自身免疫性疾病及其免疫檢測

常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測

自身抗體（autoantibody）是指抗自身細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)

分類:

臟器特異性自身抗體

臟器非特異性自身抗體1編輯ppt自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關(guān)參與免疫病理性損傷一、自身抗體的特性2編輯ppt自身抗體免疫球蛋白補(bǔ)體淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子自身免疫性疾病的主要實(shí)驗(yàn)檢測3編輯ppt

1948年Haragraves等發(fā)現(xiàn)LE細(xì)胞現(xiàn)象

1957年Holborow等應(yīng)用IIF檢測ANA1961年Beck等發(fā)現(xiàn)ANA不同熒光染色模型

60–70年代IIF、ID、CIE應(yīng)用新的自身抗體

1979年Towbin等應(yīng)用免疫印跡技術(shù)檢測自身抗體

80年代IB、RIP應(yīng)用蛋白多肽水平認(rèn)識自身抗原

1987年DNA基因重組技術(shù)開始應(yīng)用自身抗體研究近十年應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)自身抗體研究發(fā)展簡史4編輯ppt抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）類風(fēng)濕因子（RF）抗角蛋白抗體（AKA）抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）抗心磷脂抗體（ACLA）常檢測的自身抗體5編輯ppt標(biāo)志抗體相關(guān)疾病dsDNASLESmSLESSBSS著絲點(diǎn)抗體PSS（局限型）Scl-70抗體PSS（彌漫型）AKA、抗CCP抗體RAJo-1抗體PM/DM（進(jìn)行性系統(tǒng)性硬皮病）高滴度RNP抗體MCTD肝腎微粒體抗體（LKM-1）Ⅱ型自身免疫性肝炎平滑肌抗體（SMA）Ⅰ型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常見自身免疫性疾病的標(biāo)志抗體6編輯ppt間接免疫熒光法（IIF）ELISA免疫印跡法（Western-blot）酶免疫斑點(diǎn)法檢測自身抗體常用的方法7編輯ppt

抗核抗體::以真核細(xì)胞（如HEp-2細(xì)胞、肝細(xì)胞）的各種細(xì)胞核成分為靶抗原所檢測的自身抗體的總稱。二、抗核抗體的檢測與應(yīng)用8編輯ppt抗核抗體譜9編輯ppt以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；以抗原的化學(xué)名稱分類命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體,抗核小體抗體等?？购丝贵w譜的分類和命名10編輯ppt間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑點(diǎn)法ELISA免疫印跡法

（Western-blot）

抗核抗體檢測方法11編輯ppt間接免疫熒光法示意圖HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）12編輯ppt

細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞骨架細(xì)胞周期

均質(zhì)型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點(diǎn)型線粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細(xì)胞角蛋白型紡綞絲型著絲點(diǎn)型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周邊型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點(diǎn)型(dots)IIF檢測ANA熒光染色模型13編輯ppt斑點(diǎn)型（nRNP/Sm）

高滴度的抗U1-nRNP為MCTD的特征?？筍m抗體對SLE具有高度特異性。斑點(diǎn)型（SSA/SSB）抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡（100%）?？筍SB抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。14編輯ppt均質(zhì)型

抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體(histone)抗ssDNA抗體抗核小體抗體(nucleosome)15編輯ppt周邊型

可見于膠原病、PBC、CAH等患者

16編輯ppt核點(diǎn)型（DOTS）

見于SLE、SS、PBC、風(fēng)濕病

抗著絲點(diǎn)型

PSS局限型標(biāo)志抗體17編輯ppt抗原纖維蛋白型

僅見于5%～10%的PSS，男性高于女性

抗RNA多聚酶Ⅰ型抗體

僅見于硬皮病患者，陽性率為4%18編輯ppt抗PM-Scl（PM-1）抗體

見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM/皮肌炎DM/彌漫性PSS）

19編輯ppt抗Scl-70型

PSS彌漫型的標(biāo)志抗體20編輯ppt增殖細(xì)胞核抗原Ⅰ型（PCNA）

SLE特異性抗體，與發(fā)生彌漫性增殖性腎小球腎炎相關(guān)21編輯ppt抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線粒體抗體（AMA）SLE標(biāo)志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體22編輯ppt抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體偶見于SLE和SS23編輯ppt抗肌動蛋白抗體見于自身免疫性慢性活動型肝炎

