循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在肺癌中的應(yīng)用

循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)在肺癌中的應(yīng)用第一頁，共三十六頁，2022年，8月28日腫瘤疾病近期療效的判斷方法第二頁，共三十六頁，2022年，8月28日臨床因子作為預(yù)后與預(yù)測(cè)因子預(yù)后：T,N,Mstaging,PSscore預(yù)測(cè)：吸煙狀況：指導(dǎo)靶向治療性別：指導(dǎo)靶向治療種族：指導(dǎo)靶向治療組織學(xué)：指導(dǎo)化療和靶向治療第三頁，共三十六頁，2022年，8月28日影像學(xué)方法非侵入地、直觀地對(duì)患者的腫瘤大小變化情況進(jìn)行評(píng)估。缺點(diǎn)：存在一定的健康危害或健康隱患腫瘤大小常與腫瘤的惡性程度或浸潤能力不完全一致費(fèi)用昂貴滯后性靈敏性低第四頁，共三十六頁，2022年，8月28日病理學(xué)方法手術(shù)或活檢獲得病灶組織/周圍淋巴結(jié)組織，進(jìn)行病理學(xué)染色和分析，是目前唯一明確腫瘤有否轉(zhuǎn)移的金標(biāo)準(zhǔn)缺點(diǎn)：精確度不夠高是侵入性檢查手段易造成擴(kuò)散人工誤差大難以標(biāo)準(zhǔn)化第五頁，共三十六頁，2022年，8月28日血清腫瘤標(biāo)記物測(cè)定血清腫瘤標(biāo)志物的濃度往往可以在一定程度上提示腫瘤的發(fā)展程度缺點(diǎn)：特異性不高易受非特異蛋白的干擾其他的病理生理狀態(tài)影響導(dǎo)致假陽/陰性結(jié)果

第六頁，共三十六頁，2022年，8月28日1869年AustMedJ，Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到。2005年NEnglJMed，Cristofanilli證實(shí)治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進(jìn)展生存期和總生存期的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。循環(huán)腫瘤細(xì)胞指從實(shí)體瘤中脫離出來并進(jìn)入外周血液循環(huán)的腫瘤細(xì)胞。循環(huán)腫瘤細(xì)胞原發(fā)腫瘤血管生成侵潤侵入血管內(nèi)侵入血管外

(CTC)血管內(nèi)增殖

(CTM)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移播散腫瘤細(xì)胞（DTC）微轉(zhuǎn)移休眠灶循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）循環(huán)腫瘤

微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細(xì)胞

擴(kuò)增血管生成上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)－上皮轉(zhuǎn)化（MET）轉(zhuǎn)移到骨髓和其他器官第七頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC檢測(cè)預(yù)測(cè)PFS及OS指示預(yù)后效果復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)與分期有助于腫瘤個(gè)體化治療的藥物篩選和治療方案的確定是傳統(tǒng)的影像學(xué)及其他生物標(biāo)志物的補(bǔ)充檢測(cè)手段有助于尋找新的腫瘤標(biāo)識(shí)物以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物第八頁，共三十六頁，2022年，8月28日腫瘤細(xì)胞作為生物標(biāo)志物外周血和肺靜脈血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）臨床意義:轉(zhuǎn)移的輔助標(biāo)志物？可以預(yù)測(cè)治療？預(yù)后因子？最小損傷的突變檢測(cè)?第九頁，共三十六頁，2022年，8月28日獲取CTC需要解決的技術(shù)問題從紅細(xì)胞和白細(xì)胞中富集惡性腫瘤細(xì)胞

將惡性腫瘤細(xì)胞與紅細(xì)胞、白細(xì)胞、正常上皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等區(qū)分開來每10mL血液中可能僅含有幾個(gè)到幾十個(gè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞，而10mL血液中含有的白細(xì)胞約有1億個(gè)，紅細(xì)胞有500億個(gè)。第十頁，共三十六頁，2022年，8月28日三種技術(shù)過濾法ISET:

IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8μm孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細(xì)胞敏感性低梯度密度法腫瘤細(xì)胞和單核細(xì)胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細(xì)胞腫瘤細(xì)胞會(huì)遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對(duì)細(xì)胞有毒性免疫磁珠法腫瘤細(xì)胞表面抗原CTC純度低，混入較多白細(xì)胞不能有效排除細(xì)胞碎片假陽性和假陰性高CellSearch免疫磁珠+流式細(xì)胞分析+化學(xué)發(fā)光第十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日CellSearch是全球第一也是唯一經(jīng)FDA批準(zhǔn)可用于臨床的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）產(chǎn)品1983磁流體第十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日J(rèn)ClinOncol.2011Apr20;29(12):1556-63.Epub2011Mar21.

Evaluationandprognosticsignificanceofcirculatingtumorcellsinpatientswithnon-small-celllungcancer.1肺癌是最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，85%的肺癌患者為非小細(xì)胞肺癌，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是晚期，其5年生存率只有2%。2目前，仍然缺乏有效的生物標(biāo)記物預(yù)測(cè)治療的有效性。CTC是一個(gè)潛在的療效預(yù)測(cè)因子。3驗(yàn)證能否在NSCLC患者中檢測(cè)出CTC及CTC能否預(yù)測(cè)治療有效性。背景第十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)流程病人入組基線CTC檢測(cè)化療一個(gè)療程CTC檢測(cè)統(tǒng)計(jì)分析第十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日患者入組標(biāo)準(zhǔn)未做過化療，且4周內(nèi)未做過放療病理學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌IIIA,IIIB,IV期準(zhǔn)備進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞毒療法5年內(nèi)未患過惡性腫瘤實(shí)驗(yàn)方法CellSave專用收集管采集血液采集血后于室溫儲(chǔ)存并于96小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)Cellsearch系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)第十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日患者化療前CTC數(shù)量（基線CTC）與臨床特征的關(guān)系IV期患者CTC數(shù)量明顯多于IIIB期患者，IIIB期患者的CTC數(shù)量又明顯多于IIIA期患者。第十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日肝轉(zhuǎn)移及骨轉(zhuǎn)移患者中CTC數(shù)量明顯多于其它轉(zhuǎn)移患者。患者化療前CTC數(shù)量與腫瘤轉(zhuǎn)移地點(diǎn)的關(guān)系第十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日所有非小細(xì)胞肺癌病人所有Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌病人基線CTC數(shù)量與無進(jìn)展生存期和總生存期的關(guān)系基線CTC數(shù)量少于5的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯高于基線CTC數(shù)量大于等于5的患者。第十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日化療前后CTC數(shù)量與患者無進(jìn)展生存期和總生存期的關(guān)系化療后CTC數(shù)量少于5的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯高于CTC數(shù)量大于5的患者?；熐昂驝TC數(shù)量都少于5的患者無進(jìn)展生存期和總生存期明顯高于只有一次測(cè)出CTC數(shù)量少于5的患者。第十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日化療前后CTC的數(shù)量變化反映臨床療效化療前化療后化療后CTC數(shù)量減少患者的臨床療效好于CTC數(shù)量增加的患者第二十頁，共三十六頁，2022年，8月28日結(jié)論CTC能在IV期非小細(xì)胞肺癌患者中檢出CTC數(shù)量的變化反映了臨床療效CTC數(shù)量與OS和PFS相關(guān)，是非小細(xì)胞肺癌的一個(gè)新的預(yù)后判斷因子第二十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC在判斷是否存在轉(zhuǎn)移中有重要參考價(jià)值對(duì)于原發(fā)性肺癌患者，CTC計(jì)數(shù)在有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌患者中有顯著升高，相關(guān)性優(yōu)于CEA。第二十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC升高對(duì)于判斷遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的敏感性達(dá)71%，特異性達(dá)83%CTC計(jì)數(shù)和血清CEA水平在不同切點(diǎn)的診斷價(jià)值第二十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日治療前和治療后CTC的數(shù)量變化反映療效大多數(shù)患者的CTC數(shù)量在第一個(gè)化療療程后（22天）下降，提示療效好。第二十四頁，共三十六頁，2022年，8月28日TheAnnalsofThoracicSurgeryVolume87,Issue6,June2009,Pages1669-1675

CirculatingTumorCellsinPulmonaryVenousBloodofPrimaryLungCancerPatients鱗癌中periCTC和pvCTC的數(shù)量明顯高于腺癌第二十五頁，共三十六頁，2022年，8月28日NEnglJMed2008;359:366-77.

