微生物學(xué)藥學(xué)專業(yè)免疫學(xué)應(yīng)用

微生物學(xué)藥學(xué)專業(yè)免疫學(xué)應(yīng)用第一頁，共六十一頁，2022年，8月28日第一節(jié)免疫學(xué)預(yù)防第二頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫天然獲得性被動主動人工天然人工天然自然感染（隱性、顯性）抗毒素免疫球蛋白疫苗類毒素來自母親的抗體（IgG，sIgA）區(qū)別第三頁，共六十一頁，2022年，8月28日天然被動免疫:

母親通過胎盤將IgG、通過初乳將IgA傳給嬰兒。第四頁，共六十一頁，2022年，8月28日一、人工主動免疫概念：給機(jī)體輸入抗原物質(zhì)，使免疫系統(tǒng)因抗原的刺激，產(chǎn)生類似感染時所發(fā)生的免疫過程，從而產(chǎn)生特異性免疫力。疫苗的概念：1.將細(xì)菌制作的人工主動免疫的生物制劑稱為菌苗。2.將病毒、立克次體、螺旋體等制成的人工主動免疫的生物制劑稱為疫苗。3.國際上將細(xì)菌制劑、病毒制劑以及類毒素統(tǒng)稱為疫苗。第五頁，共六十一頁，2022年，8月28日

抗原(Ag)與T細(xì)胞結(jié)合，激活T細(xì)胞記憶T細(xì)胞活化的T殺傷細(xì)胞與B細(xì)胞結(jié)合，誘導(dǎo)B細(xì)胞釋放抗體記憶B細(xì)胞活化的B細(xì)胞抗體第六頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫記憶AB白喉疫苗DE抗白喉抗體白喉Bmcell抗白喉抗體白喉Bmcell第七頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗死疫苗類毒素

用于主動免疫的疫苗第八頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗：由

減毒或無毒力的活病原微生物制成。常見種類：卡介苗、麻疹活疫苗、脊髓灰質(zhì)炎活疫苗。

死疫苗：病原微生物經(jīng)理化方法滅活制成。常見種類：傷寒、百日咳、霍亂、鉤端螺旋體病、流感、狂犬病、乙型腦炎疫苗第九頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗與死疫苗的比較特點(diǎn)制劑特點(diǎn)

接種劑量及次數(shù)恢復(fù)傾向無毒或減毒的活微生物量較小，一般僅需要一次相對穩(wěn)定性不穩(wěn)定可以回復(fù)為毒株強(qiáng)毒死微生物量較大，需要多次接種較穩(wěn)定不回復(fù)為毒株免疫效果較好，維持3-5年甚至更長較差，維持半年至一年活疫苗死疫苗誘導(dǎo)的免疫類型體液免疫和細(xì)胞免疫體液免疫為主第十頁，共六十一頁，2022年，8月28日活疫苗病毒疫苗脊髓灰質(zhì)炎,麻疹,腮腺炎,風(fēng)疹,雞水痘,甲肝,黃熱病。結(jié)核(BCG).活菌疫苗（唯一）死病毒疫苗(加熱,化學(xué)或紫外光照射)流感,狂犬病

傷寒,霍亂,百日咳etc.死疫苗死菌疫苗（大多數(shù)細(xì)菌）常見的疫苗第十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日類毒素概念：種類：第十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日新型疫苗1.亞單位疫苗：腦膜炎球菌2.合成肽疫苗3.基因工程疫苗重組乙型肝炎病毒表面抗原

第十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日二、人工被動免疫將一個免疫了的供體的血清或免疫球蛋白轉(zhuǎn)入到一個未免疫的個體.

沒有抗原刺激免疫系統(tǒng)免疫細(xì)胞？第十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫血清概念：是指用免疫動物后獲得的免疫血清或從機(jī)體組織中提取制成的免疫球蛋白，主要成分為抗體。常用的種類有：（一）抗毒素血清（二）胎盤丙種球蛋白和人血清丙種球蛋白（三）抗菌免疫血清（四）抗病毒免疫血清（五）抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白第十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日破傷風(fēng)抗毒素(馬血清)

異源?

