高效液相色譜系統(tǒng)ppt

高效液相色譜系統(tǒng)——液相色譜培訓(xùn)（二）液相色譜流程圖高壓泵進(jìn)樣器檢測器色譜工作站色譜柱儲液瓶一個存放流動相的容器。其結(jié)構(gòu)材料必須對流動相是化學(xué)惰性的，常用的溶劑儲液瓶的材料應(yīng)耐腐蝕，可為玻璃、不銹鋼、氟塑料、特種塑料聚醚醚酮(PEEK)或聚四氟乙烯襯里不銹鋼容器等，貯液罐容積一般為0.5～2L儲液瓶輸液系統(tǒng)功能：溶劑輸送目標(biāo)：穩(wěn)定準(zhǔn)確重要指標(biāo)：耐壓能力壓力脈動流量精密度流量準(zhǔn)確性高壓輸液泵柱雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵柱雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵各品牌輸液泵的基本參數(shù)項目Waters515型Agilent1100型LC-10ATvp型EliteP200II型LC-5500型檢定要求流速范圍0.001~100.001~100.001~9.9990.01~4.990.01～4.99調(diào)節(jié)精度0.0010.0010.0010.010.01流量精密度RSD0.1%0.15%（<0.3%）0.3%0.5%0.5%1.5%流量準(zhǔn)確度±1.0%±1.0%±2.0%±5.0%±1.0%±2.0%最高壓力4000Psi40MPa39.2MPa40.0MPa40MPa進(jìn)樣器隔膜進(jìn)樣停留進(jìn)樣閥進(jìn)樣自動進(jìn)樣進(jìn)樣器對進(jìn)樣器的要求密封性好死體積小重復(fù)性好保證中心進(jìn)樣進(jìn)樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小進(jìn)樣器原理－六通閥手動進(jìn)樣器－六通閥一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥（以美國Rheodyne公司的7725和7725i型最常見），其關(guān)鍵部件由圓形密封墊（轉(zhuǎn)子）和固定底座（定子）組成。耐高壓（35~40MPa），進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好，操作方便分離系統(tǒng)功能：組分分離目標(biāo)：分辨力強效率高色譜柱液相色譜柱是高效液相色譜儀的核心部分，是分析好壞、成敗的關(guān)鍵鍵合相色譜柱鍵合相:反相:70%;C18,65%;C8,15%;苯基柱<5%,正相:20%;

硅膠、-NH2、-CN、-OH其它(手性柱,離子交換柱):10%反相色譜是目前應(yīng)用得最為廣泛的高效液相色譜方法。C18和C8在反相色譜中應(yīng)用得最為廣泛。檢測器功能：檢測組分濃度目標(biāo)：準(zhǔn)確檢出限低重要指標(biāo)：噪聲、漂移、線性、檢出限紫外檢測器（包括二極管陣列檢測器）熒光檢測器示差折光檢測器電導(dǎo)檢測器蒸發(fā)光散射檢測器原理：基于被分析組分對特定波長紫外光的選擇性吸收定量基礎(chǔ)：朗伯-比耳定律，A＝KCL優(yōu)點：1）靈敏度高

2）對溫度和流速不敏感

3）可用于梯度洗提缺點：僅適用于測定有紫外吸收的物質(zhì)紫外檢測器

樣品池二極管陣列光柵D2/W燈每一組分可在每一波長處得到一吸光度值二極管陣列檢測器二極管陣列檢測器1）采集三維譜圖2）峰純度檢驗3）光譜庫檢索4）可以發(fā)現(xiàn)單波長檢測時未測到的峰二極管陣列檢測器的優(yōu)點大多數(shù)有機化合物有一定程度的吸光度，所以紫外-可見檢測器可以測定大多數(shù)的化合物，是目前實驗室中使用最多的檢測器

--多數(shù)公司售出的檢測器中75%以上是吸光度檢測器（其中50%以上是紫外-可見檢測器，25%是PDA）紫外-可見檢測器原理：基于被分析組分發(fā)射的熒光強度進(jìn)行檢測優(yōu)點：1）靈敏度極高，是最靈敏的檢測器之一

