臨床輸血學(xué)檢驗(yàn)(技術(shù))：3紅細(xì)胞血型檢測技術(shù)

第二章紅細(xì)胞血型檢測技術(shù)P36血型血清學(xué)檢驗(yàn)的重要性血型血清學(xué)檢驗(yàn)是輸血前檢查的必要內(nèi)容，是輸血安全的重要保證，同時(shí)也是新生兒溶血病、器官移植等重要的實(shí)驗(yàn)室檢查。紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)基本理論紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體無論是在體內(nèi)或是在體外，均可發(fā)生反應(yīng)。體外試驗(yàn)紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)是凝集反應(yīng)，其中抗體以前多從人血清中提?。ǖF(xiàn)在的抗A、抗B試劑一般為基因工程制備的單克隆抗體），又稱為血清學(xué)試驗(yàn)。1．反應(yīng)類型在試管中，紅細(xì)胞血型抗原抗體反應(yīng)主要表現(xiàn)為凝集反應(yīng)、溶血反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等形式，其中溶血反應(yīng)必須有補(bǔ)體參與，Ca２＋和Mg２＋參與補(bǔ)體激活。因此，在紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng)中，溶血反應(yīng)也是陽性結(jié)果。2．反應(yīng)特點(diǎn)（1）特異性（2）可逆性（3）比例性（4）階段性3．影響凝集反應(yīng)的因素（1）pH：接近生理性pH范圍。（2）離子強(qiáng)度：低離子強(qiáng)度溶液（LISS）減少了紅細(xì)胞周圍的陽離子云，從而促進(jìn)了帶正電荷的抗體與帶負(fù)電荷的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。LISS增加抗體篩查和交叉配血試驗(yàn)的敏感性，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用到臨床上。（3）溫度：一般IgM抗體適宜溫度為4～25℃，稱為冷抗體，IgG抗體在37℃時(shí)活性較好，稱為溫抗體。一般在室溫和37℃檢測抗體活性。（4）孵育時(shí)間：一般鹽水介質(zhì)中，37℃孵育30分鐘可以檢出多數(shù)具有臨床意義的IgG抗體。第一節(jié)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)檢測技術(shù)1.鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)2.抗球蛋白試驗(yàn)技術(shù)3.微柱凝膠介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)4.聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)5.酶介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)6.吸收放散試驗(yàn)7.凝集抑制試驗(yàn)一、鹽水介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)P411．原理在鹽水介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原和IgM抗體反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，屬于直接凝集反應(yīng)。2．方法及應(yīng)用根據(jù)載體不同，主要有試管法、平板法和微孔板法。①試管法為定性或半定量試驗(yàn)方法，可用于ABO和Rh血型定型、不規(guī)則抗體篩查和鑒定、交叉配血及抗體效價(jià)測定等；②平板法和微孔板法為定性試驗(yàn)方法，加樣與觀察結(jié)果同試管法，用于ABO血型和RhD抗原鑒定。二、ABO血型鑒定鹽水介質(zhì)試驗(yàn)ABO血型鑒定包括正定型和反定型。1.正定型（forwardtyping）：是指用已知特異性抗體鑒定紅細(xì)胞的抗原；2.反定型（reversetyping）：是指用已知血型紅細(xì)胞鑒定血清中的抗體。正、反定型結(jié)果應(yīng)相互驗(yàn)證，結(jié)果一致才能報(bào)告ABO血型結(jié)果。ABO血型正反定型結(jié)果判定表抗體+受檢者紅細(xì)胞（正定型）受檢者血型受檢者血清（血漿）+標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（反定型）抗A抗BAcBcOc+-？-+--+？+----？++-++？---報(bào)告結(jié)果：紅細(xì)胞ABO血型鑒定：