24編輯ppt抗雙鏈DNA抗體

抗dsDNA抗體與細(xì)胞核DNA（外圍區(qū)）脫氧核糖磷酸框架結(jié)合。

抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標(biāo)志抗體。其抗體滴度與疾病的活動程度有相關(guān)性，抗體滴度的動態(tài)測定為監(jiān)控治療提供了有效的實(shí)驗(yàn)室手段?？闺p鏈DNA抗體25編輯ppt檢測方法及應(yīng)用間接免疫熒光檢測，是目前國內(nèi)外臨床常規(guī)檢測抗dsDNA抗體最常用的方法?？筪sDNA抗體診斷SLE的特異性可達(dá)95%～100%，但其敏感性僅為30%～50%，因此抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷。檢測方法及應(yīng)用26編輯ppt

抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動度相關(guān)。27編輯ppt抗核小體抗體

核小體（nucleosome）是真核生物細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位。凋亡細(xì)胞是核小體的重要來源，當(dāng)SLE患者的吞噬細(xì)胞對凋亡細(xì)胞的清除能力受損或降低，導(dǎo)致核小體在患者體內(nèi)大量存積，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗核小體抗體（Antinucleosomeantibody,AnuA）。

28編輯ppt檢測及應(yīng)用AnuA的檢測通常采用ELISA檢測法。AnuA具有同抗ds-DNA抗體相同的診斷特異性，可達(dá)到95%，在系統(tǒng)性硬化（SSc）病中可有20%～50%低濃度陽性率，其他自身免疫性疾病中該抗體均為陰性。AnuA的表達(dá)與SLE病情活動分?jǐn)?shù)相關(guān)。檢測及應(yīng)用29編輯ppt

抗ENA抗體譜:可提取核抗原抗體的總稱

臨床常檢測的抗ENA抗體譜主要包括：

抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白三、抗ENA抗體譜的檢測與應(yīng)用30編輯ppt抗可提取性核抗原（ENA）抗體31編輯ppt

雙向免疫擴(kuò)散（ID）對流免疫電泳（CIE）免疫印跡法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑點(diǎn)法ENA檢測方法32編輯ppt免疫印跡法

SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測免疫印跡法33編輯ppt34編輯ppt抗可提取性核抗原（ENA）抗體抗Sm抗體：SLE標(biāo)記性抗體（20%~30%）抗nRNP抗體：MCTD95%~100%（高滴度）抗SSA抗體：PSS60%~75%，其它CTD抗SSB抗體：

PSS10%~40%，其它CTD抗Scl-70抗體：SSc25%~75%,標(biāo)記性抗體抗Jo-1抗體：PM/DM25%，標(biāo)記性抗體抗rRNP抗體：

SLE特異性抗體（10%~30%）35編輯ppt抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。

四、與小血管炎相關(guān)的自身抗體檢測與應(yīng)用36編輯ppt

熒光染色型

靶抗原

胞漿型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）殺菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)髓過氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有兩種特性ANCA熒光染色型與靶抗原37編輯ppt周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（pANCA）主要見于炎癥性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩?。?8編輯ppt胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)主要見于Wegener’s肉芽腫及微小多動脈炎39編輯ppt

ANCA臨床應(yīng)用

髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽腫性血管炎相關(guān)殺菌/通透性增高蛋白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系

蛋白酶3（PR3）與Wegener’s肉芽腫（WG）密切相關(guān)。僅cANCA診斷WG的特異性大于90%，聯(lián)合PR3可超過95%，活動期幾乎100%陽性。

組織蛋白酶G(Cath-G)白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白(LF)可見于SLE、IBD、PBC、PSC等40編輯pptRA早期診斷相關(guān)自身抗體

抗角質(zhì)層蛋白抗體（AKA）：1979年Young等報(bào)告靶抗原：filaggrin（40KD）抗核周因子（APF):1964年Nienhuis等報(bào)告靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解產(chǎn)物抗聚角蛋白微絲蛋白抗體（AFA）：1993年Simon等報(bào)告靶抗原：filaggrin（40KD）抗Sa抗體：1994年Despres等報(bào)告靶抗原:50/55KD非?；嚯?，半抗原-瓜氨酸抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）：1998Schellekens五、與RA相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用41編輯ppt

類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor,RF）為抗變性IgGFc的自身抗體，主要是IgM型

致病機(jī)理：RF與體內(nèi)變性IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體或被吞噬細(xì)胞吞噬，產(chǎn)生炎性介質(zhì)導(dǎo)致組織炎性損傷，使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。42編輯ppt1.膠乳顆粒凝集實(shí)驗(yàn)定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定IgM-RF

2.速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE）定量、準(zhǔn)確、快速，測定IgM-RF

