毛細(xì)管電色譜技術(shù)

毛細(xì)管電色譜技術(shù)概述20世紀(jì)50年代，Muold將電場引入薄層色譜，分離了膠棉中多糖成分。1974年，Pretorius將電場引入毛細(xì)管填充柱色譜，分離了數(shù)種溶質(zhì)。1981年，Jorgenson將10mODS填料填入170mi.d.的Pyrex玻璃柱，成功分離了數(shù)種多環(huán)芳烴，第一次向世人顯示了CEC的巨大潛力。

定義：以電滲流為驅(qū)動(dòng)力，同時(shí)在毛細(xì)管內(nèi)填充或在內(nèi)壁涂覆、鍵合或交聯(lián)色譜固定相的一種微柱液相色譜技術(shù)。Jorgenson,J.W.,Lukacs,K.D.,J.Chromatogr.1981,218.209~216電驅(qū)動(dòng)和壓力驅(qū)動(dòng)下的流型比較毛細(xì)管電色譜特點(diǎn)分離效率比HPLC高選擇性比CE高分析速度快，分析結(jié)果重現(xiàn)性好可實(shí)現(xiàn)樣品的富集和預(yù)濃縮基本理論CECECLC

HighEfficiency&HighSelectivityKnox研究表明：只要填料顆粒粒徑0.5m,電滲流速度就與填料的大小無關(guān)，與填充均勻程度也沒有關(guān)系，所以分離效率高，重現(xiàn)性好。HPLC：5~10mCEC:1.5~3.0m分子擴(kuò)散項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件選擇

操作電壓適當(dāng)提高有利于快速分離緩沖液pH和濃度

≤10mmol/L有機(jī)溶劑種類和濃度

柱子的長度電色譜的固定相開管柱電色譜填充柱電色譜整體柱電色譜開管柱電色譜定義：在毛細(xì)管內(nèi)壁鍵合、涂覆固定相優(yōu)缺點(diǎn)：制備簡單，柱效高相比低，柱容量小

蝕刻法溶膠-凝膠法原位聚合多孔聚合物法J.J.Pesek,etal.JChromatogrA,2000,887,31C.Horvath,etal.J.Chromatogr.A,1999,858,91

填充柱電色譜

定義:固定相填充在毛細(xì)管內(nèi)

制柱步驟優(yōu)點(diǎn)：

制備步驟繁瑣

重現(xiàn)性較差

缺點(diǎn)：優(yōu)勢(shì)：高的柱效；豐富的固定相資源整體柱電色譜

定義：在毛細(xì)管內(nèi)原位聚合反應(yīng)或固化，形成均一整體的固定相。整體柱有機(jī)聚合物整體柱硅膠整體柱顆粒固定化整體柱雜化材料整體柱有機(jī)聚合物整體柱常用單體ONH2OOOClOO常用交聯(lián)劑基于聚丙烯酰胺的整體柱Researchgroups:HjertenS.FreitagR.NovotnyM.V.FujimotoC,FujiseY.Anal.Chem.,1996,68,2753~2757SeparationofpolycyclicaromatichydrocarbonsSeparationofacidicandbasicpolypeptides基于聚苯乙烯的整體柱C.Horvath,etal.J.Chromatogr.A,1999,855,273ResearchgroupsHorvathC.ZouH.基于聚丙烯酸酯的整體柱ResearchgroupsFrechetJ.M.JZouH.F.ElRassiaZ.硅膠整體柱硅膠整體柱的特點(diǎn)

良好的機(jī)械強(qiáng)度，耐有機(jī)溶劑

硅膠骨架和通孔尺寸可獨(dú)立控制Fastseparationoffive-blockingdrugsHPLCK.Cabrera,J.Sep.Sci.,2004,27,843ChromatogramfortheseparationofalkylbenzenesonaC8-erivatizedsilicamonolithExperimentalconditions:column,totallength(TL)of30cmandeffectivelength(EL)of10cm;mobilephase,5mMphosphatebuffer(pH7)，40%MeCN;appliedvoltages,12kV.Samples:(1)thiourea;(2)benzene;(3)toluene;(4)ethylbenzene;(5)butylbenzene.顆粒固定化型整體柱優(yōu)點(diǎn)：整體式固定相不需要制備柱塞

缺點(diǎn)：填料性能會(huì)受到影響本質(zhì)上屬于填充柱雜化材料整體柱電色譜的應(yīng)用手性分離藥物分析蛋白質(zhì)、肽分離核苷、核苷酸和堿基糖實(shí)例1手性電色譜整體柱分離手性藥物thalidomideWorldwidesalesofchiraldrugsChem.&Eng.News,2001,Vol.79,No.40,pp793504526148121330706934118003006009001200150019931994199519961997199819992000100million$N.M.Maier,P.Franco,W.Lindner,J.Chromatogr.A906(2001)3-33ChromatographyHPLCCEC實(shí)例2親水作用色譜分離肽TypicalstationaryphasesusedinHI-CEC

五種肽在CZE和HI-CEC模式下的分離

HI-CEC分離肽異構(gòu)體實(shí)例3親水作用色譜分離糖展望在線（柱）富集與分離微流控芯片電色譜ShortandlonginjectioninCE自富集效應(yīng)(Self–concentraioneffect)溶劑梯度效應(yīng)（solventgradienteffect）Sampleconcentration:18g/mL0.18g/mL

Samplesolution:80%ACNin5mmolTris

20%ACNin5mmolTrisInjection:1kV1s10kV60min場放大效應(yīng)（solventgradienteffect）Sampleconcentration:10g/mL0.1g/mL

Samplesolution:80%ACNin5mmolNaAc

10%ACNin1mmolTrisInjection:2kV1s10kV300s微流控芯片電色譜