)產(chǎn)量提高近1倍。改進發(fā)酵工藝藝：開拓原料，改改進流加工藝藝，通過電子子計算機控制制發(fā)酵條件。。七、非糖質(zhì)原原料的谷氨酸酸發(fā)酵醋酸發(fā)酵谷氨氨酸機理：醋酸形形成乙酰CoA，再進入入TCA，因因此凡能利用用葡萄糖原料料的菌種也可可作為醋酸發(fā)發(fā)酵谷氨酸的的菌株。以醋酸鈉或醋醋酸銨與醋酸酸的混合液為為原料，且濃濃度不超過4％。發(fā)酵過過程中也需流流加以保持pH。謝謝！9、靜靜夜夜四四無無鄰鄰，，荒荒居居舊舊業(yè)業(yè)貧貧。。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨中黃葉樹樹，燈下白頭頭人。。14:53:0314:53:0314:5312/29/20222:53:03PM11、以我獨獨沈久，，愧君相相見頻。。。12月-2214:53:0314:53Dec-2229-Dec-2212、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。14:53:0314:53:0314:53Thursday,December29,202213、乍見翻翻疑夢，，相悲各各問年。。。12月-2212月-2214:53:0314:53:03December29,202214、他鄉(xiāng)生白發(fā)發(fā)，舊國見青青山。。29十二月月20222:53:03下午14:53:0312月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。十二月222:53下午午12月-2214:53December29,202216、行動出成成果，工作作出財富。。。2022/12/2914:53:0314:53:0329December202217、做前，，能夠環(huán)環(huán)視四周周；做時時，你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點點的射線線向前。。。2:53:03下午午2:53下午午14:53:0312月-229、沒有有失敗敗，只只有暫暫時停停止成成功！！。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很很多多事事情情努努力力了了未未必必有有結(jié)結(jié)果果，，但但是是不不努努力力卻卻什什么么改改變變也也沒沒有有。。。。14:53:0314:53:0314:5312/29/20222:53:03PM11、成功就就是日復(fù)復(fù)一日那那一點點點小小努努力的積積累。。。12月-2214:53:0314:53Dec-2229-Dec-2212、世間成事，，不求其絕對對圓滿，留一一份不足，可可得無限完美美。。14:53:0314:53:0314:53Thursday,December29,202213、不不知知香香積積寺寺，，數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2214:53:0314:53:03December29,202214、意志堅強的的人能把世界界放在手中像像泥塊一樣任任意揉捏。29十二月月20222:53:03下午14:53:0312月-2215、楚塞三三湘接，，荊門九九派通。。。。十二月222:53下午午12月-2214:53December29,202216、少年十十五二十十時，步步行奪得得胡馬騎騎。。2022/12/2914:5