第16章體液免疫球蛋白測(cè)定

第十六章體液免疫球蛋白測(cè)定免疫球蛋白（Ig）：抗體活性、化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似重鏈性質(zhì)，Ig分5類：IgG(γ)、IgA(α)、IgM(μ)、

IgD(δ)、IgE(ε)輕鏈性質(zhì)，Ig分2型：κ、λIg占血漿蛋白總量：20%檢測(cè)意義：反應(yīng)機(jī)體的免疫功能、診斷疾病Ig含量：血清IgG、IgA、IgM：g/L、IgD、IgE：mg/L

體液IgG、IgA、IgM：mg/L五類免疫球蛋白的特點(diǎn)與功能一、IgG

1.單體。血清中含量最高?？煞譃樗膫€(gè)亞類，各亞類的生物學(xué)活性有差異。2.主要的抗感染抗體。具有抗菌、抗病毒、中和毒素、免疫調(diào)理及ADCC作用。3.唯一通過(guò)胎盤的抗體（有自然自動(dòng)免疫作用）。4.半衰期約16～24天，故臨床應(yīng)用以2～3周重復(fù)為宜。治療用的丙球的主要成分為IgG（有人工被動(dòng)免疫作用）。5.某些自身抗體和引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)的抗體屬此類。二、IgM1.為五聚體。又稱巨球蛋白。激活補(bǔ)體和免疫調(diào)理作用較IgG強(qiáng)。2.個(gè)體發(fā)育中合成最早的Ig。3.半衰期較短，有助于感染性疾病的早期診斷。4.天然的血型抗體。5.單體的IgM是細(xì)胞膜表面型免疫球蛋白。IgM

J鏈IgM抗體結(jié)構(gòu)分泌型IgM膜型IgMsIgM

IgaIgbIgaIgb

三、IgA1.有血清型和分泌型。血清型有兩個(gè)亞類。2.分泌型IgA（SIgA）存在于外分泌液中，初乳中含量較高。3.SIgA是皮膚和粘膜表面局部抗感染的重要因素（如免疫屏障、中和病毒及抑制病毒復(fù)制的作用）。四、IgE1.血清中含量極低。2.對(duì)肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞有高度的親和力。與Ⅰ型超敏反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)。3.可能與機(jī)體抗寄生蟲免疫有關(guān)。五、IgD1.血清含量極低。

2.對(duì)蛋白酶敏感，極易降解。第一節(jié)血清IgG、IgA、IgM測(cè)定

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫的主要抗體。

IgA分為血清型和分泌型，是參與黏膜局部免疫的主要抗體，主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。

IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是個(gè)體發(fā)育過(guò)程中最早合成和分泌的抗體，也是抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體。一、血清IgG、IgA、IgM測(cè)定測(cè)定方法

單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法

免疫濁度法原理誤差主要原因評(píng)價(jià)

單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法示意圖

原理誤差主要原因評(píng)價(jià)

單向環(huán)狀免疫擴(kuò)散法免疫濁度法

直接透射比濁法速率散射比濁法注意點(diǎn)評(píng)價(jià)二、血清IgG、IgA、IgM測(cè)定的臨床意義低Ig血癥:先天性低Ig血癥（免疫缺陷?。?；獲得性低Ig血癥(蛋白丟失).

高Ig血癥:多克隆Ig增高（感染）；單克隆Ig增高（免疫增殖?。?不同年齡組血清中免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的含量特點(diǎn)目的研究不同年齡組間及成年男女不同性別間血清中免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)的含量特點(diǎn).方法選取2010年1月至2012年2月的正常體檢及無(wú)慢性細(xì)菌感染、無(wú)先天和獲得性免疫性疾病的空腹血清標(biāo)本共424例.將其分為:＜1、1～3、4～6、7～9、10～16歲；成人對(duì)照共6個(gè)組,成人對(duì)照又分為男女2個(gè)組.分別測(cè)定血清中IgG、IgA、IgM的含量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.結(jié)果對(duì)IgG、IgA、IgM各年齡組進(jìn)行S-N-K的方差分析,F值分別為131.8、192.4、15.7,P值均＜0.05.組間的兩兩比較結(jié)果如下:IgG、IgA各組之間均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.IgM各組中,＜1歲組與其他各組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.成人對(duì)照組與1～3歲組之間P＞0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與其他組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.4～6歲組、7～9歲組、10～16歲組之間的P＞0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.IgG、IgA、IgM成年男、女組的P值均＞0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論免疫球蛋白IgG、IgA,在＜1歲組中含量最少,隨著年齡的增大含量逐漸增加而接近成人水平.免疫球蛋白IgM,在＜1歲組中含量最少,到3歲時(shí)就可達(dá)到成人水平.而后含量又緩慢增加并超過(guò)成人,最后逐漸降到成人水平.成人男女之間IgG、IgA、IgM含量沒(méi)有差異.第二節(jié)血清IgD、IgE測(cè)定

正常人血清中IgD含量很低，膜結(jié)合型IgD(mIgD)構(gòu)成BCR，是B細(xì)胞分化發(fā)育成熟的標(biāo)志。

IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌，為親細(xì)胞抗體，引起I型超敏反應(yīng)；與機(jī)體抗寄生蟲免疫也可能有關(guān)。一、血清IgD測(cè)定及臨床意義

測(cè)定方法：

放射免疫分析法化學(xué)發(fā)光免疫分析法免疫比濁法

酶聯(lián)免疫吸附法IgD：生物功能不詳

增高：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、變態(tài)反應(yīng)性疾病、敗血癥、新生兒溶血病

降低：意義不大二、血清IgE測(cè)定及臨床意義測(cè)定方法總IgE測(cè)定：放射免疫分析法

化學(xué)發(fā)光免疫分析法免疫比濁法酶聯(lián)免疫吸附法特異性IgE測(cè)定：免疫斑點(diǎn)法酶聯(lián)免疫吸附法IgE臨床意義：

