GB/T 21752-2008化學品嚙齒動物28天重復劑量經口毒性試驗方法

犐犆犛１３．３００；１１．１００

犃８０

中華人民共和國國家標準

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化學品嚙齒動物２８天重復劑量經口

毒性試驗方法

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２００８０５１２發(fā)布２００８０９０１實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

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前言

本標準等同采用經濟合作與發(fā)展組織（ＯＥＣＤ）化學品測試指南Ｎｏ．４０７（２００５年）《嚙齒動物２８天

重復劑量經口毒性試驗》（英文版）。

本標準作了下列編輯性修改：

———增加了范圍部分；

———計量單位改成我國法定計量單位；

———刪除ＯＥＣＤ的參考文獻部分。

本標準附錄Ａ為資料性附錄。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術委員會（ＳＡＣ／ＴＣ２５１）提出并歸口。

本標準負責起草單位：中國疾病預防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所。

本標準參加起草單位：廣東出入境檢驗檢疫局、深圳出入境檢驗檢疫局。

本標準主要起草人：許崇輝、侯粉霞、謝建軍、劉麗。

Ⅰ

書

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犗犈犆犇引言

１．１９９８年，ＯＥＣＤ啟動了一項具有高度優(yōu)先權的活動，即，修訂現(xiàn)存指南、建立用于篩查和檢測潛

在內分泌干擾物的新指南。其中一項工作就是修訂嚙齒動物２８天重復劑量經口毒性試驗（ＯＥＣＤ

ＴＧ４０７），在其中增添適用于檢測受試物內分泌活性的評價指標。為了驗證所增添的這些新指標與內

分泌的相關性及其可操作性，在國際范圍內開展了廣泛的驗證性研究。選用一些具有雌激素、抗雌激

素、雄激素、抗雄激素、甲狀腺素、抗甲狀腺素活性的化學品進行試驗，測定這些新指標，證明這些指標與

內分泌功能的相關性，比較測定結果在實驗室內和實驗室間的可重復性，說明修訂前的ＯＥＣＤ４０７中要

求測定的指標對新增添的指標的影響。在上述研究中使用的化學品包括炔雌醇（ｅｔｈｉｎｙｌｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、金

雀異黃酮（ｇｅｎｉｓｅｉｎ）、壬基苯酚（ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ）、它莫西芬（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ＣＧＳ１８３２０Ｂ、甲基睪酮（ｍｅｔｈｙｌ

ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、氟他胺（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）、丙硫氧嘧啶（ｐｒｏｐｙｌｔｈｉｏｕｒａｃｉｌ）和

