標(biāo)準(zhǔn)解讀

《NY/T 678-2003 豬偽狂犬病免疫酶試驗(yàn)方法》是一項(xiàng)針對(duì)豬偽狂犬病(Aujeszky's disease)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了如何使用免疫酶技術(shù)來(lái)檢測(cè)豬血清中的偽狂犬病毒抗體或抗原,適用于疾病監(jiān)測(cè)、疫苗效果評(píng)估以及流行病學(xué)研究等領(lǐng)域。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn),試驗(yàn)主要基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)原理進(jìn)行,這是一種高靈敏度和特異性的生物化學(xué)分析方法。整個(gè)過(guò)程包括樣品準(zhǔn)備、包被板制備、加樣與孵育、清洗、顯色反應(yīng)及結(jié)果判讀幾個(gè)步驟。其中,關(guān)鍵試劑如包被有特定抗原或抗體的微孔板、標(biāo)記酶結(jié)合物、底物溶液等的選擇與正確使用對(duì)于保證測(cè)試準(zhǔn)確性至關(guān)重要。

在操作過(guò)程中需要注意的是,所有涉及的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備都必須經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)并處于良好工作狀態(tài);同時(shí),為了確保數(shù)據(jù)可靠性和重復(fù)性,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)建立嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系,并定期參加外部質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)以驗(yàn)證自身檢測(cè)能力。此外,工作人員需接受專業(yè)培訓(xùn),熟悉相關(guān)理論知識(shí)和技術(shù)規(guī)范,嚴(yán)格按照SOP執(zhí)行每一步驟。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2003-07-30 頒布
  • 2003-10-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

犐犆犛11.220

犅41

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢/犜678—2003

豬偽狂犬病免疫酶試驗(yàn)方法

犈狀狕狔犿犲犻犿犿狌狀狅犪狊狊犪狔犳狅狉狆狅狉犮犻狀犲狆狊犲狌犱狅狉犪犫犻犲狊

20030730發(fā)布20031001實(shí)施

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書(shū)

犖犢/犜678—2003

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:王宏偉、吳清民、童光志、田克恭、陳西釗、蘇敬良、王傳彬。

書(shū)

犖犢/犜678—2003

豬偽狂犬病免疫酶試驗(yàn)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬偽狂犬?。盘堑鞍祝ǎ纾?,即gpⅠ)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫酶組織化學(xué)試驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)豬血清中的豬偽狂犬病病毒gE特異性抗體和組織中的豬偽狂犬病病毒抗原。

2犈糖蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(犵犈犈犔犐犛犃)

2.1材料準(zhǔn)備

2.1.1試劑

a)ELISA抗原包被板;

b)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清:偽狂犬病病毒gE單克隆抗體;

c)標(biāo)準(zhǔn)陰性血清:無(wú)偽狂犬病病毒gE抗體的豬血清;

d)酶結(jié)合物:辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗偽狂犬病病毒gE單克隆抗體;

e)磷酸鹽緩沖液(PBS):配制見(jiàn)第A.1章;

f)洗滌液:配制見(jiàn)第A.2章;

g)樣品稀釋液:配制見(jiàn)第A.3章;

h)底物溶液:配制見(jiàn)第A.5章;

i)終止液:配制見(jiàn)第A.6章。

2.1.2器材

a)酶聯(lián)檢測(cè)儀;

b)微量加樣器,容量50μL~200μL;

c)37℃恒溫培養(yǎng)箱。

2.1.3樣品

采集被檢豬血液,分離血清,血清應(yīng)新鮮、透明、不溶血、無(wú)污染,密裝于滅菌小瓶?jī)?nèi),4℃或-30℃保

存或立即送檢。試驗(yàn)前將被檢血清統(tǒng)一編號(hào),并用樣品稀釋液作2倍稀釋。

2.2操作方法

2.2.1取出包被板,并將樣品位置準(zhǔn)確記錄在記錄單上。

2.2.2向A1、A2、A3孔中分別加入100μL未經(jīng)稀釋的陰性對(duì)照血清,A4、A5、A6孔中分別加入

100μL未經(jīng)稀釋的陽(yáng)性對(duì)照血清,其他各孔加入100μL稀釋好的待檢樣品。

2.2.3置室溫1h。

2.2.4棄去孔內(nèi)液體,再在紗布或吸水紙上拍干。

2.2.5用洗滌液將反應(yīng)板洗滌(3~5)次,每次洗滌后均棄去孔內(nèi)液體。最后一次洗滌后,除凈孔內(nèi)液

體,拍干。

2.2.6每孔加入100μL酶結(jié)合物溶液,室溫下作用20min。

2.2.7重復(fù)2.2.4和2.2.5。

2.2.8各孔加入100μL底物液。

2.2.9室溫放置15min。

2.2.10各孔加入50μL終止液,立即用酶標(biāo)儀于650n

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