型（鹽水介質(zhì)試管法）。注意事項(xiàng)1.玻片法：可否用于反定型？2.試管法和微孔板法鑒定ABO血型時(shí)必須做正、反定型，兩者結(jié)果一致才能報(bào)告結(jié)果。3.反定型意義在于：①能夠復(fù)檢正定型血型結(jié)果的準(zhǔn)確性，糾正漏檢、誤報(bào)；②發(fā)現(xiàn)正定型難以發(fā)現(xiàn)的弱抗原亞型，如A2B型，在正定型中因其A抗原較弱而常常被誤定為B型；③能夠糾正某些患者因疾病原因造成的紅細(xì)胞抗原減弱所致血型錯(cuò)誤；④能夠排除獲得性抗原（如類B抗原）和冷凝集現(xiàn)象對(duì)紅細(xì)胞定型的干擾；⑤發(fā)現(xiàn)一些亞型中的不規(guī)則抗體。4.加樣順序：一般應(yīng)先加抗體（血漿或血清），后加紅細(xì)胞懸液，以便核實(shí)是否漏加抗體（血漿或血清）5.離心離心能促進(jìn)抗原和抗體的接觸和結(jié)合，提高反應(yīng)敏感性和縮短反應(yīng)時(shí)間，但離心時(shí)間和速度應(yīng)嚴(yán)格遵從操作規(guī)程，防假陽性或假陰性結(jié)果。6.溫度：

IgM抗A和抗B與相應(yīng)紅細(xì)胞反應(yīng)的最適溫度為4℃，但為了防止冷凝集的干擾，一般在室溫（20～24℃）下進(jìn)行試驗(yàn)，37℃可使反應(yīng)減弱。

7.結(jié)果觀察順序：溶血和凝集都是陽性結(jié)果，先看溶血，再看凝集。ABO血型鑒定正反定型結(jié)果不一致1．導(dǎo)致正反定型結(jié)果不一致的原因（1）技術(shù)失誤和人為原因1）器材不潔凈、試劑失效或污染、標(biāo)準(zhǔn)抗血清效價(jià)和親合力達(dá)不到要求：如抗A效價(jià)不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型等。2）標(biāo)本張冠李戴，漏加或錯(cuò)加試劑和標(biāo)本、細(xì)胞與血清反應(yīng)比例不適當(dāng)（紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，體積比例不當(dāng)）、離心過度或不足、未注意觀察溶血現(xiàn)象、結(jié)果判斷、記錄或書寫錯(cuò)誤等。（2）受檢者紅細(xì)胞的原因1）紅細(xì)胞抗原性減弱：新生兒或老年人；受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過少（如A2、A2B等亞型）；白血病或惡性腫瘤等。2）多凝集紅細(xì)胞：紅細(xì)胞膜發(fā)生異常，紅細(xì)胞與其他所有人的血清，甚至包括自身血清都出現(xiàn)凝集。3）嵌合體血型：體內(nèi)有兩組紅細(xì)胞群體，定型時(shí)可以出現(xiàn)“混合外觀凝集”，可見于異卵雙胎。混合外觀凝集（MF）：P384）紅細(xì)胞致敏：受IgG不完全抗體致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中，可發(fā)生凝集。5）異形紅細(xì)胞：微柱凝膠血型卡法檢測時(shí)，鐮形紅細(xì)胞可致假陽性結(jié)果。（3）受檢者血清的原因

1）抗體減弱或缺乏：新生兒和出生６個(gè)月之內(nèi)的嬰兒血液中無ABO抗體或抗體很弱；老年人血清中ABO抗體水平下降，反定型時(shí)可出現(xiàn)不凝集或弱凝集；丙種球蛋白缺乏癥患者血清中缺乏應(yīng)有的抗A、抗B。2）獲得性抗體：新生兒血清中可能存在來自母體的抗體；使用大量的非同型的血漿做置換治療，標(biāo)本血清中含有供血者的抗A、抗B。3）異常血漿蛋白：肝病、多發(fā)性骨髓瘤患者血清中球蛋白增多，心肌梗死、感染及外傷等引起患者血清中纖維蛋白原增多，這些常引起紅細(xì)胞呈緡錢（串）狀排列，造成假凝集。4）血型特異性物質(zhì)過高：一些卵巢囊腫病例，血液中血型物質(zhì)濃度很高，可中和抗A、抗B，要多次洗滌待檢紅細(xì)胞。5）自身抗體：自身免疫性貧血患者血清中存在溫性自身抗體，能凝集自身和其他血型紅細(xì)胞。