葡萄糖濃度的測(cè)定

葡萄糖濃度的測(cè)定考試實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙笳莆锗徏妆桨贩ǚy(cè)定葡萄糖含量的原理和方法。學(xué)會(huì)取液器及紫外分光光度計(jì)的使用。了解葡萄糖濃度測(cè)定的意義。實(shí)驗(yàn)儀器及試劑772型分光光度計(jì)；試管；移液管；水浴鍋。鄰甲苯胺試劑：硫脲2.5g，鄰甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸溶解，在1000ml容量瓶?jī)?nèi)調(diào)至到刻度。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液：10mg/ml。葡萄糖濃度測(cè)定的意義正常人血糖濃度在神經(jīng)和激素調(diào)節(jié)下維持相對(duì)恒定。當(dāng)調(diào)節(jié)因素失去平衡時(shí)出現(xiàn)高血糖或低血糖。病理性高血糖見于胰島α-細(xì)胞瘤等疾病。病理性低血糖見于胰島β-細(xì)胞瘤、垂體機(jī)能減退、腎上腺皮質(zhì)機(jī)能減退、甲狀腺機(jī)能減退、及肝壞死、糖原累積癥等疾病。測(cè)定葡萄糖濃度的方法Folin-吳憲法：利用葡萄糖的還原性，在與堿性銅試劑共熱時(shí)，是銅離子還原成亞銅離子。鄰甲苯胺法：利用醛糖在熱醋酸溶液中與苯胺類縮合生成青色的Schiff堿。葡萄糖氧化酶法：利用葡萄糖氧化酶對(duì)葡萄糖的氧化作用。鄰甲苯胺法原理葡萄糖在熱醋酸溶液中脫水后與鄰甲苯胺縮合，生成青色的Schiff堿，其顏色深淺與葡萄糖含量成正比，其反應(yīng)式如下：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液制備取10ml容量瓶6只，分別編號(hào)①、②、③、④、⑤；依次加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml；以H2O稀釋至10ml，混勻以上葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為50、100、200、300、400mg/100ml。實(shí)驗(yàn)步驟123456測(cè)定管鄰甲苯胺試劑（ml）5.05.05.05.05.05.05.0樣品（ml）00.1①0.1②0.1③0.1④0.1⑤0.1蒸餾水（ml）0.1000000樣品試劑混勻后置沸水浴中煮沸15分鐘，取出置冷水中冷卻。用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)630nm處進(jìn)行比色，以“1”管作空白校零，讀取各管吸光度。實(shí)驗(yàn)步驟數(shù)據(jù)處理以吸光度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)管中的葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以樣品“2”“3”“4”“5”“6”為基礎(chǔ)在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)測(cè)定管的吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到未知樣品中的葡萄糖濃度。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)測(cè)定血糖必須采用空腹血。若用抗凝血最好采用氟化鈉抗凝劑。鄰甲苯胺法，試劑酸度很