3.ELISA定量、準(zhǔn)確，可測定不同類型的RF檢測方法43編輯ppt

（1）RF在RA、SLE、PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽性率（%）RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25臨床應(yīng)用44編輯ppt（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，

IgM-RF效價(jià)>80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)通常提示患者預(yù)后不良。

（3）IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)

癥狀密切相關(guān)，常伴隨IgM-RF同時(shí)出現(xiàn)，在正常人及非RA患者中很難檢出。

（4）IgA-RF與RA患者關(guān)節(jié)癥狀的嚴(yán)重程度及骨質(zhì)破壞有顯著相關(guān)性。45編輯pptAKA主要見于RA，陽性率36%~59%，特異性95%~99%，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的RA類型。抗角蛋白抗體（AKA）46編輯ppt常用方法：ELISA臨床意義：RA特異性自身抗體，敏感性65%~85%，特異性為94%~98%；高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關(guān)節(jié)侵蝕的危險(xiǎn)因子之一，定量檢測有助于判斷預(yù)后?？弓h(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）47編輯ppt自身免疫性肝病是與自身免疫密切相關(guān)的特殊類型的肝病，其診斷和治療完全不同于一般的慢性病毒性肝炎

自身免疫性肝炎(AIH)

原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)

原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)

重疊綜合征六、與自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用48編輯ppt

在多種累及肝膽疾患的自身免疫疾病中，自身抗體在發(fā)病機(jī)制中起重要作用自身免疫性肝病具有相對特異性自身抗體譜自身抗體檢測對自身免疫性肝病的診斷及鑒別診斷具有重要意義自身免疫性肝病與自身抗體49編輯ppt自身免疫性肝病及其自身抗體譜疾病類型相關(guān)自身抗體

自身免疫性肝炎（AIH）

Ⅰ型AIHANA/ASMAⅡ型AIHanti-LKM-1anti-LC-1Ⅲ型AIHanti-SLA(可溶性肝抗原)

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）

AMA(M2/M4/M8/M9)anti-gp210，sp100ACA

原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC）pANCA

自身免疫性肝病及其自身抗體譜50編輯ppt

抗甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)

抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb

）抗促甲狀腺素受體抗體（TSH-RAb）七、與橋本甲狀腺炎相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用51編輯ppt重癥肌無力（MG）自身抗體譜：

抗骨胳肌抗體（ASA）、抗乙酰膽堿受體(AchR)抗體多發(fā)性硬化（MS）自身抗體譜：

抗髓鞘堿性蛋白（MBP）抗體、抗腦苷脂抗體、抗神經(jīng)結(jié)苷脂抗體急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病（格林―巴利綜合征）自身抗體譜：抗髓鞘糖脂抗體、抗髓鞘硫脂抗體

八、與神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性相關(guān)自身抗體的檢測與應(yīng)用52編輯ppt

大多數(shù)自身免疫患者血清中可測到高效價(jià)的自身抗體，特別是有些自身抗體的檢測已納入某些自身免疫性疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)中，自身抗體檢測已是臨床免疫檢測的一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。第五節(jié)自身抗體檢測的臨床應(yīng)用53編輯ppt

篩查性試驗(yàn)與確診性試驗(yàn)項(xiàng)目的合理組合選擇相關(guān)的自身抗體檢測項(xiàng)目切忌盲目的全面檢測實(shí)驗(yàn)中應(yīng)同步設(shè)置陽性和陰性對照一、自身抗體檢測的一般原則54編輯ppt

95%～99%可排除SLE

（－）SLE治療緩解病情特重（大量IC沉積消耗抗體）（＋）低滴度常見于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作為診斷SLE的依據(jù)ENA抗體譜檢測（－）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗體（＋）可幫助診斷ANA初篩二、實(shí)驗(yàn)室方法的選擇及結(jié)果的確認(rèn)55編輯ppt自身免疫性疾病ANA陽性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80潰瘍性結(jié)腸炎26慢性活動性肝炎30~40其它風(fēng)濕病20~50ANA在自身免疫性疾病中的檢出率

56編輯ppt第六節(jié)自身免疫性疾病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測在自身免疫病患者體內(nèi)，因有多種自身抗原的存在，自身抗體的種類也可有交叉重疊現(xiàn)象，故實(shí)驗(yàn)中檢測出多種自身抗體陽性時(shí)還必須結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行綜合分析。57編輯ppt自身抗體↑→免疫球蛋白↑II型及III型自身免疫病消耗補(bǔ)體↑→補(bǔ)體↓→監(jiān)測病情一、免疫球蛋白