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文檔簡介
病原生物與免疫學(xué)實驗實驗室規(guī)則一.進入實驗室必須穿護士服,不必需的物品不要攜帶入室,嚴(yán)禁在實驗室進食、飲水。
二.保持實驗室的安靜和秩序,實驗要嚴(yán)肅認(rèn)真。三.如有傳染性材料的污染,及時報告老師。四.實驗過程中有儀器和器材的損壞要報告老師并登記。五.實驗后的材料要放到指定的位置。六.離開實驗室前,要用肥皂洗手,接觸過傳染性強的實驗材料要用0.1%的新潔爾滅泡手1-2分鐘七.值日生要作好值日工作,關(guān)好水,電,門窗,作好實驗記錄本的登記方可離開實驗室??乖贵w反應(yīng)Ab-Agreactions實驗?zāi)康恼莆昭丸b定實驗、免疫膠體金技術(shù)實驗的操作及結(jié)果的正確觀察、判斷;熟悉血型鑒定實驗、免疫膠體金技術(shù)實驗的原理;了解血型鑒定實驗、免疫膠體金技術(shù)實驗的用途??乖贵w反應(yīng)的基礎(chǔ)
basisofAb-Agreaction抗原抗體反應(yīng)的特點
charactersofAb-Agreaction特異性
Specificity
抗原抗體反應(yīng)的特點
charactersofAb-Agreactions可逆性reversibility凝集反應(yīng)
Agglutinationreactions在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中,顆粒性抗原(紅細胞、細菌、乳膠顆粒等)和相應(yīng)抗體反應(yīng)能夠產(chǎn)生肉眼可見的凝集塊。直接凝集(directagglutination)間接凝集(indirectagglutination)間接凝集抑制試驗(inhibition
of
indirectagglutination)直接凝集
directagglutination----ABO血型的鑒定
identificationofABObloodtype概述overview血型系統(tǒng)Bloodgroupsystem
1901年發(fā)現(xiàn)的人類第一個血型系統(tǒng)----ABO血型系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)者----
奧地利細菌學(xué)家KarlLandsteinerABO血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)DiscoveryofABObloodtype【實驗原理】
Experiment’smechanism
血型是指紅細胞的血型,是根據(jù)紅細胞膜外表面存在的特異性抗原(鑲嵌于紅細胞膜上的糖蛋白和糖脂)來確定的,這種抗原或凝集原是由遺傳決定的YYY+【實驗器材】
Experiment’sequipments
1:載玻片、采血針、牙簽2:抗A和抗B單克隆抗體、碘伏、棉簽?!静僮鞑襟E】
Experiment’sMethods1.在潔凈的玻片兩端用記號筆分別標(biāo)上A、B,然后在A端滴一滴抗A單克隆抗體,B端滴一滴抗B單克隆抗體;2.用碘伏消毒手指;3.取無菌采血針,采血;4.用牙簽一端蘸取少量血液,置于抗A單克隆抗體攪勻,換取另一根牙簽蘸取少量血液,置于抗B單克隆抗體攪勻;5.輕輕轉(zhuǎn)動玻片,使其充分混勻,靜置數(shù)分鐘后,觀察結(jié)果。注意:兩次取血的牙簽一定不能混用。(單克隆抗體+被檢者紅細胞)被檢者血型抗A抗B
+--+++--A【實驗結(jié)果】Experiment’sresultsBABO【實驗結(jié)果】Experiment’sresults
免疫標(biāo)記技術(shù)
immunolabelingtechniques簡介免疫標(biāo)記技術(shù)是指用熒光素、酶、放射性同位素等對抗體或抗原進行標(biāo)記,然后再通過檢測標(biāo)記物來觀察抗原抗體反應(yīng)的實驗技術(shù)。分類
classification
免疫膠體金技術(shù)
膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層析技術(shù)研制而成,該技術(shù)是90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡易快速的免疫學(xué)檢測技術(shù),最先用于人絨毛膜促性腺激素(HCG)的測定和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)等檢測。膠體金(Colloidalgold)是氯金酸(HAuCl4)的水溶膠,氯金酸在還原劑的作用下,聚合成特定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。膠體金標(biāo)記的原理:膠體金在堿性條件下帶負電荷,與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團藉靜電吸引而形成牢固結(jié)合。膠體金標(biāo)記技術(shù)(Immunogoldlabelingtechnique)是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理以硝酸纖維素膜為載體,利用了微孔膜的毛細血管作用,滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移,通過抗原抗體結(jié)合,并利用膠體金呈現(xiàn)顏色(紅色)反應(yīng),檢測抗原/抗體。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原膠體金試紙條示意圖檢測線質(zhì)檢線吸收墊樣品墊硝酸纖維素膜連接墊(膠體金墊)背襯(底板)【實驗原理】
Experiment’smechanism原理圖膠體金標(biāo)記的鼠抗人α—hCG抗體抗人β—hCG抗體抗鼠IgG抗體hCG【操作步驟】
Experiment’sMethods1.待測樣品、檢測試紙和其它檢測材料等在室溫后檢測2.將測試紙有箭頭的一端插入尿液標(biāo)本容器中,5秒鐘后取出平放,5分鐘內(nèi)觀察結(jié)果注意:測試
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