2）選擇性好

3）對溫度和流速不敏感，可用于梯度洗脫缺點：僅適用于測定可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)可檢測物質(zhì)：多環(huán)芳烴、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、兒茶酚氨等（具有對稱共軛體系）熒光檢測器原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣中各組分濃度。優(yōu)點：通用型檢測器，缺點：1）對溫度變化敏感2）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測3）屬于中等靈敏度的檢測器示差折光檢測器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)含量。廣泛應(yīng)用于離子色譜法優(yōu)點：對流動相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫缺點：對溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率增加2%-2.5%)主要用于離子色譜檢測水溶性無機和有機離子電導(dǎo)檢測器蒸發(fā)激光光散射檢測器（ELSD）通用型檢測器（適合于揮發(fā)性比流動相低的任何組分）；響應(yīng)值與組分質(zhì)量有關(guān)；可用于梯度洗脫HPLC柱噴霧氣體蒸發(fā)漂移管激光光源樣品液滴光二極管檢測器散射室工作站數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)功能：采集處理數(shù)據(jù)目標(biāo)：使用便捷功能完善梯度洗脫●HPLC有等強度(isocratic)和梯度(gradient)洗脫兩種方式等度洗脫是在同一分析周期內(nèi)流動相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品梯度洗脫是在一個分析周期內(nèi)程序控制流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度和pH值等，用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品比例閥檢測器進(jìn)樣器ABCD色譜柱高壓輸液泵低壓梯度阻尼器混合器高壓輸液泵檢測器進(jìn)樣器色譜柱梯度混合器高壓輸液泵高壓梯度梯度洗脫梯度洗脫的特點優(yōu)點縮短分析時間增加分離能力提高檢測靈敏度缺點儀器設(shè)備要求高不適合某些檢測方式(RI)柱需再生平衡定量分析的重復(fù)性較低梯度洗脫注意的問題注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相所用的溶劑純度要求高所用的溶劑要徹底脫氣，防止混合時產(chǎn)生氣泡混合溶劑的黏度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力變化每次梯度洗脫后必須對色譜柱進(jìn)行再生處理，使其恢復(fù)初始狀態(tài)高效液相色譜的配件管路與連接件脫氣裝置：在線脫氣機或超聲波清洗器過濾器：溶劑過濾器和針筒式過濾器進(jìn)樣器：平頭進(jìn)樣器不同材質(zhì)的管路不銹鋼管：耐腐蝕性好，有精密的同軸度，一般用于高壓部分聚合物管：用在液相色譜系統(tǒng)中從儲液瓶到泵、檢測器出口以后和進(jìn)樣器排液口等低壓部分PEEK（聚醚醚酮）管：是一種耐高溫、高性能的工程塑料，具有良好的惰性，適宜于生物樣品的分離分析液路連接件連接件也稱接頭一般可分為兩種：高壓接頭和低壓接頭高壓接頭采用不銹鋼材質(zhì)低壓接頭采用高聚物材質(zhì)連接件主要有卡套和空心螺釘液路連接密封示意圖液路連接裝配不合適的示意圖脫氣裝置超聲波清洗器通過超聲波作用使流動相中的氣泡排除，超聲脫氣效率只有20％～30％左右在線脫氣機脫氣效果好，脫氣效率大于70％，在線脫氣機使用方便、省事，尤其是在作梯度洗脫時最好用在線脫氣機。過濾裝置溶劑過濾器為了除去流動相中的雜質(zhì)，對流動相進(jìn)行過濾溶劑過濾器要配濾膜（有機系和水系，規(guī)格0.45μm或更小孔徑的濾膜）針筒式過濾器樣品溶液在進(jìn)入色譜系統(tǒng)前必須經(jīng)過針筒式過濾器針筒式過濾器也分為有機系和水系，規(guī)格0.45μm或更小孔徑的進(jìn)樣器液相色譜的進(jìn)樣器必須是平頭進(jìn)樣器常配的進(jìn)樣器規(guī)格為10、25、50、100μL最常使用的為50μL和100μL的進(jìn)樣器LC-5500和LC-5510

