標(biāo)準(zhǔn)解讀

《NY/T 543-2002 牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法》是一項(xiàng)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),主要針對牛流行熱病毒的檢測提供了詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室對疑似感染牛流行熱病毒樣本進(jìn)行微量中和試驗(yàn),以評估血清或疫苗中的抗體水平。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn),試驗(yàn)過程首先需要準(zhǔn)備一系列不同稀釋度的待測血清樣本,并將這些樣本與已知量的牛流行熱病毒混合,在適宜條件下共同孵育一段時間。其目的是讓血清中的特異性抗體與病毒結(jié)合,從而阻止病毒在細(xì)胞培養(yǎng)物上的生長。之后,將上述混合物接種到敏感細(xì)胞單層上,通過觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)來判斷血清是否能夠中和病毒及其效價高低。

此外,標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定了對照組設(shè)置、結(jié)果判定原則以及實(shí)驗(yàn)條件控制等具體要求。例如,必須設(shè)立病毒對照孔以確認(rèn)所用病毒具有足夠的活性;同時,還需要有陰性血清對照和陽性血清對照來保證實(shí)驗(yàn)的有效性和準(zhǔn)確性。最終,依據(jù)各稀釋度下是否出現(xiàn)CPE來確定待測樣品的最大無毒害稀釋倍數(shù),以此作為衡量抗體滴度的標(biāo)準(zhǔn)之一。

該文件對于促進(jìn)我國畜牧業(yè)健康發(fā)展、加強(qiáng)動物疫病防控體系建設(shè)具有重要意義。


如需獲取更多詳盡信息,請直接參考下方經(jīng)官方授權(quán)發(fā)布的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)文檔。

....

查看全部

  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
NY/T 543-2002牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法_第1頁
NY/T 543-2002牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法_第2頁
NY/T 543-2002牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法_第3頁
免費(fèi)預(yù)覽已結(jié)束,剩余9頁可下載查看

下載本文檔

NY/T 543-2002牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法-免費(fèi)下載試讀頁

文檔簡介

﹫﹤.

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

燉—

牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法

┇┄┐┃┊┉┇━┏┉┄┃┉┈┉┄┇┄┋┃┅│┇━┋┇

┐┐發(fā)布┐┐實(shí)施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

燉—

前言

牛流行熱(簡稱BEF)又稱牛暫時熱、三日熱、一日熱、僵硬病等,本病在亞、非和大洋洲許多國家均

有發(fā)生。該病是由彈狀病毒科暫時熱病毒屬牛流行熱病毒引起的一種急性、熱性傳染病,呈周期性流行。

在發(fā)病期間,對牛的產(chǎn)奶量、使役能力、增重、精液品質(zhì)都有嚴(yán)重影響,還可導(dǎo)致少數(shù)病牛癱瘓,流產(chǎn)甚至

死亡。嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。

本標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)我國科研成果,與澳大利亞合作研究成果和我國的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)制定的。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C為規(guī)范性附錄,附錄D為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:白文彬、嚴(yán)雋端。

燉—

牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法

范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛流行熱微量血清中和試驗(yàn)技術(shù)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛流行熱的診斷、免疫監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。

微量血清中和試驗(yàn)

器材

營養(yǎng)液和005%胰酶EDTA(簡稱ATV)液,配制方法見附錄A。

細(xì)胞及其制備、傳代、計(jì)數(shù)方法,見附錄B。

抗原(指示毒)、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清由法定單位提供,按說明書使用??乖緝r以及工作抗

原(100TCID50)測定方法見附錄C。

微量滴定板:無菌帶蓋96孔微量滴定板(簡稱微量板)。

微量加樣器:25μL、50μL及100μL單道和多道加樣器,加樣塑料滴頭(裝量為25μL~

100μL,與加樣器配套使用)。

二氧化碳培養(yǎng)箱。

操作方法

滅活

被檢血清以及陰、陽性血清用前均于56℃水浴鍋中滅活30min。

準(zhǔn)備

制備工作抗原(指示毒)方法(見第C1章),將已知毒價的合格種毒用生長液(見第A1章)稀釋成

100TCID50燉mL。

定性試驗(yàn)

向微量板的每孔各加25μL生長液。

在第一排加被檢血清,每份占2孔,每孔25μL,混合均勻,即成2倍稀釋。

用多道加樣器從第1孔取25μL液體對應(yīng)移入第2排孔內(nèi),混勻即成4倍稀釋。再從孔內(nèi)吸

出25μL丟棄。

每孔加工作抗原25μL,混勻置37℃孵育60min。

每孔加細(xì)胞懸液100μL(30000個細(xì)胞)。細(xì)胞計(jì)數(shù)方法見第B3章。

試驗(yàn)對照系統(tǒng)的設(shè)置。每批試驗(yàn)的對照系統(tǒng)的設(shè)置:標(biāo)準(zhǔn)陽性血清,從第1列至第6列,每列

4孔,逐列稀釋(即2倍~64倍),標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、細(xì)胞對照和病毒對照各1列4孔。同時對本試驗(yàn)使用的

工作抗原,隨同試驗(yàn)再次進(jìn)行測定。

用滅菌的蓋子蓋上微量板,置37℃二氧化碳(CO2)培養(yǎng)箱內(nèi),培養(yǎng)5d。從第3d起逐日記錄

細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)。

結(jié)果判定:標(biāo)準(zhǔn)陽性血清中和抗體價≥64,標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、病毒對照排各孔均出現(xiàn)CPE,工作

抗原含量滴定在規(guī)定的范圍之內(nèi)(CPE出現(xiàn)的孔數(shù)與毒價查閱方法見第D1章),細(xì)胞對照孔正常情況

下,4倍稀釋的被檢血清列,兩孔都出現(xiàn)CPE時,判為陰性;僅1孔出現(xiàn)CPE,被判為可疑

溫馨提示

  • 1. 本站所提供的標(biāo)準(zhǔn)文本僅供個人學(xué)習(xí)、研究之用,未經(jīng)授權(quán),嚴(yán)禁復(fù)制、發(fā)行、匯編、翻譯或網(wǎng)絡(luò)傳播等,侵權(quán)必究。
  • 2. 本站所提供的標(biāo)準(zhǔn)均為PDF格式電子版文本(可閱讀打印),因數(shù)字商品的特殊性,一經(jīng)售出,不提供退換貨服務(wù)。
  • 3. 標(biāo)準(zhǔn)文檔要求電子版與印刷版保持一致,所以下載的文檔中可能包含空白頁,非文檔質(zhì)量問題。

評論

0/150

提交評論