臨床免疫檢驗(yàn)中的15大干擾因素

臨床免疫檢驗(yàn)中的干擾因素內(nèi)源性干擾物質(zhì)1、類風(fēng)濕因子（Rheumatoidfactors,RF）類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor，RF）是一種抗人或動(dòng)物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF最初由Rose等（1984年）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清中發(fā)現(xiàn)。RA患者體內(nèi)有產(chǎn)4RF的B細(xì)胞克隆，在變性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為IgM類自身抗體，但也有IgG類、IgA類、IgD類和IgE類。人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的Fc段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。類風(fēng)濕因子干擾的排除（1）用F（ab）替代完整的IgG。（2）標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63°C,10min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）。（3）檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-筑基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。2、嗜異性抗體嗜異性抗體（Id）是由低純度抗原引起的，又稱之為對(duì)非特異性抗原產(chǎn)生的抗體應(yīng)答。天然的嗜異性抗體（IgG）可分為兩類：一類（85%的假陽(yáng)性或假增高由其引起）可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域，但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類（15%的假陽(yáng)性或假增高由其引起）可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位，但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過(guò)交聯(lián)固相和酶標(biāo)的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽(yáng)性或假增高反應(yīng)。其也可造成假陰性或假降低的結(jié)果。嗜異性抗體干擾的排除使用特異的兔F（ab’）2片段作為固相或酶標(biāo)抗體。在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig，封閉可能存在的嗜異性抗體。但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。使用靶特異的非Ig親和蛋白（Affibody）替代固相或酶標(biāo)抗體之一。采用噬菌體展示技術(shù)展示來(lái)自單個(gè)金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）聯(lián)合文庫(kù)的人IgA結(jié)合親和蛋白，用于IgA的測(cè)定，不受異嗜性抗體的影響。使用特異的雞抗體作為固相和測(cè)定抗體。3、人抗動(dòng)物（如小鼠、免、羊等）抗體人抗小鼠抗體（humananti-mouseantibodies，HAMA）：抗鼠抗體對(duì)使用鼠源性單克隆抗體的免疫測(cè)定，可產(chǎn)生假陽(yáng)性（定量檢測(cè)假增高）或假陰性（定量假降低）結(jié)果。干擾排除的方法使用特異的抗體F(ab')2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體。在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的鼠Ig,封閉可能存在的抗鼠抗體。使用特異的雞抗體IgG作為固相和測(cè)定抗體。雞IgG不與人抗鼠抗體反應(yīng)。因而，用其作為固相或酶標(biāo)抗體不會(huì)出現(xiàn)假增高或假降低結(jié)果。4、自身抗體自身抗體如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素、抗甲狀腺激素抗體等，能與其相應(yīng)靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在免疫測(cè)定方法中可干擾相應(yīng)抗原抗體的測(cè)定。自身抗體干擾排除的方法測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。5、補(bǔ)體補(bǔ)體(complement,C)是存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。早在19世紀(jì)末Bordet即證實(shí)，新鮮血液中含有一種不耐熱的成分，可輔助和補(bǔ)充特異性抗體，介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，故稱為補(bǔ)體。補(bǔ)體是由30余種可溶性蛋白、膜結(jié)合性蛋白和補(bǔ)體受體組成的多分子系統(tǒng)，故稱為補(bǔ)體系統(tǒng)(complementsystem)。根據(jù)補(bǔ)體系統(tǒng)各成分的生物學(xué)功能，可將其分為補(bǔ)體固有成分、補(bǔ)體調(diào)控成分和補(bǔ)體受體(CR)。ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其Fc段的C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。補(bǔ)體干擾的排除1、用EDTA稀釋標(biāo)本。2、用53°C，10min加熱血清使C1q滅活。6、溶菌酶溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶(muramidase)或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。主要通過(guò)破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的8-1，4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。