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文檔簡介
1、植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)有哪些?2、植物組織培養(yǎng)的過程?3、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)?4、植物體細(xì)胞雜交的過程和理論基礎(chǔ)?復(fù)習(xí):動(dòng)物細(xì)胞工程專題2細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是其他細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)思考與回憶:1.動(dòng)物細(xì)胞全能性特點(diǎn)?
隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制,分化潛能變窄。細(xì)胞核仍具有全能性。2.能否用植物組織培養(yǎng)的方法使動(dòng)物細(xì)胞發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體?
不能。動(dòng)物細(xì)胞和組織在體外培養(yǎng)的過程中,伴隨一定的組織分化,不管采用什么手段和培養(yǎng)條件,由于細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、變化,細(xì)胞發(fā)生結(jié)構(gòu)功能變異,結(jié)果長時(shí)間的培養(yǎng)只能使單一類型的細(xì)胞保存下來,最終成了簡單的細(xì)胞培養(yǎng)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和本節(jié)內(nèi)容:一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)情境:在治療燒傷病人時(shí),通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。但對一個(gè)大面積燒傷的病人來說,自身健康皮膚有限,使用他人皮膚來源不同,而且會(huì)產(chǎn)生排異反應(yīng)。那么,怎樣能獲得大量的自體健康皮膚呢?1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長和增殖.思考:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是什么?與植物組織培養(yǎng)目的相同嗎?動(dòng)物的細(xì)胞培養(yǎng)的理論依據(jù)(原理)?
細(xì)胞增殖2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的原理:細(xì)胞增殖定義:人們通常將動(dòng)物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。胰蛋白酶處理取出組織胚胎或幼齡動(dòng)物器官組織剪碎單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)(貼壁生長長成單層細(xì)胞。有接觸抑制現(xiàn)象)。①原代培養(yǎng)3:過程圖示原代培養(yǎng)細(xì)胞懸液CO2培養(yǎng)箱強(qiáng)調(diào)一:細(xì)胞貼壁過程■細(xì)胞貼壁:在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細(xì)胞貼壁?!雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求:表面光滑、無毒、易于帖附?!霎?dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。強(qiáng)調(diào)二:接觸抑制定義義::當(dāng)原原代代培培養(yǎng)養(yǎng)的的細(xì)細(xì)胞胞處處于于接觸觸抑抑制制后后,用用胰蛋蛋白白酶酶處理理,使細(xì)細(xì)胞胞從從瓶瓶壁壁上上脫離離下來來,然后后加加入入新新的的培培養(yǎng)養(yǎng)液液,將細(xì)細(xì)胞胞分分離離稀稀釋釋,并并從原原培培養(yǎng)養(yǎng)瓶瓶內(nèi)內(nèi)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)接接到到新新的的培培養(yǎng)養(yǎng)瓶瓶內(nèi)內(nèi),這這個(gè)個(gè)過過程程稱稱傳代代培培養(yǎng)養(yǎng).