１甲狀腺素（１ｔｈｙｒｏｘｉｎｅ）。所獲得的大量研究數據已經被匯總到一起、ＯＥＣＤ的一份綜合性報告對這

些研究結果進行了詳細的評價。該修訂后的ＴＧ４０７是上述國際范圍內驗證試驗得出的經驗和結果的

結晶。新ＴＧ４０７允許在評價其他毒理學效應時同時評價內分泌介導的毒性效應。

２．在ＯＥＣＤＴＧ４０７中增添用于檢測內分泌介導的毒性效應指標的合理性在ＯＥＣＤ專論中進行

了論述。該專論中列出了主要的修訂內容，其中大部分修訂內容的合理性在國際性驗證研究的第一階

段使用氟他胺和丙硫氧嘧啶進行了驗證。在第一階段還使用了更多的化合物進行了驗證，但是后來開

展的這些研究沒有對前版本ＴＧ４０７要求的所有觀察終點進行觀察，比如ＦＯＢ或運動功能評價，有些

研究也沒有很充分地報道，有些與前版本ＴＧ４０７的要求相比使用劑量太低。根據第一階段驗證試驗

對新增添評價指標測定時所獲得的有關其測定的可操作性、重復性和靈敏性等方面的資料，來決定應選

擇其中的哪些評價指標進行國際范圍內的第二階段驗證試驗。現(xiàn)行ＴＧ４０７是在第二階段驗證試驗結

果的基礎上形成的。

３．本試驗作為一種體內試驗方法，可提供關于多種內分泌機制及其效應的數據，可在“ＯＥＣＤ內分

泌干擾物測定與評價的概念框架”（附錄Ａ）中看到。在該概念性框架中，ＴＧ４０７被包含在第４級。該試

驗除了可獲得原版本可能提供的信息外，還提供多種內分泌機制及其效應的相關數據、并說明這種多種

內分泌機制效應是否存在劑量反應關系。

４．國際范圍內對ＴＧ４０７的驗證研究結果表明，該ＴＧ４０７在要求的靈敏度范圍內，檢測出了已知

的具有強內分泌活性作用的化學品，包括（抗）雌激素類化學品、（抗）雄激素類化學品或（抗）甲狀腺素類

化學品。用甲基睪酮和二氯二苯二氯乙烯（狆，狆’ＤＤＥ）進行的試驗表明，該試驗程序也可用于檢測對

甲狀腺產生微弱作用的化學品。關于金雀異黃酮（植物雌激素）、壬基苯酚（弱雌激素作用）、狆，狆’ＤＤＥ

（弱的抗雄性激素作用）等測試物，其產生的內分泌活性作用與其產生的其他毒性效應相比太弱了，即使

在高劑量組也檢測不到內分泌相關指標的明顯改變，另一種情況是，各實驗室得出的試驗結果都具有不

確定性（指異黃酮的試驗結果）。

５．通過對國際范圍內驗證試驗結果的詳盡分析，認為需要對ＴＧ４０７進行進一步修訂以提高試驗

的靈敏度，特別是檢測弱雌激素類物質和（抗）雄性激素類物質的靈敏度。推薦在試驗中進行雌性和雄

性動物乳腺的組織病理學檢查、評價雌性生殖器官的組織病理學改變（應特別注意雌性生殖器官組織結

構與發(fā)情周期（陰道涂片檢查）同步性的改變）。這些方面的測定內容未包含在提供給參與驗證實驗室

的研究程序中。

６．國際范圍內驗證研究的結果不能明確說明是否需要在ＴＧ４０７中加入甲狀腺激素的測定，但是

明確提示甲狀腺激素（Ｔ４、Ｔ３）和促甲狀腺素（ＴＳＨ）應作為更新指標加入到ＴＧ４０７的試驗程序中。

Ⅱ

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７．國際范圍內的驗證研究的結果表明，ＴＧ４０７驗證試驗中數據的質量主要依賴于實驗室的經驗，

特別是實驗室在檢查雌性生殖器官組織結構周期性改變方面的經驗以及在分離和稱量激素依賴性小器

官的重量時所具有的經驗。因此，建議各實驗室在按照ＴＧ４０７進行試驗時應進行適當的質量控制。

８．該ＴＧ４０７是經過兩次會議討論后的產物，一次是哺乳動物試驗方法確認管理小組／內分泌干擾

物測試與評估任務組于２００６年４月在華盛頓召開的，另一次是ＯＥＣＤ于２００６年４月在斯德哥爾摩召

開的。新版ＴＧ４０７是在國際范圍內對其進行方法驗證的基礎上產生的。

９．由于按照ＴＧ４０７進行試驗需要花費大量動物、很多費用、很長時間，因此，如果對ＴＧ４０７進行

像體外試驗方法驗證要求的那樣進行全面的方法驗證，則無論是過去還是現(xiàn)在看來都不太合適。無論

從動物福利還是從經濟方面考慮都不應開展這種全面的驗證試驗。根據對ＴＧ４０７中某些評價指標的

驗證結果，認識到需要對某些評價指標進行進一步的驗證和優(yōu)化。在新版ＴＧ４０７的應用過程中，將會

獲得更多的有關這些評價指標的經驗。

１０．該ＴＧ４０７在今后的幾年里可用于測定受試物重復經口染毒所引起的毒性作用，包括對內分泌

系統(tǒng)的作用。在該試驗程序經世界范圍內的應用而進一步取得經驗后，應召集專家對ＴＧ４０７進行進

一步的修改、提煉和認可。今后在對ＴＧ４０７進行修改時，必要時應重點對那些目前尚不能明確其價值

的一些觀察終點進行評價，如，乳腺的組織病理學檢查、雌性生殖器官組織結構周期性變化與動情周期

的一致性測定、甲狀腺相關激素的測定等。

１１．對化學品進行毒性特征評價時，可在獲得最初的急性毒性資料后進行重復劑量經口毒性試驗。

該試驗可提供在一個相對有限的時間內重復染毒受試物可能產生的健康危害效應資料，包括對內分泌

系統(tǒng)的毒性作用。該試驗作為一種重復劑量毒性試驗，可在未要求進行９０天重復染毒試驗時（如，受試

物的產量未超過規(guī)定的限值）進行或作為長期毒性試驗的預試驗來開展。染毒期限應為２８天。

１２．該修改后的ＴＧ４０７增加了用于檢測化學品對甲狀腺生理功能影響和對雄性和（或）雌性生殖

器官影響的評價指標，同時仍然保留修改前的ＴＧ４０７中的所有毒理學評價指標。根據驗證試驗的數

據資料，必須強調的是該試驗程序的敏感性尚不足以檢測出所有的（抗）雄激素類物質或（抗）雌激素類

物質。用于ＴＧ４０７試驗的動物未處于對內分泌干擾物最敏感的年齡。該ＴＧ４０７可檢測出強的或中

等程度的內分泌活性物質，但是，在多數情況下，檢測不出弱的內分泌活性物質。因此，不能把該試驗當

作內分泌干擾作用的篩選試驗。

１３．因此，未檢測出內分泌效應時并不能據此認為化學品對內分泌系統(tǒng)無影響。按照內分泌介導

的效應對受試物進行分類時，不能僅依賴該ＴＧ４０７的結果，而是應該對現(xiàn)有的可反映受試物潛在內分

泌活性的所有資料進行證據權重分析后再進行分類。當要制定化學品內分泌活性（化學品分類）相關的

管理決策時，應依據上述經證據權重分析后的結果，而不是僅僅依賴于該ＴＧ所獲得的結果。

１４．該ＴＧ４０７是為了根據試驗所觀察到的毒性效應，包括內分泌影響效應，來檢測受試物可能的

危害作用。也就是說，根據該ＴＧ４０７的結果可對受試物進行危害識別和危險度評價。有關內分泌評

價指標的測定結果可參見“ＯＥＣＤ內分泌干擾化學品測定與評價的概念框架”（附錄Ａ）。

１５．眾所周知，所有涉及到動物的操作都應當符合當地的動物保護標準；下面所述的動物保護和處

理要求是最低要求，當地的動物保護標準應高于此要求。ＯＥＣＤ另外還有一項關于“人道對待動物”的

規(guī)范。

Ⅲ

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化學品嚙齒動物２８天重復劑量經口

毒性試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了嚙齒動物２８ｄ重復劑量經口毒性試驗的范圍、術語和定義、試驗基本原則、試驗方