DetectionofMutationsinEGFRinCirculatingLung-CancerCells1吉非替尼是較好地治療非小細(xì)胞肺癌的靶向藥物，但是EGFR的基因型決定了藥物的治療效果。2目前，檢測(cè)EGFR的基因型需要選取患者的腫瘤組織，找到一種非侵入性的方法檢測(cè)EGFR迫在眉睫。3驗(yàn)證能否在CTC中檢測(cè)EGFR的基因型，且與藥物療效相關(guān)。背景第二十六頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC中EGFR突變與腫瘤組織中EGFR突變的一致性（SARMS方法）CTC中EGFR基因型有17個(gè)與腫瘤組織中的一樣，準(zhǔn)確率為94%，第二十七頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC數(shù)量與病情進(jìn)展的關(guān)系吉非替尼治療后CTC數(shù)量下降，伴隨著疾病進(jìn)展CTC數(shù)量也隨之上升。腫瘤大的患者CTC數(shù)量比腫瘤小的患者多。CTC數(shù)量影像學(xué)腫瘤變化第二十八頁，共三十六頁，2022年，8月28日檢測(cè)CTC中EGFR的基因型與組織中檢測(cè)結(jié)果高度符合可以通過CTC來檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤的基因型CTC數(shù)量與疾病進(jìn)展密切相關(guān)結(jié)論第二十九頁，共三十六頁，2022年，8月28日小細(xì)胞肺癌患者活檢組織及相對(duì)應(yīng)的CTC中的CD56活檢組織中的CD56和CTC中的CD56表達(dá)具有一致性肺癌組織肺癌肝轉(zhuǎn)移組織第三十頁，共三十六頁，2022年，8月28日BaselinebloodCAC腫瘤細(xì)胞a,monosomy6p11-q12;b,amplificationEGFR,c-MYC;EGFR(red)5.p15.3(green),6p11-q12(aqua),c-MYC(yellow).c,trisomyCEP3andmonosomyCEP17;d,polysomyCEP3,CEP7,CEP17and9p21.3.CEP3(red),CEP7(green),CEP17(aqua),9p21.3(yellow).外周循環(huán)腫瘤細(xì)胞的異常情況與手術(shù)切除的腫瘤細(xì)胞具有高度一致性。BaselinebloodCTC腫瘤細(xì)胞第三十一頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC中的染色體異常分子標(biāo)記物與疾病的復(fù)發(fā)和生存密切相關(guān)第三十二頁，共三十六頁，2022年，8月28日CTC計(jì)數(shù)CTC的分子特性指示預(yù)后輔助檢測(cè)抗癌藥物的反應(yīng)——作為預(yù)測(cè)和/或藥物動(dòng)力學(xué)生物標(biāo)志物聯(lián)合已知的分期因素，獲取更精確的預(yù)后判斷病人是否需要輔助化療檢測(cè)癌癥復(fù)發(fā)輔助診斷實(shí)時(shí)活檢——腫瘤的生物學(xué)行為闡明預(yù)后和預(yù)計(jì)的分子學(xué)特征檢測(cè)抗藥情況——基于獲得連續(xù)樣本的便利性提高對(duì)生物過程機(jī)制的了解發(fā)現(xiàn)并鑒定新治療靶點(diǎn)CTC的應(yīng)用：從細(xì)胞計(jì)數(shù)到分子特性第三十三頁，共三十六頁，2022年，8月28日FISH分析C