((分瓶瓶培培養(yǎng)養(yǎng)的的過過程程)②傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)▲細(xì)胞胞株株::傳傳代代細(xì)細(xì)胞胞一一般般能能傳傳到到40-50代代,,遺傳傳物物質(zhì)質(zhì)一一般般不不會(huì)會(huì)發(fā)發(fā)生生改改變變,叫叫細(xì)細(xì)胞胞株株。。強(qiáng)調(diào)調(diào)::細(xì)細(xì)胞胞系系、、細(xì)細(xì)胞胞株株▲細(xì)胞胞系系::傳傳代代50代代以以后后不不能能再再傳傳下下去去,,部部分分細(xì)細(xì)胞胞遺傳傳物物質(zhì)質(zhì)發(fā)發(fā)生生了了改改變變,能能連連續(xù)續(xù)傳傳代代,,獲獲得得不不死死性性,,叫叫細(xì)細(xì)胞胞系系。。細(xì)胞胞株株和和細(xì)細(xì)胞胞系系的的區(qū)區(qū)別別::細(xì)胞胞系系的的遺遺傳傳物物質(zhì)質(zhì)改改變變,,具具有有癌癌細(xì)細(xì)胞胞的的特特點(diǎn)點(diǎn),,失失去去接接觸觸抑抑制制,,容容易易傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)。。3.總總結(jié)結(jié)::動(dòng)動(dòng)物物細(xì)細(xì)胞胞培培養(yǎng)養(yǎng)過過程程動(dòng)物物胚胚胎胎或或幼幼齡齡動(dòng)動(dòng)物物的的組組織織、、器器官官細(xì)胞胞懸懸浮浮液液剪碎碎用用胰胰蛋蛋白白酶酶處處理理10代代細(xì)細(xì)胞胞轉(zhuǎn)入入培培養(yǎng)養(yǎng)瓶瓶40-50代代細(xì)細(xì)胞胞傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)無限限傳傳代代單個(gè)個(gè)細(xì)細(xì)胞胞加培培養(yǎng)養(yǎng)液液稀稀釋釋傳代10代以以內(nèi),遺傳物質(zhì)不改改變,保持正正常二倍體核核型。傳代10-50代左右,,增長緩慢以以至于完全停停止,部分細(xì)胞核型型可能發(fā)生變變化(遺傳物質(zhì)可可能改變)為什么用胰蛋蛋白酶處理??原代培養(yǎng)特點(diǎn)點(diǎn):細(xì)胞貼壁、接接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)養(yǎng)少部分細(xì)胞胞獲得不死性,細(xì)胞突變,遺傳物質(zhì)已經(jīng)經(jīng)改變,等同于癌細(xì)胞胞。原代培養(yǎng)4.動(dòng)物細(xì)胞胞培養(yǎng)的條件件:1)無菌無毒毒的環(huán)境境:適宜的溫度::人和哺乳動(dòng)物物細(xì)胞最適溫溫度為36.5±0.5℃。適宜的酸堿度度:液體合成培養(yǎng)養(yǎng)基:(糖、氨基酸))、促生長因因子、(無機(jī)機(jī)鹽、微量元元素)等;通常還需需加入血漿、血清等等天然成分。4)氣體環(huán)境境:2)營養(yǎng):3)溫度和pH:“95%空氣氣+5%CO2”的混合氣體培培養(yǎng)箱。氧氣是細(xì)胞代謝謝必須的;CO2維持培養(yǎng)液的的PH。對培養(yǎng)液和所所有培養(yǎng)用具具無菌處理;培養(yǎng)液中添加抗生素防止培養(yǎng)過程程中污染;定期更換培養(yǎng)養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)產(chǎn)物,防止對對培養(yǎng)細(xì)胞造造成危害。主要有:營養(yǎng)物質(zhì)(糖糖、氨基酸、、無機(jī)鹽、微微量元素、促促生長因子))動(dòng)物血清(10%~20%)等培養(yǎng)液(液體體培養(yǎng)基)的的成分血清如:小牛血清清等血漿如:雞血漿等等組織浸出液可用雞胚胎浸浸出液,水解乳蛋白由乳白蛋白質(zhì)質(zhì)經(jīng)水解得到到淡黃色粉末末,一般可配配制成0.5%溶液。