6）不規(guī)則抗體：受檢者血漿中含有ABO血型抗體以外的不規(guī)則抗體，與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞上其他血型抗原系統(tǒng)的抗原起反應(yīng)。7）藥物：藥物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮及靜脈注射某些造影劑，血液粘滯性增高，可使紅細(xì)胞凝集而類似凝集表現(xiàn)。2．正反定型結(jié)果不符合分析程序及解決方法：首先應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)1次，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑及仔細(xì)觀察凝集結(jié)果；如重復(fù)試驗(yàn)仍然結(jié)果不符，則進(jìn)一步進(jìn)行以下試驗(yàn)：（1）重新采集受檢者的新鮮血液標(biāo)本，避免標(biāo)本采集錯(cuò)誤或原標(biāo)本受污染所導(dǎo)致的錯(cuò)誤結(jié)果。（2）查詢受血者既往病史、輸血史和用藥史等。（3）將受檢者紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，應(yīng)換用新開啟的確定為無細(xì)菌污染的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，用抗AB、抗A1或抗H檢測紅細(xì)胞。（4）對(duì)受檢者紅細(xì)胞直接作抗球蛋白試驗(yàn)，如陽性，表示紅細(xì)胞已被致敏。（5）用A1、A2、B、O型紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢者血清。（6）如懷疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A或抗B血清作吸收及放散試驗(yàn)，以及受檢者唾液作A、B及H物質(zhì)測定。（7）分析O型篩選細(xì)胞檢測結(jié)果，確定是否是同種異型或自身冷抗體干擾正反定型結(jié)果。臨床應(yīng)用1．用于輸血前的檢查：輸血前必須準(zhǔn)確鑒定供血者與受血者的血型，選擇同型血源，經(jīng)交叉配血相符后才能輸血。2．用于器官移植前的檢查：ABO血型抗原廣泛地分布于人體內(nèi)除中樞神經(jīng)細(xì)胞外的各種組織細(xì)胞、體液、分泌液中，是一種移植抗原。在器官移植時(shí)，應(yīng)力求受體和供體的ABO血型一致。3．用于新生兒溶血病的檢查：母子ABO血型不合可引起新生兒溶血病，主要通過血型血清學(xué)檢查來診斷。幾種血型鑒定方法學(xué)的比較（1）玻片法：不需要離心，操作簡單，可用于大規(guī)模普查，但費(fèi)時(shí)，靈敏度差；不適于臨床常規(guī)使用及不適于反定型；容易污染環(huán)境和工作人員。（2）試管法：①常規(guī)血型鑒定方法，敏感，結(jié)果可靠，可發(fā)現(xiàn)亞型或較弱抗原抗體反應(yīng)；②所需時(shí)間短，適用于急診血型鑒定；③應(yīng)用廣泛：可用于定性試驗(yàn)，也可用于半定量試驗(yàn)，如抗體效價(jià)測定。臨床上主要用于血型鑒定、血清中IgM抗體的篩查和鑒定、交叉配血等。但與玻片法相比較，操作相對(duì)復(fù)雜。（3）微孔板法：可自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化，適于大量標(biāo)本血型鑒定，中心血站應(yīng)用較多。但需要特殊儀器設(shè)備。二、抗球蛋白介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)P43抗球蛋白試驗(yàn)是1945年由R.R.A.Coombs等建立的，又稱為Coombs試驗(yàn)?？骨虻鞍自囼?yàn)是經(jīng)典的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，主要用于檢查IgG等不完全抗體參與的抗原抗體反應(yīng)，也可測定補(bǔ)體組分C3、C4片段參與的免疫反應(yīng)。1.抗球蛋白試驗(yàn)原理在合適的溫度及一定的反應(yīng)時(shí)間等條件下，IgG血型抗體能與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合而使紅細(xì)胞致敏，但多數(shù)IgG抗體不能在鹽水介質(zhì)中使致敏的紅細(xì)胞出現(xiàn)肉眼可見的直接凝集。