增高：變態(tài)反應(yīng)性疾病、寄生蟲感染、病毒感染、自身免疫性疾病。

降低：意義不大第三節(jié)尿液及腦脊液Ig測(cè)定

正常人尿液中的Ig含量甚微，當(dāng)機(jī)體的免疫功能異?；蜓装Y反應(yīng)引起腎臟疾病時(shí)，可導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)膜分子屏障破壞或電荷屏障受損，從而引起球蛋白及其他大分子蛋白質(zhì)漏出增多。生理情況下，Ig根據(jù)其分子量大小，通過(guò)血腦屏障的難易度不同，IgG、IgA、IgM在腦脊液中的濃度遞減。病理狀態(tài)時(shí)，腦脊液組分發(fā)生改變。一、尿液Ig測(cè)定及臨床意義尿液：

腎小球?yàn)V膜受損程度：選擇性蛋白尿指數(shù)SPISPI=(尿IgG/血清IgG）/（尿TRF/血清TRF）

TRF為轉(zhuǎn)鐵蛋白

增高有臨床意義：腎病、免疫增殖病可根據(jù)尿內(nèi)Ig增高的類型幫助鑒別診斷腎小球疾病的種類二、腦脊液Ig測(cè)定及臨床意義腦脊液：生化儀檢測(cè)白蛋白

血腦屏障受損程度：白蛋白商值=CSF中白蛋白/血清中白蛋白）*1000CSF-IgG指數(shù)=（CSF中IgG*血清中白蛋白）/（血清IgG*CSF中白蛋白）

增高有臨床意義：多發(fā)性硬化癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染第四節(jié)血清IgG亞類測(cè)定及臨床意義Ig亞類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降測(cè)定方法：

單向免疫擴(kuò)散法免疫比濁法（常用）放射免疫分析法酶聯(lián)免疫吸附法臨床意義：IgG亞類的含量隨年齡的不同而變化免疫缺陷病降低明顯第五節(jié)M蛋白測(cè)定及臨床意義

M蛋白

B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞單克隆異常增殖產(chǎn)生的異常單克隆免疫球蛋白（monoclonalproteinMP)

臨床上多見(jiàn)于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等

M蛋白測(cè)定蛋白區(qū)帶電泳：經(jīng)典方法計(jì)算蛋白含量和百分比免疫比濁法：免疫球蛋白定量準(zhǔn)確性高、快速免疫電泳：M蛋白分型免疫固定電泳：M蛋白分型及鑒定，分辨率高原理：區(qū)帶電泳＋雙向擴(kuò)散1、將蛋白質(zhì)抗原在凝膠中電泳分成肉眼不可見(jiàn)的若干區(qū)帶2、沿電泳方向挖一與之平行的抗體槽，加入相應(yīng)抗血清進(jìn)行雙向擴(kuò)散。技術(shù)要點(diǎn)：制備瓊脂板打孔，加樣于孔內(nèi)，電泳2～3mA/cm，0.5～1h后，槽內(nèi)加入相應(yīng)抗血清作雙向擴(kuò)散。免疫電泳-+免疫電泳示意圖免疫電泳原理，不同之處是將抗血清直接加于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，抗原抗體在凝膠中直接發(fā)生沉淀反應(yīng)，在適當(dāng)位置形成抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)染色后，可對(duì)各類免疫球蛋白及其輕鏈進(jìn)行分型原理區(qū)帶電泳＋沉淀反應(yīng)免疫固定電泳GAMκλIgG-κ型M蛋白Marker免疫固定電泳模式圖

左圖為IgGκ型,中圖為IgGλ型，右為正常

SPGAMκλSPGAMκλSPGAMκλ免疫固定電泳示意圖第六節(jié)輕鏈測(cè)定及臨床意義本周蛋白的檢測(cè)

樣本：尿液方法：免疫電泳、加熱沉淀（50-60℃

），繼續(xù)加熱90℃

溶解（簡(jiǎn)便易行）κ–Ig和λ-Ig定量檢測(cè)

樣本：尿液、血液方法：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散法、免疫比濁法（常用，準(zhǔn)確、快速）應(yīng)用：M蛋白血癥的分型及鑒定第七節(jié)冷球蛋白的檢測(cè)冷球蛋白：

在低溫（0-4℃）下發(fā)生沉淀，加溫（37℃

）后又復(fù)溶的免疫球蛋白在低溫時(shí)產(chǎn)生冷沉淀的機(jī)制尚不十分明確多數(shù)冷球蛋白為免疫復(fù)合物，其抗原可以是外源性的，也可以是內(nèi)源性的冷球蛋白的類型及臨床意義

I型：為單克隆冷球蛋白型，占25%～40%;多見(jiàn)于免疫增生性疾病

Ⅱ型：?jiǎn)慰寺『投嗫寺』旌闲屠淝虻鞍祝?5%～25%;多見(jiàn)于自身免疫性疾病

Ш型：多克隆混合型冷球蛋白，約占50%;多見(jiàn)于自身免疫性疾病以及感染性疾病1.血清免疫球蛋白測(cè)定方法有哪些?2.比較單向免疫擴(kuò)散法和速率散射比濁法優(yōu)缺點(diǎn)。3.免疫球蛋白IgG、IgA、IgM測(cè)定有何臨床意義？4.如何正確選擇測(cè)定M蛋白的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目思考題

免疫球蛋白是由漿細(xì)胞所產(chǎn)生能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgE和IgD五類，其相應(yīng)重鏈分別稱為γ鏈、α鏈、μ鏈、δ鏈和ε鏈輕鏈分為κ型和λ型，