天然培養(yǎng)基小資料根據(jù)細(xì)胞的生生理生化代謝謝特點(diǎn),人工配配制而成,為細(xì)細(xì)胞提提供一一個(gè)近近似體體內(nèi)生生存環(huán)環(huán)境,又便便于控控制和和標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化操操作基本成成分各種碳碳水化化合物物(糖糖)、、氨基基酸、、維生生素、、無機(jī)機(jī)鹽、、生長長因子子、激激素等等常用培培養(yǎng)液液幾十種種人工合合成培培養(yǎng)基基小資料料問題3:為為什么么用胰胰蛋白白酶處處理??問題1:為為什么么選用用動(dòng)物物胚胎胎或幼幼齡個(gè)個(gè)體的的器官官或組組織做做動(dòng)物物細(xì)胞胞培養(yǎng)養(yǎng)材料料?因?yàn)槠淦浼?xì)胞胞生命命力旺旺盛,,分裂裂能力力強(qiáng),,分化化程度度低。。問題2:為為什么么培養(yǎng)養(yǎng)前要要將組組織細(xì)細(xì)胞分分散成成單個(gè)個(gè)細(xì)胞胞?擴(kuò)大細(xì)細(xì)胞與與培養(yǎng)養(yǎng)液的的接觸觸面積積,利利與細(xì)細(xì)胞吸吸收營營養(yǎng)。。動(dòng)物組組織細(xì)細(xì)胞間間隙中中含有有一定定量的的彈性性纖維維等蛋蛋白質(zhì)質(zhì),胰蛋白酶酶處理理動(dòng)物物組織織,可可以使使動(dòng)物物組織織細(xì)胞胞間的的蛋白白質(zhì)和和細(xì)胞外外的其其他成成分酶酶解,,獲得得單個(gè)個(gè)細(xì)胞胞。問題4:為為什么么用胰胰蛋白白酶處處理而而不用用胃蛋蛋白酶酶?動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)的的最適適PH值為,,胰蛋蛋白酶酶作用用的適適宜PH為,,胃蛋蛋白酶酶適宜宜PH為2.胃胃蛋白白酶在在PH為7.2-7.4的動(dòng)動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)中中無活活性。。問題5:用用胰蛋蛋白酶酶處理理不會(huì)會(huì)把所所培養(yǎng)養(yǎng)的細(xì)細(xì)胞消消化掉掉嗎??控制好好時(shí)間間!長長時(shí)間間處理理當(dāng)然然會(huì)損損傷細(xì)細(xì)胞。。問題6:動(dòng)動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)液液的主主要成成分是是什么么?較較植物物組培培培養(yǎng)養(yǎng)基有有何獨(dú)獨(dú)特之之處??問題7:動(dòng)動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)能能否像像綠色色植物物組織織培養(yǎng)養(yǎng)那樣樣最終終培養(yǎng)養(yǎng)成新新個(gè)體體?主要成成分::(葡葡萄糖糖、氨氨基酸酸)、、(水水、無無機(jī)鹽鹽)、、維生生素和和動(dòng)物物血清清等。。獨(dú)特特之處處有::1、、液體體培養(yǎng)養(yǎng)基2、、成分分中有有動(dòng)物物血清清等不能,動(dòng)物物細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)只能使細(xì)細(xì)胞數(shù)目增增多,不能能發(fā)育成新新的動(dòng)物個(gè)個(gè)體問題8:動(dòng)動(dòng)物細(xì)胞培培養(yǎng)的原理理:細(xì)胞增殖。。問題9:目目前使用的的或冷凍保保存的正常常細(xì)胞通常常在10代代以內(nèi),為為什么?10代以內(nèi)內(nèi)的細(xì)胞遺傳物質(zhì)不不改變,保保持正常二二倍體核型型。5.動(dòng)物細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)技技術(shù)的應(yīng)用用:1.蛋白質(zhì)質(zhì)生物制品品的生產(chǎn)如病毒疫苗苗、干擾素素、單克隆隆抗體2.應(yīng)用于于基因工程程主要用于作作為受體細(xì)細(xì)胞3.檢測有有毒物質(zhì),,判斷某種種物質(zhì)的毒毒性4.