溶菌酶可與等電點(diǎn)較低的蛋白有強(qiáng)的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點(diǎn)約為5，因此，在雙抗體夾心法測(cè)定中，溶菌酶可在包被的IgG和酶標(biāo)的IgG間形成橋接，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性或假增高結(jié)果。排除方法為保證免疫測(cè)定的可靠性，有必要從標(biāo)本中去除溶菌酶或?qū)⑵浞忾]，Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶，防止其聯(lián)接IgG。7、抗試劑成份的抗體抗鏈霉親合素抗體(anti-streptavidinantibodies):鏈霉親合素(streptavidin)是由Streptomycesavidinni產(chǎn)生的，機(jī)體為什么會(huì)出現(xiàn)抗鏈霉親合素抗體的原因目前尚不清楚?？贯斂贵w(antirutheniumantibodies)。8、 被動(dòng)獲得的外源抗體或抗原靜脈輸注免疫球蛋白獲得抗病原體的抗體(如抗梅毒抗體、抗-HCV、抗-HBs等)；新生兒獲得的來(lái)自母體的特異IgG；新生兒獲得的來(lái)自乙肝“大三陽(yáng)〃母親的HBeAg。9、 交叉反應(yīng)(crossreaction)交叉反應(yīng)是兩種來(lái)源不同的抗原，彼此之間可以有相同的抗原決定簇，由此決定簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體不僅可分別與其自身表面的相應(yīng)抗原表位結(jié)合，而且還能與另一種抗原的相同表位結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，稱為交叉反應(yīng)。交叉反應(yīng)現(xiàn)象的形成可能與下列因素有關(guān):1、 共同抗原，不同生物體的某些生物大分子具有相同的抗原結(jié)構(gòu)；2、 共同表位，不同的生物大分子的某些片段（肽段）具有相同的表位；3、 相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空間構(gòu)象十分類似，可以和同一種抗體的互補(bǔ)決定區(qū)相契合。激素、小分子半抗原等易受到交叉反應(yīng)影響。10、生物素（biotin）生物素又被稱為維生素B7或維生素H，是一種水溶性B族維生素。生物素的缺乏主要會(huì)損害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng)，在普通人群中長(zhǎng)期的生物素缺乏可能導(dǎo)致毛發(fā)、指甲、皮膚的損害。生物素-親合素系統(tǒng)是上世紀(jì)70年代末發(fā)展起來(lái)的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)?，F(xiàn)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。在體外診斷的實(shí)際應(yīng)用中更是具有巨大的優(yōu)越性，生物素可與幾乎所有生物大分子結(jié)合，親和力高，結(jié)合穩(wěn)定，靈敏度高，具有多級(jí)放大作用。生物素干擾存在于使用生物素-親和素系統(tǒng)或生物素-抗生物素系統(tǒng)的檢測(cè)中。與儀器廠家、儀器型號(hào)、發(fā)光底物無(wú)關(guān)，同一廠家不同項(xiàng)目包被方式也可能不同。生物素對(duì)化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生干擾需要一定的濃度，不同項(xiàng)目/試劑抗生物素干擾的能力不同。生物素干擾可能產(chǎn)生假陽(yáng)性，也可能產(chǎn)生假陰性。一般來(lái)說(shuō)，夾心法產(chǎn)生假陰性，競(jìng)爭(zhēng)法產(chǎn)生假陽(yáng)性。外源性干擾物質(zhì)1、溶血溶血(Hemolysis)紅細(xì)胞破裂，血紅蛋白逸出稱紅細(xì)胞溶解，簡(jiǎn)稱溶血?？捎啥喾N理化因素和毒素引起。在體外，如低滲溶液、機(jī)械性強(qiáng)力振蕩、突然低溫冷凍(-20°C?一25°C)或突然化凍、過(guò)酸或過(guò)堿，以及酒精、乙醚、皂堿、膽堿鹽等均可引起溶血。標(biāo)本溶血時(shí)可釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異

性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。解決方法標(biāo)本采集和處理時(shí)必須注意避免溶血。2、 標(biāo)本被細(xì)菌污染細(xì)菌菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，在ELISA試驗(yàn)中可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。3、 標(biāo)本保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)部分項(xiàng)目因穩(wěn)定性時(shí)間較短，需嚴(yán)格注意標(biāo)本保存時(shí)間。項(xiàng)目名粽NSE（神經(jīng)原特異性烯醇化醺）INSE（神經(jīng)原特異性烯醇化醺）IS100CsiooSS）HE4〔鞘睪蛋白4）ProGRPf胃泌素釋放前體）Folate（葉酸）Insulin（展島素）Cpeptide（Clt）24小時(shí)（15-25*C6小時(shí)）2天C15-254C8小時(shí)）2天（15-25*C6小時(shí)）73:小時(shí)（20°C9小時(shí)）2天（20-25°C2小時(shí)）24小時(shí)（15-25"C4小時(shí)）24小時(shí)（15-25*C4小時(shí)）4、標(biāo)本凝固不全血液采集后，如收集管中無(wú)促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時(shí)后開(kāi)始凝固，18~24h完全凝固。日常檢驗(yàn)中，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即離心分離血清，此時(shí)因血液沒(méi)有完全凝固，離出的〃血清〃并非為完全的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，易形成干擾，造成假陽(yáng)性。解決方法血液標(biāo)本采集后，應(yīng)使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分