植物組織培養(yǎng)之培養(yǎng)環(huán)境及

第七章

植物組織培養(yǎng)之培養(yǎng)環(huán)境及

癒傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)環(huán)境（一）溫度一般最適培養(yǎng)之溫度在20-30℃範(fàn)圍內(nèi)，過高或過低都會(huì)抑制植物細(xì)胞及組織之增殖及分化。選擇培養(yǎng)溫度時(shí)，要瞭解植物原來的生長(zhǎng)環(huán)境，培植體的生長(zhǎng)最適溫度通常與其在生態(tài)環(huán)境中之生長(zhǎng)最適溫度相同，而25±2℃通常適合大多數(shù)植物之培養(yǎng)條件。相同植物之不同部位其培養(yǎng)適溫會(huì)有差異，如菸草的花藥在培養(yǎng)前進(jìn)行48小時(shí)（5℃）的低溫處理，會(huì)增加其不定胚之比例（Nitsch&Norrel,1972）。相同的培植體培養(yǎng)在不同溫度時(shí)，其生長(zhǎng)激素的需求也會(huì)有所差異。如將菸草細(xì)胞培養(yǎng)在26℃的條件下，培養(yǎng)基不須添加Cytokinin，但在16℃時(shí)則要添加Cytokinin。原因是在26℃時(shí)內(nèi)生（endogenous）之Cytokinin會(huì)被活化，但在16℃時(shí)則不會(huì)（莊野，1975）。（二）光照光對(duì)細(xì)胞、組織、器官之生長(zhǎng)及分化影響很大，光對(duì)培養(yǎng)體的影響包括光週期、光質(zhì)及光強(qiáng)度。培植體所需之光強(qiáng)度與其生長(zhǎng)環(huán)境相同，陽性植物需要較高的光強(qiáng)度，陰性植物則需要較低的光強(qiáng)度，其範(fàn)圍在1500至6000lux之間。癒傷組織之誘導(dǎo)要在無光或弱光的條件下進(jìn)行，但胡蘿蔔在弱光下的增殖較無光為佳，或先在無光條件下培養(yǎng)，再移至弱光條件下。光週期也很重要，一般長(zhǎng)日照植物要較長(zhǎng)的照光時(shí)間，短日植物則要較長(zhǎng)的暗週期。光質(zhì)不同，培植體之生長(zhǎng)及分化也會(huì)不同，白光及藍(lán)光會(huì)促進(jìn)培植體的綠化和不定芽之分化，而紅光則可促進(jìn)根的形成。普通的日光燈為最常用的光源。（三）通氣 固態(tài)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)瓶常用之棉花塞及鋁箔紙與外界有流通性，因此不須特別供給氧，但液體培養(yǎng)時(shí)，則要用震盪器來增加養(yǎng)的供應(yīng)量。二、癒傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)（一）定義 癒傷組織（callus）原意是指植物在受傷後所形成之癒合組織，而今是指植物的組織或細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)在含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑之人工培養(yǎng)基，經(jīng)過脫分化後，所形成的細(xì)胞塊，具有分化成植物各種組織及器官的潛能。（二）癒傷組織形成之條件培植體通常需要在含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上才會(huì)形成callus。大部分的材料需添加auxin，少數(shù)材料除需添加auxin外，尚需添加cytokinin才能形成callus。一般而言，組織塊上能形成癒傷組織的部分非常有限，例如以莖切片或葉塊做培植體進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，只在切口附近形成callus。添加之a(chǎn)uxin不同時(shí)，癒傷組織之形成部位會(huì)有差異，如使用IAA或NAA時(shí)大多只在傷口及其附近形成癒傷組織，然而使用高濃度之2,4-D時(shí)，除傷口會(huì)形成癒傷組織外，其他的部位也會(huì)形成callus。（三）Callus之種類Callus有兩種類型。Type1Callus的質(zhì)地堅(jiān)硬，增殖能力及再分化能力弱。Type2Callus的質(zhì)地柔軟，增殖能力及再分化能力均佳。若培植體本身的營(yíng)養(yǎng)含量及內(nèi)生荷爾蒙的種類及濃度不一致或培植體本身已發(fā)生突變…時(shí)，會(huì)產(chǎn)生形狀及性質(zhì)混雜的癒傷組織，這種現(xiàn)象尤其容易發(fā)生在能產(chǎn)生二次代謝產(chǎn)物的植物中。（四）癒傷組織之應(yīng)用 由於癒傷組織可以連續(xù)地移植到新培養(yǎng)基，可無限地增殖下去，因此可以將形態(tài)不一致，或突變的癒傷組織的細(xì)胞經(jīng)