細(xì)胞的的生理、藥藥理、病理理研究如用于篩選選抗癌藥物物植物組織培培養(yǎng)和動(dòng)物物細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)的比較::比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖促--動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白取材植物幼嫩部分或花藥胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織其他條件無菌無毒,適宜條件無菌無毒,適宜條件去核注核重組細(xì)胞二、動(dòng)物體體細(xì)胞核移移植技術(shù)和和克隆動(dòng)物物1、概念:動(dòng)物核移植植是將動(dòng)物物的一個(gè)細(xì)胞的的細(xì)胞核,移入一個(gè)個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核核的卵母細(xì)細(xì)胞中.使其重組組并發(fā)育成成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新的的胚胎最終終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體.2、原理:動(dòng)物細(xì)胞核核具有全能能性比較以下細(xì)細(xì)胞的全能能性:受精卵、二二分裂球的的子細(xì)胞囊胚細(xì)胞、、多能造血血干細(xì)胞單能造血干干細(xì)胞、水螅的消化化細(xì)胞、人人的消化細(xì)細(xì)胞細(xì)胞具有全全能性多能細(xì)胞單能細(xì)胞高度分化的的體細(xì)胞3、分類:胚胎核移植植、體細(xì)胞胞核移植。。胚胎細(xì)胞分分化程度低低,恢復(fù)其其全能性相相對容易。。動(dòng)物體細(xì)胞胞分化程度度高,恢復(fù)復(fù)其全能性性十分困難難4、體細(xì)胞胞核移植過過程---示動(dòng)物克克隆---無性繁殖殖1.)克隆隆羊多利培培育過程::黑面綿羊去核卵母細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期重組胚胎胚胎移植另一頭綿羊羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利◆特別注意::克隆動(dòng)物性性狀與供體體動(dòng)物完全全一樣嗎??不可能!因?yàn)椋阂弧⒐w動(dòng)動(dòng)物只提供供細(xì)胞核,,而細(xì)胞質(zhì)質(zhì)中的遺傳傳物質(zhì)(如如線粒體DNA)來來自于受體體卵母細(xì)胞胞.二、生物的的性狀不僅僅與遺傳物物質(zhì)有關(guān),,還受環(huán)境境的影響。。供體受體代孕受體黑面綿羊去核卵母細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核a重組細(xì)胞電脈沖刺激早期重組胚胎b另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利1、寫出AB所代表表細(xì)胞工程程名稱:a表示:b表示:2、實(shí)施細(xì)細(xì)胞工程時(shí)時(shí),所需受受體細(xì)胞大大多采用卵卵母細(xì)胞的的原因:體積大,易易操作。含含有促使細(xì)細(xì)胞核表達(dá)達(dá)全能性的的物質(zhì)和營營養(yǎng)條件。。3、多利面面部毛色是是:根據(jù)遺傳學(xué)學(xué)原理說明明判斷依據(jù)據(jù)。4、若黑面面綿羊的基基因型為AA,白面面綿羊的基基因型為aa,則克克隆羊的基基因型為核移植胚胎移植白色多利全部的的核基因都都來自白面面綿羊aa◆取供體細(xì)胞胞傳代培養(yǎng)養(yǎng)10代以以內(nèi)的細(xì)胞胞.為什么么?◆用的是去核核的減數(shù)第第二次分裂裂中期細(xì)胞胞(MⅡ中期)為什么??◆激活方法::◆激活目的::◆促融方法::電刺激◆胚胎移植至至代孕受體體內(nèi)妊娠、分娩娩2.)核移移植流程供體:優(yōu)質(zhì)質(zhì)高產(chǎn)奶牛牛受體:普通通奶牛(卵卵母細(xì)胞的的采集與培培養(yǎng))1.體積大大,易操作作。2.含含有促使細(xì)細(xì)胞核表達(dá)達(dá)全能性的的物質(zhì)和營營養(yǎng)條件。。有人說它三三個(gè)母親,,對嗎?