標準解讀
《GB/T 19915.6-2005 豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法》是中國一項關于豬源鏈球菌檢測的技術標準,旨在為相關行業(yè)提供一種統(tǒng)一、準確且高效的檢測手段。該標準詳細規(guī)定了使用熒光聚合酶鏈反應(Fluorescent Polymerase Chain Reaction, F-PCR)技術來識別和定量豬源樣本中鏈球菌的方法學要求、操作步驟、質量控制及結果判定準則。下面是該標準內容的詳述:
標準適用范圍
本標準適用于豬源性食品、飼料及其生產環(huán)境中鏈球菌的檢測,尤其適合于監(jiān)控豬群健康狀況及肉類食品安全,以預防和控制由鏈球菌引起的疾病傳播。
檢測原理
利用熒光PCR技術,通過設計針對豬源鏈球菌特異性核酸序列的引物和探針,在DNA擴增過程中,當探針與目標DNA片段結合并被酶切時,會釋放出可被儀器檢測到的熒光信號。隨著循環(huán)次數(shù)增加,熒光信號累積,達到閾值的時間點(Ct值)可以用來定量初始模板DNA的數(shù)量,從而判斷樣品中是否存在豬源鏈球菌及其大致濃度。
樣品處理
標準中詳細說明了樣品的采集、保存、前處理步驟,包括如何從不同類型的樣本(如組織、血液、環(huán)境樣本等)中有效提取DNA,確保檢測的準確性不受前期處理過程的影響。
PCR反應體系與條件
制定了熒光PCR反應所需的試劑組成、反應體積、各成分濃度以及優(yōu)化后的PCR擴增程序(包括溫度設置、循環(huán)次數(shù)等),以確保檢測的特異性和靈敏度。
質量控制
強調了內部對照、陽性對照和陰性對照的應用,用以監(jiān)測整個檢測過程中的污染情況及試劑有效性,確保檢測結果的可靠性。
結果判定與報告
規(guī)定了根據(jù)熒光信號的強度及Ct值來判定樣品中鏈球菌的有無及其數(shù)量,并對結果報告格式提出了具體要求,確保檢測結果的標準化表達和交流。
方法驗證
標準還涵蓋了方法驗證的相關指導原則,包括敏感性、特異性、重復性及再現(xiàn)性的評估方法,以證明該檢測方法的科學性和實用性。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2005-09-27 頒布
- 2005-11-01 實施
文檔簡介
ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標準GB/T:19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法Methodofthereal-timePCRforthedetectionofSireptococcussuis2005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會
GB/T19915.6-2005前本標準的附錄A是規(guī)范性附錄·附錄B是資料性附錄。本標準由國家標準化管理委員會提出。本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位:中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。本標準主要起草人:張鶴曉、宋立、高志強、寧宜寶、周琦、喬彩霞、楊承槐、吳丹、谷強本標準系首次發(fā)布的國家標準
GB/T19915.6—2005豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法1范圍本標準規(guī)定了豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測方法本標準適用于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及生豬執(zhí)子、豬組織樣品中豬源鏈球菌的檢測規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標準。GB/T19438.1—2004禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法縮略語本標準采用下列縮略語:熒光PCR熒光聚合酶鏈式反應C值每個反應管內的熒光信號量達到設定的閩值時所經歷的循環(huán)圈數(shù)DNA脫氧核糖核酸TagDNA聚合酶PBS磷酸鹽緩沖生理鹽水原理采用TagMan方法.在比對豬源鏈球菌16SrDNA基因序列的基礎上.設計針對該基因的特異性引物和特異性的熒光雙標記探針進行配對。探針5"端標記FAM熒光素為報告熒光基團(用R表示)3"端標記TAMRA熒光素為渾滅熒光基團(用Q表示),它在近距離內能吸收5°端熒光基團發(fā)出的熒光信號。PCR反應進入退火階段時,引物和探針同時與目的基因片段結合,此時探針上R基團發(fā)出的熒光信號被Q基團所吸收.儀器檢測不到熒光信號;而反應進行到延伸階段時.Taq酶的5"→3"的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團游離出來,所發(fā)出的熒光不再為Q所吸收而被檢測儀所接收。隨著PCR反應的循環(huán)進行,PCR產物與熒光信號的增長呈現(xiàn)對應關系。5豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標準化設置與管理豬源鏈球菌通用熒光PCR檢測實驗室的標準化設貿與管理見GB/T19438.1—2004中附錄C。試劑和材料6.1除另有說明.所用試劑均為分析純。6.1.1無水乙醇:-20℃預冷6.1.275%乙醇;用新開啟的無水乙醇和無DNA酶的滅菌純化水
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