同源人工注射人的球蛋白或免疫動物的球蛋白。第十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日馬血清抗毒素的兩重性：2、異種抗原，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗馬血清抗體，或超敏反應(yīng)（I，III）。1、特異性抗體----中和毒素第十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日人工主動免疫與人工被動免疫區(qū)別點(diǎn)人工主動免疫人工被動免疫接種物抗原抗體免疫力出現(xiàn)時間慢，要經(jīng)過1-4周誘導(dǎo)期快，即刻產(chǎn)生免疫力維持時間長（數(shù)月-數(shù)年）較短（2周-數(shù)周）用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防第十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫學(xué)治療第二節(jié)第十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）免疫增強(qiáng)劑概念：是增強(qiáng)、促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的生物制劑或非生物制劑。常見種類：免疫因子微生物制劑化學(xué)藥物中藥制劑常用來治療免疫缺陷、病毒感染性疾病和腫瘤。第二十頁，共六十一頁，2022年，8月28日細(xì)胞因子細(xì)胞因子作為一類重要和有效的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，正逐漸稱為一種常規(guī)手段應(yīng)用于免疫治療。目前已在臨床得到應(yīng)用的細(xì)胞因子包括IL、IFN、CSF、TNF等。它們主要用于免疫缺陷、自身免疫、病毒感染性疾病和腫瘤的治療。第二十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日第二十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日過繼免疫過繼免疫治療：過繼免疫是將對疾病有免疫力的供者的免疫應(yīng)答產(chǎn)物轉(zhuǎn)移給其他個體，或自體的細(xì)胞經(jīng)體外處理后回輸自身，以發(fā)揮治療疾病的作用。用于過繼免疫的物質(zhì)：包括免疫血清、免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)移因子、免疫核糖核酸等。第二十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日骨髓干細(xì)胞移植概念：是取患者或健康人的骨髓回輸給患者，讓骨髓中的干細(xì)胞進(jìn)入患者體內(nèi)定居、分化、增殖，使患者恢復(fù)造血功能和免疫力。類型：1.自體骨髓干細(xì)胞移植

2.異體骨髓干細(xì)胞移植

3.臍血干細(xì)胞移植應(yīng)用：1.免疫缺陷病

2.再生障礙性貧血

3.白血病第二十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（二）免疫抑制劑概念：是一類抑制機(jī)體免疫功能的生物制劑或非生物制劑。常見種類：1.真菌代謝產(chǎn)物

2.McAb3.抗腫瘤藥物

4.中藥制劑

5.激素特點(diǎn)：1.作用是非特異性

2.大多有毒副作用第二十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日治療性疫苗概念：是以抗原為治療劑，用特定的抗原成分制成的疫苗。進(jìn)入機(jī)體后可增強(qiáng)免疫應(yīng)答或誘導(dǎo)免疫耐受，從而達(dá)到治療疾病的目的。用途：

1.增強(qiáng)免疫應(yīng)答的疫苗：治療感染和腫瘤。

2.誘導(dǎo)免疫耐受的疫苗：治療自身免疫病和超敏反應(yīng)，防止免疫排斥。第二十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日第三節(jié)免疫學(xué)診斷一、體液免疫測定法第二十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）抗原抗體反應(yīng)的原理和特點(diǎn)原理：抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合部位間存在結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性，二者相互結(jié)合，在適宜條件下，出現(xiàn)可見反應(yīng)。原則：用已知抗體檢測未知抗原，也可用已知抗原檢測未知抗體。特點(diǎn)：

1.特異性

2.可見性

3.可逆性第二十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日1.特異性

一種抗原一般僅能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性即特異性。第二十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日2.可見性若抗原、抗體的數(shù)量比例恰當(dāng)，抗體分子的兩個Fab段分別與兩個抗原分子結(jié)合，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合體，反應(yīng)體系中基本無游離的抗原或抗體。此時，可形成肉眼可見的明顯反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）。因此，確定抗原、抗體的最適比例十分重要，應(yīng)根據(jù)抗原的物理性狀，對抗原或抗體進(jìn)行稀釋，以確定最適比例。第三十頁，共六十一頁，2022年，8月28日3.可逆性抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的非共價結(jié)合，結(jié)合穩(wěn)定且可逆。在一定條件下，抗原抗體結(jié)合形成的復(fù)合物可被解離，如低pH、高濃度鹽、凍融等。解離后的抗原或抗體分子仍保持原有的理化特性和生物學(xué)活性。如解離后的外毒素恢復(fù)其毒性，細(xì)菌仍可存活。第三十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日（二）抗原或抗體的檢測方法