核移植流程程:1、供體細(xì)細(xì)胞的采集集與培養(yǎng)5、用物理理或化學(xué)方方法激活受受體細(xì)胞,,使其完成成減數(shù)分裂裂進(jìn)程。6電刺激促促融使供體體核進(jìn)入受受體卵母細(xì)細(xì)胞,構(gòu)建建重組胚胎胎。4、將供體體細(xì)胞注入入去核卵母母細(xì)胞3、顯微操操作去除卵卵母細(xì)胞中中的核2、受體卵卵母細(xì)胞的的采集與體體外培養(yǎng)7、胚胎移移植入代孕孕母牛體內(nèi)內(nèi)8、妊娠分分娩與供體體遺傳物質(zhì)質(zhì)基礎(chǔ)相同同的犢牛。。胚胎分割::受精卵二等分四等分把每等份分分別移植到到母體子宮宮內(nèi),迅速速繁殖出大大批性狀相相似的個(gè)體體。動(dòng)物的基因因組中,一一類基因是是維持生存存的,在各各種細(xì)胞中中都處于活活動(dòng)的狀態(tài)態(tài)。另一類類基因隨著著組織器官官和發(fā)育階階段不同而而選擇性表表達(dá)。分化的細(xì)胞胞內(nèi)基因的的活動(dòng)很不不完全,因因此很難像像受精卵那那樣發(fā)揮細(xì)細(xì)胞全能性性。胚胎細(xì)胞克克隆比高度度分化的體體細(xì)胞克隆隆要容易得得多。動(dòng)物難以克克隆的原因因5.體細(xì)胞胞核移植技技術(shù)的應(yīng)用用前景6.體細(xì)胞胞核移植技技術(shù)存在的的問題看書P49-50頁定義:指用自然或或人工方法法,使兩個(gè)個(gè)或多個(gè)不不同的細(xì)胞胞融合成一一個(gè)細(xì)胞的的過程。不同基因型型的細(xì)胞之之間的融合合就是細(xì)胞雜交。。三、動(dòng)物細(xì)細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融融合誘導(dǎo)融合的的因素:生物法:滅滅活的仙臺(tái)臺(tái)病毒誘導(dǎo)導(dǎo)融合。利用滅活仙仙臺(tái)病毒是是動(dòng)物細(xì)胞胞融合所特特有的。這是由于病病毒的磷脂脂外衣與動(dòng)動(dòng)物細(xì)胞的的膜十分相相似的緣故故。病毒外外殼上的某某些糖蛋白白可能還有有促進(jìn)細(xì)胞胞融合的功功能?;瘜W(xué)法:聚聚乙二醇誘誘導(dǎo)融合因?yàn)榫垡叶家椎?、、簡便,且且融合效果果穩(wěn)定,是是目前應(yīng)用用最廣泛的的方法。物理法:離心、振動(dòng)動(dòng)、電刺激激動(dòng)物細(xì)胞融融合技術(shù)的的應(yīng)用遺傳學(xué)上::基因定位位由于細(xì)胞雜雜交中染色色體容易丟丟失,因此此利用雜交交細(xì)胞檢測測特定染色色體丟失與與特定基因因產(chǎn)物(蛋蛋白質(zhì))減減少的對應(yīng)應(yīng)關(guān)系,可可以進(jìn)行基基因定位。。例如:人-鼠雜交細(xì)細(xì)胞通常丟丟失人的染染色體,可可以進(jìn)行人人類基因的的定位(如如由于1號(hào)號(hào)染色體丟丟失導(dǎo)致尿尿苷單磷酸酸激酶活性性喪失,可可知該基因因位于1號(hào)號(hào)染色體上上)免疫學(xué)上::利用雜交交瘤技術(shù),,制備單克克隆抗體。。用途誘導(dǎo)方法細(xì)胞融合的方法植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物物細(xì)胞融合合的比較細(xì)胞膜的流流動(dòng)性細(xì)胞膜的流流動(dòng)性去除細(xì)胞壁壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體體融合使細(xì)胞分散散后誘導(dǎo)細(xì)胞融融合物理(離心心、振動(dòng)、電刺激)化學(xué)(聚乙乙二醇)物理、化學(xué)學(xué)方法(同左)滅活的病毒毒獲得雜種植植株主要用于制制備單克隆抗體體回憶:1、抗體的的化學(xué)本質(zhì)質(zhì)?球蛋白2、抗體是是由何種細(xì)細(xì)胞產(chǎn)生的的?效應(yīng)B細(xì)胞3、抗體主主要分布在在哪?血清4、抗原的的特異性取取決于什么么?抗原決定簇簇5、抗原決決定簇的種種類和數(shù)目目是否相同同?不同動(dòng)物細(xì)胞融融合的成功功應(yīng)用———單克隆抗體體的制備一種抗原只只能與相應(yīng)應(yīng)的抗體發(fā)發(fā)生特異性性結(jié)合。6、抗原與與抗體的關(guān)關(guān)系?