常見微生物菌種衰退原因分析及預(yù)防措施送您

第第頁常見微生物菌種衰退原因分析及預(yù)防措施，送您！微生物長期受到外界的影響，遺傳性狀必定發(fā)生某些變異。正是由于變異的存在才使得生物向前進(jìn)化。然而由于突變的存在，菌種在培育或保藏過程中，可能會(huì)消失某些優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記丟失、典型特征轉(zhuǎn)變等現(xiàn)象，稱為菌種衰退。比如蘇云金芽孢桿菌由于菌種衰退，導(dǎo)致其新生的菌體芽孢和伴孢晶體都比較??；保藏的沙門氏菌鞭毛抗原丟失，導(dǎo)致H多價(jià)血清不凝固等。一.

菌種衰退緣由

1、表型延遲造成菌種衰退

表型延遲現(xiàn)象也會(huì)造成菌種衰退。如，在誘變育種過程中，常常會(huì)發(fā)覺某菌株初篩時(shí)產(chǎn)量較高，進(jìn)行復(fù)篩時(shí)產(chǎn)量卻下降了。

2、質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退

質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退的狀況在抗生素生產(chǎn)中較多，不少抗生素的合成是受質(zhì)粒掌握的。當(dāng)菌株細(xì)胞由于自發(fā)突變或外界條件影響(如高溫)，致使掌握產(chǎn)量的質(zhì)粒脫落或者核內(nèi)DNA和質(zhì)粒復(fù)制不全都，即DNA復(fù)制速度超過質(zhì)粒，經(jīng)多次傳代后，某些細(xì)胞中就不具有對(duì)產(chǎn)量起打算作用的質(zhì)粒，這類細(xì)胞數(shù)量不斷提高達(dá)到優(yōu)勢(shì)，則菌種表現(xiàn)為衰退。

3、連續(xù)傳代

連續(xù)傳代是加速菌種衰退的一個(gè)重要緣由。一方面，傳代次數(shù)越多，發(fā)生自發(fā)突變(尤其是負(fù)突變)的幾率越高；另一方面，傳代次數(shù)越多，群體中個(gè)別的衰退型細(xì)胞數(shù)量增加并占據(jù)優(yōu)勢(shì)越快，致使群體表型消失衰退。

4、不相宜的培育和保藏條件

不相宜的培育和保藏條件是加速菌種衰退的另一個(gè)重要緣由。不良的培育條件如養(yǎng)分成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如養(yǎng)分、含水量、溫度、氧氣等，不僅會(huì)誘發(fā)衰退型細(xì)胞的消失，還會(huì)促進(jìn)衰退細(xì)胞快速繁殖，在數(shù)量上大大超過正常細(xì)胞，造成菌種衰退。

二.

防止菌種衰退措施

1、掌握傳代次數(shù)

盡量避開不必要的移種和傳代，把必要的傳代削減到最低的水平以削減突變幾率。傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生突變的幾率就越大，菌種發(fā)生衰退的機(jī)會(huì)就越高。在試驗(yàn)室檢驗(yàn)或者是生產(chǎn)實(shí)際中，應(yīng)嚴(yán)格掌握傳代次數(shù)。中國藥典當(dāng)中規(guī)定，培育基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代，以防止菌株因傳代次數(shù)過多引起衰退影響檢驗(yàn)。

2、利用不同類型細(xì)胞進(jìn)行接種傳代

放線菌，霉菌用菌絲進(jìn)行移種比分生孢子簡單衰退，因菌絲是對(duì)核且有異核存在，所以移種霉菌相宜采納孢子。

3、良好的培育條件

不良的培育條件會(huì)衰退細(xì)胞的消失，因此采納相宜的培育基進(jìn)行菌種培育，以削減衰退幾率

4、采納有效的菌種保藏方法

依據(jù)保存時(shí)間的長短，選擇相宜的保存方法。

傳代培育法：復(fù)蘇后的第一代放于4℃冰箱或室溫保存，定期傳代培育。保藏時(shí)間依微生物種類而定。如，芽孢、霉菌、酵母菌保存6個(gè)月轉(zhuǎn)一次，一般細(xì)菌1個(gè)月轉(zhuǎn)一次，假單胞菌2周轉(zhuǎn)一次。

甘油凍存法：將復(fù)活后經(jīng)過性能確認(rèn)的菌株新奇培育物（一般是其次代菌株），用0.85%的滅菌生理鹽水（約1-2mL）洗斜面菌苔成菌懸液；將上述菌懸液吸取適量于滅菌管（凍存管）中（如，滅菌管容量為5ml，則取1.5mL菌液），加入等體積的40%滅菌甘油，混勻，密封。保藏溫度為20℃，一般可保存1-2年。

瓷珠保存管保存：菌株保藏管內(nèi)含特制的小珠（20-25顆）和特別溶液，只需將培育好的菌株接入溶液中，搖勻成菌懸液，細(xì)胞即吸附于小珠上，然后吸出溶液，將保藏管置-70℃可保存5年，置-20℃可保存2-3年。

小貼士

瓷珠保存管保存詳細(xì)操作：

第一步：對(duì)需要保存的菌株進(jìn)行必要的純化，挑取生長旺盛時(shí)期的菌落，接入菌株。

保藏管中，通常需要接入4-7環(huán)，對(duì)于苛養(yǎng)菌應(yīng)多接一些。

其次步：擰上蓋子，充分猛烈震蕩。

第三步：用無菌吸管將溶液吸走，盡可