根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分因素，可將抗原抗體反應(yīng)分為：凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體參與的反應(yīng)采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)第三十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日1.凝集反應(yīng)概念：細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集團(tuán)塊，此類反應(yīng)稱為凝集反應(yīng)。方法：（1）直接凝集（2）間接凝集第三十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）直接凝集將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。玻片法：是用已知抗體與相應(yīng)抗原在玻片上反應(yīng)，用于抗原的定性檢測，如ABO血型鑒定、細(xì)菌鑒定。試管法：是在試管中連續(xù)稀釋待檢血清，加入已知顆粒性抗原，用于抗體的定量檢測，如診斷傷寒病的肥達(dá)試驗。第三十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）間接凝集概念：將可溶性抗原包被在與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體反應(yīng)，出現(xiàn)顆粒物凝集的現(xiàn)象。常用的載體：

人O型血紅細(xì)胞聚苯乙烯乳膠顆粒反應(yīng)的類型：第三十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接凝集反應(yīng)的類型根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式，間接凝集反應(yīng)可分為：（正向）間接凝集反應(yīng)：用抗原致敏載體以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗體。反向間接凝集反應(yīng)：用特異性抗體致敏載體以檢測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原。間接凝集抑制反應(yīng)第三十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接凝集抑制反應(yīng)診斷試劑：為抗原致敏的顆粒載體及相應(yīng)的抗體，用于檢測標(biāo)本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。檢測方法：為將標(biāo)本先與抗體試劑作用，然后再加入致敏的載體，若出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說明標(biāo)本中不存在相同抗原，抗體試劑未被結(jié)合，因此仍與載體上的抗原起作用。如標(biāo)本中存在相同抗原，則凝集反應(yīng)被抑制。第三十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日2、沉淀反應(yīng)概念：血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，此類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。方法：沉淀反應(yīng)多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散或免疫擴(kuò)散。即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比例合適處相遇時形成可見的白色沉淀。第三十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）單向瓊脂擴(kuò)散方法：將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散。結(jié)果：抗原在擴(kuò)散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量呈正相關(guān)。取已知量抗原繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可根據(jù)所形成沉淀環(huán)的直徑，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出待檢標(biāo)本的抗原含量。應(yīng)用：本法常用于定量測定血清IgG、IgM、IgA和C3等。第三十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）雙向免疫擴(kuò)散將抗原與抗體分別加于瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向四周擴(kuò)散，在相遇處形成沉淀線。若反應(yīng)體系中含兩種以上抗原-抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原的相關(guān)性分析。第四十頁，共六十一頁，2022年，8月28日（3）免疫電泳方法：先將待檢血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組份被分為不同區(qū)帶，然后按電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)抗血清，與已分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)位置形成沉淀弧。結(jié)果：對照正常血清形成的沉淀弧數(shù)量、位置和形態(tài)，可分析標(biāo)本中所含抗原成分的性質(zhì)和含量。應(yīng)用：該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig異常增多或缺失，可診斷骨髓瘤及性聯(lián)低丙種球蛋白血癥等疾病。第四十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日（4）免疫比濁方法：在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。結(jié)果：用濁度計測量反應(yīng)液體的濁度，復(fù)合物形成越多則濁度越高，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)反應(yīng)液體的濁度推算樣品中抗原含量。應(yīng)用：該法快速簡便，可取代單向免疫擴(kuò)散用于測定Ig含量。第四十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日3.免疫標(biāo)記技術(shù)概念：免疫標(biāo)記技術(shù)乃用熒光素、酶或放射性核素等標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。標(biāo)記物與抗體或抗原連接后并不改變后者的免疫特性。優(yōu)點(diǎn)：具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點(diǎn)。是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測技術(shù)。第四十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日（1）免疫熒光法(IF)

概念：用熒光素與抗體連接成熒光抗體，再與待檢標(biāo)本中抗原反應(yīng)，置熒光顯微鏡下觀察，抗原-抗體復(fù)合物散發(fā)熒光，借此鑒定或定位標(biāo)本中的抗原。常用的熒光素：有異硫氰酸熒光素(FITC)和藻紅蛋白（PE），前者發(fā)黃綠色熒光，后者發(fā)紅色熒光。方法：第四十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日直接熒光法方法：將熒光素直接標(biāo)記抗體，對標(biāo)本進(jìn)行染色。優(yōu)點(diǎn)：是特異性高。缺點(diǎn)：是檢查任一抗原均須制備相應(yīng)熒光抗體。

