儀器驗證演講稿

方法驗證

吳衛(wèi)良20100820驗證一、驗證的定義驗證就是證明某一程序、生產(chǎn)過程、設(shè)備、物料、活動或系統(tǒng)確實能達到預(yù)期結(jié)果的有文件證明的一系列活動。下面就和大家一起共同討論學習。二、儀器性能的驗證

為了確保使用該儀器檢測數(shù)據(jù)真實靠，確認該儀器的各項指標能達到該儀器所設(shè)置的性能指標，對該儀器進行必要的驗證。1、輸液系統(tǒng)液相色譜儀的輸液系統(tǒng)一般由儲液罐、脫氣裝置、比例控制閥和高壓輸液泵組成；而影響分析結(jié)果的關(guān)鍵是泵的性能，對泵的性能的驗證即對泵流量準確度和精密度的驗證。1.1泵流量準確度的驗證

通過收集一定時間內(nèi)不同流速的流出液，然后用稱重的方法計算流出量的實際值，來判斷該泵流量的準確度。

可執(zhí)行標準：＜±3%

下表為水流動相的測得流速設(shè)定值V1（ml/min）

1.02.02.53.03.54.05分鐘收集量（g）

收集量轉(zhuǎn)換成體積(ml)實際流速V2（ml/min）流量準確度（%）（︱V2-V1︱）/V1×100%1.2泵流量精密度的驗證

通過收集一定時間內(nèi)1ml/min流速的流出液5次，然后用稱重的方法計算流出量的實際值，來判斷該泵流量的精密度。

可執(zhí)行標準：＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min）下表為以水流動相的測得次數(shù)123455分鐘收集量（g）收集量轉(zhuǎn)換成的體積(ml)

實際每分鐘流出量（ml/min）

流量精確度RSD（%）1.3泵梯度準確度的驗證由梯度控制裝置設(shè)定特定的洗脫程序，A溶劑為水，B溶劑為0.1%丙酮的水溶液。執(zhí)行梯度程序，畫出曲線變化。根據(jù)B溶劑的含量及對應(yīng)的響應(yīng)值，來計算梯度誤差。梯度誤差一般應(yīng)小于1.0%。原理：因為流動相中丙酮的濃度和它在一定波長處的吸收成正比；所以根據(jù)比例閥來調(diào)節(jié)丙酮溶液的比例變化并記錄相應(yīng)波長下吸收線的變化，從而來確定比例閥梯度的誤差。下圖為在不斷增加B溶劑的比例的理論吸收曲線1.4壓力范圍

測試方法

在進樣閥的出口接一個兩通，再將兩通的另外一端用OD1.6的盲管封??；啟動泵，使壓力升至所設(shè)定的壓力，觀察儀器是否自動停泵。

設(shè)定值分別為：10.0Mpa、20.0Mpa、30.0Mpa

可執(zhí)行標準:±0.2MPa設(shè)定值

1.5自動進樣器（1）進樣器影響分析結(jié)果的因素是樣品進樣量的準確度；（2）進樣器一般有①使用微量注射器通過流通閥進樣，樣品進樣量取決于微量注射器的刻度和操作者；②通過流通閥和定量環(huán)進樣，樣品進樣量取決于定量環(huán)的容積；對定量環(huán)的容積驗證可以通過對定量管殘留量的測定進行；用高濃度的對照品進行進樣，注射定量環(huán)三倍量的溶液，計算峰面積A；然后用容劑進行進樣，同樣注射定量環(huán)三倍量的溶液，計算峰面積B。執(zhí)行標準：B/A<0.02%

③通過自動進樣裝置進樣，樣品進樣量取決于自動進樣裝置的精密度和設(shè)置；對樣品進樣量的驗證包括兩部分：一部分是某一進樣下，連續(xù)進樣六次，計算峰面積和保留時間的相對標準偏差，一般不大于2%和1%；

另一部分是通過對某一樣品不同進樣量下進樣，計算不同進樣量和不同峰面積的線性關(guān)系，一般應(yīng)大于0.9992UV檢測器

2.1波長準確度和重復(fù)性驗證

向檢測器入口注入紫外吸收標準溶液，進行波長檢測，利用其特征吸收波長與波長標準值進行比較，計算波長示值的誤差和重復(fù)性。組號123456RSD峰面積≤2%保留時間（min）≤1%2.2噪聲與漂移