當(dāng)加入抗球蛋白試劑后，該抗體（二抗）的Fab片段可與包被在紅細(xì)胞膜上的IgG血型抗體（一抗）的Fc片段結(jié)合發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，通過抗球蛋白抗體的“搭橋”作用，促使原來已致敏的紅細(xì)胞發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。因此采用此種方法能夠檢測出血清中是否存在不完全抗體。2.抗球蛋白試驗(yàn)分類及應(yīng)用根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康牟煌譃?直接抗球蛋白試驗(yàn)（directantiglobulintest，DAT）間接抗球蛋白試驗(yàn)（indirectantiglobulintest，IAT）（1）直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）：抗球蛋白試劑直接與紅細(xì)胞反應(yīng)，如出現(xiàn)肉眼可見的凝集，稱為直接抗球蛋白陽性。直接抗球蛋白試驗(yàn)主要用于新生兒溶血病的診斷、溶血性輸血反應(yīng)的調(diào)查、自身免疫性溶血性疾病和藥物免疫性溶血性疾病的診斷等。直接抗球蛋白試驗(yàn)用于檢測體內(nèi)不完全抗體致敏的紅細(xì)胞。（2）間接抗球蛋白試驗(yàn)（IAT）：紅細(xì)胞在體外與不完全抗體結(jié)合后，再加入抗球蛋白試劑進(jìn)行檢測的試驗(yàn)稱為間接抗球蛋白試驗(yàn)。主要用于血清中不完全抗體篩查和鑒定、交叉配血試驗(yàn)、檢測紅細(xì)胞上的血型抗原（如Rh、Duffy，Kell，Kidd等血型系統(tǒng)）、白細(xì)胞和血小板抗體試驗(yàn)等。間接抗球蛋白試驗(yàn)用于證實(shí)體外致敏的紅細(xì)胞。4.抗球蛋白試驗(yàn)的技術(shù)特點(diǎn)（1）抗球蛋白試驗(yàn)是最可靠的確定不完全抗體的方法，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的特點(diǎn)，已成為臨床上保障安全輸血、診斷和預(yù)防新生兒溶血病、自身免疫性溶血性疾病等研究工作中最主要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。（2）經(jīng)典的試管法抗球蛋白試驗(yàn)雖較靈敏，但其操作繁瑣，反應(yīng)時(shí)間較長，不適用于急診檢查和大批量樣本的檢測，始終未能在臨床常規(guī)應(yīng)用。洗滌非常重要！三洗三、微柱凝膠介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)P521．微柱凝膠試驗(yàn)（microcolumngelassay）：1986年建立，紅細(xì)胞抗原抗體在微柱腔內(nèi)的凝膠介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。2.原理：葡聚糖凝膠顆粒-凝膠微柱-微柱凝膠卡。是利用凝膠顆粒之間的間隙形成的分子篩作用，在微柱凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，凝集成塊的紅細(xì)胞因體積大被凝膠阻滯不能通過凝膠層，留于凝膠介質(zhì)的上層或中間，即陽性反應(yīng)；未凝集游離紅細(xì)胞因體積小而通過凝膠之間的間隙沉積于微柱凝膠檢測管底部，形成細(xì)胞扣，即陰性反應(yīng)。

微柱凝膠試劑卡分類應(yīng)用中性凝膠試劑卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原測定、其他血型抗原鑒定及鹽水介質(zhì)交叉配血等；特異性凝膠試劑卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原測定和其他血型鑒定；抗球蛋白凝膠試劑卡：用于IgG抗D抗體鑒定RhD抗原，紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查和交叉配血等?？ㄊ椒ǖ膬?yōu)點(diǎn)：1）結(jié)果敏感、準(zhǔn)確：靈敏度、準(zhǔn)確度比傳統(tǒng)的玻片法和試管法液體介質(zhì)中的凝集試驗(yàn)更高，重復(fù)性好，肉眼觀察清晰明確，易于判定且客觀，避免了因經(jīng)驗(yàn)不足對(duì)結(jié)果判斷的影響。