第四十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接熒光法方法：用一抗與標(biāo)本中抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。優(yōu)點(diǎn)：是敏感度比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗即可用于多種抗原的檢查，但非特異性反應(yīng)亦增加。第四十六頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫熒光法的應(yīng)用檢查細(xì)菌、病毒、螺旋體等抗原或抗體，用于診斷傳染病。鑒定免疫細(xì)胞表面的CD分子。檢測自身免疫病的抗核抗體。第四十七頁，共六十一頁，2022年，8月28日（2）酶免疫測定(EIA)方法：將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應(yīng)判定結(jié)果。結(jié)果觀察：可用目測定性，也可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量，靈敏度可達(dá)每毫升ng甚至pg水平。常用于標(biāo)記的酶：有辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等。常用的方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗：測定可溶性抗原或抗體酶免疫組化法：檢測組織或細(xì)胞表面抗原第四十八頁，共六十一頁，2022年，8月28日酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)是酶免疫測定中應(yīng)用最廣的技術(shù)。基本方法是：將已知抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原-抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將固相上的抗原-抗體復(fù)合物與液相中的游離成份分開。ELISA的操作方法很多，簡介以下方法：

雙抗體夾心法間接法第四十九頁，共六十一頁，2022年，8月28日雙抗體夾心法用于檢查特異性抗原。方法：將已知抗體包被固相，加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中若含有相應(yīng)抗原即與固相表面的抗體結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分，加入該抗原特異的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體，加底物后顯色。若標(biāo)本中無相應(yīng)抗原，固相表面即無抗原結(jié)合，加入的酶標(biāo)記抗體則不能結(jié)合于固相并被洗滌去除，當(dāng)加入無色底物后，因無酶催化故不顯色。

第五十頁，共六十一頁，2022年，8月28日間接法用于檢查特異性抗體。方法：用已知抗原包被固相，加入待檢血清標(biāo)本，再加酶標(biāo)記的二抗，加底物觀察顯色反應(yīng)。ELISA敏感性高、操作簡便，配套儀器設(shè)備的發(fā)展使操作程序規(guī)范化和自動化，并進(jìn)一步提高了穩(wěn)定性，被廣泛用于檢測多種病原體抗原或抗體、血液及其它體液中微量蛋白成分、細(xì)胞因子等。第五十一頁，共六十一頁，2022年，8月28日免疫組化技術(shù)概念：是應(yīng)用標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞抗原發(fā)生反應(yīng)，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察，對抗原作定性、定量、定位檢測。常用的技術(shù)包括：酶免疫組化（辣根過氧化物酶標(biāo)記）免疫金組化（膠體金顆粒標(biāo)記）免疫電鏡技術(shù)（鐵蛋白、膠體金、過氧化物酶標(biāo)記）第五十二頁，共六十一頁，2022年，8月28日

（3）放射免疫測定法(RIA)概念：用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測。它將放射性核素具有的高靈敏度和抗原-抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，使檢測的靈敏度達(dá)pg水平。常用于標(biāo)記的放射性核素有：125I和131I。采用的方法分為：液相法和固相法兩種。應(yīng)用：常用于測定微量物質(zhì)，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素，嗎啡、地高辛等藥物，以及IgE等。第五十三頁，共六十一頁，2022年，8月28日二、細(xì)胞免疫測定法檢測淋巴細(xì)胞的類別、數(shù)量與功能，是判斷機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要手段?；颊咄庵苎侵饕臉?biāo)本來源，但僅代表再循環(huán)的淋巴細(xì)胞。實驗動物還可取胸腺、脾臟、淋巴結(jié)等作為標(biāo)本進(jìn)行檢查。第五十四頁，共六十一頁，2022年，8月28日（一）體外測定法1.E花結(jié)試驗：

人成熟T細(xì)胞表面CD2分子是綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體，能結(jié)合SRBC而形成花結(jié)。第五十五頁，共六十一頁，2022年，8月28日2.T細(xì)胞增殖試驗原理：植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等絲裂原以及抗CD3抗體等均能非特異性激活培養(yǎng)的