一個(gè)抗原可可以與多個(gè)個(gè)抗體特異異結(jié)合4脾臟4種效應(yīng)B細(xì)胞B1B2B3B4抗原B1B2B3B4Ab1Ab2Ab3Ab44種特異性性抗體問題情境1:長期以來,,人們?yōu)榱肆双@得抗體體,采用的的就是把某某種抗原反反復(fù)注射到到動(dòng)物體內(nèi)內(nèi),然后從從動(dòng)物血清清中分離出出所需抗體體的方法。。你認(rèn)為這種種做法有什什么弊端??產(chǎn)量低,而而且機(jī)體會(huì)會(huì)產(chǎn)生多種種抗體,抗抗體純度低低,反應(yīng)不不夠靈敏,,這種情況況給臨床醫(yī)醫(yī)學(xué)的診斷斷與治療帶帶來諸多不不便。問題情境2:每個(gè)漿細(xì)胞胞只分泌一一種特異性性抗體,要要想獲得大大量專一性性抗體,你能利用前前面學(xué)習(xí)過過的動(dòng)物細(xì)細(xì)胞工程的的有關(guān)技術(shù)術(shù)來解決問問題嗎?(1)用單單個(gè)特定B淋巴細(xì)胞胞進(jìn)行無性性繁殖,形形成大量的的細(xì)胞群體體,即克隆。(2)如此此克隆出的的B淋巴細(xì)細(xì)胞遺傳特特性高度一一致,由它它們分泌的的抗體化學(xué)學(xué)性質(zhì)單一一、特異性性強(qiáng),叫做做單克隆抗體體。質(zhì)疑:(動(dòng)物細(xì)胞胞培養(yǎng))在體外培養(yǎng)養(yǎng)條件下,,一個(gè)B淋淋巴細(xì)胞可可能無限增增殖嗎?那么怎樣才才能獲得大大量單克隆隆抗體呢??科勒米爾斯坦1984年年諾貝爾醫(yī)醫(yī)學(xué)和生理理學(xué)獎(jiǎng)1975年年研究單克克隆抗體的的制備過程程獲得成功功為什么先注注射特定抗抗原?特定抗原獲得的B細(xì)細(xì)胞會(huì)是同同種的嗎??已免疫的B細(xì)胞細(xì)胞融合第一次篩選選(多種)雜交瘤細(xì)胞胞存活HAT培養(yǎng)養(yǎng)基篩選::1、淋巴細(xì)細(xì)胞合成DNA有D和S兩條條途徑,其其中D途徑徑能夠被氨氨基嘌呤阻阻斷。但是是一般不分分裂增殖。。2、骨髓瘤瘤細(xì)胞是特特殊選擇的的代謝缺陷陷型細(xì)胞,,其DNA合成過程程只具有D途徑,能能被氨基嘌嘌呤阻斷。。3、雜交瘤瘤細(xì)胞則既既可無限增增殖,又具具備DNA合成途徑徑。雜交瘤細(xì)胞胞(多種)細(xì)胞培養(yǎng)多孔培養(yǎng)板板第二次篩選選選出能產(chǎn)生生特定抗體的細(xì)胞群,,繼續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)。(專一抗體體檢驗(yàn)陽性性細(xì)胞)克隆陽性細(xì)細(xì)胞體外培養(yǎng)單克隆抗體體單克隆抗體體從小鼠腹水水中提取1、單克隆隆抗體作為為診斷試劑,在臨床生生化診斷、、病理組織織定位、體體內(nèi)腫瘤的的定位等,與常規(guī)抗抗體相比,具有特異性強(qiáng),靈敏度高高等特點(diǎn).2、單克隆隆抗體上連連接抗癌藥藥物,治療療癌癥等疾疾病(生物物導(dǎo)彈)單克隆抗體體的優(yōu)點(diǎn)::可以從特異異性抗原成成分比例極極少的抗原原混合物中中,獲得單單一類型的的抗體。特異性強(qiáng),,靈敏度高高。單克隆抗體體的應(yīng)用單克隆抗體體的應(yīng)用::①在基礎(chǔ)理論論研究中具具有重要意意義②在疾病診斷斷、治療和和預(yù)防方面面,具有特特異性強(qiáng)、、靈敏度高高等優(yōu)越性性。③單抗診斷斷盒、生物導(dǎo)彈下圖表示單單克隆抗體體的制備過過程,請分分析完成下下列問題::(1)A過程是從從小鼠的脾脾臟取得細(xì)細(xì)胞,該該細(xì)胞能夠夠產(chǎn)生。。從小小鼠體內(nèi)提提取分離該該細(xì)胞之前前,應(yīng)給小小鼠注射類類物質(zhì)質(zhì)。(2)B過過程是一個(gè)個(gè)過過程,該該過程的進(jìn)進(jìn)行需要滅滅活的或誘誘導(dǎo)。。C→D是過過程,選出出能產(chǎn)生特特異性抗體體的,,繼續(xù)續(xù)培養(yǎng)。(3)單克克隆抗體在在疾病的診診斷、治療療和預(yù)防方方面與常規(guī)規(guī)抗體相比比,其特點(diǎn)點(diǎn)是能產(chǎn)生抗體體的B(淋淋巴)特定抗體抗原細(xì)胞融合滅活的(仙仙臺(tái))病毒毒PEG篩選雜交瘤細(xì)胞胞特異性強(qiáng)、、靈敏度高高,優(yōu)越性性非常明顯顯。