2）結(jié)果保存時(shí)間長：在室溫條件下，凝膠試劑卡一般可保存數(shù)天甚至數(shù)周，也可以拍照保留試驗(yàn)結(jié)果圖像存檔備用。3）標(biāo)本用量少：標(biāo)本用量為試管法的1/10～1/5，尤其有利于新生兒及某些特殊血液標(biāo)本的檢測。4）操作簡便：不需要洗滌，對(duì)陰性結(jié)果不需要確證試驗(yàn)，適于大量標(biāo)本檢測?？蓡畏輼?biāo)本多項(xiàng)指標(biāo)一次離心檢測，簡化了操作程序。5）自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化：配套儀器可以自動(dòng)配制RBC懸液、自動(dòng)加樣、自動(dòng)判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，易于自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化。6）檢驗(yàn)項(xiàng)目齊全、應(yīng)用范圍廣：可用于ABO血型正反定型、其他血型定型、交叉配血、抗體篩查、抗體鑒定等。7）安全：減少了接觸血液標(biāo)本及病原微生物的機(jī)會(huì)，減少了醫(yī)源性感染。卡式法的缺點(diǎn)：本法試劑卡較貴，需要特殊離心機(jī)，其配套設(shè)備價(jià)格昂貴，不適合標(biāo)本量較少的單位開展工作。Q：什么是微柱凝膠卡實(shí)驗(yàn)結(jié)果的雙群現(xiàn)象？如何對(duì)雙群現(xiàn)象的結(jié)果進(jìn)行判讀？微柱凝膠抗球蛋白試驗(yàn)在含有抗球蛋白的凝膠介質(zhì)中進(jìn)行的抗球蛋白試驗(yàn)稱之為微柱凝膠抗球蛋白試驗(yàn).即微柱凝膠Coombs試驗(yàn)（MG-Coombs’Test）。MG-Coombs’T孵育后的紅細(xì)胞不需三洗，且孵育時(shí)間只需15分鐘，顯著提高了免疫凝集試驗(yàn)的敏感性，使其能更廣泛地應(yīng)用在臨床輸血檢驗(yàn)中。四、低離子聚凝胺介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)P461980年建立聚凝胺（polybrene，Poly）是一種由4個(gè)胺聚合而成的高價(jià)陽離子聚合體，在液體中可產(chǎn)生多個(gè)陽離子基團(tuán)，能夠中和紅細(xì)胞表面唾液酸所帶的負(fù)電荷，從而縮短紅細(xì)胞間的正常距離。1.原理A.利用低離子強(qiáng)度溶液（LISSorLIM）降低溶液的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的電子云，促使血型抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合。

B.加入聚凝胺(Polybrene)溶液，帶正電荷的聚凝胺大分子聚合物能夠中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞間的靜電斥力，縮短紅細(xì)胞間的正常距離.

在離心力作用下，可使正常紅細(xì)胞形成可逆性的非特異性聚集。C.加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負(fù)電荷能中和聚凝胺的正電荷.由抗體介導(dǎo)的特異性凝集則不會(huì)消失，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，為陽性反應(yīng)。由聚凝胺引起的非特異性聚集會(huì)因電荷中和而消失，為陰性反應(yīng)。2.低離子聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)特點(diǎn)

該方法能檢出完全抗體和多數(shù)不完全抗體，具有簡便、快捷、成本較低等優(yōu)點(diǎn)。盡管此法的靈敏度較鹽水介質(zhì)試驗(yàn)有了提高，但其根本還是一種非特異性促凝手段，仍不能使靈敏度達(dá)到最理想的臨床應(yīng)用水平。該方法操作難以標(biāo)準(zhǔn)化、影響因素多、缺乏完善的質(zhì)控體系，易造成假陰性結(jié)果，易漏檢低效價(jià)抗體。3.低離子聚凝胺試驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用在抗體篩查、交叉配血和血型鑒定中具有一定應(yīng)用價(jià)值，但對(duì)Kell血型系統(tǒng)的抗體檢測不理想。臨床應(yīng)用