可執(zhí)行標準：噪聲＜±1.0×10-4AU漂移＜±5.0×10-4AU/hr測試方法：將儀器各部連接好，紫外檢測器調(diào)至250nm，流動相為甲醇，流速為1.0ml/min，待柱平衡穩(wěn)定后，進行基線的測試，測試時間半小時，觀察并記錄測試結(jié)果。三、分析方法驗證1、準確度準確度系指用該方法測定值與真實值之間的一致性或接近的程度，一般用回收率（%）表示。測定方法：準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。制備3個不同濃度的樣品，各測定3次，即測定9次，報告已知加入量的回收率（％）或測定結(jié)果平均值與真實值之差及其可信限?；厥章剩剑y定液平均測定值M-原樣品液含量平均值P）/加入量A×100％2、精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)樣品，經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。精密度可分為批內(nèi)精密度和批間精密度兩種。批內(nèi)精密度：是同一次測定的精密度。通常采用高、中、低三種濃度的同一樣品各7-10份，每種濃度的樣品按所擬定的分析方法操作，一次開機后，一一測定。計算每種濃度樣品的SD值或RSD值。批間精密度：是不同次測定的精密度。通常采用高、中、低三種濃度的同一樣品，每種濃度配制7-10份，置冰箱冷凍。自配制樣品之日開始，按所擬定的分析方法操作，每天取出一份測定，計算每種濃度樣品的SD值或RSD值。3、檢測限

是指分析方法能夠從背景信號中區(qū)分出被分析物時，所需樣品中藥物的最低量，可以不用準確定量。LOD是一種限度檢驗效能指標，它既反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)處理后空白(本底)值的高低。要根據(jù)采用的方法來確定檢測限。當用儀器分析方法時，可用已知濃度的樣品與空白試驗對照，記錄測得的被測藥物信號強度S與噪音(或背景信號)強度N，以能達到S／N＝2或S／N＝3時的樣品最低藥濃為LOD；也可通過多次空白試驗，求得其背景響應(yīng)的標準差，將三倍空白標準差(即3δ空或3S空)作為檢測限的估計值。為使計算得到的LOD值與實際測得的LOD值一致，可應(yīng)用校正系數(shù)(f)來校正，然后依之制備相應(yīng)檢測限濃度的樣品，反復(fù)測試來確定LOD。4、定量限是指在保證具有一定可靠性(一定準確度和精密度)的前提下，分析方法能夠測定出的樣品中分析物的最低量。它反映了分析方法測定低藥物濃度樣品時具有的可靠性。它與上述的檢測限的差別在于：定量限要定量測定某一分析物在樣品介質(zhì)中的最低量，且定量限規(guī)定的最低量應(yīng)該符合一定的精密度和準確度的要求。確定定量限的方法也因所用方法不同而異。如用儀器分析方法時，則往往將多次空白試驗測得的背景響應(yīng)的標準差(即空白標準差)乘以10，作為定量限的估計值，然后，再通過分析適當數(shù)量已知接近定量限或以定量限制備的樣品來驗證。5、專屬性

專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用多個方法予以補充。1、鑒別反應(yīng)鑒別試驗應(yīng)確證被分析物符合其特征。專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的樣品呈正反應(yīng)（可與已知對照物比較），而不含被測成分的樣品呈負反應(yīng)，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，也應(yīng)呈負反應(yīng)。2、雜質(zhì)檢查在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具有適當?shù)臏蚀_度與精密度。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明是合適的、分離或檢測原理不同、或具較強分辨能力的方法進行結(jié)果比較來確定。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行色譜峰純度檢查。

3、含量測定

在雜質(zhì)可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的試樣比較測定結(jié)果。

在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法進行比較，比對兩種方法測定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進行含量測定比較測定結(jié)果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。

6、線性與范圍線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被分析物的濃度（量）直接呈線性比例關(guān)系的能力。范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量的區(qū)間。所謂線性范圍是指利用一種方法在取得精密度、準確度均符合要求的試驗果，而且成線性的供試物濃度的變化范圍，其最大量與最小量之間的間隔。線性與范圍的確定可用作圖法(響應(yīng)值Y／濃度X)或計算回歸方程(Y＝a+bX)來研究建立。

每次作標準曲線時，方法應(yīng)與分析方法考核時完全一致。標準濃度應(yīng)包括一定梯度的5-8個濃度，每個濃度只需測定一次；標準曲線應(yīng)覆蓋樣品可能的濃度范圍，對于含量測定要求一般濃度上限為樣品最高濃度的120％，下限為樣品最低濃度的80％；目前仍廣泛采用相關(guān)系數(shù)(r)表示標準曲線的線性度、并控制r≥0.9900。對照品的LOQ必須包括在線性范圍內(nèi)（LOQ測量限度）。7、耐用性(robustness)耐用性系指測定條件發(fā)生細小變動時，