采用此方法法可以將兩兩個(gè)不同種種、屬的動(dòng)動(dòng)物優(yōu)點(diǎn)集集中在一起起,產(chǎn)生具具有雙親優(yōu)優(yōu)點(diǎn)的可繁繁殖的雜種種動(dòng)物。細(xì)胞核移植植對動(dòng)物優(yōu)優(yōu)良雜交種種的無性繁繁殖具有重重大意義。。這一技術(shù)術(shù)的成功與與完善對于于優(yōu)良家禽禽的無性繁繁殖和瀕臨臨絕跡的珍珍貴動(dòng)物的的傳種意義義重大。1、植物組組織培養(yǎng)和和動(dòng)物細(xì)胞胞培養(yǎng)的比比較復(fù)習(xí):培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的培養(yǎng)基性質(zhì)原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基性質(zhì)原理比較項(xiàng)目細(xì)胞的全能能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基基液體培養(yǎng)基基蔗糖、植物物激素葡萄糖、動(dòng)動(dòng)物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)細(xì)胞系快速繁殖、、培育無病毒植株株獲得細(xì)胞或或細(xì)胞分泌蛋蛋白2、動(dòng)物細(xì)細(xì)胞融合的的原理?3、動(dòng)物細(xì)細(xì)胞融合不不同于植物物原生質(zhì)體體融合所用用的誘導(dǎo)劑劑是什么??細(xì)胞膜具有有一定的流流動(dòng)性。滅活的(仙仙臺(tái))病毒毒9、靜夜四無鄰鄰,荒居舊業(yè)業(yè)貧。。1月-231月-23Friday,January6,202310、雨雨中中黃黃葉葉樹樹,,燈燈下下白白頭頭人人。。。。14:11:5914:11:5914:111/6/20232:11:59PM11、以我獨(dú)獨(dú)沈久,,愧君相相見頻。。。1月-2314:11:5914:11Jan-2306-Jan-2312、故人江海海別,幾度度隔山川。。。14:11:5914:11:5914:11Friday,January6,202313、乍見見翻疑疑夢,,相悲悲各問問年。。。1月-231月-2314:12:0014:12:00January6,202314、他鄉(xiāng)生生白發(fā),,舊國見見青山。。。06一一月20232:12:00下午午14:12:001月-2315、比不了了得就不不比,得得不到的的就不要要。。。一月232:12下午午1月-2314:12January6,202316、行動(dòng)出成成果,工作作出財(cái)富。。。2023/1/614:12:0014:12:0006January202317、做前,,能夠環(huán)環(huán)視四周周;做時(shí)時(shí),你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點(diǎn)點(diǎn)的射線線向前。。。2:12:00下午午2:12下午午14:12:001月-239、沒有失敗敗,只有暫暫時(shí)停止成成功!。1月-231月-23Friday,January6,202310、很多事情努努力了未必有有結(jié)果,但是是不努力卻什什么改變也沒沒有。。14:12:0014:12:0014:121/6/20232:12:00PM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小努力力的積累。。。1月-2314:12:0014:12Jan-2306-Jan-2312、世間間成事事,不不求其其絕對對圓滿滿,留留一份份不足足,可可得無無限完完美。。。14:12:0014:12:0014:12Friday,January6,202313、不不知知香香積積寺寺,,數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。1月月-231月月-2314:12:0014:12:00January6,202314、意志堅(jiān)強(qiáng)強(qiáng)的人能把把世界放在在手中像泥泥塊一樣任任意揉捏。。06一月月20232:12:00下下午14:12:001月-
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