主要用于急診搶救患者的交叉配血試驗(yàn)。如果用聚凝胺介質(zhì)交叉配血出現(xiàn)不配合時(shí)，要用抗球蛋白試驗(yàn)重復(fù)。結(jié)果不一致時(shí)，以抗球蛋白結(jié)果為準(zhǔn)。五、酶介質(zhì)試驗(yàn)技術(shù)P42紅細(xì)胞膜表面唾液酸所帶負(fù)電荷，能夠使紅細(xì)胞相互排斥，保持懸浮狀態(tài)。因IgG抗體分子的跨度小于正常情況下紅細(xì)胞間的距離，IgG抗體與紅細(xì)胞抗原結(jié)合后，不足以把紅細(xì)胞拉在一起而引起肉眼可見的凝集。某些蛋白水解酶，可以破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸結(jié)構(gòu)，從而減少了負(fù)電荷的數(shù)量，縮短紅細(xì)胞間的距離，促進(jìn)某些抗原抗體反應(yīng)。酶技術(shù)對(duì)Rh、Kidd血型系統(tǒng)的檢出效果最好，但對(duì)MNS和Duffy血型系統(tǒng)抗原的破壞較為顯著。目前臨床常用木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶。酶試驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用：1.鑒定RhD抗原鑒定2.交叉配血試驗(yàn)等Rh血型鑒定方法鹽水介質(zhì)（玻片法、試管法）----IgM抗D試劑酶介質(zhì)法----IgG抗D試劑抗人球蛋白介質(zhì)法----IgG抗D試劑低離子強(qiáng)度聚凝胺法微柱凝膠法六、吸收放散試驗(yàn)P48抗體與相應(yīng)抗原在適合條件下可發(fā)生凝集或致敏，但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理或化學(xué)條件，抗體可以從結(jié)合的紅細(xì)胞上解離下來。紅細(xì)胞與血清混合，在一定條件下，紅細(xì)胞表面某種抗原可特異性地與血清中相對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合，使血清中該抗體的效價(jià)顯著降低或消失，稱為吸收試驗(yàn)（absorptiontest）。根據(jù)待檢標(biāo)本中所含抗體的最適反應(yīng)溫度，對(duì)其進(jìn)行吸收。冷抗體4℃反應(yīng)最強(qiáng)，常用冷吸收試驗(yàn).溫抗體吸收采用酶處理后的紅細(xì)胞37℃孵育。放散試驗(yàn)是把結(jié)合到紅細(xì)胞上的抗體解離下來，用于其他目的。ABO抗體首選熱放散方法（56℃）Rh抗體首選乙醚放散方法。吸收放散試驗(yàn)的臨床應(yīng)用1．去除血清中不需要的抗體：當(dāng)存在冷抗體、自身抗體或抗血清試劑中混有其他特異性抗體時(shí)，可利用吸收試驗(yàn)去除這些不必要或干擾試驗(yàn)的抗體。2．證實(shí)存在于紅細(xì)胞上的弱抗原：如在ABO亞型鑒定中，紅細(xì)胞上的ABH抗原有時(shí)很弱，可能與相應(yīng)試劑血清反應(yīng)后不出現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)。經(jīng)過吸收放散后，測定放散液中的抗體，可以確定紅細(xì)胞上帶有的抗原。3．分離、鑒定混合抗體：當(dāng)血清中存在多種血型抗體，并要求鑒定抗體特異性時(shí)，可以利用吸收放散試驗(yàn)將抗體分離開來，并分別加以鑒定。4．濃縮低效價(jià)抗體：當(dāng)血清抗體效價(jià)很低，可以利用吸收放散試驗(yàn)濃縮抗體。如利用紅細(xì)胞膜做吸收放散試驗(yàn)可以濃縮低效價(jià)的抗血清，使之成為可利用的試劑。5．鑒定抗體特異性：用已知抗原紅細(xì)胞吸收抗體，有助于鑒定、核實(shí)該抗體特異性。6．利用吸收放散技術(shù)鑒定引起新生兒溶血病和免疫性輸血反應(yīng)的抗體。7．研究鑒別免疫性溶血性貧血的抗體。七、凝集抑制試驗(yàn)P50血型抗原除了存在于人體紅細(xì)胞膜上外，某些血型抗原也以游離的形式存在于血漿、體液和分泌物中，稱為可溶性血型物質(zhì)。這些血型物質(zhì)可與相應(yīng)的血型抗體結(jié)合而中和該抗體，從而使該抗體凝集對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞的能力受到抑制，此種試驗(yàn)稱為凝集抑制試驗(yàn)。唾液中ABH血型物質(zhì)能特異地與相應(yīng)抗體結(jié)合，從而抑制抗體再與相應(yīng)紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集反應(yīng)，由此可以判斷受檢唾液中是否有血型物質(zhì)存在及其類型。臨床應(yīng)用：1．輔助ABO血型亞型分類及特殊情況下進(jìn)行血型鑒定。2．證明可溶性血型物質(zhì)的存在。3．用于司法鑒定及考古鑒定。第二節(jié)輸血相容性檢測

