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關(guān)于血球計數(shù)板使用及相關(guān)計算第一頁,共十頁,2022年,8月28日第二頁,共十頁,2022年,8月28日第三頁,共十頁,2022年,8月28日血球計數(shù)板的使用方法步驟1.鏡檢計數(shù)室。在加樣前,先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物,則需清洗,吹干后才能進行計數(shù);2.加樣品。將清潔干燥的血球計數(shù)板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片,用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液,滴于蓋玻片邊緣,讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入,一次性充滿計數(shù)室,防止產(chǎn)生氣泡,多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去;3.計數(shù)。稍待片刻(約5min),待酵母菌細胞全部沉降到計數(shù)室底部后,將計數(shù)板放在載物臺的中央,先在低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計數(shù)并記錄。第四頁,共十頁,2022年,8月28日1.每天同一時間,各組取出本組的試管,用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌個數(shù),并作記錄,連續(xù)觀察7天。2.從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前,要將試管輕輕震蕩幾下,這樣使酵母菌分布均勻,求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。3.如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多,難以數(shù)清,應(yīng)當(dāng)對培養(yǎng)液進行稀釋。具體方法是:搖勻試管,取1mL酵母菌培養(yǎng)液,加入成倍的無菌水稀釋,稀釋n倍后,再用血球計數(shù)板計數(shù),所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4—5個酵母細胞為宜。4.活酵母有芽殖現(xiàn)象,若芽體達到母細胞大小的一半時,即可作為兩個菌體計數(shù),若芽體小于母細胞一半時為1個酵母細胞。第五頁,共十頁,2022年,8月28日5.對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù),一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線”的原則處理,另兩邊不計數(shù)。6.計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算,對每個樣品可計數(shù)三次,再取其平均值。7.血球計數(shù)板的清潔血球計數(shù)板使用后,用自來水沖洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干,或用95%的乙醇、無水乙醇、丙酮等有機溶劑脫水使其干燥。通過鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈,則必須重復(fù)清洗直到干凈為止。第六頁,共十頁,2022年,8月28日例1、通常用血球計數(shù)板對培養(yǎng)液中酵母菌進行計數(shù),若計數(shù)室為1mm×1mm×0.1mm方格,由400個小方格組成,如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多,難以計數(shù),應(yīng)先▲后再計數(shù)。若多次重復(fù)計數(shù)后,算得每個小方格中平均有5個酵母菌,則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有▲個。(參考答案:稀釋;2×108)5×400×10000×10=2×108。第七頁,共十頁,2022年,8月28日例2、檢測員將1mL水樣稀釋10倍后,用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數(shù)量;將蓋玻片放在計數(shù)室上,用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室,并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由25×16=400個小格組成,容納液體的總體積為0.1mm3?,F(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內(nèi)共有藍藻n個,則上述水樣中約有藍藻▲個/mL。(參考答案:5n×105
)第八頁,共十頁,2022年,8月28日解析三:從例4來看,是按照血球計數(shù)板的原理進行設(shè)計試題的,還添加了相應(yīng)的圖示,題意一目了然。按照前面所述的公式,不難得出正確答案:酵母細胞個數(shù)/1mL=80個小方格細胞總數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)
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