高效液相色譜儀介紹LC-5500高效液相色譜儀LC-5500高壓輸液泵P-101型高壓液相平流泵由泵體、過濾器、緩沖器、步進(jìn)電機、步進(jìn)電機驅(qū)動器、控制電路板、鍵盤以及液晶顯示器等部件構(gòu)成LC-5500高壓輸液泵技術(shù)指標(biāo)工作壓力：0～40MPa流量范圍：0.01～5.0mL/min流量準(zhǔn)確性：≤1％流量精密度：≤0.5％壓力脈動：≤1％LC-5500高壓輸液泵主要特點采用雙柱塞交替輸液吸液，特殊設(shè)計的非圓凸輪運動曲線，保證輸出液體流速穩(wěn)定精密電機及電路設(shè)計，實現(xiàn)流量控制和流速的穩(wěn)定性壓力傳感器避免了過壓對色譜柱和泵的意外損害性能良好的阻尼器有效消除了輸液脈沖采用LCD帶背光的顯示屏來顯示泵的設(shè)置參數(shù)和運行參數(shù)。梯度洗脫流量程序智能化，流量準(zhǔn)確LC-5500高效液相色譜儀主機主機包括兩部分：柱溫箱紫外-可見光檢測器LC-5500柱溫箱技術(shù)指標(biāo)：溫度控制范圍：室溫＋10～80℃溫度控制精度：±1℃功能特點：控溫精度準(zhǔn)確更換色譜柱方便分析結(jié)果重現(xiàn)性好保證檢測穩(wěn)定性LC-5500紫外-可見光檢測器技術(shù)指標(biāo)：波長范圍：190～650nm波長精度:±2nm波長重復(fù)性:優(yōu)于2nm基線噪聲：±1×10-4AU基線漂移：±5×10-4AU/h光譜帶寬：8nm流通池體積：5ul最小檢測濃度：＜4×10-8g/mL(萘的甲醇溶液)LC-5500紫外-可見光檢測器功能特點：使用波長范圍寬波長精度準(zhǔn)確能夠?qū)崿F(xiàn)多波長測定LC-5500工作站功能特點：具有儀器控制系統(tǒng)、數(shù)據(jù)采集和處理系統(tǒng)；可進(jìn)行波長程序控制可設(shè)定柱溫可對兩臺泵進(jìn)行程序控制，進(jìn)行梯度洗脫LC-5510高效液相色譜儀LC-5510在線脫氣機在線脫氣機主要由真空泵、脫氣膜管、傳感器、控制電路、真空腔等組成在線脫氣機的主要目的是脫除流動相中的氣泡LC-5510高壓輸液泵技術(shù)指標(biāo)工作壓力：0～42MPa流量范圍：0.01～5.0mL/min流量準(zhǔn)確性：≤1％流量精密度：≤0.5％壓力脈動：≤1％LC-5100高壓輸液泵主要特點采用雙柱塞交替輸液吸液，特殊設(shè)計的非圓凸輪運動曲線，保證輸出液體流速穩(wěn)定精密電機及電路設(shè)計，實現(xiàn)流量控制和流速的穩(wěn)定性壓力傳感器避免了過壓對色譜柱和泵的意外損害性能良好的阻尼器有效消除了輸液脈沖采用LCD帶背光的顯示屏來顯示泵的設(shè)置參數(shù)和運行參數(shù)。梯度洗脫流量程序智能化，流量準(zhǔn)確LC-5510柱溫箱技術(shù)指標(biāo)：溫度控制范圍：5～80℃溫度控制精度：±0.2℃溫度設(shè)定值誤差：±0.5℃LC-5510柱溫箱功能特點：控溫精度準(zhǔn)確分析結(jié)果重現(xiàn)性好保證檢測穩(wěn)定性采用LCD帶背光的顯示屏來顯示柱溫的設(shè)置和運行溫度既可升溫也可降溫，能滿足一些特殊用戶的需求LC-5510紫外-可見光檢測器技術(shù)指標(biāo)：波長范圍：190～650nm波長精度:±0.2nm波長重復(fù)性:優(yōu)于0.2nm基線噪聲：±6×10-5AU（動態(tài)，254nm）基線漂移：±2.5×10-4AU/h（動態(tài)