輸血前三項(xiàng)試驗(yàn)：紅細(xì)胞ABO血型和RhD血型鑒定（血型）交叉配血試驗(yàn)（配血）不規(guī)則抗體檢測（抗篩）輸血前三項(xiàng)試驗(yàn)是安全輸血的保障理論基礎(chǔ)：免疫血液學(xué)臨床安全有效輸血的免疫血液學(xué)底線是：病人與供者紅細(xì)胞：1.血型“相同”（same,identification）：病人與供者血型完全一樣。2.或者血型“相容”(compatibility,matching)：供者紅細(xì)胞能被病人容納，不被破壞。輸血前血型相容性試驗(yàn)3.“相容”的本質(zhì)是：病人沒有針對(duì)供者紅細(xì)胞的抗體。4.判斷“相容”的標(biāo)準(zhǔn)是：配血無凝集5.堅(jiān)持“配不上血，決不輸血”的原則輸血前三項(xiàng)試驗(yàn)，哪項(xiàng)最重要：配血第一：是“安全輸血生命線”血型第二抗篩第三只要配血不相容：即便是：1.病人與供者血型“相同”2.病人抗篩陰性一定會(huì)發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)或者無效輸血！必須配血無凝集才能輸血！一、交叉配血試驗(yàn)P40將供血者的紅細(xì)胞、血漿分別與受血者的血漿、紅細(xì)胞混合，觀察有無溶血或凝集，稱為交叉配血試驗(yàn)。主側(cè)和次側(cè)交叉配血主側(cè)交叉配血試驗(yàn)：用受血者血漿與供血者紅細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，檢查受血者血漿中是否存在針對(duì)供者紅細(xì)胞的抗體；次側(cè)交叉配血試驗(yàn)：用受血者紅細(xì)胞與供血者血漿進(jìn)行反應(yīng)，檢查供血者血漿中是否存在針對(duì)受血者紅細(xì)胞的抗體。自身對(duì)照：患者紅細(xì)胞與自身血清，以排除自身抗體。目前，臨床上交叉配血試驗(yàn)主要用于紅細(xì)胞和濃縮血小板輸注前的相容性檢查。我國《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》未要求血漿和單采血小板輸注前需要做交叉配血試驗(yàn)。

交叉配血試驗(yàn)根據(jù)所使用的介質(zhì)不同分為：鹽水介質(zhì)法低離子聚凝胺介質(zhì)法抗球蛋白介質(zhì)法微柱凝膠抗球蛋白法酶介質(zhì)法交叉配血反應(yīng)體系均應(yīng)有37℃孵育這個(gè)步驟。鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)是臨床輸血前最基本的相容性試驗(yàn)，簡便快速。但只能檢出不相配合的IgM完全抗體，不能對(duì)IgG不完全抗體進(jìn)行檢測。鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)應(yīng)與檢測不完全抗體的配血方法（如抗球蛋白試驗(yàn)）聯(lián)合檢測，以防止漏檢不完全性抗體，以確保輸血安全。二、不規(guī)則抗體篩查P39目的：在輸血前檢查患者血液中是否存在有臨床意義的意外抗體。所謂有臨床意義的不規(guī)則抗體一般指能夠引起溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血??；或者使輸入的紅細(xì)胞存活時(shí)間縮短且在37℃下有反應(yīng)的同種異型抗體。除了ABO血型系統(tǒng)抗A和抗B外，其他血型系統(tǒng)抗體的產(chǎn)生沒有規(guī)律，不符合Landsteiner規(guī)則，稱之為不規(guī)則抗體或意外抗體?？笰1抗體，也屬于不規(guī)則抗體?？贵w篩查通常在配血前進(jìn)行。凡遇有下列情況必須進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)：①交叉配血不合時(shí)；②有輸血史、妊娠史；③短期內(nèi)需要